三种方法对儿童肺炎支原体感染诊断的动态评价

目的评价荧光定量PCR(FQ-PCR)检测肺炎支原体(MP)-DNA(MP-DNA),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MP-IgM,以及MP快速培养三种方法对儿童MP感染诊断的临床价值。方法对经临床和实验室诊断MP感染的患儿同时进行三种方法检测。并分别在病程1、3个月时重复检测。结果 MP感染患儿共153例。入院时首次检测,FQ-PCR阳性率为96%,ELISA为71%,MP快速培养法为24%。其中MP快速培养法的检出率在≤3岁组明显高于>3岁组,差异有统计学意义(P<0.05)。随访至1个月时,MP-DNA检测结果仍有50%以上阳性,而MP-IgM则保持较高的阳性率,此时仍然有44例(29%)患儿存在咳嗽,其中28例(64%)MP-DNA和MP-IgM均为阳性。随访至3个月时有4例(3%)患儿仍存在咳嗽,2例(50%)MP-DNA和MP-IgM均为阳性。结论在三种诊断儿童MP感染的方法中,FQ-PCR检测MP-DNA最敏感,其次为ELISA检测MP-IgM抗体,MP快速培养敏感性最低。MP-IgM检测阳性率至3个月时仍然维持较高水平。     

支气管肺泡灌洗液荧光定量PCR对儿童肺炎支原体肺炎诊断研究

目的探讨荧光实时定量PCR(FQ-PCR)检测肺泡灌洗液(BALF)中MP-DNA基因在肺炎支原体肺炎(MPP)早期病原诊断中的价值。方法采用FQ-PCR检测61例患儿BALF中MP-DNA,并与目前常用血清MP抗体检测方法颗粒凝集法进行比较。结果 FQ-PCR检测MP-DNA敏感度94%,特异度100%;病程早期及难治性病例中FQ-PCR检测BALF中MP-DNA准确性优于单份血清MP抗体检测(P<0.01)。难治性病例中MP-DNA拷贝数显著高于普通MPP组(P<0.05),且与CRP呈正相关(r=0.845,P<0.01)。结论 FQ-PCR检测BALF中MP-DNA是早期MPP特别是难治性MPP病原诊断的可靠方法,优于血清MP抗体检测。MP-DNA的拷贝量可以作为评价难治性MPP的转归以及判断药物疗效的指标。     

荧光PCR和定量ELISA在呼吸道肺炎支原体感染诊断中的应用

目的 探讨定量ELISA和荧光PCR方法在呼吸道肺炎支原体(MP)感染中的临床应用和意义.方法 选取于2006年1月-2008年12月因急性呼吸道感染住院治疗的患儿3 958例,进行多种病原联合检测.应用定量ELISA和荧光PCR检测血清特异性抗体和痰液特异性核苷酸序列,明确MP感染;同时检测151例患儿家属血清MP特异性抗体.结果 PCR检测阳性率为8.9%;单份血清ELISA检测阳性率为23.24%,双份血清的阳性率为37.18%;PCR与EUSA联合检测阳性率为31.07%.血清ELISA阳性率显著高于痰PCR-DNA阳性率,PCR和ELISA的一致性较差.MP感染阳性率随年龄的增长而增加.不同疾病MP感染阳性率也不同,毛细支气管炎最低(9.04%),大叶性肺炎患儿MP感染阳性率高达72.55%.MP感染与肺炎衣原体感染存在正相关,而与RSV感染存在负相关.患儿和家属之间存在交叉感染.结论 MP是儿童呼吸道感染的主要病原体之一.定量ELISA和荧光PCR均适合临床应用,联合应用有利于作出早期诊断、进行合理治疗.     

荧光定量PCR测定在小儿非细菌性脑膜炎病原学诊断中作用及其临床意义

目的 研究疱疹类病毒与肺炎支原体(MP)在潍坊地区小儿中枢神经系统(CNS)感染发病中的作用 及荧光定量PCR测定(FQ-PCR)与临床的关系。方法 利用FQ-PCR法检测小儿非细菌性脑膜炎(非菌脑)脑脊液 (CSF)中EBV、HSV、CMV和MP的核酸,并与CSF中其特异性抗体结果进行比较。结果 192例非菌脑患儿中84 例病原DNA阳性(阳性率43.8％),且年龄越小,阳性率越高,以0-3岁组最高,占50.0％;阳性者中,EBV-DNA阳 性率最高(46.4％),其次是HSV-DNA和MP-DNA(28.6％和14.3％),CMV-DNA阳性率最低(10.7％);重型患儿 CSF 4种病原DNA的拷贝量明显高于轻型患儿(P<0.05,0.01);CSF病原DNA阳性率与特异性IgM阳性率分 别为43.8％(47／192例)和24.5％(84／192例)(P<0.01)。结论 小儿CNS感染发病中上述4种病原不可忽视; CSF病原DNA拷贝量检测对判断非菌脑病情具有重要指导意义;MP的直接损伤是MP脑膜炎的发病机制之一; FQ-PCR特异性强、敏感性高,需标本量少,是早期快速诊断小儿非菌脑的可靠方法,值得推广使用。     

荧光探针PCR检测肺炎支原体的临床应用研究

目的 探讨荧光探针PCR(FP-PCR)检测肺炎支原体DNA(MP-DNA)的临床应用价值.方法 563例疑似MP感染患儿为实验组,用FP-PCR检测MP-DNA,选取60例复查MP-DNA.同时应用颗粒凝集法检测肺炎支原体抗体(MP-Ab),1～2周后复查MP-Ab.同期选取20例无呼吸道感染者为对照组.结果 MP-DNA和MP-Ab的阳性率分别为34.99%、35.52%,两者差异无显著性(χ2=0.31,P>0.05),两种方法 一致率为97.69%.在疾病早期MP-DNA阳性率为30.48%,MP-Ab阳性率为10.16%,MP-DNA阳性检出率明显高于MP-Ab,差异有显著性(χ2=74.46,P<0.05).FP-PCR法敏感度及特异度分别是96.00%和98.62%.MP-DNA复查结果 与首次检查结果 及临床诊断一致.结论 FP-PCR法敏感性高,特异性强,方便快捷,稳定性好,适于临床应用,尤其适于MP早期诊断;且对MP既往感染有鉴别诊断意义.     

肺炎支原体抗体和载量指数在儿童肺炎支原体肺炎诊断中的应用

目的 评估肺炎支原体载量指数（MPLI）与血清总抗体在MP 肺炎诊断中的价值。方法 选取115 例肺炎支原体肺炎患儿和400 例健康儿童为研究对象,荧光定量PCR 与被动凝集法检测MP 肺炎患儿不同病程阶段的MP-DNA 及总抗体水平,并计算MPLI。结果 肺炎支原体肺炎患儿的MPLI 临界值为6.12。MPLI和MP 总抗体滴度均随病程升高,MP-DNA 则随病程迅速下降;MP-DNA 载量较高组的总抗体滴度显著高于MP载量较低组（P P 结论 MPLI 提供了标准化的MP-DNA 定量值,对肺炎支原体感染的早期诊断有重要价值。     

儿童大叶性肺炎肺泡灌洗液病原学及临床研究

目的分析儿童大叶性肺炎主要致病原及其临床特点。方法回顾分析2015年3月至2019年3月住院治疗并采集肺泡灌洗液(BALF)的149例大叶性肺炎患儿的临床资料,分析以荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测的BALF中的病原特点,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测的血清MP特异性抗体(MP-IgM)水平。比较不同年龄段、MP肺炎与非MP肺炎、混合感染与单一感染患儿的临床肺部感染评分(CPIS)的差异。结果 149例患儿中,病原体阳性129例,男71例、女58例,1～3岁18例、～6岁40例、～14岁71例。肺炎支原体(MP)阳性107例,肺炎链球菌(SP)18例,腺病毒(ADV)12例,流感嗜血杆菌(HI)6例,肺炎克雷伯杆菌(KP)3例,呼吸道合胞病毒(RSV)3例,肺炎衣原体(CP)2例;混合感染23例,以合并MP、SP居多。1～3岁患儿细菌及病毒感染10例,占同年龄组阳性病例的55.6%;3岁患儿MP感染99例,占MP阳性病例的92.5%。在107例MP阳性患儿中,BALF以FQ-PCR法检测MP阳性率高于血清MP-IgM,差异有统计学意义(P0.05)。与非MP肺炎组相比,MP肺炎组患儿胸腔积液、肝功能异常、神经系统受累比例较高,差异有统计学意义(P0.05)。混合感染组CPIS≥6的患儿比例高于单一感染组,差异有统计学意义(P0.05)。结论儿童大叶性肺炎MP检出率最高,其次为SP、ADV,不同年龄段感染的病原体不同,MP是多数混合感染的主要病原体,混合感染更易出现重症或难治病例。     

荧光定量PCR法检测呼吸系统感染儿童肺炎支原体DNA的分析

为探讨儿童肺炎支原体 (MP)感染的早期诊断 ,用荧光定量PCR(FQ -PCR)技术检测1010例疑似MP感染患儿血、痰中的DNA ,结果发现1010例患儿中MP -DNA阳性401例 ,占39.70 % ,其中血液标本阳性率23.60 % ,DNA平均拷贝数7.88×102;痰、咽拭子标本阳性率41.71 % ,DNA平均拷贝数2.71×103。血液与呼吸道标本之间MP -DNA量差异有显著性(P<0.005)。提示FQ -PCR可快速、敏感、准确地定量检测标本中MP -DNA ,了解MP在患儿体内感染和复制情况 ,有助于临床明确诊断与治疗方案的选择     

呼吸道吸出物MP-DNA检测对儿童肺炎支原体肺炎诊断的临床意义

目的 探讨鼻咽抽吸物(NPA)和肺泡灌洗液(BALF)中肺炎支原体(MP)-DNA 检测对儿童MP 肺炎(MPP)诊断的意义。方法 收集164 例MPP 患儿入院24 h 内的NPA 及BALF,荧光定量PCR 法检测MP-DNA;同时在入院24 h 内及治疗7~10 d 病情好转时采集所有患儿静脉血,ELISA 法检测血清特异性MPIgM。结果 164例患儿NPA的MP-DNA阳性检出率为51.8%,低于双份血清MP-IgM阳性检出率(63.4%)(P=0.044),两者检出一致性中等(Kappa=0.618,PP>0.05),两者检出一致性好(Kappa=0.793,PPKappa=0.529,PPPP结论 BALF 中MP-DNA 检出敏感性高,对临床早期诊断MPP具有重要意义;而NPA MP-DNA 检测可能会引起漏诊。     

肺炎支原体荧光定量聚合酶链反应检测在儿童肺炎支原体肺炎中的诊断意义

目的 探讨肺炎支原体(MP)荧光定量PCR检测在儿童MP肺炎(MPP)中的诊断价值.方法 选择2008年6月-2009年1月住院的肺炎患儿153例,同期住院的非呼吸道感染患儿30例作为对照组.入选患儿均留取呼吸道分泌物(鼻咽深部分泌物、痰、肺泡灌洗液或咽拭子)和血清标本,部分患儿留取双份血清.采用MP荧光定量PCR法检测其呼吸道分泌物标本中MP DNA水平,用ELISA法和被动凝集法分别检测患儿血清MP-lgM抗体及MP抗体滴度.结果 入选肺炎患儿中,MP抗体检测阳性(MPP)123例,双份血清MP检测阴性肺炎(非MPP)30例.MPP组:PCR阳性114例,PCR定量结果MP DNA水平为1.20×106～3.66×1010基因拷贝/L.非MPP组:PCR阳性2例,MP DNA水平为(1008～3.02)×107基因拷贝/L.对照组:PCR结果均阴性.MPP患儿病程第1-2周,单份血清MP-IgM检测的敏感度仅为66.7%～83.9%,而定量PCR的敏感度为92.7%,特异度为93.3%;病程第3周后,单份血MP-IgM检测的敏感度上升为90.9%～100%.MPP组患儿入院时病程、住院时间及热程均显著长于非MPP组患儿,其临床表现尤特异性.结论 荧光定量PCR法较血清学方法更适用于MPP的早期快速诊断,2种方法结合既有利于早期诊断,又可提高诊断的准确性.实用儿科临床杂志,2009,24(10):760-762     

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目的探讨儿童化脓性脑膜炎(化脑)新的快速诊断方法。方法2003-08—2005-12采用16SrRNA荧光定量法对浙江大学儿童医院49例临床疑似化脑患儿脑脊液(CSF)的细菌DNA进行测定;监测化脑患儿脑脊液细菌DNA拷贝数,同期进行CSF细菌培养的对照。结果(1)荧光定量PCR(FQ-PCR)检测49份脑脊液标本发现17份阳性,阳性率为34.7%(17/49),明显高于脑脊液培养的阳性率10.2%(5/49),差异具有显著性(P<0.01)。(2)对17份FQ-PCR阳性标本进一步测定细菌DNA的拷贝数,发现患儿病情与其DNA拷贝数呈正相关,与其Ct值(指每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数)呈负相关,Ct值越低,脑脊液细菌DNA拷贝数越高,患儿的预后越差。(3)FQ-PCR、CSF细菌培养同时阳性的仅为5例。(4)对2例脑脊液FQ-PCR的产物测序,Ct值17.9的测序提示为大肠埃希菌,符合CSF细菌培养结果;Ct值31.8的,测序未果。结论荧光定量PCR特异性强、敏感性高,需标本量少,是早期快速诊断儿童化脑的可靠方法,具有较大的应用价值。     

儿童急性白血病不同治疗阶段血液和脑脊液TNF-α变化的研究(英文)

目的：探讨急性白血病儿童血液和脑脊液中肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化及其临床意义。方法：采用放射免疫分析法检测31例儿童急性白血病治疗前、完全缓解时及连续完全缓解期血液和脑脊液TNF-α水平。结果：急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性髓细胞白血病(AML)治疗前血液TNF-α水平［(24.35±4.84) pmol/L,(28.65±5.12) pmol/L］明显高于正常对照［(11.28±1.69) pmol/L］(P0.05)。合并中枢神经系统白血病(CNSL)者脑脊液TNF α明显高于未合并CNSL者［(26.47±7.14)pmol/L vs (13.15±0.92) pmol/L］,P<0.01。脑脊液TNF α与脑脊液白细胞数呈正相关(r=0.942,P<0.05),经鞘内注射治疗后脑脊液中TNF α逐步恢复正常,但较白细胞恢复慢。结论：血液和脑脊液TNF-α水平可反映白血病患者的肿瘤负荷及CNS的受累程度,是指导治疗的有益指标。     

肺炎支原体脑炎36例

目的探讨肺炎支原体(MP)脑炎小儿的临床特点。方法对经采用特异性免疫凝集法检测外周血和(或)脑脊液抗MP-IgM抗体阳性患儿36例的临床表现、实验室检查、治疗、转归情况进行回顾性分析。总结小儿MP脑炎的临床特点。结果MP脑炎多见于学龄期儿童,临床表现为头痛、呕吐(21/36),发热(17/36),抽搐(9/36),昏迷(3/36),嗜睡、精神萎靡(2/36)和肢体活动障碍(1/36)。33例血清抗MP-IgM阳性,9例脑脊液抗MP-IgM阳性,其中6例血清和脑脊液抗MP-IgM同时阳性。6例咳嗽、流涕。17例拍摄胸片,10例异常。11例检查C-反应蛋白(CRP)均升高。患儿均好转出院。结论中枢神经系统感染患儿如果脑脊液呈病毒性脑炎改变,胸片检查有肺炎X线表现,CRP升高,要考虑MP感染可能。确诊有赖于血清和(或)脑脊液抗MP-IgM检查。     

重症肺炎支原体肺炎患儿肺炎支原体DNA复制水平与病情的相关性

目的 探讨重症肺炎支原体肺炎（SMPP）患儿咽拭子、肺泡灌洗液（BALF）中肺炎支原体DNA （MP-DNA）复制水平与病情的相关性。方法 44例行支气管肺泡灌洗术的SMPP患儿为研究对象,分别在急性期和恢复期检测相关血清细胞因子水平及咽拭子MP-DNA复制倍数,并检测急性期BALF中白细胞介素（IL）-18水平及MP-DNA复制倍数。并按照病程中是否出现呼吸衰竭需要机械通气分为机械通气组（n=19）与非机械通气组（n=25）,比较两组患儿肺泡灌洗液中MP-DNA复制倍数。结果 与恢复期相比,SMPP患儿在急性期时,血清C反应蛋白、红细胞沉降率、乳酸脱氢酶、IL-1、IL-6、IL-8、IL-18水平显著增高（P < 0.05）。急性期咽拭子与BALF的MP-DNA复制倍数呈显著正相关（r=0.613,P < 0.05）;BALF中MP-DNA复制倍数与外周血及BALF的IL-18水平呈正相关（分别r=0.613、0.41,均P < 0.05）。机械通气组BALF中MP-DNA复制倍数高于非机械通气组,且全身激素治疗时间明显长于非机械通气组,血清乳酸脱氢酶、IL-18及BALF中WBC总数、IL-18水平也更高（P < 0.05）。结论 SMPP患儿急性期咽拭子与BALF MP-DNA复制水平可作为病情评估的参考。     

病毒性脑炎患儿血和脑脊液胰岛素样生长因子-1的变化

目的探讨病毒性脑炎(VE)患儿血和脑脊液(CSF)胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的变化。方法 采用ELISA法测定VE 25倒(轻症10例,重症15例)和10例正常小儿血及CSF IGF-1浓度。结果VE组治疗前血IGF-1浓度较对照组明显低,而CSF IGF-1浓度较对照组明显升高(P<0.01);重症组血IGF-1浓度较轻症组明显降低,而CSF IGF-1浓度较轻症组明显升高(P<0.01)、治疗后7-10 d轻症组和重症组血IGF-1浓度均较治疗前明显升高,且轻症组血IGF-1浓度与对照组比较无差异(P>0.05),但重症组血IGF-1浓度仍较轻症组和对照组低(P<0.01)。结论VE患儿治疗前血IGF-1浓度明显降低,病情越重,降低越明显;而CSF IGF-1浓度明显升高,病情越重,升高越明显     

维生素 A 水平与儿童肺炎支原体感染的关系

目的探讨维生素A(VA)水平与肺炎支原体(MP)感染的相关性。方法随机选取2015年3月—2015年12月因呼吸道急性感染性疾病住院的0~12岁儿童为研究对象。采用高效液相色谱法(HPLC)检测血清VA水平,聚合酶链反应(PCR)检测鼻咽拭子MP-DNA,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清MP-Ig M。分析和比较亚临床VA缺乏(SVAD)、可疑亚临床维生素A缺乏(SSVAD)和VA正常患儿间MP感染情况。结果 600例患儿中SVAD 83例(13.83%),SSVAD193例(32.17%),1岁、1~3岁、6岁以及~6岁组间SVAD及SSVAD发生率的差异有统计学意义(P均0.001),其中1岁婴儿SVAD及SSVAD发生率最高,分别为26.36%和49.10%。600例患儿中MP阳性病例201例(33.5%),其中SVAD 57例(28.35%),SSVAD 70例(34.83%);MP阳性患儿的SVAD发生率高于阴性患儿,差异有统计学意义(P0.001)。201例MP阳性患儿不同年龄组间SVAD、SSVAD以及VA正常儿童分布的差异有统计学意义(P=0.003),1岁婴儿SVAD发生率(48.39%)较高。结论 SSVAD、SVAD以1岁婴儿最多,SVAD与儿童MP感染可能相关。