miR-150-5p与NCAPG的靶向关系及其对肝细胞肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的：探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G (NCAPG)的靶向关系及其对肝细胞肝癌(HCC)细胞生物学功能的影响,为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。方法：通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照(mimic NC)组、miR-150-5p模拟物(miR-150-5p mimic)组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照(miR-150-5pmimic+ovNC)组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG(miR-150-5p mimic+ovNCAPG)组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平,5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测各组细胞EdU阳性率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性...     

miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制研究

背景 miR-324-3P在多种恶性肿瘤中发挥着重要作用,调控Wnt/β-catenin信号通路可能是其参与肿瘤进展的重要途径,miR-324-3P在宫颈癌中的具体作用尚不清楚.目的 研究miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制.方法 收集入住我院宫颈癌患者的宫颈癌组织和正常宫颈组织各40例,TargetScan7.1预测软件及双荧光素酶报告基因试验检测miR-324-3P对WNT3a基因的靶向调控作用.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和正常宫颈组织中miR-324-3P、WNT3a mRNA的表达水平.Pearson法分析宫颈癌组织中miR-324-3P与WNT3a表达的相关性.常规培养宫颈癌细胞(HeLa细胞),将其分为对照组(NC组)、miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组,采用Lipofectamine 2000转染试剂进行各组质粒的转染.四唑盐比色法(MTT)检测各组细胞的增殖能力,Boyden实验检测各组细胞的侵袭能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力.Western-blot法检测各组细胞中WNT3a和β-catenin的表达.结果 宫颈癌组织中miR-324-3P、WNT3a的相对表达量分别为0.79±0.39、1.46±0.53,与正常宫颈组织相比,miR-324-3P表达降低、WNT3a表达升高.Targetscan7.1预测软件、双荧光素酶报告基因试验及qRT-PCR表明miR-324-3P靶向调控WNT3a,且Pearson分析显示二者呈负相关.与NC组相比,miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力降低.与miR-324-3P mimic组相比,miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力增加,WNT3a削弱miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力的抑制作用.与NC组相比,miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组细胞中WNT3a和β-catenin表达降低.而与miR-324-3P mimic组相比,miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组WNT3a和β-catenin蛋白表达增加.WNT3a削弱miR-324-3P对β-catenin的抑制作用.结论 miR-324-3P靶向调控WNT3a表达,抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力.     

MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在H...     

MiR-125b-5p 抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase（http://starbase. sysu.edu.cn/）生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcDNA3.1组、miR-125b-5p mimic+pcDNA3.1-CD147组,应用RT-qPCR和Westem blot实验检测各组中miR-125b-5p水平,CD147蛋白和mRNA水平;应用CCK-8实验、Transwell实验检测各组卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 RT-qPCR技术证实miR-125b-5p在癌组织和卵巢癌细胞株中均低表达,而CD147在癌组织和卵巢癌细胞株中均高表达（P<0.05）;选择SKOV3和HO8910细胞进行转染,过表达miR-125b-5p后的卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力均被抑制（P<0.05）;Starbase生信软件预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-125b-5p 和CD147存在一个靶向调控关系;在SKOV3细胞中转染过表达质粒和对照质粒,转染成功后,过表达miR-125b-5p组中miR-125b-5p的表达升高,而CD147的mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）。过表达miR-125b-5p后再转染pcDNA3.1-CD147,CD147的mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）。Transwell实验显示过表达miR-125b-5p后卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到明显抑制,而过表达miR-125b-5p后再过表达CD147,卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的能力得到增强。结论 miR-125b-5p通过负向调控CD147的表达,从而抑制卵巢癌细胞的迁移与侵袭。     

丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移

【摘要】 目的 探讨丙泊酚通过调控微小RNA-574-5P(miRNA-574-5P）/性别决定区Y框蛋白（SOX2）对胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移的影响和分子机制。 方法 以0、5、10和20 μg/mL丙泊酚处理AGS细胞48 h。筛选丙泊酚最佳使用浓度。将转染后的AGS细胞分为对照组、丙泊酚组、丙泊酚+miR-NC组、丙泊酚+miR-574-5p组、丙泊酚+si-con组、丙泊酚+si-SOX2组、丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组、丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组。采用细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测细胞中微小RNA（miR）-574-5p的表达水平;免疫印迹法检测细胞中SOX2蛋白的表达水平。采用上述方法检测AGS细胞增殖、侵袭、迁移能力。双荧光素酶报告基因实验检测miR-574-5p与SOX2的靶向关系。 结果 选择20 μg/mL丙泊酚浓度进行实验。与0μg/mL比较,5、10、20 μg/mL丙泊酚处理组细胞存活率、克隆形成率、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低（P＜0.05）,且呈浓度依赖性,miR-574-5P表达水平呈浓度依赖性降低,SOX2呈浓度依赖性升高（P＜0.05）。与对照组比较,丙泊酚组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-NC组比较,丙泊酚+miR-574-5p组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+si-con组比较,丙泊酚+si-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组比较,丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。miR-574-5p直接与SOX2结合。 结论 丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA KTN1-AS1调节miR-153-3p/NFAT5轴对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA Kinectin 1反义RNA 1(lncRNA KTN1-AS1)调控miR-153-3p/活化T细胞核因子5(NFAT5)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测NSCLC组织、癌旁组织、人正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系A549、HCC827、H1299中KTN1-AS1、miR-153-3p表达及NFAT5蛋白表达;将A549细胞分为Ct组、si-NC组、si-KTN1-AS1组、mimic NC组、miR-153-3p mimic组、miR-153-3p mimic+pcDNA组、miR-153-3p mimic+pcDNA-NFAT5组,qRT-PCR检测细胞中KTN1-AS1、miR-153-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测NFAT5、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白...     

调控miR-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及机制研究

目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,...     

miR-145-5P通过调节Rho A蛋白表达抑制U251胶质瘤细胞的功能

目的 探究miR-145-5P对U251胶质瘤细胞增殖、侵袭影响及作用机制。方法 使用miR-145-5P mimic体外干预U251胶质瘤细胞,分为miR-145-5p过表达[miR-145-5p（+）]组、对照（NC）组。使用CCK-8实验、划痕愈合实验、Transwell实验检测miR-145-5P对U251细胞增殖、迁移、侵袭的影响,免疫荧光实验检测miR-145-5P对U251胶质瘤细胞骨架形成的影响,Western blot实验检测各组细胞中RhoA蛋白表达量的变化。结果 与NC组相比,CCK-8实验、划痕愈合实验、Transwell实验显示,miR-145-5p（+）组U251细胞的OD值、划痕愈合率、迁移/侵袭细胞数均明显减少（P均<0.05）;免疫荧光实验显示,miR-145-5p过表达后细胞形态由梭形变为圆形,丝状伪足及片状伪足皱缩;Western blot实验结果显示,miR-145-5p过表达后U251细胞中RhoA蛋白表达量减少（P<0.05）。结论 miR-145-5P通过调节RhoA蛋白表达量,进而影响胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭等生物学功能。     

miR-30b-5p通过Sema3A调控HUVECs细胞增殖、凋亡、迁移与血管形成

目的 探究miR-30b-5p对HUVECs细胞增殖、凋亡、迁移与血管形成的影响及机制。方法 培养的HUVECs细胞进行不同处理：blank组(正常糖培养)、HG组(高糖培养)、HG+mimic-NC组(高糖联合mimic-NC转染)、HG+miR-30b-5p mimic组(高糖联合miR-30b-5p mimic转染)、HG+miR-30b-5p mimic+oe-NC组(高糖联合miR-30b-5p mimic+oe-NC转染)、HG+miR-30b-5p mimic+oe-Sema3A组(高糖联合miR-30b-5p mimic+oe-Sema3A转染)。CCK-8、流式细胞术、划痕实验、血管生成实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和血管形成。qRT-PCR检测miR-30b-5p、Sema3A mRNA表达。Starbase、Targetscan、miRDB网站预测miR-30b-5p与Sema3A的靶向结合位点,双荧光素酶报告实验分析miR-30b-5p对Sema3A的靶向调控。结果 与blank组比较,HG组HUVECs细胞miR-30b-5p表达下降,细胞增殖、迁移和血管形...     

miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响

  目的  探讨miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响。  方法  将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-503-5p mimic组、E2F3组、mimic+E2F3组,并通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组HeLa细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-503-5p和E2F3的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。将裸鼠分为对照组和miR-503-5p mimic组,在裸鼠右后肢腹侧皮下分别注射0.2 mL转染mimic-NC或miR-503-5p mimic的宫颈癌HeLa细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,测量肿瘤质量,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Vimentin表达情况。  结果  宫颈癌HeLa细胞中miR-503-5p的表达量明显下调,miR-503-5p与E2F3在3′UTR区存在结合位点, miR-503-5p直接靶向作用于E2F3,过表达miR-503-5p抑制E2F3表达; miR-503-5p过表达降低细胞生长速度、Ki67和PCNA表达量,减少侵袭细胞数目,增宽划痕、降低愈合率,上调E-cadherin表达、下调N-cadherin表达（P<0.01）;miR-503-5p过表达减小移植瘤体积、减轻移植瘤重量,减少Ki67和Vimentin的阳性所占比率（P<0.01）。  结论  miR-503-5p通过靶向调控E2F3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化。     

5''''-脱氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶对6株大肠癌细胞的抑制作用

目的:测定大肠癌细胞的胸苷磷酸化酶(dThdPase)蛋白含量,探讨dThdPase与5’-脱氧氟尿苷(5’-DFUR)、5-氟尿嘧啶(5-FU)对大肠癌细胞的生长抑制作用的相互关系。方法:采用ELISA法对6株大肠癌细胞系LS174T、CloneA、Col0320、CX-1、Lovo和MIP101进行dThdPase蛋白定量分析,然后进行5’-DFUR、5-FU对6株大肠癌细胞的生长抑制实验。把大肠癌细胞分别接种于96孔培养板的每孔中培养24 h,分别加入2倍梯度稀释的5’-DFUR和5-FU.继续培养96 h后应用MTT分析分别测定5’-DFUR和5-FU对6株大肠癌细胞的半数有效剂量(IC50)。结果:除LS174T检出0.5 u/mg、Lovo检出8.9 u/mg的dThdPase蛋白外,其它4株癌细胞未检出。6株大肠癌细胞均对5-FU高度敏感,其半数有效浓度(IC50)分别为1.52～13.68μmol/L,而5’-DFUR对6株大肠癌细胞的IC50则分别为68.71～528.15μmoL/L,是5-FU的15倍-94倍,差异有显著性(P<0.01)。结论:6株大肠癌细胞很少有dThadPase蛋白表达;每一株大肠癌细胞对5’-DFUR的敏感性均明显低于5-FU。     

5′-脱氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶对6株大肠癌细胞的抑制作用

目的测定大肠癌细胞的胸苷磷酸化酶(dThdPase)蛋白含量,探讨dThdPase与5′-脱氧氟尿苷(5′-DFUR)、5-氟尿嘧啶(5-FU)对大肠癌细胞的生长抑制作用的相互关系.方法采用ELISA法对6株大肠癌细胞系LS174T、CloneA、Colo320、CX-1、Lovo和MIP101进行dThdPase蛋白定量分析,然后进行5′-DFUR、5-FU对6株大肠癌细胞的生长抑制实验.把大肠癌细胞分别接种于96孔培养板的每孔中培养24 h,分别加入2倍梯度稀释的5′-DFUR和5-FU,继续培养96 h后应用MTT分析分别测定5′-DFUR和5-FU对6株大肠癌细胞的半数有效剂量(IC50).结果除LS174T检出0.5 u/mg、Lovo检出8.9u/mg的dThdPase蛋白外,其它4株癌细胞未检出.6株大肠癌细胞均对5-FU高度敏感,其半数有效浓度(IC50)分别为1.52～13.68 μmol/L,而5′-DFUR对6株大肠癌细胞的IC50则分别为68.71～528.15 μmol/L,是5-FU的15倍～94倍,差异有显著性(P＜0.01).结论6株大肠癌细胞很少有dThdPase蛋白表达;每一株大肠癌细胞对5′-DFUR的敏感性均明显低于5-FU.     

5阶BZ-代数

应用美国Wolfram公司的软件Mathematica4.0，通过编写计算机程序给出22个5阶真BZ-代数并进行了适当分类，这不仅对BZ-代数的进一步研究具有重要参考价值，而且将对相关代数系统的研究产生积极影响。     

Rabex-5及其激活物Rab5的研究进展

细胞的吞噬作用是细胞维持正常生理功能的关键,小分子GTP激酶在其中扮演了至关重要的角色。在Ras超家族中,已证实有超过50种小分子GTP激酶,其中Rab家族在调控细胞吞噬和囊泡运输中的作用,近年备受关注。     

手术治疗周围动脉假性动脉瘤(附55例报告)

目的 探讨周围动脉假性动脉瘤的手术治疗要点,提高手术治疗的成功率和安全性。方法 总结12例来收治的55例周围动脉假性动脉瘤的诊治经验。结果 8例经保守治疗痊愈,47例通过多种手术术式治愈,没有手术死亡。结论 保守治疗多用于瘤体较小、浅在、早期和破口较小易于压迫控制的假性动脉瘤。手术治疗要点在于有效地控制动脉出血和重建动脉血流。对接近主动脉弓的巨大假性动脉瘤,使用体外循环或血液快速回收输入装置辅助,可提高手术安全性。     

弓形虫病淋巴结炎组织中5-HT及5-HT1AR的表达

目的探讨弓形虫病淋巴结炎组织中神经内分泌免疫网络系统共用的生物学语言：5-HT与5HT1AR表达的意义。方法应用免疫组化Picture^TM二步法检测淋巴结炎组织中的弓形虫、5-HT及5-HT1AR。将弓形虫检测结果分为阳性组与阴性组，分析两组5-HT与5-HT1AR的检测结果。结果50例淋巴结炎组织中有16例弓形虫阳性。5-HT与5-HT1AR阳性标志物在两组淋巴结炎组织中分布大致相似，主要位于副皮质区的T淋巴细胞、淋巴滤泡生发中心B淋巴细胞及巨噬细胞等部位。5-HT在两组的表达强度有显著性差异（P〈0．005），而5-HT1AR在两组的表达强度无差异（P〉0．05）。结论弓形虫可引起神经内分泌免疫网络中的5-HT与5-HT1AR表达强度的变化，可能与弓形虫病淋巴结炎的发生与病情发展有一定的关系。