甲状腺增生性疾病中p16INK4a基因甲基化及其表达

目的 研究甲状腺增生性疾病中p16~(INK4a)基因的甲基化状况及其与表达之间的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测45例甲状腺增生性疾病(15例甲状腺乳头状癌,17例甲状腺腺瘤,13例结节性甲状腺肿)样本中p16~(INK4a)蛋白的表达;采用甲基化特异性PCR检测p16~(INK4a)基因的甲基化状况.采用RT-PCR检测其中10例甲状腺增生性疾病(3例甲状腺乳头状癌,5例甲状腺腺瘤,2例结节性甲状腺肿)中p16~(INK4a) mRNA的表达.结果 45例甲状腺增生性疾病样本中,8例检测到p16~(INK4a)基因异常甲基化,19例p16t~(INK4a)蛋白表达阳性;p16~(INK4A)基因异常甲基化与其蛋白表达之间呈负相关(r=-0.293 4,P=0.038 7).10例甲状腺增生性疾病样本中,5例检测到转录产物;p16~(INK4A)基因异常甲基化与其转录水平之间呈负相关(r=-0.6547,P=0.04).结论 p16~(INK4a)基因甲基化与p16~(INK4a)基因失活有关,但并不与失活完全一致;p16~(INK4a)基因甲基化可能在甲状腺增生性疾病中起作用.     

P16INK4A基因对宫颈癌和癌前病变的诊断价值

目的探讨宫颈癌及癌前病变(CIN)组织中P16INK4A基因表达的临床意义及P16INK4A基因检测对宫颈癌及CIN的诊断价值。方法选取2004—2006年经病理检查证实的宫颈浸润癌患者18例、CIN患者150例和慢性宫颈炎患者57例,采用EnVision免疫组化法检测组织标本中P16INK4A阳性表达情况,并进行比较分析。结果CIN组和浸润癌组患者的P16INK4A阳性表达率与慢性宫颈炎组间差异均有统计学意义(P<0·01);随宫颈病变程度加重,P16INK4A的表达强度和阳性表达率不断升高(P<0·01)。结论P16INK4A基因表达与宫颈癌及CIN病变程度及其进展有关;P16INK4A基因可作为宫颈癌和CIN早期诊断、判断病情、预测病情进展和预后的生物学指标。     

肿瘤抑制因子的新发现

研究人员鉴定了一个在P53之前起作用的新的肿瘤抑制因子P19~(ARF)。这一发现引起对另一个肿瘤抑制因子P16~(INK4a)在肿瘤发生中的作用提出疑问,因为一个单独的基因位点INK4a编码P16~(INK4a)和P19~(ARF)。现在专家们开始重新考虑一些可导致人类癌症发生的途径。     

P14~(ARF)和P16~(INK4a)基因在鼻咽癌组织中异常甲基化及其临床意义

目的:通过检测P14ARF和P16 INK4a基因启动子区甲基化情况,分析探讨其在鼻咽癌临床诊断和治疗中的意义.方法:运用甲基化特异性PCR对54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P14ARF和P16INK4a基因启动子区甲基化状态进行检测.结果:鼻咽癌组织中P14ARF和P16INK4a基因启动子区甲基化阳性率分别为20.4%(11/54)和46.3%(25/54),二者总检出率为48.2%(26/54),26例甲基化的癌组织同时出现二者甲基化为10例;而在正常鼻咽上皮组织中未检测到P14ARF和P16INK4a基因启动子区甲基化.结论:鼻咽癌P14ARF和P16INK4a基因启动子区甲基化与患者临床病理特征无明显相关性,为早期事件,有望成为早期分子生物学诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.二者在鼻咽癌发生发展中可能存在协同作用.     

人宫颈癌发生中p16INK4A表达缺陷与其外显子甲基化的关系

目的 研究抑癌基因p16INK4A在宫颈癌发生中的表达变化，分析这种差异表达与甲基化的关系。方法 逆转录聚合酶链技术（RT．P（1R）检测30例宫颈癌组织标本、48例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织（CIN Ⅰ12例、CINⅡ16例、CINⅢ20例）中p16INK4A基因的表达。Western Blot分析P16INK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术（MSP）对p16INK4A DNA进行甲基化分析。以每例标本相应正常宫颈组织作为对照。结果 70％（21／30）宫颈癌组织中p16INK4A表达下降或缺失，与正常宫颈组织、CIN Ⅰ和CINⅡ中的p16INK4A表达相比，差异具有统计学意义（P〈0．05），与CIN Ⅲ相比差异无统计学意义（P〉0．05）。蛋白的表达检测也得到相似的结果。MsP检测发现宫颈癌组织中有9例p16INK4A外显子甲基化，甲基化率为30％，其中8例年龄小于40岁，提示甲基化易于出现在年轻患者。而CIN组织中仅CIN Ⅲ发现1例甲基化，说明甲基化随着宫颈病变的发展而增多。分析甲基化与p16INK4A表达的关系，发现42．86％（9／21）的宫颈癌组织中p16INK4A表达下降与甲基化有关，甲基化的宫颈癌组织中p16INK4A表达均下降。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因，它的表达缺失或下降在宫颈癌的发生中起重要作用，外显子甲基化是导致其表达缺陷的部分原因。     

Survivin、P16INK4a在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨新的凋亡抑制基因survivin在非小细胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma,NSCLC)中的表达,及其与抑癌基因P16INK4a表达的相关性.方法:用免疫组化的方法检测survivin和P16INK4a在56例NSCLC组织中的表达,同时抽取12例非肺癌的肺部良生病变手术标本作为对照组.结果:NSCLC组织中survivin阳性率64.3%、明显高于肺良性病变组织(8.3%)(P＜0.01),P16INK4a在NSCLC组织和肺良性病变组织中的失表达率分别为51.8%、16.7%(P＜0.01).NSCLC组织中survivin阳性率和P16INK4a失表达率均与NSCLC的病理分级、临床分期和淋巴结转移密切相关(P＜0.01).Survivin在NSCLC组织中P16INK4a表达阳性和阴性病例,阳性率分别为40.8%(11/27)和86.2%(25/29)(P＜0.01),且表达呈负相关(r=-0.459,P＜0.01).结论:在NSCLC中survivin的过表达和P16INK4a的失表达提示二者可能通过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖在非小细胞肺癌的发生发展中起协同作用,同时检测survivin、P16INK4a的表达状态对非小细胞肺癌的诊断和预后有一定的参考价值.     

p27kip1和 p16INK4A 基因在鼻咽癌组织中的甲基化表达及意义

目的探讨 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化在鼻咽癌早期诊断和治疗中的作用.方法采用甲基化特异性PCR 方法对54例鼻咽癌组织(观察组)和20例正常鼻咽上皮组织(对照组)的 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化状态进行检测及对比分析.结果观察组患者 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化检出率分别为62.96%(34/54)和46.30%(25/54),两者同时甲基化19例,总检出率为74.1%(40/54);对照组均未检测到 p27kip1和 p16INK4A 基因启动子区甲基化;两组间差异有统计学意义(P<0.01).p27kip1和 p16INK4A 基因启动子甲基化与鼻咽癌患者年龄、性别、T 分期、N 分期、TNM 分期、病理类型等临床特征均无相关性(P >0.05).鼻咽癌患者 p27kip1基因甲基化与 p16INK4A 基因甲基化无明显相关关系(r=0.2507,P >0.05).结论鼻咽癌中 p27kip1基因甲基化可能是其基因表达调节的一种重要方式,p27kip1和 p16INK4A 基因甲基化具有肿瘤特异性,为鼻咽癌早期事件,有望成为早期分子生物学诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.     

P14ARF与肿瘤

INK4a/ARF基因编码有两个独立的蛋白,即p16INK4a和p14ARF.其中p14ARF对MDM2-p53通路具有关键性调控作用.在人类的很多肿瘤中发现p14ARF基因位点存在改变.随着国内外研究的增多,p14ARF成为肿瘤研究的热点,本文将对p14ARF的结构、抑癌机理及其功能失活机制作一综述.     

宫颈癌及癌旁组织和上皮内瘤变及病变旁组织中P16^INK4A蛋白的表达意义

目的探讨P16INK4A蛋白在宫颈癌（cervical cancer CC）及癌旁组织、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia, CIN）及病变旁组织中表达的意义。方法采用免疫组化PV－9000方法检测P16INK4A蛋白在23例宫颈癌及癌旁组织、71例宫颈上皮内瘤变及病变旁组织、20例正常宫颈组织中的表达。结果宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中P16INK4A蛋白表达随着宫颈病变程度加深,阳性率逐渐增高,强度增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;P16INK4A蛋白在宫颈癌癌旁正常组织、宫颈上皮内瘤变病变旁正常组织、正常宫颈组织中不表达;P16INK4A蛋白在宫颈癌组织中的表达强度与肿瘤直径、浸润深度及有无淋巴结转移有关（P〈0.05）,而与年龄、民族及病理分级无关（P〉0.05）。结论P16INK4A蛋白表达与宫颈病变程度有关,病变旁组织均不表达,P16INK4A蛋白可能参与了宫颈癌的发生。P16INK4A蛋白表达与肿瘤直径、浸润深度及有无淋巴结转移密切相关,可能作为新的评价宫颈癌患者预后的生物学指标。     

地西他滨对淋巴瘤细胞株Raji中P15INK4B基因的去甲基化作用

目的 探讨Burkitt淋巴瘤细胞系Raji中P15INK4B基因甲基化状态,地西他滨对Raji细胞P15INK4B基因去甲基化作用及生长增殖的生物学影响。方法 用不同浓度地西他滨作用淋巴瘤细胞株Raji,用台酚蓝拒染法研究药物对Raji细胞生长曲线的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用聚合酶链反应(RT PCR)检测P15INK4B表达,用甲基化特异PCR(MSP) 方法检测P15INK4B 基因的甲基化程度。结果 地西他滨对Raji细胞有生长抑制作用,作用后细胞凋亡增加,P15INK4B基因表达增加,地西他滨使其甲基化程度下降。结论 在Raji细胞中P15INK4B高度基因甲基化,并且表达下降,地西他滨通过去甲基化抑制淋巴瘤增殖。     

P16INK4A和NF-κB在不同亚型尖锐湿疣组织中的表达及意义

目的:探讨感染不同亚型HPV的尖锐湿疣(CA)组织中P16INK4A和NF-κB的表达及意义。方法:用PCR技术对60例CA组织进行分型检测,再用免疫组化方法检测P16INK4A和NF-κB在HPV6/11阳性(低危型组)和HPV16/18阳性(高危型组)尖锐湿疣组织中的表达,同时用健康男性的包皮组织作对照。结果:在低危型组和高危型组尖锐湿疣组织中,P16INK4A的阳性率均为66.7%,对照组为0%。NF-κB在低危型组、高危型组和对照组中均有表达,阳性率为90%,三组的表达强度比较差异均有显著性意义(P<0.05);在尖锐湿疣组织中P16INK4A和NF-κB两者呈正相关。结论:P16INK4A和NF-κB在不同亚型尖锐湿疣组织中均存在着表达,且表达的水平不同。P16INK4A和NF-κB的表达增强可能参与尖锐湿疣组织中细胞的增生与调控。     

KGFR、P16^INK4a在新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及意义

目的探讨角质细胞生长因子受体（keratinoeyte gowth factor reeeptor,KGFR）与P16INK4a在新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）及宫颈鳞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶链接（SP）法检测20例慢性宫颈炎组织、70例CIN组织（CINⅠ25例、CINⅡ25例、CINⅢ20例）及40例浸润性宫颈鳞癌组织标本中KGFR、P16INK4a的表达。结果 （1）KGFR蛋白阳性表达率：浸润性宫颈鳞癌82.50%,CIN62.86%,慢性宫颈炎40.00%,差异具有统计学意义（P=0.004）;P16INK4a蛋白阳性表达率：浸润性宫颈鳞癌82.50%,CIN47.14%,慢性宫颈炎0.00%,差异具有统计学意义（P=0.000）。（2）在宫颈各组织中,KGFR蛋白与P16INK4a蛋白表达无相关性（r=0.158,P=0.073）。结论 KGFR和P16INK4a的高表达与宫颈癌的发生、发展密切相关,但是KGFR和P16INK4a无协同作用,各自以不同的方式参与了宫颈癌的发生发展。P16INK4a和KGFR检测可作为宫颈癌早期诊断和宫颈癌进展的分子指标。     

P16INK4A基因与宫颈癌

随着分子生物学的发展,人们发现在宫颈癌的发生、发展过程中,有多种癌基因、抑癌基因及相关因子参与。P16INK4A是人们发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因。它的过表达发生在宫颈癌和癌前病变阶段,可作为一种肿瘤标志物用于宫颈癌的临床筛查及诊断中。     

P16INK4、PCNA在肺癌中表达的研究

目的 通过检测肺癌组织中p16、PCNA的表达，探讨其在肺癌发生发展中的作用及相互关系。方法 采用S—P免疫组化方法，检测83例肺癌标本及15例正常肺组织标本中P16^INK4和PCNA的表达。结果 P16^INK4和PCNA在正常肺组织和肺癌组织中表达的阳性率存在显著性差异。P16^INK4表达的阳性率在小细胞癌与非小细胞癌之间有显著性差异。PNTM分期高的肺癌标本P16^INK4及PCNA表达阳性率显著高于分期低的肺癌标本。不同分化程度的肺癌组织P16^INK4及PCNA表达阳性率有显著性差异。结论 肺癌的发生与P16^INK4的低表达和PCNA的高表达有关。而P16^INK4的表达与肺癌的组织学类型、分化程度、临床分期有关；PCNA的表达与肺癌的分化程度、临床分期有关。     

P16INK4A在宫颈癌及癌前病变脱落细胞中表达的临床意义及其与HPV16、18型的关系

目的:观察p16INK4A能否作为宫颈癌、宫颈癌前病变标志物及其与HPV16、18型的关系.方法:采用免疫组织化学S-P方法,检测p16INK4A在宫颈脱落细胞中表达.同时,采用FQ-PCR技术检测HPV16、18型DNA.结果:9例宫颈鳞状细胞癌P16INK4A表达均为阳性;45例LSIL,44例P16INK4A表达为阳性,仅1例为阴性;38例的HSIL均为阳性;30例中ASC有10例阳性,20例正常宫颈及40例慢性宫颈炎,P16INK4A染色均为阴性.HPV16、18型DNA阳性率分别为8/9、31.1%、68.4%、33.3%.40例慢性宫颈炎HPV16、18型DNA阳性1例,正常宫颈细胞未检测出HPV16、18型DNA.结论:HPV16、18型DNA阳性率及阳性标本拷贝数愈高,P16INK4A表达的强度愈强.p16INK4A有望成为宫颈癌前病变诊断标志物.     

P16INK4a、Ki-67在宫颈上皮病变组织中的表达规律及其与HPV负荷量的相关性研究

目的 探讨P16INK4a、Ki-67、高危型人乳头瘤病毒(hr-HPV)对宫颈病变的诊断价值.方法 采用免疫组织化学染色法检测P16INK4a、Ki-67在120例宫颈上皮病变组织中的表达情况;采用第二代杂交捕获法检测病例的13种hr-HPV DNA负荷量.分析P16INK4a、Ki-67、hr-HPV的临床诊断价值...     

细胞周期调控因子P16INK4、P57kip2和K i67在肝癌中的表达及意义

目的：探讨细胞周期调控因子P16INK4、P57kip2和Ki67在肝癌中的表达水平及其意义。方法收集正常肝组织标本21例,肝细胞肝癌标本48例及对应的癌旁组织标本48例为研究对象,通过免疫组织化学和Western blot分析P16INK4、P57kip2和Ki67的表达水平。结果 P16INK4及 P57kip2蛋白肝癌组织中的表达与癌旁组织及正常肝脏组织比较显著降低,阳性率分别为49．3％和34．2％,K i67蛋白肝癌组织中的表达水平显著升高,其阳性率为91．7％,与癌旁组织及正常肝脏组织比较差异均有统计学意义（P＜0．05）,结果与Western blot结果一致;高、低分化组P57kip2、Ki67及P16INK4的表达水平比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 P16INK4、P57kip2表达降低及Ki67的高表达在肝细胞癌的发生、发展过程中可能有重要的作用。