氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其机制

目的观察氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用氯喹20,40和80μmol·L~(-1)分别处理MDA-MB-231细胞24和48 h,采用CCK-8法和细胞克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western印迹法检测细胞周期相关蛋白即细胞周期蛋白D3、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和CDK4,细胞凋亡相关蛋白即活化胱天蛋白酶3和活化聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及自噬标志蛋白即自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)和自噬底物SQSTM1表达水平。结果氯喹20,40和80μmol·L~(-1)与MDA-MB-231细胞作用24和48 h后,均能有效抑制细胞增殖(P<0.01)。与细胞对照组相比,氯喹20和40μmol·L~(-1)处理24 h,G_0/G_1期细胞百分比显著增高(P<0.01);80μmol·L~(-1)组G_2/M期细胞百分比升高(P<0.01),且细胞凋亡率增加(P<0.01)。处理48 h,与细胞对照组相比,氯喹用药3组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05)。氯喹3组处理24 h,与细胞对照组相比,细胞周期蛋白D3、CDK2和CDK4表达水平降低(P<0.01),活化胱天蛋白酶3和活化PARP表达增强(P<0.01),LC3B和SQSTM1表达水平显著升高(P<0.01)。结论氯喹可通过抑制MDA-MB-231细胞自噬、阻滞细胞周期进程并促进细胞凋亡而抑制其增殖。     

娃儿藤宁碱诱导肝癌细胞死亡及其作用机制

目的探讨娃儿藤宁碱调节肝癌的生长及分子作用机制。方法采用MTT和平板克隆形成实验检测娃儿藤宁碱作用对细胞活力及单细胞增殖能力的影响;DAPI染色、Western印迹分析和流式细胞技术检测娃儿藤宁碱对肝癌细胞凋亡的影响;免疫荧光染色检测娃儿藤宁碱对细胞自噬的影响;应用自噬抑制剂(Bafilomycin A1)抑制自噬探究对凋亡的影响;应用细胞热转变分析实验(CETSA)和药物亲和力反应靶标稳定性测定(DARTS)实验分析娃儿藤宁碱与蛋白激酶B(Akt)之间的结合关系,采用分子对接模拟娃儿藤宁碱与Akt之间的作用位点,利用Western印迹实验对其进行验证;将两种肝癌细胞系HepG2和Hep3B的Akt进行过表达,应用Western印迹和免疫荧光染色实验分析娃儿藤宁碱对肝癌细胞的凋亡、自噬的影响。结果娃儿藤宁碱显著下调肝癌细胞生存活力,降低单细胞增殖能力;显著改变凋亡相关蛋白PARP、活化胱天蛋白酶3、Bcl-2和Bax,自噬相关蛋白P62和LC3B的表达水平。在娃儿藤宁碱作用下,细胞活力进一步下降,单细胞增殖能力进一步降低,细胞凋亡进一步增加。娃儿藤宁碱可减缓链金霉素或温度对Akt蛋白的降解速度,娃儿藤宁碱可以直接与Akt的C端结构域结合,并可以显著抑制Akt的磷酸化(S308位点活性),表达Akt后,娃儿藤宁碱抑制的细胞活力有一定程度的恢复,凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白均有一定程度的逆转。结论娃儿藤宁碱通过促进肝癌细胞凋亡、诱导细胞自噬,进而发挥抗肝癌作用。     

槐定碱对人结肠腺癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响

目的考察槐定碱对人结肠癌SW620细胞的增殖影响及探讨其诱导凋亡作用。方法MTT法测定槐定碱对SW620细胞的半数抑制浓度;光学显微镜、荧光显微镜及电镜观察细胞凋亡形态变化;流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率。结果实验结果显示槐定碱对体外培养的SW620细胞增殖具有明显抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,48hIC50=2.8mmol.L-1。凋亡细胞表现为细胞固缩、变圆、核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化。DNA ladder结果显示有凋亡引起的"梯状"条带出现。流式细胞仪细胞周期分析结果表明,随着槐定碱作用时间的延长,G0-G1期细胞增多,同时S期细胞比例也相应增高。结论槐定碱对体外培养SW620细胞生长增殖有明显抑制作用,其作用机制与阻滞细胞周期的进程,诱导细胞凋亡相关。     

过氧化氢诱导血管平滑肌细胞内质网应激及其自噬作用

目的观察过氧化氢(H_2O_2)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激及其自噬的作用机制。方法体外培养VSMC细胞,加入H_2O_250,100,200,400,600,800,1200和1600μmol·L~(-1)分别作用12和24 h后,MTT法检测H_2O_2对VSMC的抑制率;倒置相差显微镜观察H_2O_2对VSMC细胞形态的影响;采用间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和泛素结合蛋白p62的表达,采用Western蛋白印迹法检测自噬相关蛋白人卷曲螺旋肌球蛋白样BCL2相互作用蛋白/自噬基因(Beclin-1)和LC3、内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT-增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及自噬上游信号通路哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白(m TOR)的表达。结果 MTT结果显示,H_2O_250~1600μmol·L~(-1)作用VSMC细胞12和24 h,VSMC细胞存活率明显降低,12和24 h的IC50分别为(597.2±2.3)和(447.4±1.7)μmol·L~(-1)。倒置相差显微镜观察可见H_2O_2400μmol·L~(-1)组VSMC收缩变圆。H_2O_2400μmol·L~(-1)作用VSMC 12 h时,细胞存活率由(97.5±0.1)%下降至(74.4±1.0)%;作用VSMC 24 h,下降至(56.8±0.9)%(P<0.01)。激光共聚焦显微镜检测发现,H_2O_2400μmol·L~(-1)作用VSMC 8 h,细胞浆中LC3和p62蛋白随H_2O_2作用时间的延长表达增加。LC3与p62的共定位显示,H_2O_2400μmol·L~(-1)作用8 h最明显。Western蛋白印迹结果表明,H_2O_2诱导内质网应激相关蛋白GRP78,CHOP和自噬相关蛋白Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著增加(P<0.01),m TOR的表达显著降低(P<0.01)。结论 H_2O_2可能通过诱导VSMC内质网应激激活自噬。     

不同浓度米诺环素对人胶质瘤细胞增殖、自噬、凋亡的影响及其机制

摘要：目的 探讨不同浓度米诺环素对人类胶质瘤 U87 和 LN229 细胞增殖及凋亡的影响和作用机制。方法 （1）U87和LN229细胞设对照组（DMSO处理），5 μmol/L米诺环素组和10 μmol/L米诺环素组，分组处理72 h 后采用 MTT法检测细胞增殖水平，免疫荧光标记检测细胞自噬蛋白微管相关蛋白l轻链3B亚基（LC3B）表达水平，Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达变化。（2）构建沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）-shRNA载体，观察 敲低SIRT1表达后，不同浓度米诺环素对U87和LN229细胞自噬的影响。结果 （1）与对照组相比，5 μmol/L和10 μmol/L米诺环素组细胞增殖能力下降，免疫荧光标记显示胞浆内自噬标记蛋白LC3B的表达增多，Western blot结果 显示哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）水平显著降低，自噬基因相关蛋白5（Atg5）、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α亚 基（p-AMPKα）、SIRT1水平显著增加（P＜0.05）。与对照组相比，10 μmol/L米诺环素组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷 酸化 p70 核糖体蛋白 S6 激酶（p-p70s6k）水平显著降低，活化形式的 Caspase-3（Cleaved caspase-3）水平显著增加 （P＜0.05），而5 μmol/L米诺环素组除Cleaved Caspase-3表达水平下降外其他凋亡相关蛋白水平未见显著变化（P＞ 0.05）。（2）敲低SIRT1表达后，shSIRT1组mTOR和LC3B表达水平较对照组明显下降；而经过米诺环素处理后，mTOR 的表达出现明显升高，而LC3B表达水平仅部分恢复。结论 5、10 μmol/L的米诺环素均能有效抑制人类胶质瘤U87 和LN229细胞的生长，其机制可能与AMPK/SIRT1通路诱导细胞自噬和p70s6k/Bcl-2通路诱导细胞凋亡有关。     

胰高血糖素样肽-1对AGEs诱导H9C2心肌细胞自噬的影响

目的观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导H9C2心肌细胞自噬(Autophagy)的影响,初步探讨GLP-1心肌细胞保护作用与自噬活性关系。方法将传代培养H9C2心肌细胞随机分4组:(1)Control组:加入0.9%生理盐水;(2)AGEs组:加入100 mg·L~(-1)AGEs;(3)AGEs+GLP-1组:同时加入100 mg·L~(-1)AGEs和10 nmol·L~(-1)GLP-1;(4)AGEs+GLP-1+Rapamycin组:同时加入100 mg·L~(-1)AGEs、10 nmol·L~(-1)GLP-1及5μmol·L~(-1)Rapamycin(自噬诱导剂)。各组在经上述预处理24 h后,分别用CCK-8法检测细胞存活率Hoechst 33258试剂盒检测细胞的凋亡率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞自噬溶酶体形成,Western blot法检测自噬相关蛋白(LC3Ⅱ,Beclin-1)表达。结果 (1)与Control组相比,AGEs组细胞生存率明显减少,细胞内ROS水平明显增高,细胞自噬溶酶体水平及自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin-1)表达均明显增加;(2)与AGEs组相比,AGEs+GLP-1组细胞生存率明显增高,细胞内ROS水平、细胞自噬溶酶体水平及自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin-1)表达均明显下降;(3)与AGEs组相比,AGEs+GLP-1+rapamycin组中细胞内ROS水平降低,而细胞生存率、细胞自噬溶酶体水平及自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin-1)表达未见差异。结论 (1)AGEs可导致H9C2心肌细胞内ROS升高,诱导细胞损伤并激活细胞自噬;(2)GLP-1对AGEs诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,其保护机制可能与抑制细胞自噬活性有关。     

小檗碱通过诱导细胞抑制性自噬发挥抗胃癌作用

目的探讨中药黄连活性成分小檗碱抗胃癌作用及相关机制。方法用MTT法检测小檗碱对人胃癌BGC-823细胞的生长抑制作用;用MDC染色结合流式细胞术及GFP-LC3质粒转染法检测小檗碱引起BGC-823细胞发生自噬;用Western印迹法检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1表达水平;引入自噬抑制剂3-MA和CQ,用MTT法检测小檗碱诱导的自噬与细胞存活之间的关系;建立人胃癌BGC-823细胞裸鼠移植瘤模型,评价小檗碱在体内抑制人胃癌细胞移植瘤的生长作用,用免疫组化法和Western印迹法检测肿瘤组织中自噬相关蛋白的表达水平。结果小檗碱呈时间-剂量依赖性的诱导BGC-823细胞死亡,其48 h的IC50值为24μmol·L~(-1)。与对照组相比,小檗碱处理后细胞中自噬小体的数目及自噬标志蛋白LC3及Beclin-1的表达水平皆随时间依赖性增加,且抑制自噬后小檗碱引起的细胞死亡率下降,提示小檗碱诱导的自噬发挥抑制细胞生长的作用。裸鼠移植瘤实验表明,5、10及20 mg·kg~(-1)的小檗碱均对裸鼠移植瘤的生长具有显著的抑制作用,且抑制作用与剂量成正比。其中小檗碱高剂量组的相对肿瘤增殖率为28%,优于阳性对照药物5-FU(31%)。同时,小檗碱不影响裸鼠的体重,裸鼠生长状态良好,说明其毒性较小。进一步发现小檗碱能够呈剂量依赖性的增加肿瘤组织中自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平。结论小檗碱在体内和体外通过诱导细胞抑制性自噬而发挥抗胃癌作用。     

橘红素对人胃癌AGS细胞自噬的作用及其机制研究

目的探讨橘红素(Tangeretin, Tan)对人胃癌AGS细胞自噬的作用及其机制。方法 Western blot检测Tan对LC3II、p62及p-Akt蛋白表达的影响,以及自噬抑制剂CQ和促进剂Rapa干预后,LC3II和p62蛋白表达的变化。Annexin V/PI双染,流式细胞术检测CQ对Tan诱导细胞凋亡作用的影响。结果作用24 h,Tan可呈剂量依赖地增强LC3II蛋白(P<0.05,P<0.01)和p62蛋白(P<0.05)的表达;作用48 h,Tan可呈剂量依赖地增强p62蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。作用24 h和48 h,与Tan单独处理组比较,CQ与Tan联合处理可明显增强LC3Ⅱ和p62蛋白的表达(P<0.01),而Rapa和Tan联合处理则下调LC3Ⅱ和p62蛋白的表达(P<0.05)。10μmol·L~(-1) CQ与60μmol·L~(-1) Tan联合作用48 h,CQ+Tan组与Tan组比较,细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。Tan作用24 h和48 h,p-Akt蛋白的表达均呈剂量依赖地下降(P<0.05,P<0.01)。结论橘红素可以抑制人胃癌AGS细胞的自噬流,造成自噬体的堆积,促进AGS细胞凋亡,Akt蛋白的磷酸化可能参与其中。     

去甲泽拉木醛通过调控细胞周期和自噬诱导的细胞凋亡抑制K562细胞生长的机制

目的研究去甲泽拉木醛(demethylzeylasteral,ZST93)在体外抑制慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的增殖作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法以K562细胞为研究对象,采用CCK-8、细胞生长曲线和倒置显微镜检测ZST93对K562细胞增殖抑制作用;细胞转染和Western blot分析细胞自噬;PI染色、Annexin V-FITC/PI和流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果ZST93对K562细胞株的生长呈剂量和时间依赖性的抑制作用,IC₅₀值为2.59μmol·L^-1,使细胞周期阻滞于G₁期。自噬检测中发现ZST93可诱导GFP-LC3积累、LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ以及p62表达水平降低。ZST93通过调控自噬激活caspase-8,诱导外部凋亡信号通路,促使caspase-9、caspase-3和PARP剪切而被激活,针对caspase-3的抑制剂Z-DEVD-FMK能够降低ZST93诱导的K562细胞凋亡。结论ZST93可有效抑制K562细胞增殖,促进细胞周期阻滞、细胞凋亡和自噬激活,可能与自噬激活/caspase-8/caspase-3凋亡信号通路有关。     

雷公藤甲素诱导自噬促进人肾小管上皮HK-2细胞凋亡

目的 研究自噬在雷公藤甲素(triptolide, TP)诱导人肾近端小管上皮HK-2细胞凋亡中的作用。方法 以HK-2细胞为研究对象,CCK-8法检测细胞存活率;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位MMP变化;激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内LC3荧光强度变化;Western blot检测细胞凋亡及自噬相关蛋白cleaved caspase 9、caspase 9、Bax、Bcl-2、LC3、p62和Beclin 1的表达;采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin, Rap)研究自噬对TP诱导HK-2细胞凋亡的影响。结果 TP降低HK-2细胞存活率,诱导细胞凋亡和自噬,降低MMP水平,增加胞内LC3Ⅱ荧光强度,上调Beclin 1表达,下调p62表达,升高cleaved caspase 9/caspase 9、Bax/Bcl-2和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。此外,与TP组相比,3-MA+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值降低,p...     

土槿皮乙酸对人肺癌A146细胞的自噬作用以及凋亡与自噬的关系

目的土槿皮乙酸是从松科植物金钱松的根皮或近根树皮中分离的二萜酸,具有抗肿瘤、抗生育等作用。本研究主要阐述了土槿皮乙酸能够诱导人肺癌细胞(A146)发生自噬从而抑制细胞生长的机制及在A146细胞中自噬与凋亡的关系。方法采用了形态学观察、四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析法、MDC流式细胞术分析、MDC荧光染色法、乳酸脱氢酶LDH活力测试法、免疫沉淀法、蛋白质印迹法等方法考察了土槿皮乙酸通过自噬抑制A146细胞生长以及该细胞中自噬与凋亡的关系。结果研究发现,4μmol/L土槿皮乙酸作用A146细胞0、12、24、36、48 h后,细胞数目减少,MDC染色有荧光亮绿色颗粒出现,流式细胞仪分析显示土槿皮乙酸增加MDC阳性率。而且4μmol/L土槿皮乙酸作用后自噬相关蛋白Beclin 1的表达增高,LC3从Ⅰ型转化为Ⅱ型,说明土槿皮乙酸诱导A146细胞自噬,自噬在抑制A146细胞生长中起到了关键的作用。另外,加入自噬抑制剂3-MA与土槿皮乙酸联用之后,凋亡小体明显增加,凋亡率上升,自噬率下降,自噬相关蛋白Beclin 1和LC3表达降低,说明在A146细胞中,自噬是对抗凋亡的。结论土槿皮乙酸诱导A146细胞自噬,自噬在抑制A146细胞生长中起到了关键的作用。     

黄杨碱诱导胶质母细胞瘤细胞T98G凋亡及对其自噬的影响

目的探讨黄杨碱诱导胶质母细胞瘤细胞(T98G)凋亡和阻断其自噬降解的作用及其机制。方法以黄杨碱(0,40,80,120,160μmol/L)处理细胞24 h(即对照组,黄杨碱1组、2组、3组、4组)。采用CCK-8法检测细胞活性,并计算细胞存活率;采用Annexin V-FITC/PI双染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,并计算细胞凋亡率;采western blot法检测相关蛋白表达水平;采用Lipofectamine 3000进行tfLC3质粒转染,并以荧光显微镜观察细胞中自噬荧光团的变化。结果与对照组比较,黄杨碱1组、2组、3组、4组的细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,且均呈量效依赖趋势(P<0.05);cleaved-PARP(C-PARP),cleaved-Caspase3(C-Caspase3)蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);LC3Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.05),转染tfLC3双光质粒显示黄杨碱可阻断细胞的自噬降解过程;黄杨碱2组、3组、4组的P-ERK及P-m TOR蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);黄杨碱3组、4组的P-Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论黄杨碱可能通过Akt/m TOR/ERK信号通路诱导T98G细胞凋亡,并阻断其自噬降解过程。     

白藜芦醇诱导人乳腺癌MDA-MB231细胞凋亡及自噬

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)诱导人乳腺癌MDA-MB231细胞凋亡及自噬蛋白表达的作用与机制。方法以人乳腺癌MDA-MB231细胞为研究对象,MTT法检测Res(0、1、5、10、20、50、100、200 mg·L~(-1))抑制MDA-MB231细胞增殖情况; Res(0、5、20、60 mg·L~(-1))处理MDA-MB231细胞,划痕实验检测细胞迁移能力,Annexin V/PI双染法检测细胞早期凋亡率,免疫荧光法检测细胞LC3Ⅰ/Ⅱ的表达;Res(0、20、60 mg·L~(-1))处理MDA-MB231细胞,蛋白免疫印迹法检测细胞中自噬相关蛋白p62及Beclin-1的表达。结果Res在体外可明显抑制MDA-MB231细胞增殖,且呈浓度依赖关系。随着Res浓度的增高,乳腺癌细胞迁移能力较对照组分别下降了(8. 7±1. 1)%、(16. 5±2. 9)%和(32. 2±3. 6)%。流式细胞仪检测结果表明,早期凋亡细胞数增加;激光共聚焦检查显示,细胞质中LC3Ⅰ/Ⅱ绿色荧光增加;蛋白免疫印迹法检测出MDA-MB231细胞p62蛋白表达下降,Beclin-1蛋白表达升高。结论 Res可抑制人乳腺癌MDA-MB231细胞增殖,其机制可能与Res诱导细胞凋亡和自噬有关。     

积雪草酸通过改变自噬作用促进胶质瘤细胞T98G凋亡的实验研究

目的研究积雪草酸对T98G细胞凋亡及自噬的影响。方法 MTT法分析积雪草酸对T98G细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞自噬;Western blot检测凋亡和自噬通路相关因子的表达。结果积雪草酸对T98G细胞增殖有抑制作用,IC50值为46.3μmol·L-1。Annexin-V/7-AAD双染和Western blot结果显示,积雪草酸可引起Akt表达下调、线粒体膜电位下降和Caspase-3激活,进而诱导T98G细胞凋亡。同时,AA可抑制T98G细胞自噬,表现为降低MDC荧光强度,抑制Beclin-1、LC3-Ⅱ、Atg表达。通过氯喹上调Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,积雪草酸抑制自噬作用被阻断,同时促凋亡作用也明显降低。结论积雪草酸可同时诱导T98G细胞凋亡和抑制自噬,并且抑制自噬作用能够促进细胞凋亡,进而抑制T98G细胞增殖。     

BH3模拟物ABT737诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡与自噬

目的观察ABT737作用于人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞后,细胞凋亡和自噬的发生,探讨抑制自噬后对凋亡的影响。方法体外培养SKOV3/DDP细胞,按ABT737药物终浓度0、2.5、5.0和10.0μmol/L分为4组,分别作用12和24 h。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,分别采用免疫荧光和免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达水平。将细胞分为对照组、ABT737组、3-Ma组和联合用药组,分别以细胞培养基、ABT737(5.0μmol/L)、3-Ma(1.0 mmol/L)和ABT737联合3-Ma作用于SKOV3/DDP细胞,Western blot法检测12和24 h后凋亡相关蛋白active Caspase-3和cyto C的表达水平。结果与对照组比较,12和24 h各剂量ABT737组细胞凋亡率均明显增高,差异有统计学意义(P0.01)。间接免疫荧光法检测LC3和Beclin-1蛋白表达,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,两蛋白阳性表达亮度均越来越强,提示蛋白表达增强。Western blot检测LC3和Beclin-1蛋白表达水平,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,细胞中LC3(F=10.878,F=13.256,P0.05)和Beclin-1(F=6.589,F=7.365,P0.05)蛋白表达水平均逐渐升高。3-Ma抑制自噬后,与ABT737组相比,联合用药组active Caspase-3 12和24 h表达水平明显增强,12和24 h cyto C表达水平也明显增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论 ABT737诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞凋亡的同时伴随着自噬的发生,抑制自噬能够促进凋亡。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨黄芪多糖对结直肠癌自噬的影响

目的 探讨黄芪多糖（APS）对结直肠癌自噬的影响及其机制。方法 采用CCK-8法检测APS各剂量（0.25 g/L、0.5 g/L、0.75 g/L、1 g/L）组对人结直肠癌HCT-116细胞增殖的影响，通过细胞划痕实验检测APS对HCT-116细胞迁移的影响，通过单丹磺酰尸胺染色检测APS对结直肠癌细胞自噬的影响，采用Western blot法检测APS对HCT-116细胞和结直肠癌荷瘤裸鼠肿瘤中自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白LC3B、p62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、PI3K、Akt及m TOR表达的影响；通过免疫组化染色检测APS对结直肠癌肿瘤中自噬相关蛋白p62表达的影响。结果APS可抑制HCT-116细胞增殖，且呈剂量依赖性（P<0.05）;APS可通过诱导细胞自噬抑制HCT-116细胞增殖和迁移，而自噬抑制剂3-MA(2 mmol/L)不仅可减弱APS对HCT-116细胞自噬的诱导作用，也可减弱APS对HCT-116细胞增殖和迁移的抑制作用（P<0.05）;APS可上调HCT-116细胞及结直肠癌小鼠肿瘤中自噬相关蛋白LC3BⅡ...     

麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制研究

目的:研究麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制.为临床抗肿瘤治疗提供理论依据.方法:MTT比色法检测人肝癌HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测HepG2细胞的凋亡及细胞周期变化;吖啶橙、Lyso-Tracker Red(溶酶体红色荧光探针)染色、HepG2-GFP-LC3转染细胞等检测细胞自噬;Western blotting(蛋白质印迹法)检测人肝癌HepG2细胞自噬信号通路中关键蛋白的变化.结果:人肝癌HepG2细胞的增殖被麦冬皂苷B抑制,而且麦冬皂苷B可诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬,但不诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,可导致LC3I转变为LC3II和Beclin-1(自噬标志性蛋白)表达增加,自噬抑制剂3-MA几乎完全逆转其抗增殖作用.Western blotting检测结果表明,AKT、mTOR和p70S6K的磷酸化及PTEN上调是被麦冬皂苷B抑制的结果.结论:麦冬皂苷B通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬.     

腺苷对肝癌细胞自噬和增殖的作用

目的研究腺苷对肝癌细胞增殖和自噬的作用。方法腺苷作用于HepG2细胞,CCK-8法观察细胞增殖的变化,Western blot研究LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白的表达,MDC染色观察自噬体数量。结果腺苷(1.0~4.0 mmol·L~(-1))作用于HepG2细胞,在12、24、48 h可明显抑制细胞增殖(P<0.01)。低浓度腺苷(0.2、0.5、1.0 mmol·L~(-1))处理细胞24h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ明显降低,腺苷(1.0 mmol·L~(-1))对HepG2细胞自噬抑制作用最强(P<0.01),高浓度腺苷(4 mmol·L~(-1))反而增强Hep G2细胞内自噬(P<0.05)。腺苷(1.0mmol·L~(-1))作用细胞24 h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值在6、12、24 h检测点明显降低,MDC染色显示自噬体减少,在12 h检测点发现LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ最低(P<0.01),自噬体基本消失。结论腺苷抑制肝癌细胞增殖,低浓度腺苷抑制细胞自噬,高浓度腺苷促进细胞自噬,对提高肝癌药物的治疗效果有重要意义。     

金合欢素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响及机制研究

目的 探讨金合欢素（Aca）通过调节PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶（Parkin）通路介导的线粒体自噬对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 将肝癌HepG2细胞分为对照组（正常培养的HepG2细胞）、Aca组（10μmol/L Aca）、PINK1小干扰RNA阴性对照（si-NC）组（转染si-NC）、PINK1小干扰RNA(si-PINK1)组（转染si-PINK1）、Aca+si-NC组（转染si-NC后用10μmol/L Aca处理）、Aca+si-PINK1组（转染si-PINK1后用10μmol/L Aca处理）。CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞迁移；透射电镜观察自噬小体的形成；Western blot检测细胞中自噬相关蛋白[Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ]及PINK1/Parkin通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较，Aca组HepG2细胞存活率、迁移细胞数目降低，凋亡率、自噬小体数量、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、PINK1、Parkin蛋白表达水平...     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和自噬的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡和自噬的影响,并探讨可能的分子机制。方法雷帕霉素及顺铂分别单独或联合作用于卵巢癌细胞株SKOV3细胞后,流式细胞仪检测凋亡率,实时荧光定量PCR检测各处理组的mTOR mRNA表达,Western blot检测自噬蛋白Beclin1、LC3和抗凋亡蛋白bcl-2的表达。结果雷帕霉素联合顺铂组凋亡率为(12.520±1.499)%,较其他处理组凋亡率提高(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的mTORmRNA表达为0.339±0.015,较对照组明显降低(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达均增强(P<0.05),抗凋亡蛋白bcl-2明显降低(P<0.05)。结论雷帕霉素通过特异性阻滞mTOR的表达,可以促进顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡,增强卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。