汉防己甲素和艾氟龙对兔角膜基质细胞抑制作用的对比研究

目的：探讨比较汉防己甲素（Tet）和艾氟龙对离体兔角膜基质细胞的抑制作用及其作用机制。方法：选用原代及传代兔角膜基质细胞,Tet组加入含不同质量浓度Tet的培养液,艾氟龙组加入不同质量浓度艾氟龙的培养液,对照组加入含等量PBS的培养液。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测对细胞增生的抑制;免疫细胞化学法检测E2F1的表达状况。结果：Tet和艾氟龙对角膜基质细胞生长都具有抑制作用,各时间点IC50Tet均1低于艾氟龙。免疫细胞化学结果显示,Tet组、艾氟龙组和对照组均有E2F1蛋白的表达,但Tet组和艾氟龙组中E2F1蛋白的表达均减弱,Tet组中E2F1蛋白的表达减弱更明显。结论：Tet和艾氟龙对角膜基质细胞的增生均有抑制作用,且Tet对角膜基质细胞的抑制作用强于艾氟龙。Tet和艾氟龙可能通过降低E2F1的表达使细胞周期停滞而发挥其对角膜基质细胞的抗增生作用。     

uPAR抗体对口腔癌HB细胞增殖的影响

目的:检测uPAR抗体对口腔癌HB细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法:MTT法检测不同浓度的uPAR抗体(20、50、100μg/ml)作用于口腔癌HB细胞,并检测不同作用时间(24、48和72 h)的细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI染色法检测对细胞凋亡的影响;酶联免疫吸附法检测uPAR抗体对HB细胞分泌VEGF-D的影响.结果:uPAR抗体能抑制HB细胞的增殖,并呈现浓度和时间依赖关系.uPAR抗体可使HB细胞周期停滞于G0/G1期,随着uPAR抗体作用浓度的增加,G0/G1期细胞比例逐渐增高.uPAR抗体可促进HB细胞凋亡并呈现一定的浓度依赖关系.uPAR抗体对HB细胞分泌VEGF-D有抑制作用,随着uPAR抗体浓度的增高,其VEGF-D分泌量也逐渐降低.结论:uPAR抗体可抑制HB细胞增殖,其可能机制是使细胞周期停滞于G0/G1期,促进细胞凋亡及减少VEGF-D的分泌.     

槲皮素对BGC823胃癌细胞p53、Bcl-2/Bax、PCNA表达影响与抑癌作用研究

目的：观察槲皮素对胃癌细胞BGC823生长及p53、Bcl-2／Bax、PCNA的影响。方法：以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率,透射电镜从形态变化上了解凋亡的发生,流式细胞术检测细胞周期变化,免疫细胞化学检测p53、Bcl-2／Bax、PCNA蛋白的表达。结果：台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制BGC823细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性,槲皮素处理48h后的Ic50为28．12μm。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,流式细胞仪检测表明经10—20μm／L的槲皮素处理,BGC823细胞周期阻滞于S期,药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经槲皮素处理后BGC823细胞株bax蛋白表达明显增加,bcl-2、PCNA、p53蛋白表达降低。结论：槲皮素能抑制胃癌细胞的生长,呈时间剂量依赖性,能诱导BGC823发生凋亡,使细胞周期阻滞于S期,抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调p53、PCNA的表达,降低bcl-2／Bax比值有关。     

姜黄素诱导肺癌A549细胞凋亡

目的：研究姜黄素对A549细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法：姜黄素处理A549细胞后,MTT法于不同时间点检测A549细胞的增殖情况;姜黄素处理A549细胞48h后,流式细胞术（Flow CytoMetry,FCM）检测A549细胞的凋亡率;30μmol／L姜黄素处理A549细胞24h、48h、72h后,RT—PCR、Western—Blot检测A549细胞中P53、Bcl2、Bax和cagpase-3基因的表达水平。结果：姜黄素对肺癌A549细胞增殖的抑制作用具有显著的浓度-时间依赖关系,30μmol／L姜黄素可诱导A549细胞凋亡。30μmoL／L姜黄素作用A549细胞24h即可引起A549细胞中P53、Bax和Caspase-3表达水平的上调,48h后可引起Bcl2表达水平的下调,诱导A549细胞凋亡。结论：30μmol／L姜黄素可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与促进P53、Bax和Caspase-3基因的表达,抑制Bcl2基因的表达有关。     

慢病毒载体转染离体兔角膜基质细胞的实验研究

目的：观察慢病毒载体转染离体兔角膜基质细胞的有效性及对细胞活性的影响。方法：转染组用慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白（Lentivirus-enhanced green fluorescent proteins,Lenti-EGFP）转染细胞,对照组则加入空白培养液,在不同感染复数（multiplicity of infection,MOI）及感染后不同时间段在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况并计算转染率;RT-PCR检测EGFP mRNA的表达;MTT比色法和流式细胞技术（Flow cytometer,FCM）检测病毒对细胞增殖和凋亡的影响。结果：Lenti-EGFP转染细胞后从48h开始可见绿色荧光,在MOI=500时,转染后第5天转染率可达51%;RT-PCR检测转染组有EGFP的mRNA表达;MTT结果显示在MOI为1~500时,漫病毒不影响细胞的增殖;在MOI=500时,FCM检测慢病毒载体对细胞凋亡无影响。结论：慢病毒载体可以在体外稳定有效转染兔角膜基质细胞且不影响细胞活性,是角膜基质细胞理想的基因转染载体。     

铜蒸气激光照射对血管平滑肌细胞凋亡的诱导作用及对其增殖的影响

目的：研究510.6nm铜蒸气激光照射对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的诱导作用，以及对增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响，探讨铜蒸气激光照射在经皮冠状动脉成形术（PTCA）后再狭窄（RS）的防治作用。方法：贴块法培养兔VSMC，510.6nm铜蒸气激光照射后透射电镜观察凋亡细胞形态学改变，TUNEL法计数凋亡细胞，免疫组化染色法计数照光对PCNA阳性表达率的影响。结果：激光照射后，VSMC凋亡率较未照光组增加12.8倍，而PCNA表达阳性率降低27．9％倍；电镜下观察细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论：铜蒸气激光照射可以诱导VSMC凋亡，而且抑制其增殖，在RS的防治中具有一定的作用。     

Salubrinal保护心肌细胞内质网应激凋亡的实验研究

目的探讨Salubrinal对衣霉素诱导的乳鼠原代心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法采用消化贴壁法获得乳鼠原代心肌细胞,分别给与不同浓度的Salubrinal(10μmol、20μmol、40μmol)预处理,30min后加入TM(5μg/ml),继续培养24h后通过流式细胞和TUNEL检测方法对乳鼠心肌细胞凋亡进行检测;Western印迹法检测凋亡过程中Caspase-12蛋白酶的表达变化。结果经Salubrinal预处理的细胞同单独使用衣霉素相比,细胞凋亡率和细胞凋亡指数均显著下降;Caspase-12表达明显减少。结论Salubrinal对衣霉素诱导的乳鼠原代心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能是通过抑制内质网应激凋亡通路。     

Ras信号通路阻断剂FTI-277抑制HeLa细胞增殖及对cyclin E表达的影响

目的：观察Ras信号通路阻断剂（FTI-277）在人类宫颈癌细胞株HeLa细胞中对细胞周期素E（cyclin E）表达及对HeLa增殖、凋亡的影响情况。方法：采用MTT法观察不同浓度的FTI-277对HeLa细胞的生长抑制作用;流式细胞术（FCM）观察Hela细胞的细胞周期变化;RT-PCR、Western blot法检测FTI-277阻断Ras信号通路前后HeLa细胞cyclin E mRNA及蛋白表达。结果：各浓度范围FTI-277均能抑制HeLa细胞的增殖,且具有剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞术分析显示,FTI-277作用后的HeLa细胞明显滞留于G1/S期,且具有时间依赖性。RT-PCR及Western blot结果显示,FTI-277作用前后HeLa细胞cyclin E mRNA表达无明显变化,而蛋白表达水平明显降低。结论：FTI-277可以抑制细胞增殖,Ras信号转导通路可能是通过影响HeLa细胞cyclin E转录后的翻译环节减少其表达。     

细胞增殖状态对激光诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：探讨细胞的增殖状态及细胞周期分布对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的激光诱导率的影响。方法：组织贴块法体外培养VSMC,饥饿法同步法,VSMC在不同的刺激因子作用之后,亚甲基噻唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖状况,流式细胞仪（FCM）检测细胞的周期发布,510．6nm的铜蒸汽激光照射后,TUNEL染色法记数细胞凋亡率。结果：生长活跃,处于增殖期的细胞,在激光的诱导下易发生凋亡;相反,增殖相对不活跃、处于静止期的细胞,凋亡诱导率较低。结论：经不同生长因子刺激后VSMC的增殖状态及细胞的周期分布不同,对激光的凋亡诱导率产生影响。     

竹红菌乙素光动力对人舌鳞癌Tca8113细胞杀伤作用的初步研究

目的：本文是用实验的方法,初步探讨中药光敏剂竹红菌乙素（HB）在光动力（PDT）作用下,对体外人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用。方法：常规培养、选取对数生长期人舌鳞癌Tca8113细胞,用含有竹红菌乙素（HB）浓度分别为0μM、0．25μM、0．5μ／M、1μM、2μM的RPMI-1640培养液孵育细胞4h后,经470nmLED定制多光源半导体激光光照处理（PDT）,能量密度设置分别为0J／CM^2、1J／CM^2、2J／CM^2、3J／CM^2、4J／CM^2。PDT处理后细胞继续孵育24h后,分别在光学显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学变化,并用甲基噻唑四唑法（MIT法）检测竹红菌乙素（HB）对细胞的抑制作用。并分别在激光照射6h及24h后,用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果：经PDT处理后细胞在光学显微镜及荧光显微镜下均可观察到细胞坏死和凋亡样改变;在一定浓度范围和光照能量密度范围内,竹红菌乙素（HB）在PDT作用下对人舌鳞癌Tca8113细胞生长增殖的抑制和诱导凋亡作用与药物浓度和能量密度成正相关变化。结论：竹红菌乙素（HB）在光动力（PDT）作用下,对人舌鳞癌Tca8113细胞具有显著的杀伤作用,并在一定范围内呈浓度剂量和光剂量正相关依赖性。     

黄芩苷对兔tenon囊成纤维细胞增殖及TGF-β_1表达的影响

目的：研究黄芩苷对兔tenon囊成纤维细胞增殖及TGF-β1表达的影响,初步探讨其对青光眼术后滤过瘢痕的治疗作用。方法：以体外培养的兔tenon囊成纤维细胞为实验对象,分别加入含不同浓度（15,30,45,60μg/m1）黄芩苷培养24,48,72h后采用MTT法检测药物对细胞的抑制率;采用流式细胞术及半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测30μg/ml黄芩苷作用48h后成纤维细胞周期情况及TGF-β1的mRNA的变化;结果：MTT法显示黄芩苷各实验组与对照组抑制率间比较差异有显著性;流式细胞术显示黄芩苷将细胞阻抑于G1期;RT-PCR显示药物作用后细胞中TGF-β1的mRNA含量显著降低。结论：黄芩苷可抑制体外培养的兔Tenon囊成纤维细胞增殖,其作用可能跟下调TGF-β1的表达有关。     

丙泊酚对兔晶状体氧化损伤的保护作用探讨

目的：观察丙泊酚在兔子晶状体氧化损伤中对水通道蛋-1（AQP-1）表达的影响,探对其对晶状体的保护作用。方法：将正常兔晶状体分为4组：正常对照组、氧化损伤组、维生素C组（100μg/mL）、丙泊酚组（4μg／mL、40μg／mL、100μg／mL）。体外培养24h后,观察晶状体混浊情况,分析晶状体的相对灰度值,免疫组织化学检测AQP-1,分光光度诈测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的变化。结果：与正常组比较,其他各组晶状体有不同程度混浊：与氧化损伤组和VC组相比,丙泊酚组晶状体相对灰度值增加,AQP-1表达增加,SOD活性增高,MDA的含量降低（P〈0．05）。结论：丙泊酚可以通过凋节品状体上皮细胞AQP-1的表达和增强抗氧化能力,来减小晶状体损伤程度.     

高效液相色谱法测定头孢噻吩钠含量和有关物质

建立高效液相色谱法（HPLC）测定头孢噻吩钠含量和有关物质。色谱条件以C18为固定相,色谱柱：（4.6mm×250mm,5μm）;流动相为0.207mol/L醋酸钠溶液（用冰醋酸调pH值至5.9）-乙醇-乙腈（82：2：16）,流速为：1.0mL/min;检测波长：254nm：柱温;40℃。结果：头孢噻吩钠含量在55.8μg/mL至464.4μg/mL呈良好线性关系,r=0.9999：平均回收率100.2%;最低检测限为3ng（1ng/μL×3μL）。本法简单、准确,重现性、分离效果好,能较好的进行孢噻吩钠含量和有关物质测定。     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷调控UCHL1基因表达对人前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨5-杂氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人前列腺癌细胞（PC-3）株增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以2．5、5．0、10．0kenol／L的5-Aza—CAR作用于PC-3细胞48h后,采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应（tiT—PcR）检测UCHL1 mRNA表达;甲基化测序聚合酶链反应（BsP）检测UCHLlCpG岛的甲基化状态;蛋白质印迹法（Western Blot）检测UCHL1蛋白的表达。结果：5-Aza—CAR对PC-3细胞生长有抑制作用;与对照组相比细胞凋亡率明显增高（P〈0．01）;5-Aza—CdR处理细胞后UCHL1的启动子甲基化水平明显降低（P〈0．01）;UCHL1 mRNA表达水平显著上调（P〈0．01）;UCHL1蛋白表达水平上升（P〈0．01）。结论：5-Aza—CAR能诱导前列腺癌PC-3细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza—CdR能逆转PC-3细胞UCHLl启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达。     

人参皂苷Rg1协同rhBMP-2对人牙髓干细胞成牙分化作用研究

目的：探讨不同浓度人参皂苷Rg1、重组骨形态发生蛋白2（rhBMP-2）及两者联合应用对体外培养的人牙髓干细胞（DPSCs）成牙分化的影响。方法：酶消化法获得DPSCs,采用碱性磷酸酶（ALP）活性检测和实时荧光定量RT—PCR测定牙本质涎磷蛋白1（DSPP）和牙本质基质蛋白1（DMP1）mRNA的表达以检测不同浓度人参皂苷Rgt（0．1,0．5,2．5,5,10,20μmol／L）及rhBMP-2（25,50,100,200rig／ha）单独及联合应用对DPSCs成牙分化的影响。结果：人参皂苷Rg1（2．5,5和10μmol／L）组的ALP活性明显高于同期对照组（P〈0．001）,5μmol／L组ALP活性明显高于其它浓度组（P〈0．001）;浓度为50,100,200mg/ml的rhBMP-2其ALP活性明显高于同期对照组（P〈0．001）,100ng／ml rhBMP-2组ALP活性最强。联合应用人参皂苷Rg1（5μmol／L）和rhBMP-2（100ng／ml）DSPP和DMP1 mRNA的表达明显高于单独应用组（P〈0．001）。结论：人参皂苷Rg1可促进体外培养的DPSCs成牙本质分化,人参皂苷：Rg1协同rhBMP-2能明显增强DISCs成牙本质分化。     

人参总皂苷对K562细胞的增殖抑制及诱导分化作用

目的:研究人参总皂苷TSPG对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)增殖及分化的影响,探讨TSPG抗肿瘤作用.方法:取对数生长期K562细胞,分为阴性对照组、不同浓度TSPG组及阳性对照组进行体外培养,以噻唑蓝(MTT)比色法、台盼蓝活细胞计数法观察TSPG对K562细胞增殖的影响;用联苯胺染色及血红蛋白测定检测其诱...