应用PAP免疫组化染色法观察输精管结扎16—28月家兔的睾丸组织学变化

日本大耳白雄兔16只，行双侧输精管结扎手术。术后16、22、28个月处死动物，睾丸切片HE染色光镜匀,细精管恢复正常的成精过程，各级精细胞形态无明显异常，并可见灶状分布的萎缩曲细精管，被结缔组织包绕，有淋巴细胞和浆细胞浸润，PAP染色显示，恢复正常生精过程的曲细精管均阴性染色，萎缩的曲细精管与基底膜呈阳性染色。提示输精管结扎术后曲细精管萎缩与免疫损伤有关。     

输精管结扎不同月份大鼠睾丸cAMP的动态变化

本研究将５６只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为输精管结扎３月组及对照组，输精管结扎８月组及对照组，输精管结扎１５月组及对照组。分别检测各组的睾丸环－一磷酸腺苷、睾丸睾酮、睾丸血管紧张素转换酶。结果显示，ＲＶ－３组、ＲＶ－８组的睾丸ｃＡＭＰ明显低于ＲＣ－３组和ＲＣ－８组（Ｐ＜０．０５），而ＲＶ－１５组与ＲＣ－１５组睾丸ｃＡＭＰ则无差异（Ｐ＞０．０５）。睾丸睾酮，除ＲＶ－１５组较ＲＣ－１５组升高外（Ｐ＜０．０     

输精管结扎家兔血浆睾酮与皮质醇含量的动态变化

利用日本大耳白兔随机分为输精管结扎组和假手术组，术后４、８、１２、１８、２２、２５个月分别测定血浆睾酮和皮质醇含量。结果表明，ＶＧ４、１２、１８、２２和２５月组血浆睾酮，皮质醇含量与ＳＯＧ各月比较均无明显差异。（Ｐ〉０．０５）。但是，输精管结扎后８月的血浆皮质醇含量明显低于ＳＯＧ８月（Ｐ〈０．０５），而血浆皮质醇含量则显著地高于ＳＯＧ８月（Ｐ〈０．０５），血浆睾酮含量和皮质醇含量呈明显负相关（Ｐ〉     

应用PAP免疫组化染色法观察输精管结扎16～28月家兔的睾丸组织学变化

日本大耳白雄兔16只,行双侧输精管结扎手术。术后16、22、28个月处死动物,睾丸切片HE染色尤镜观察,大部分曲细精管恢复正常的成精过程,各级精细胞形态无明显异常,并可见呈灶状分布的姜缩曲细精管,被结缔组织包绕,有淋巴细胞和浆细胞浸润。PAP染色显示,恢复正常生精过程的曲细精管均阴性染色,萎缩的曲细精管与基底膜呈阳性染色。提示输精管结扎术后曲细精管萎缩与免疫损伤有关。     

输精管结扎家兔血浆睾酮与皮质醇含量的动态变化

利用日本大耳白兔随机分为输精管结扎组（ＶＧ）和假手术组（ＳＯＧ），术后４、８、１２、１８、２２、２５个月分别测定血浆睾酮和皮质醇含量。结果表明，ＶＧ４、１２、１８、２２和２５月组血浆睾酮，皮质醇含量与ＳＯＧ各月比较均无显著差异，（Ｐ＞０．０５）。但是，输精管结扎后８月的血浆皮质酮含量明显低于ＳＯＧ８月（Ｐ＜０．０５），而血浆皮质醇含量则显著地高于ＳＯＧ８月（Ｐ＜０．０５）。血浆睾酮含量和皮质醇含量呈明显负相关（Ｐ＜０．０５）。     

输精管结扎16月大鼠睾丸雄激素受体mRNA表达与血浆睾酮

为在分子水平上探讨输精管结扎对雄激素受体的影响，取１４只Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠分为输精管结扎组（ＶＧ）和假手术组（ＳＯＤＧ），采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｄｏｔ ｂｌｏｔ方法地术后１６个月大鼠睾丸组织做雄激素受体ｍＲＮＡ表达及血中ＬＨ和睾酮水平检测，。结果表明，（１）应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析发现，ＶＧ和ＳＯＧ在２８Ｓ后相同的位置上均有一杂交带，ＶＧ表达强度明显地强于ＳＯＧ；斑点印迹杂交结     

输精管结扎16月大鼠睾丸雄激素受体mRNA表达与血浆睾酮

为在分子水平上探讨输精管结扎对雄激素受体的影响，取１４只Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠分为输精管结扎组（ＶＧ）和假手术组（ＳＯＧ），采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｄｏｔｂｌｏｔ方法对术后１６个月大鼠睾丸组织做雄激素受体ｍＲＮＡ表达及血中ＬＨ和睾酮水平检测。结果表明，（１）应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析发现，ＶＧ和ＳＯＧ在２８Ｓ后相同的位置上均有一杂交带，ＶＧ表达强度明显地强于ＳＯＧ；斑点印迹杂交结果同样显示ＶＧ的ＡＲｍＲＮＡ表达强于ＳＯＧ。（２）血浆睾酮含量，ＶＧ（８．５９±３．０９ｎｍｏｌ／Ｌ）略低于ＳＯＧ（９．７６±２．５６ｎｍｏｌ／Ｌ），Ｐ＞０．０５。血清ＬＨ，ＶＧ（２．８０±０．８３ｍｇ／Ｌ）略高于ＳＯＧ（２．６４±０．８７ｍｇ／Ｌ），Ｐ＞０．０５。提示ＶＧ睾丸ＡＲｍＲＮＡ表达增强可能与血浆睾酮含量的下降有关，是一种代偿适应性变化。     

输精管结扎家兔抗精子抗体变化的实验研究

本实验应用间接血凝试验(IHT)和间接免疫荧光(IIF)两种方法,测定了33只输精管结扎的家兔血清抗精子抗体。IHT检测结果表明,23例检出抗精子抗体,阳性率为69.7％,效价范围为1∶5～1∶1280,抗体效价几何均数的峰值(1:174.5)出现于结扎后第11个月。IIF检测结果显示,30例检出抗精子抗体,占90.9％,其中9例为一过性。对照组两种方法的检测结果均为阴性。输精管结扎后第4个月起开始检出抗精子抗体,此后阳性率逐月增加,第7～12个月波动于45～72％的范围内。比较两种试验结果发现,二者有显著的一致性     

家兔输精管结扎后血脂及实验性高脂血症与睾酮变化关系的实验研究

输精管结扎术后12个月家兔15只,分为结扎胆固醇(V-Ch)组和结扎普食(V-S)组,同龄雄兔15只,分为对照胆固醇(C-Ch)组和对照普食(C-S)组。结果表明,V-S组睾酮(T)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、LDL-C水平与C-S组比较无显著差异,而HDL-C显著高于C-S组(P<0.05);V-Ch组上述指标与C-Ch组比较均无显著差异,V-Ch组TC,LDL-C显著高于V-S组(P<0.01),而T、TG、HDL-C差异不显著。各组血浆睾酮与同组血脂水平相关检验结果表明,除V-S组睾酮与LDL-C呈负相关(r=-0.76)外,余皆无相关关系。V-S和V-Ch组血清抗精子抗体水平无显著差异,血清抗精子抗体水平对睾酮水平无影响。     

家兔输精管结扎术后实验性高胆固醇血症

本实验以输精管结扎不同时期家免复制了两组高胆固醇血症动物模型。术后7个月喂饲高胆固醇饲料者称V-Ch Ⅰ组;术后12个月喂饲同样的高胆固醇饲料组,称V-ChⅡ组。结果表明,V-Ch Ⅰ组血清总胆固醇含量明显地高于V-ChⅡ组(P<0.05)。输精管结扎术后4～7个月时,80％家兔附睾明显肿胀,之后伴随附睾肿胀的消退,血清抗精子抗体阳性检出率增高。由此推论,V-Ch Ⅰ组由于精子抗原大量释放,作用于免疫系统使巨噬细胞处理脂质的能力降低。于是,血清总胆固醇水平高于V-ChⅡ组。     

米非司酮对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响

目的 :研究米非司酮对大鼠睾丸间质细胞 (Leydigcells)睾酮的基础分泌及促性腺激素刺激的睾酮分泌的影响。方法 :将雄性大鼠处死 ,取睾丸间质细胞加药进行体外培养 ,用放射免疫分析方法测定睾酮含量。结果 :10 μmol·L-1米非司酮对睾酮基础分泌和促性腺激素刺激的睾酮分泌的抑制率分别为 65 18% (P <0 0 0 1)、 72 78% (P <0 0 5 )。结论 :本研究表明米非司酮能直接影响睾丸甾体激素的合成     

妊娠期染毒PFOS对子代成年雄鼠生殖毒性作用及机制探讨

目的 探讨妊娠期染毒全氟辛烷磺酸盐（perfluorooctane sulfonate,PFOS）对子代成年雄鼠Leydig细胞（adult Leydig cell,ALC）合成睾酮的影响。方法 对妊娠第12 d的SD大鼠采用灌胃方式染毒PFOS（5 mg/kg),1次/d,连续8 d。仔鼠出生后第70 d (PND70),观测子代雄鼠体质量、睾丸系数、精子数量、血清睾酮浓度,并采用实时荧光聚合酶链式反应检测睾酮合成途径中相关因子 mRNA 的相对表达量。结果 与对照组相比,染毒组子代雄鼠体质量降低（P<0.001）;睾丸系数增高（P<0.001）;精子数量及血清睾酮浓度降低（P<0.05）;ALC中睾酮合成相关基因类固醇能急性调控因子（Star基因）、清除因子受体类 B 成员1（Scarb1基因）、P450scc编码基因（Cyp11a1）、17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD3）编码基因（Hsd17b3）的mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05),而胰岛素样生长因子-1基因（Igf1）和胰岛素样因子-3基因（Insl3）的mRNA表达差异无统计学意义。结论 妊娠期染毒PFOS可抑制子代雄鼠睾酮合成途径中相关基因的表达,降低子代雄鼠睾丸ALC合成睾酮的功能。     

电离射辐致大鼠离体Leydig细胞对hCG反应性变化机理的初探

本实验采用幼年雄性大鼠睾丸Leydig细胞离体单层培养法,研究hCG对Leydig细胞睾酮和cAMP生成的影响,并探讨了不同剂量X线对Leydig细胞辐射效应的发生机理。实验结果表明,hCG能明显促进Leydig细胞睾酮和cAMP生成。细胞预培养24h接受不同剂量X线照射,停照后加入外源性hLCG(0.05IU/ml)继续培养48h,小剂量辐射(25～250mGy,剂量率12.5mGy/min)在25,50mGy剂量组引起Leydig细胞对hCG反应性增高,睾酮生成量明显高于对照组,细胞内cAMP含量也发生相应变化;大剂量辐射后(0.5～8.0Gy,剂量率0.5Gy/min),Leydig细胞在各剂量组对hCG反应性均降低,睾酮生成量和cAMP含量变化一致,并与照射剂量呈线性负相关。     

Annexin5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中StarD7表达的影响

目的先前研究发现annexin 5刺激大鼠睾丸间质细胞后,3β-羟类固醇脱氢酶(3βbeta-hydroxysteroid dehydro-genase,3β-HSD)及睾酮水平都增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在联系。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中的StarD7(START domain containing 7)表达的影响,探讨annexin 5影响睾酮分泌的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,1nmol/L的annexin 5处理间质细胞24h,分别提取细胞总mRNA和总蛋白。RT-PCR检测StarD7的mRNA表达改变。Western blotting方法分析睾丸间质细胞中StarD7的蛋白表达变化。收取细胞爬片,利用免疫细胞化学的方法对StarD7在睾丸间质细胞中进行定位。结果与对照组相比,在mRNA水平上,加药组StarD7 mRNA的表达增加了44.5%(1.10±0.02 vs 1.59±0.09,P<0.05)。在蛋白水平上,加药组StarD7蛋白的表达增加了44.3%(1.49±0.10 vs 2.15±0.16,P<0.05)。StarD7主要定位在大鼠睾丸间质细胞的胞浆内,加药组的染色强度明显强于对照组。结论 StarD7在基因和蛋白水平均受annexin 5的调控,结合先前发现annexin 5可调控睾丸间质细胞睾酮合成的结果,提示annexin 5调控睾酮合成可能是通过调控StarD7的表达来实现的。     

Alterations in gene expression and steroidogenesis in the testes of transient cerebral ischemia in male rats

Background  Serum testosterone levels have been found lower in acute ischemic stroke male patients. However, the exact mechanism remains unclear. In the present study, we measured serum testosterone levels, steroidogenesis- related genes and Leydig cells number in experimental transient cerebral ischemia male rats to elucidate the mechanism.

Methods  The middle cerebral arteries of adult male Sprague-Dawley rats were sutured for 120 minutes and then sacrificed after 24 hours. Blood was collected for measurement of serum testosterone, follicular stimulating hormone and estradiol levels, and testes were collected for measurement of steroidogenesis-related gene mRNA levels and number of Leydig cells.

Results  Serum testosterone levels in rats after cerebral ischemia were significantly lower (0.53±0.16) ng/ml, n=7, mean±SE) compared with control ((2.33±0.60) ng/ml, n=7), while serum estradiol and follicular stimulating hormone levels did not change. The mRNA levels for luteinizing hormone receptor (Lhcgr), scavenger receptor class B member 1 (Scarb1), steroidogenic acute regulatory protein (StAR), cholesterol side chain cleavage enzyme (Cyp11a1), 3β-hydroxysteroid dehydrogenase 1 (HSD3β1), 17α-hydroxylase/20-lyase (Cyp17a1) and membrane receptor c-kit (kit) were significantly downregulated by cerebral ischemia, while luteinizing hormone, Kit ligand (KitL), 17β-hydrosteroid dehydrogenase 3 (HSD17β3) and 5α-reductase (Srd5a1) were not affected. We also observed that, relative to control, the Leydig cell number did not change.

Conclusions  These results indicate that transient cerebral ischemia in the brain results in lower expression levels of steroidogenesis-related genes and thus lower serum testosterone level. Transient cerebral ischemia did not lower the number of Leydig cells.

     

糖尿病对大鼠睾丸病理变化及睾酮合成、17β-HSD3和3β-HSD1mRNA表达的影响

目的：研究大鼠糖尿病时睾丸的主要病理变化及对间质细胞（Leydig细胞）睾酮合成、17β—HSD、和3β—HSD，mRNA表达的影响。方法：雄性SD大鼠19只，随机分为正常对照（NC）组10只，糖尿病（DM）组9只。DM组予高脂饮食加小剂量（25mg／kg）链脲佐菌素（STZ）诱导2型糖尿病大鼠模型，12周后处死。用光镜及电镜观察大鼠睾丸的组织形态学改变；RT—PCR法检测睾丸组织17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅲ型（17β-HSD3）和3β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型（3β—HSD1）mRNA含量；酶联免疫吸附法测定血清中睾酮含量。结果：糖尿病大鼠光镜下主要表现为睾丸曲细精管生精细胞数量减少及生精阻滞，Leydig细胞缩小，细胞核皱缩；透射电镜下主要见到Leydig细胞萎缩，线粒体、内质网等细胞器空泡样变及扩张，细胞核皱缩，染色质聚集；睾丸组织的17β—HSD3和3β—HSD1-mRNA含量和血清中睾酮含量糖尿病组均低于正常对照组。结论：糖尿病可使大鼠睾丸Leydig细胞变性，睾酮合成降低，其机制可能与降低17β—HSD，和3β—HSD1 mRNA表达有关。     

输精管结扎后家兔血清及精浆的前列腺酸性磷酸酶活力变化

成年日本大耳白雄兔４２只，随机分为输精管结扎２５月组（ＶＧ２５）１４只和假手术２５月组（ＳＯＧ２５）１１只；输精管结扎６月组（ＶＧ６）９只和假手术６月组（ＳＯＧ６）８只。均于体重２．５～３．０ｋｇ（５月龄）时行输精管结扎或假手术。在相同条件下检测前列腺酸性磷酸酶（ＰＡＰ）的活力。结果表明：①血清ＰＡＰ活力，有随增龄增高的趋势，输精管结扎对该酶活性无影响（Ｐ＞０．０５）。②精浆ＰＡＰ活力：ＶＧ６明显低于ＳＯＧ６（Ｐ＜０．０１）；ＶＧ２５也明显低于ＳＯＧ２５（Ｐ＜０．０１）。提示输精管结扎无提高前列腺癌标志酶—ＰＡＰ活性的作用；精浆中的ＰＡＰ除主要来自前列腺之外，另有一部分可能来自睾丸。