酶消化组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞的初步研究

目的 提高人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPIF)原代培养的成功率,快速建立体外细胞研究模型。方法 采取组织块与酶消化相结合的方法处理牙周膜组织块,获取细胞;用形态学、免疫细胞化学染色等方法鉴定细胞来源,通过生长曲线的测定研究体外细胞生长特性。结果 原代培养成功率为77．8％。获得的细胞呈梭形,抗波形丝蛋白染色呈阳性,抗角蛋白染色呈阴性,符合人牙周膜成纤维细胞的形态学特征和生物学特性,生长良好。结论 酶消化组织块法可显著提高人牙周膜成纤维细胞原代培养成功率,方法可行。     

玻片覆盖组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞及其生物活性的观察

目的 采用玻片覆盖组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞,以用于实验观察中药单体对培养人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响,进而探讨中医药治疗牙周病的有效性及其作用机制.方法 用玻片覆盖组织块方法进行人牙周膜成纤维细胞原代培养,利用形态学、免疫组化方法鉴定其来源,通过生长曲线及贴壁率的测定来研究其生物学特性.结果 原代培养成功率为85%,细胞形态呈长梭形,抗波形丝蛋白染色呈阳性,抗角蛋白染色呈阴性,细胞倍增时间为54 h,细胞12 h贴壁率为96%,符合人牙周膜成纤维细胞的形态学特征和生物学特性,生长良好.结论 采用玻片覆盖组织块法可提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率,且简单易行,可满足中医药治疗牙周病的有效性及其作用机制的实验研究需求.     

酶消化组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞的初步研究

目的：提高人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts，HPLF)原代培养的成功率，快速建立体外细胞研究模型．方法：采取组织块与酶消化相结合的方法处理牙周膜组织块，获取细胞；用形态学、免疫细胞化学染色等方法鉴定细胞来源，通过生长曲线的测定研究体外细胞生长特性．结果：原代培养成功率为77．8％．获得的细胞呈梭形，抗波形丝蛋白染色呈阳性，抗角蛋白染色呈阴性，     

酶消化组织块法原代培养兔牙周膜细胞

目的建立用酶消化组织块培养兔牙周膜细胞的方法,为下一步的研究做好基础。方法取成年新西兰大白兔牙周膜组织,通过酶消化组织块法原代培养兔牙周膜细胞。取第4代免牙周膜细胞,免疫细胞化学法鉴定细胞组织来源。结果酶消化组织块法成功培养出兔牙周膜细胞,细胞形态呈梭形。免疫细胞化学鉴定波形蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,说明细胞为中胚层来源的牙周膜成纤维细胞。结论酶组织消化块法可以很好地进行兔牙周膜细胞体外培养,且此方法简单易行。     

体外培养人牙周膜细胞方法的探讨

目的:研究如何提高体外培养人牙周膜细胞(hPDL)的成功率,为简便、快速地获得大量成活率高的hPDL膜细胞,建立体外细胞模型提供一定的实验方法.方法:利用3种不同方法(组织块法、酶消化组织块法、全牙消化法)进行牙周膜细胞的原代培养,用形态学、免疫细胞化学染色等方法鉴定细胞来源;通过生长曲线的测定研究体外细胞生长特性.结果:3种方法获得的细胞形态和生物学行为大致相同;波丝蛋白抗体染色阳性,角蛋白抗体染色阴性.组织块法培养的细胞同源性好,但初代培养时间长;全牙消化法的原代培养成功率高于其他2种方法.结论:通过对牙周膜细胞培养方法的改良,可以显著提高hPDL原代培养的成功率.     

人牙周膜细胞原代培养及鉴定

目的 建立人牙周膜细胞原代培养方法.方法 取因正畸需要拔除的健康前磨牙根面中1/3的牙周膜组织,分别运用组织块法(n=12)、酶消化法(n=10)及组织块一酶消化联合培养技术(n=12)培养人牙周膜细胞.运用免疫组化染色法对培养细胞的生物学特征加以鉴定.绘制生长曲线,观察细胞生长并计算细胞群体倍增时间.结果 组织块法、酶消化法和织块一酶消化联合培养的细胞培养成功率分别为16.67%、20.00%和33.33%.培养细胞的抗波形蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性;碱性磷酸酶染色阳性.细胞生长曲线有明显的滞留期、指数生长期和平台期,群体倍增时间为109.79 h.结论 成功进行人牙周膜细胞的原代培养,培养细胞具有牙周膜细胞的生物学特征.组织块-酶消化联合培养可提高人牙周膜细胞原代培养的成功率.     

人牙周膜细胞原代培养及鉴定

目的 建立人牙周膜细胞原代培养方法.方法 取因正畸需要拔除的健康前磨牙根面中1/3的牙周膜组织,分别运用组织块法(n=12)、酶消化法(n=10)及组织块一酶消化联合培养技术(n=12)培养人牙周膜细胞.运用免疫组化染色法对培养细胞的生物学特征加以鉴定.绘制生长曲线,观察细胞生长并计算细胞群体倍增时间.结果 组织块法、酶消化法和织块一酶消化联合培养的细胞培养成功率分别为16.67%、20.00%和33.33%.培养细胞的抗波形蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性;碱性磷酸酶染色阳性.细胞生长曲线有明显的滞留期、指数生长期和平台期,群体倍增时间为109.79 h.结论 成功进行人牙周膜细胞的原代培养,培养细胞具有牙周膜细胞的生物学特征.组织块-酶消化联合培养可提高人牙周膜细胞原代培养的成功率.     

人牙周膜成纤维细胞的体外培养

目的：建立人牙周膜成纤维细胞体外培养的方法。方法：采用组织块贴附法原代培养人牙周膜成纤维细胞并传代。结果：牙周膜成纤维细胞体外培养成功率为20％。5代后细胞生长旺盛。经免疫组织化学SABC法证实为来源于中胚层的成纤维细胞。结论：采用组织块贴附法培养原代人牙周膜成纤维细胞。胰酶消化传代后，生长状况良好，可作为人牙周膜成纤维细胞的实验模型。     

人肝癌组织伴生成纤维细胞的体外培养及其生物学性状的初步探讨

目的:体外培养人肝癌组织伴生成纤维细胞,观察其生长状态,为进一步研究其功能奠定基础。方法:应用组织块培养法进行人肝癌伴生成纤维细胞的原代培养,细胞铺满培养瓶底后首次传代,通过胰酶消化法和反复贴壁法进行成纤维细胞的纯化;通过倒置显微镜观察细胞形态、免疫组织化学方法检测细胞膜波形蛋白(v im entin)、角蛋白(keratin)表达情况,对细胞进行鉴定。结果:组织块法原代培养约1周可见纤维样细胞从组织块周围游出,5周左右细胞基本长满培养瓶底。首次传代时应用胰酶消化法进行成纤维细胞的初次纯化,第2次转种时先后应用酶消化法和反复贴壁法再次进行细胞纯化,第3代以后基本可获得呈典型克隆性生长、长梭形纤维样细胞,生长周期短。免疫组化染色结果为v im entin染色阳性,keratin染色阴性。结论:在体外成功培养了人肝癌组织伴生成纤维细胞,并对其生物学性状进行了初步探讨,为进一步研究其与肝癌细胞生长、浸润及转移的关系等机制奠定了基础。     

人上皮性卵巢癌组织中肿瘤相关成纤维细胞的培养

目的:通过分离、纯化、培养及鉴定,获得人上皮性卵巢癌组织中肿瘤相关成纤维细胞。方法:采用酶消化法获得原代细胞,再通过酶消化+反复贴壁法,传代获得第4代纯化细胞,并绘制细胞生长曲线,通过形态学观察和免疫细胞化学染色,对所得细胞进行鉴定。结果:获得典型卵巢癌相关成纤维细胞。形态学上,细胞呈长梭形,胞核不明显,细胞大小不一致。其生长潜伏期较肿瘤细胞长,生长相对缓慢。免疫细胞化学上,肿瘤相关成纤维细胞中,成纤维细胞特性蛋白-1、波形蛋白、结蛋白及α-平滑肌动蛋白均表达阳性,而血管内皮细胞、间充质细胞标志均表达阴性。细胞角蛋白在较早传代的细胞中少量表达,通过纯化后基本消失。结论:本方法可获得典型上皮性卵巢癌相关成纤维细胞,为进一步研究该细胞自身生物学特性及其与卵巢癌间的相互作用提供了必要的细胞学基础。     

PCB153诱导小鼠胚胎细胞凋亡对胚胎生长发育的影响

目的 探讨环境雌激素多氯联苯同系物PCB153对发育过程中小鼠胚胎细胞凋亡的影响.方法 于体外施予孕8.5 d小鼠胚胎不同浓度PCB153,应用植入后全胚胎培养技术培养胚胎;采用原位TUNEL技术观察胚胎细胞凋亡.结果 PCB153对胚胎发育具有明显影响且呈剂量-效应关系,且随PCB153浓度增加,凋亡细胞比值上升.结论 PCB153能诱导胚胎细胞凋亡,这与其致胚胎发育异常有关,可能是PCB153的致畸作用机制之一.     

单种群杆菌简单波动生长的数学模型

目的：量化探讨单种群杆菌简单波动生长的过程，定量认识单种群杆菌产生简单波动的原因。方法：以奇异变形杆菌为研究对象，以生物实验研究方法和数学研究和数学演绎推理二者结合进行讨论。结果：在经典Ｌｏｇｉｓｔｉｃ模型基础上，得到描述单种群杆菌简单波动生长的推广Ｌｏｇｉｓｔｉｓ模型。结论：该模型及解定量直观地反映了细菌增殖－扩散、增殖的自组织过程。     

免疫电镜胶体金标记技术应用中关键环节的处理

目的：探讨免疫电镜胶体金技术在应用中某些关键技术环节的处理。方法：应用免疫电镜胶体金技术对大肠癌GST-Pi(胎盘型谷胱苷肽S转移酶）和金黄地鼠胚胎神经管NGF（神经生长因子）和bFGF(碱性成纤维细胞因子）进行定位观察。结果：大肠粘膜细胞和神经上皮细胞结构清晰，金颗粒呈团状，点灶状分布，特异性强，无非特异性散在金颗粒。结论：免疫电镜金标记技术应用中某些关键性技术环节的处理是获得理想免疫金染色切片的保证。     

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的 研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制.方法 MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定Cyclin D1, p27kip1 mRNA表达变化,Western blot检测Cyclin D1,p27kip1蛋白表达变化.结果 crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系.FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/L crocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,Cyclin D1 mRNA表达明显下调,p27 mRNA无显著变化;Western blot结果表明Cyclin D1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加.结论 crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响Cyclin D1 mRNA转录,但并不影响p27 mRNA表达水平,并调控Cyclin D1、p27kip1蛋白表达.     

TwinBlock联合2×4技术早期矫治安氏Ⅱ~2错

目的探讨TwinBlock技术和"2×4"技术联合矫正治疗安氏Ⅱ2错的效果。方法选择2009～2012年在我院接受治疗的安氏Ⅱ2错患者26例,对患者的口腔内部进行细致了解,然后采用TwinBlock技术,并结合使用"2×4"技术矫正治疗患者的口腔牙齿,同时测量矫正治疗之前和之后口腔内的各个数据,并对测量数据进行精确的分析。结果此26例患者通过矫正治疗,上颌和下颌齿轴角恢复正常,口腔内牙齿的每个高度、倾斜度都得到了很好的矫正,患者的口腔生长恢复正常、面部也随之更加美观。结论 TwinBlock技术和"2×4"技术的有效结合有利于更好地治疗安氏Ⅱ2错,在这方面有明显的疗效,同时也有利于口腔医学领域的发展。     

蓝光对痤疮患者的疗效及对糠秕马拉色菌的影响

目的 观察波长407～420 nm蓝光对痤疮患者的疗效,对面部皮肤皮脂溢出率及糠秕马拉色菌的影响.方法 对20例痤疮患者蓝光治疗前后行电子显微成像观察,评价靶疹的表皮层及真皮浅层变化;应用Looking bill及Cunliffe改良测定法进行皮脂溢出率测定;应用蓝光对培养的糠秕马拉色菌进行照射,观察照光前后菌落的数量及形态变化.结果 20例痤疮患者蓝光治疗后靶疹明显消退,其表皮层及真皮浅层损伤减轻;皮脂溢出率较治疗前显著减少(P<0.01);在0.5 ml细胞数为5×10~6/ml的糠秕马拉色菌菌液中,菌落数量、直径与光照时间成反比,蓝光光照时间大于3 min 30 s时,平吼内无菌落生长.结论 蓝光对痤疮有很好的治疗效果:能修复深至真皮层的皮肤损伤,抑制皮脂分泌,对糠秕马拉色菌有杀菌作用.     

可降解组织工程血管支架成功用于犬股动脉移植

目的 采用可降解的聚己内酯接枝肝素材料,负荷b-FGF(碱性成纤维细胞生长因子),体外构建的小口径组织工程血管,完成犬的股动脉移植动物实验.方法 利用可降解的聚己内酯接枝肝素材料,电纺丝技术制备组织工程血管支架,并对支架负荷b-FGF生长因子,并进行材料的内皮细胞粘附实验.将体外构建的小口径组织工程血管,完成犬的股动脉移植动物实验,观察通畅率和移植术后组织工程血管的改变.结果 可降解聚己内酯接枝肝素材料支架,负荷细胞生长因子(b-FGF),利于内皮细胞粘附.构建的组织工程血管进行体外动物实验构建,3个月移植物通畅率好,移植后取材,有新生内膜迁移和胶原纤维浸入.结论 利用可降解聚己内酯接枝肝素材料构建小口径支架,初步符合构建组织工程血管支架的要求.     

补阳还五汤对神经干细胞生长分化的影响

目的 :观察补阳还五汤对神经干细胞生长分化的影响。方法 :取孕 12d大鼠胚胎神经管上皮细胞 ,分别接种在灌服补阳还五汤的鼠血清和对照鼠血清的培养基内。不同培养时间内观察细胞的生长状况 ;用MTT法检测细胞活性 ;用免疫组化染色法检测神经元特异烯醇化酶 (NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 :药物血清组神经干细胞的生长明显好于对照组 ,OD值高于对照组 ;免疫组化染色显示 ,NSE、GFAP免疫阳性细胞药物血清组均多于对照组。结论 :补阳还五汤药物血清可促进神经干细胞的生长、存活和向神经元及神经胶质细胞的分化。     

多孔性壳聚糖-胶原材料促进神经纤维生长的实验研究

目的 比较在体横断性损伤的坐骨神经在壳聚糖-胶原复合管和硅胶管内的生长情况。方法 采用冷冻干燥法将壳聚糖及组织胶原制备成壳聚糖-胶原管形支架,切除一侧大鼠坐骨神经1cm,将损伤神经分别显微缝合于壳聚糖-胶原管形支架内作为实验组,缝合至普通硅胶管内作为对照组。术后7周、15周分别做神经纤维的髓鞘特异性染色、髓鞘超微结构观察并用在体坐骨神经复合动作电位直接记录法检测神经纤维生长、髓鞘再生及神经冲动的传导情况。结果 术后7周,实验组、对照组的神经两断端之间部位已有较少神经纤维,远离中枢端的复合动作电位不明显。术后15周,实验组的髓鞘化优于对照组,复合动作电位的波幅亦高于对照组。结论 多孔性壳聚糖-胶原材料可促进神经纤维生长。     

三氧化二砷影响肝癌细胞系Hep201凋亡的研究

目的　研究三氧化二砷对肝癌细胞生长的抑制作用。方法　采用三氧化二砷处理人肝癌细胞系Hep2 0 1,通过生长曲线的绘制观察三氧化二砷对肝癌细胞生长的影响 ,并应用原位缺口末端DNA标记技术检测肝癌细胞的凋亡情况 ,同时用免疫组织化学和NorthernBlot方法检测凋亡相关基因bc1- 2和bax蛋白与mRNA的表达强度 ,探讨三氧化二砷影响肝癌细胞凋亡的机制。结果　经三氧化二砷连续作用 72h后 ,肝癌细胞生长受到抑制 ,发现试验组凋亡的细胞明显多于对照组 ,bc1- 2在试验组中表达强度低于对照组 ,而bax的表达高于对照组。结论　在三氧化二砷的作用下 ,肝癌细胞的生长受到抑制 ,凋亡细胞增加 ,肝癌细胞凋亡增加的机制可能是凋亡的主要调节因子bc1- 2和bax两种基因表达比例发生变化。