硫化氢在外源性SB203580预处理人卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(Na HS)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及可能机制。方法体外培养SKOV3细胞,随机分为正常对照组、Na HS组、SB203580组、Na HS+SB203580组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组SKOV3细胞增殖,流式细胞术检测各组SKOV3细胞周期分布,Western印迹检测各组SKOV3细胞中P-p38MAPK蛋白表达。结果与正常对照组比较,Na HS组SKOV3细胞增殖明显增加,G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,且p-p38MAPK表达明显增加(均P<0.01);SB203580组、Na HS+SB203580组SKOV3细胞增殖均明显减少,G1期细胞均明显增加,S期细胞均明显减少,且p-p38MAPK表达均明显降低(均P<0.01)。而与Na HS组比较,SB203580组、Na HS+SB203580组SKOV3细胞增殖均明显减少,G1期细胞均明显增加,S期细胞均明显减少,且p-p38MAPK表达均明显降低(均P<0.01);与SB203580组比较,Na HS+SB203580组SKOV3细胞的增殖明显增加,G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,且p-p38MAPK表达明显增加(均P<0.01)。结论 H2S可能通过活化p38MAPK信号通路促进SKOV3细胞增殖。     

蒺藜皂苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响

目的 探讨蒺藜皂苷(STT)对体外培养的卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及机制.方法 选择对数生长的卵巢癌细胞株SKOV3分为空白对照组,实验组加STr.采用MTr法检测细胞活性,流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3肿瘤细胞凋亡率及细胞周期变化;应用免疫组化检测SKOV3 Bcl-2和Bax蛋白表达变化.结果 与对照组相比,实验组对卵巢癌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P＜0.05).细胞周期分析显示,实验组使卵巢癌细胞的S期细胞比例减小,G1期细胞比例增大(P＜0.05).STr能够降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),增加Bax蛋白表达(P＜0.01).结论 STT能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,其机制可能与细胞周期发生停滞有关,并通过影响细胞周期及下调Bcl-2蛋白和增加Bax蛋白的表达而诱导细胞凋亡.     

硫化氢在外源性雷帕霉素预处理人结肠癌细胞增殖中的作用

目的探讨外源性硫氢化钠(Na HS)(H2S供体)对体外培养人结肠癌细胞增殖的影响及其机制。方法体外培养人结肠癌细胞,随机分为正常对照组、Na HS(100μmol/L)组、雷帕霉素(1μg/ml)组、Na HS(100μmol/L)+雷帕霉素(1μg/ml)组,采用CCK-8检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞细胞周期的影响,Western印迹检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞中m TOR蛋白表达的影响。结果与正常对照组比较,Na HS组人结肠癌细胞增殖显著增加,G0/G1期细胞显著减少,S期细胞显著增加,m TOR蛋白表达均显著增加(P<0.01)。雷帕霉素组人结肠癌细胞增殖显著减少,G0/G1期细胞显著增加,S期细胞显著减少,m TOR蛋白表达均显著减少(P<0.01)。而与Na HS组比较,Na HS+雷帕霉素组人结肠癌细胞增殖显著减少,G0/G1期细胞显著增加,S期细胞显著减少,m TOR蛋白表达均显著减少(均P<0.01)。结论 PI3K/Akt/m TOR信号通路可能介导参与了H_2S对人结肠癌细胞增殖的调控作用。     

斑蝥酸钠维生素B6对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖抑制作用

目的观察斑蝥酸钠维生素B6对体外培养的人卵巢癌细胞株(SKOV3细胞)的增殖抑制率、凋亡率及其对细胞周期的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6对SKOV3细胞的增殖抑制率。流式细胞仪定量检测经斑蝥酸钠维生素B6作用后的SKOV3细胞周期进程的变化及凋亡率。结果不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6制剂对SKOV3细胞增殖均有抑制作用,且呈剂量依赖性。流式细胞仪结果显示G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,SKOV3细胞凋亡率升高。结论斑蝥酸钠维生素B6制剂对SKOV3细胞生长增殖有显著的抑制作用,抑制SKOV3细胞G1期向S期转化进程,从而使S期细胞减少,造成G2/M期细胞相对增多,诱导SKOV3细胞凋亡。     

那可丁联合顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨那可丁联合顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞;用四甲基耦氮唑蓝(MTT)法检测SKOV3细胞增殖情况,流式细胞术检测分析细胞的周期变化、凋亡率及细胞中S期激酶关联蛋白2(Skp2)与成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)的表达情况。结果在一定范围内,那可丁对SKOV3细胞的增殖有明显抑制作用,且存在着浓度和时间依赖效应(P0.05)。联合用药组SKOV3细胞凋亡率〔(36.45±3.06)%,(39.56±4.91)%〕高于顺铂组〔(28.25±3.40)%〕(P0.05);与对照组相比,SKOV3细胞G0/G1期细胞比例减少(P0.05),G2/M期细胞比例增加(P0.05);各用药组SKOV3细胞中Skp2和FGF-2的表达水平均低于对照组(P0.05),其中联合用药组又低于顺铂组(P0.05)。结论那可丁提高了顺铂对SKOV3细胞的敏感性,其与顺铂联用具有协同抗肿瘤作用。     

硫化氢通过p38MAPK信号通路对肝纤维化大鼠肝细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝纤维化大鼠肝细胞增殖、凋亡的调节作用以及P-p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)蛋白的表达的影响.方法:用四氯化碳诱导肝纤维化SD大鼠模型,将提取的肝纤维化大鼠肝细胞分组:对照组、H2S组(对照组基础上加H2S的供体N a H S至最适浓度)、S B组(对照组基础上加SB203580至最适浓度)、SB+H2S组(对照组基础上加Na HS、SB203580至最适浓度).M T T法检测N a H S及S B203580对肝纤维化大鼠肝细胞的增殖、增殖抑制率的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测肝纤维化大鼠肝细胞凋亡率;Western blot技术检测P-p38MAPK蛋白在各组中的表达水平.结果:与对照组相比,低浓度H2S(50μmol/L)促进肝纤维化大鼠肝细胞增殖明显(P=0.000),对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡无影响;SB203580可抑制肝纤维化大鼠肝细胞的增殖,伴随药物浓度的升高细胞存活率降低(P=0.000),并诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡(P=0.000);P-p38MAPK蛋白在各组中均有表达,H2S组表达水平高于对照组(P=0.000),SB组、SB+H2S组与对照组、H2S组相比,P-p38MAPK蛋白的表达量均减少(均P=0.000).结论:低浓度H2S对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡无诱导作用,但能通过激活p38MAPK信号转导通路促进其细胞增殖.     

S1通过线粒体途径诱导人卵巢癌细胞凋亡

目的探讨小分子化合物S1对人卵巢癌(SKOV3)细胞线粒体凋亡的影响。方法通过倒置显微镜观察S1作用卵巢癌细胞的形态学改变;不同剂量S1作用8 h,JC-1染色检测线粒体膜电势变化;Western印迹检测线粒体凋亡相关蛋白细胞色素(Cyto)c、Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果与对照组相比S1作用24 h能明显诱导SKOV3凋亡;流式细胞术结果显示,S1引起SKOV3细胞线粒体膜电势降低(P<0.05,n=3);蛋白水平检测S1作用8 h能明显抑制SKOV3细胞Bcl-2蛋白表达,胞浆Cyto c和Bax蛋白表达增高(P<0.05,n=3)。结论 S1可能通过抑制Bcl-2蛋白诱导人卵巢癌细胞线粒体凋亡。     

miR-26b在卵巢癌组织中的表达与功能

目的探讨microRNA-26b(miR-26b)在卵巢癌组织中的表达情况,并探讨其对卵巢癌细胞株HO8910恶性行为的影响。方法采用实时定量PCR(q PCR)检测72例卵巢癌患者经手术切除的上皮性卵巢癌组织标本(卵巢癌组)中的miR-26b水平,同时选取26例正常卵巢上皮组织(正常组)和45例良性卵巢上皮囊肿组织(良性组)作对照,分析miR-26b表达与临床病理参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移)的关系。将化学合成miR-26b前体分子mimics和无关序列转染卵巢癌细胞株HO8910,采用MTT法检测转染24、48、72、96 h后的细胞增殖情况,采用流式细胞仪PI/Annexin V-FITC双染法及PI单染法检测转染48 h后的细胞凋亡及细胞周期情况。结果卵巢癌组的miR-26b水平均低于正常组和良性组(P<0.05),且其表达与临床分期、分化程度及淋巴结转移均有关(P<0.05)。与对照组相比,过表达组(转染miR-26b mimics)的增殖抑制率和凋亡率均升高,且细胞周期中G0/G1期细胞比例升高而S期细胞比例降低(P<0.05)。结论在卵巢癌细胞中上调miR-26b表达可抑制增殖并诱导凋亡及细胞周期组织,在卵巢癌防治中有一定价值。     

卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其耐药机制探讨

目的 为探讨卵巢癌细胞多药耐药的发生机制,寻找克服卵巢癌耐药的方法而建立人卵巢癌紫杉醇(TAX)耐药细胞株SKOV3/TAX.方法 选用卵巢癌细胞株SKOV3,以浓度为300ug/ml的TAX反复大剂量冲击用药,培养8个月后建立TAX耐药细胞株,命名为SKOV3/TAX.该细胞已反复传代3个月以上.结果 SKOV3/TAX细胞耐药性稳定,耐药指数(RI)为10.57.除对紫杉醇耐药外,对环磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、足叶乙甙(VP-16)有明显的交叉耐药,与亲本细胞相比,细胞倍增时间明显缓慢(P<0.01),G2/M期明显高于亲本细胞,S期比例明显降低(P<0.05),细胞内P糖蛋白(P-gp)表达增加.产生耐药的机制可能与细胞周期改变、细胞凋亡及P-gp的表达增加,导致细胞内TAX聚集量减少有关.结论 SKOV3/TAX细胞耐药性稳定,具有典型的多药耐药表型.     

姜黄素对卵巢癌细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将SKOV3随机分为空白组、顺铂组、姜黄素组、联合组。除空白组外,顺铂组加入终浓度为2.5μmol/mL的顺铂、姜黄素组加入终浓度为10μmol/mL的姜黄素、联合组加入顺铂2.5μmol/mL和姜黄素10μmol/mL,均作用24 h。采用RT-PCR检测各组细胞中表皮生长因子受体(EGFR),用流式细胞术分析细胞周期、凋亡率。结果与空白组相比,顺铂组、姜黄素组、联合组细胞中EGFR表达明显下降,P均<0.01,顺铂组、姜黄素组、联合组细胞凋亡率、G0/G1期细胞增高,G2/M期细胞降低(P均<0.05);联合组EGFR相对表达量低于、细胞凋亡率和G0/G1期细胞高于顺铂组和姜黄素组(P均<0.05),顺铂组与姜黄素组EGFR表达、细胞凋亡率及G0/G1期细胞相近(P均>0.05)。结论姜黄素能有效促进卵巢癌细胞凋亡,其机制与下调细胞中EGFR表达有关;与单独用药比较,姜黄素联合顺铂的抑瘤作用明显增强。     

卵巢癌个体化治疗的可行性

目的探讨原代人卵巢癌细胞对4种化疗药物的敏感性。方法应用原代人卵巢癌细胞为靶点,观察其对4种化疗药物的敏感性。MTT法检测原代卵巢癌细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化,透射电子显微镜观察其亚细胞结构改变。结果 MTT结果显示,斑蝥酸钠维生素B6、顺铂对培养的卵巢癌细胞敏感性较强,而紫杉醇、环磷酰胺敏感性次之,组间比较差异显著(P0.05)。流式细胞仪结果显示不同的化疗药物诱导原代卵巢癌细胞周期分布表现为G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,组间比较差异显著(P0.05)。透射电子显微镜下可见细胞核染色质趋边凝集、线粒体肿胀,可见凋亡小体改变。结论原代人卵巢癌细胞培养及药物敏感性实验为卵巢癌术后个体治疗提供重要参考依据。此对降低化疗药物的毒副作用,避免多药耐药的产生,尤其对远端微小转移灶的治疗有重要意义。     

p38MAPK抑制剂增强人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨p38 MAPK抑制剂通过蛋白激酶B(Akt)有关的信号途径对人宫颈癌细胞顺铂(CDDP)化疗敏感性的影响.方法 应用CDDP和p38MAPK特异性抑制剂SB203580及两者联合应用处理人宫颈癌Hela细胞株.采用MTT法检测化疗药物对肿瘤细胞的生存抑制率,Western印迹技术检测化疗药物处理后Akt和磷酸化Akt的表达水平.结果 MTT显示CDDP和SB203580对人宫颈癌细胞均有抑制作用(24.34％,36.58％),两者相同用量联合后癌细胞抑制率更明显(58.76％).Western印迹结果说明CDDP处理组与联合处理组Akt表达水平无明显差异,而pAkt水平较SB203580组和联合组显著升高.结论 p38 MAPK抑制剂SB203580可能通过阻断PI3K/Akt途径或其他有关Akt的通路提高人剧颈癌细胞CDDP化疗的敏感性.     

硫化氢在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡中的作用及磷酸化P38、Caspase-3蛋白表达的变化。方法实验设对照组(HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液)、二甲基亚砜(DMSO)组(对照组基础上加DMSO,使其终浓度为0.1%)、NaHS组(对照组基础上加NaHS,使其终浓度为50μmol/L)、SB组(DMSO组基础上加SB203580,使其终浓度为75μmol/L)、SB加NaHS(SB+NaHS)组;采用Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测磷酸化p38MAPK表达及Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,SB组和SB+NaHS组HSC-T6的凋亡率增加(P0.05),NaHS组p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3表达均明显增高(P0.01);与NaHS组比较,SB组和SB+NaHS组细胞凋亡率增加明显(P0.01),p38MAPK磷酸化水平表达降低(P0.01);SB+NaHS组较SB组Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)。结论 p38MAPK及Caspase-3在H2S刺激的HSC-T6中表达增强,H2S能促使SB203580诱导的HSC-T6细胞凋亡,其作用机制可能与活化p38MAPK的磷酸化途径,进而激活Caspase-3的表达有关。     

全反式维甲酸对卵巢癌SKOV3细胞增殖、分化的影响

目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）对卵巢癌SKOV3细胞增殖、分化的影响.方法 以1×10^-6 mol/L的ATRA处理人卵巢癌SKOV3细胞为实验组,细胞不加ATRA处理为对照组.应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞周期分布,免疫组化法检测鼠抗人分化相关基因1（NDRG1）表达,显微镜观察细胞形态变化.结果 与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率、NDRG1表达升高（P均＜0.05）;随着作用时间延长,实验组G/G0期细胞增多、S期细胞减少,显微镜下可见细胞生长差,增殖缓慢,分裂像少见.结论 ATRA有较强的抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和诱导其分化作用.     

不同浓度的吗啡与5-氟尿嘧啶联合应用对MCF-7乳腺癌细胞凋亡与细胞周期的影响

目的研究吗啡与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合应用对MCF-7乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法药物作用48 h后通过流式细胞技术(FCM)检测Annexin V-EGFP/PI染色的细胞早期凋亡和细胞周期情况。结果单独应用吗啡处理,早期凋亡率随着吗啡浓度的增加依次增加(P<0.05,P<0.01),浓度为250μM及1250μM时,早期凋亡率较未处理组明显增加(P<0.01)。单独应用500μM 5-Fu处理48 h,早期凋亡率亦增加(P<0.01)。吗啡与5-Fu联合用药时,早期凋亡率随着联合用药中吗啡浓度的增加依次增加(P<0.01)。各浓度吗啡与5-Fu联合应用,均具有协同作用(P<0.05,P<0.01)。单独应用吗啡处理时,G0/G1期细胞比例随着吗啡浓度的增加依次增加(P<0.01),S期细胞比例随着吗啡浓度的增加依次降低(P<0.01),而G2M期细胞比例无明显变化(P>0.05)。单独应用500μM 5-Fu处理时,G0/G1期细胞比例减少(P<0.01),S期细胞比例增加(P<0.01),G2M期细胞比例减少(P<0.05)。不同浓度的吗啡与5-Fu联合用药时,G0/G1期细胞比例随着联合用药中吗啡浓度的增加依次增加(P<0.05,P<0.01),较该浓度的吗啡单独处理组均减少(P<0.01);S期细胞比例随着吗啡浓度的增加依次降低(P<0.05,P<0.01),较该浓度的吗啡单独处理组均增加(P<0.01);G2M期细胞比例随着联合用药中吗啡浓度的增加依次降低(P<0.05,P<0.01),较该浓度的吗啡单独处理组均减少(P<0.01);各浓度吗啡与5-Fu联合应用,均具有协同作用(P<0.01)。结论一定浓度的吗啡、5-Fu及联合应用48小时能诱导MCF-7乳腺癌细胞早期凋亡,且与其中吗啡的浓度有一定的剂量依赖关系,两药联合应用具有协同作用。吗啡可以诱导MCF-7细胞主要被阻滞于G0/G1期,5-Fu可以使细胞循环周期主要被阻滞于S期,两药联合应用既抑制了G0/G1期到S期的转化,又抑制了S期向G2M期的转化,对细胞周期的影响也与其中吗啡的浓度有一定的剂量依赖关系     

1,25(OH)_2D_3对脂多糖诱导下肾小管上皮细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨1,25(OH)_2D_3对脂多糖诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)增殖与凋亡的影响。方法体外培养HK-2细胞,随机分为正常对照组、脂多糖(1μg/ml)组、1,25(OH)_2D_3(10~(-8)mol/L)组、脂多糖联合1,25(OH)_2D_3组,干预培养48 h,采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测各组HK-2细胞的增殖,流式细胞术分别检测各组HK-2细胞的细胞周期与细胞凋亡。结果与正常对照组比较,脂多糖组HK-2细胞增殖明显被促进,G0/G1期细胞明显减少,S期及G2/M期细胞明显增加,且细胞凋亡率明显下降;1,25(OH)_2D_3组HK-2细胞增殖明显被抑制,G0/G1期细胞明显增加,S期及G2/M期细胞明显减少,且细胞凋亡率明显增加。与脂多糖组比较,脂多糖联合1,25(OH)_2D_3组HK-2细胞增殖明显被抑制,G0/G1期细胞明显增加,S期及G2/M期细胞明显减少,且细胞凋亡率明显增加。结论 1,25(OH)_2D_3可抑制HK-2细胞的增殖,诱导其凋亡,且1,25(OH)2D3可逆转脂多糖对HK-2细胞的促增殖、抑制凋亡的作用。     

人剪切修复基因D介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用

目的探讨人剪切修复基因D(XPD)是否介导氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡。方法以ox-LDL建立HUVEC凋亡模型。用脂质体将XPD-siRNA转染HUVEC,给予ox-LDL处理。实验分6组:空白对照组;阴性对照siRNA组;XPD-siRNA组;ox-LDL组;ox-LDL+阴性对照siRNA组;ox-LDL+XPDsiRNA组。MTT测定细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期;用RT-PCR和Western blot检测XPD、Bax和Bcl-2的表达。结果建立HUVEC凋亡模型ox-LDL的最佳浓度为100 mg/L。与阴性对照siRNA组相比,XPDsiRNA组的细胞凋亡率明显下降(P0.05),存活率明显增加(P0.01),G0/G1期细胞减少(P0.05)、S期细胞增加(P0.05),XPD、Bax表达降低(P均0.05),Bcl-2表达增高(P0.05);与空白对照组相比,ox-LDL组细胞凋亡率明显增加(P0.01),细胞存活率下降(P0.05),G0/G1期细胞增加(P0.05)、S期细胞明显减少(P0.01),XPD、Bax表达升高(P均0.05),Bcl-2表达降低(P0.05);与ox-LDL+阴性对照siRNA组相比,ox-LDL+XPD-siRNA组细胞凋亡率下降(P0.05),细胞存活率明显增加(P0.01),G0/G1期细胞减少(P0.05)、S期细胞增加(P0.05),XPD、Bax表达降低(P均0.05),Bcl-2表达增高(P0.05)。结论 XPD能介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用。     

顺铂联合足叶乙甙对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用及机制探讨

目的观察顺铂联合足叶乙甙（PE方案）对卵巢癌细胞增殖和细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养的卵巢癌SKOV3细胞,加入不同浓度的顺铂和足叶乙甙,作用24 h。MTT法检测细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞周期,免疫细胞化学法检测细胞的Cyclin B1、p34cdc2和survivin。结果足叶乙甙和不同浓度的顺铂联合应用,可明显抑制SKOV3细胞的增殖,S期和G2-M期细胞增加,G0-G1期细胞减少,细胞Cyclin B1、p34cdc2和survivin表达下调。结论顺铂联合足叶乙甙对SKOV3细胞具有协同抑制作用,阻滞细胞周期,其机制可能与细胞Cyclin B1p、34cdc2和survivin的表达下调有关。     

联合应用p38MAPK抑制剂对降低结肠癌阿霉素耐药性的影响

目的:探讨p38 MAPK抑制剂通过Akt(蛋白激酶B)有关的信号途径对结肠癌细胞阿霉素(Doxorubicin)化疗敏感性的影响.方法:应用阿霉素(Dox)和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580及两者联合应用去处理结肠癌HCT-116细胞株.采用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测化疗药物对肿瘤细胞的生存抑制率,Western blot蛋白免疫印迹技术检测化疗药物处理后癌细胞Akt和磷酸化Akt的表达水平.结果:MTT显示阿霉素和抑制剂SB203580对结肠癌细胞均有抑制作用(26.60%,33.87%),后者大于前者,两者相同用量联合后癌细胞抑制率更明显(56.04%).Western blot显带说明阿霉素处理组较联合组的Akt表达水平并无明显差异,而磷酸化的Akt水平较SB203580组和联合组显著升高.亦即抑制剂组和联合组方案可降低结肠癌细胞磷酸化Akt的表达水平.结论:p38 MAPK抑制剂SB203580可能通过阻断P13K/Akt信号途径或其他有关Akt的通路以提高结肠癌细胞阿霉素化疗的敏感性.     

VEGF基因表达抑制对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的:研究siRNA(small interfering RNA)对人胃腺癌细胞SGC-7901的VEGF基因表达的影响．方法:选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA．以人胃腺癌细胞系SGC-7901为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞．采用Hoechst33258染色观察siRNA作用于SGC-7901细胞中出现凋亡小体的情况．流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR法比较转染前后VEGF mRNA表达水平的变化, ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化．结果:两组siRNA转染后均能有效地抑制 SGC-7901细胞的生长,诱导细胞凋亡产生凋亡小体．siRNA作用于SGC-7901细胞．其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0／G1 期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0／G1期(siRNA1组,siRNA2组G0／G1期VS 对照组G0／G1期:75．04％,76．52％ vs 58．37％, P<0．01;siRNA1组,siRNA2组S期vs对照组S 期:17．82％,16．73％ vs 39．52％,P<0．01),而其他组则无明显变化．VEGF mRNA的表达量大幅度减少(siRNA1组,siRNA2组vs对照组: 0．638±0．078,0．656±0．085 vs 0．941±0．046, P<0．01),相对应的VEGF蛋白水平也显著降低(164．7±22．7,166．3±26．6 vs 414．0±61．5, P<0．01),而其他组siRNA转染后则无上述作用．结论:应用靶向VEGF基因RNA干扰技术可以有效抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖．