芬太尼影响MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的探讨芬太尼对乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 (1)流式细胞术检测细胞凋亡.不同浓度的芬太尼、纳洛酮和浓度比为1∶1的芬太尼和纳洛酮干预MCF-7细胞24 h,Annexin V/PI双染后,流式细胞术检测细胞凋亡. (2) 检测凋亡相关蛋白的表达水平.10 μmol/L芬太尼作用MCF-7细胞6 h后,免疫细胞化学染色SP法检测细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的改变.结果 芬太尼≥5 μmol/L时,晚期凋亡细胞和坏死细胞较对照组明显增加(P《0.01);给予纳洛酮后,凋亡和坏死细胞无明显改变(P》0.05);纳络酮和芬太尼联合给药时,晚期凋亡细胞和坏死细胞与对照组相比,差异有显著性(P《0.01),较芬太尼单独给药组明显增加(P《0.05).10 μmol/L芬太尼使细胞内Bax平均光密度 (AOD) 值较对照组明显增加(P《0.05),而Bcl-2 AOD值较对照组明显下降(P《0.05).结论 芬太尼能剂量依赖性诱导MCF-7细胞凋亡,而纳洛酮不能拮抗芬太尼的促凋亡作用,因此芬太尼促凋亡作用可能不是通过μ受体而是通过改变细胞内Bax、Bcl-2的表达而产生的.     

吉西他滨对乳腺癌细胞凋亡作用及其对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨吉西他滨对乳腺癌细胞凋亡作用及其对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法应用MTT比色检测法测定不同浓度(0、5、10、100、250)μmol/L不同作用时间(24 h、48 h、72 h)下吉西他滨对MCF-7人乳腺癌不同时期细胞生长抑制作用,倒置显微镜观察吉西他滨对MCF-7细胞形态学的影响,流式细胞仪测定MCF-7细胞凋亡情况,应用Western blot法及免疫荧光法对Bcl-2、Bax蛋白进行定性及定量分析。结果 MTT结果显示,吉西他滨能有效抑制MCF-7细胞增殖,且呈剂量及时间依赖性。在倒置显微镜下观察吉西他滨作用MCF-7细胞后,细胞呈通透性增加,形态不规则,细胞脱落破碎等改变。MCF-7乳腺细胞培养24 h后应用流式细胞仪可观察到5μmol/L、10μmol/L吉西他滨组细胞凋亡率分别为(34.25±3.89)%、(45.89±4.32)%显著高于对照组(4.02±0.39)%,差异有统计学意义(t=5.269,7.452,P0.05)。Western blot法显示MCF-7细胞中Bax蛋白表达增多,而Bcl-2蛋白表达减少。免疫荧光法显示在细胞培养24 h后随着吉西他滨浓度增加,Bax蛋白表达强度增加,而Bcl-2蛋白表达强度减弱。结论吉西他滨能有效抑制乳腺癌细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白有关。     

5氮杂脱氧胞苷对乳腺癌MCF-7细胞中抑癌基因p16mRNA表达的影响

目的 探讨5氮杂脱氧胞苷(5-aza-cdr)对乳腺癌细胞中p16基因mRNA表达的影响.方法 分别用5-aza-cdr 5、10和20 μmol/L处理乳腺癌细胞MCF-7,未处理的MCF-7细胞作为对照.采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)对药物处理前后的细胞进行p16基因甲基化检测;绿色荧光染料实时反转录聚合酶链反应(SYBR Green qRT-PCR)检测p16 mRNA表达.结果 在未处理的MCF-7细胞中(对照)p16基因呈完全甲基化状态,随着5-aza-cdr浓度增加,甲基化水平逐渐减弱,至5-aza-cdr 20 μmol/L时p16基因甲基化状态完全被逆转;p16 mRNA表达水平也随着药物剂量的递增逐渐增加,5-aza-cdr 20 μmol/L处理组与5、10 μmol/L处理组以及未处理组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 乳腺癌细胞MCF-7中p16基因的甲基化能被5-aza-cdr逆转,去甲基化后可以促进p16 mRNA表达.     

尼美舒利联合阿霉素对舌鳞癌Tca8113细胞的体外作用

目的:探讨尼美舒利联合阿霉素对舌鳞癌Tca8113细胞的协同作用.方法:通过MTT法检测细胞的生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期分布的改变.免疫组化SP法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果:20μmol/L尼美舒利作用24 h、48 h、72 h细胞生长抑制率为12.14%、27.10%和36.42%:浓度升至500 μmol/L时,抑制率分别升为38.57%、67.40%和85.18%.单用阿霉素(0.5 mg/L)作用48 h后,细胞生长抑制率为(37.54±6.47)%:合用20、100、500 μmol/L的尼美舒利后,抑制率分别升为(60.54±9.14)%,(75.34±12.79)%,(88.35±14.27)%.随着尼美舒利浓度(20、100、500 μmol/L)的增加,Tca8113细胞的G0/G1期细胞比率下降,G2/M期细胞比率逐渐上升:且细胞内Bcl-2表达下调,Bax表达上调.结论:尼美舒利能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期,下调Bcl-2表达和上调Bax表达的表达来抑制舌鳞癌Tca8113细胞的生长增殖,与阿霉素具有协同抗肿瘤作用.     

表皮生长因子受体在黑色素瘤紫杉醇耐药性中的机制研究

目的探究紫杉醇对黑色素瘤的作用机制及表皮生长因子受体（EGFR）信号通路在调节黑色素瘤侵袭与转移中的作用,揭示该信号通路与紫杉醇耐药的关系及相关机制。 方法以EGFR高表达的恶性黑色素瘤A375细胞为研究对象,采用流式细胞术、细胞迁移实验、MTT法和蛋白质印迹法,研究紫杉醇及表皮生长因子（EGF）通过EGFR信号通路对A375细胞凋亡、增殖和迁移的影响。 结果（1）细胞凋亡：紫杉醇诱导的A375细胞凋亡随浓度升高而增强（P＜0.001）,同时紫杉醇（0.1 μmol/L）抑制Bcl-2并增加了Bax的表达（P＜0.01）;EGFR抑制剂AG1478可明显增加A375细胞凋亡并增强紫杉醇的诱导效果及对Bcl-2和Bax的影响（P＜0.001）;EGF单独处理对A375细胞凋亡无明显影响,但其可抑制紫杉醇诱导的细胞凋亡（P＜0.05）及对Bcl-2和Bax的影响（P＜0.001）。（2）细胞增殖：紫杉醇（0.1 μmol/L）可显著抑制A375细胞增殖（P＜0.001）且该作用可被AG1478进一步增强但被EGF减弱（P＜0.001）。（3）细胞迁移：紫杉醇（0.1 μmol/L）可显著抑制A375细胞的迁移（P＜0.001）,该抑制作用可被AG1478进一步增强但被EGF减弱（P＜0.001）。 结论紫杉醇能够降低Bcl-2并增加Bax表达,从而诱导黑色素瘤A375细胞的凋亡并抑制其增殖和迁移,而这些抑制作用可被EGF激活的EGFR通路减弱。     

漆树酸联合紫杉醇对肝癌细胞生长抑制和凋亡的影响

目的:评价漆树酸和紫杉醇联合用药对人肝癌HepG2细胞是否具有协同作用.方法:人肝癌HepG2细胞经漆树酸和(或)紫杉醇处理后,MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪技术检测细胞凋亡,Western blot方法检测Bax、Bcl-2及Caspase-3、8、9和PARP凋亡相关蛋白的变化.结果:漆树酸和紫杉醇联合应用能够明显增强对HepG2细胞的增殖抑制,与单独用药组相比具有明显的协同作用.漆树酸联合紫杉醇可以明显诱导HepG2细胞凋亡.两药联合作用可以诱导Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比率增加,引起Caspase-3、8、9的活化,PARP的切割.结论:漆树酸和紫杉醇联合用药具有协同作用,明显增强抑制HepG2细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与Caspase系统活化相关.     

雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7 RCAS1表达的影响

目的探讨体外雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7表达SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原(RCAS1)分子的影响。方法用浓度为10-12~10-8mol/L的雌激素或浓度为10-9~10-5mol/L的孕激素作用乳腺癌细胞MCF-7后,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCF-7细胞RCAS1 mRNA水平的变化,用蛋白免疫印迹试验分析MCF-7细胞表达RCAS1蛋白水平的变化。结果在10-12~10-8mol/L范围内随着雌激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈递增趋势,在10-11、10-10、10-9、10-8mol/L范围内雌激素组与未处理对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。随着10-9~10-5mol/L的孕激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈下降趋势,孕激素各组与未处理对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。用RCAS1单克隆抗体能检出相对分子质量为32 000的条带,其灰度随着雌激素浓度的增加而增强,随孕激素浓度的增加而减弱。结论雌激素可上调MCF-7细胞的RCAS1分子表达,孕激素可下调MCF-7细胞的RCAS1分子表达。     

去甲斑蝥素通过NF-κB/IκBα途径增强阿霉素的抗骨髓瘤效应

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)联合阿霉素(ADR)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以U266细胞为研究对象,采用NCTD(10 μmol/L)和ADR(0.25 μmol/L)单独或联合处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测核因子-κB P65( NF-κB P65)、磷酸化NF-κB P65( p-NF-κB P65)、NF-κB抑制因子IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白水平,免疫组化法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平.结果 ①NCTD能增强ADR的细胞毒和诱导凋亡作用,二者具有协同作用;②与ADR单药组比较,联合用药组胞核NF-κB P65和胞质p-IκBα的表达量分别由2.08±0.29和0.39±0.07降至0.48±0.08和0.02±0.01,胞质NF-κB P65和IκBα表达无变化;③联合用药组与ADR单药比较,survivin和Bcl-2的表达水平分别由0.31±0.05和0.23±0.05降至0.03±0.02和0.05±0.02,而Bax的表达由0.46±0.06升至0.62±0.08;④ADR组和联合用药组VEGF的阳性率分别为(44.6±4.4)％和(27.0±2.1)％,NCTD增强ADR对VEGF表达的抑制作用.结论 NCTD通过抑制NF-κB/IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2、Bax和VEGF的表达,增强ADR的抗骨髓瘤效应.     

雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7 RCAS1表达的影响

目的探讨体外雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7表达SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原（RCAS1）分子的影响。方法用浓度为10^12～10^-8mol／L的雌激素或浓度为10^-9～10^-5mol／L的孕激素作用乳腺癌细胞MCF-7后，用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测MCF-7细胞RCAS1 mRNA水平的变化，用蛋白免疫印迹试验分析MCF-7细胞表达RCAS1蛋白水平的变化。结果在10^-12～10^-8mol／L范围内随着雌激素浓度的增加，MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈递增趋势，在10^-11、10^-10、10^-9、10^-8mol／L范围内雌激素组与未处理对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。随着10^-9～10^-5mol／L的孕激素浓度的增加，MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈下降趋势，孕激素各组与未处理对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。用RCAS1单克隆抗体能检出相对分子质量为32000的条带，其灰度随着雌激素浓度的增加而增强，随孕激素浓度的增加而减弱。结论雌激素可上调MCF-7细胞的RCAS1分子表达，孕激素可下调MCF-7细胞的RCAS1分子表达。     

姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂敏感性的研究

目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP对顺铂化疗敏感性的关系。方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对COC1/DDP细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达。结果:顺铂的浓度在1.25～5μg/mL时与姜黄素合用后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以2.5μg/mL顺铂和20μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;顺铂与姜黄素联合用药与单独用药相比,凋亡率明显增加(P<0.05);联合用药与单独用药相比Bcl-2 mRNA的表达明显降低(P<0.05),Smac mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,机制可能与降低Bcl-2基因的表达,增加Smac基因的表达有关。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

The characteristics of interpretation of results of analysis of protein amount in urine of pregnant women

The adequacy of implementation of present proteinuria diagnostic thresholds under examination of pregnant women was examined. The analysis was applied to all urine samples of pregnant women from December 2009 to March 20010. The amount of protein in urine was concurrently evaluated by turbidimetric analysis with sulfosalicylic acid, colorimetric analysis with pyrogallol red, "dry chemistry" technology (the diagnostic strips). It is established that the mentioned techniques of analysis of protein in urine provide independent results. The results of colorimetric analysis are characterized by better precision and adequacy. However, in case of pregnant women the diagnostic threshold of protein concentration should be shifted from 0.120 to 0.150 g/l.     

超声评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响

目的 探讨超声在评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响的价值。方法 回顾性收集经病理学证实为头颈部肿瘤、放疗前后的颈动脉超声资料以及其他基线资料完整的患者93例,比较放疗前后放疗侧颈动脉和非放疗侧颈动脉粥样硬化斑块和溃疡斑块的总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积。结果 放疗前后颈动脉超声检查的平均间隔时间为（6.1±1.9）年;放疗前放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积与非放疗侧比较差异均无统计学意义（P均>0.05）;放疗后放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积均较非放疗侧加重,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 放疗可导致头颈部肿瘤患者颈动脉粥样硬化斑块的形成和进展,且斑块具有易损性特点。     

《中国内镜杂志》主编雷光华教授简介

雷光华男,1970年12月生,骨科学博士,一级主任医师,二级教授,博士生/后导师。国家"万人计划"领军人才,教育部"长江学者"特聘教授,科技部"中青年科技创新领军人才",国家卫生计生突出贡献中青年专家,享受国务院政府特殊津贴专家,国家临床重点专科骨科和运动医学学科带头人,全国青年岗位能手,湖南省"芙蓉学者"特聘教授,湖南省科技领军人才和骨科学科领军人才,湖南省普通高校学科带头人,湖南省首届"优秀科技工作者",中南大学"湘雅名医"。