TRIM59基因沉默对结直肠癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨三结构域蛋白59(TRIM59)对人结直肠癌HCT116细胞生物学功能的影响及其作用机制。方法 构建重组TRIM59干扰质粒RNA(si-TRIM59),采用脂质体转染法将TRIM59敲减质粒转染至结直肠癌细胞HCT116中,RT-qPCR和Western blot验证转染效率;CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测TRIM59基因沉默对结直肠癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响,Western blot检测CDK4和cyclinD1细胞周期蛋白表达水平。结果 TRIM59 mRNA及蛋白在结直肠癌细胞中的表达水平高于正常结直肠黏膜细胞(P<0.05);敲减TRIM59表达后,HCT116细胞的增殖活性和克隆形成能力受到抑制(P<0.05),细胞周期阻滞在G₀/G₁期;同时,细胞周期相关蛋白CDK4和cyclinD1的表达量降低(P<0.05)。结论 TRIM59在结直肠癌细胞中高表达,下调TRIM59表达可抑制结直肠癌细胞的增殖、克隆形成能力,提示TRIM59有望成为结直肠癌基因治疗的新靶点。     

mTOR信号通路介导黄芩苷抑制人结肠癌细胞的增殖

目的 探讨黄芩苷抑制人结肠癌细胞(HCT116)增殖的分子机制.方法 采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷(0.01～ 100 μg/ml)对体外培养的HCT116细胞增殖的抑制作用;采用Western blot分析检测被黄芩苷干预的HCT 116细胞的增殖相关蛋白的表达.结果 与对照组比较,浓度为1～ 100 μg/ml的黄芩苷处理组明显抑制HCT 116细胞的增殖(P＜0.05).用100μg/ml黄芩苷处理后,增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、eIF4E表达明显下调(P＜0.05),4E-BP1表达明显上调.p-mTOR(Ser2448)、p-S6(Ser235/236)、p-4E-BP1(Thr37/46)的磷酸化水平下降(P＜0.05).结论 黄芩苷能通过抑制mTOR信号通路来抑制人结直肠癌HCT116细胞的增殖.     

敲低Piezo2对人结肠癌细胞HCT116和SW620增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨敲低机械敏感性离子通道Piezo2对人结肠癌细胞HCT116和SW620增殖、迁移侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测结直肠癌组织及其相应癌旁组织中Piezo2的mRNA和蛋白表达情况;Western blot检测Piezo2在正常结肠上皮细胞NCM460、结肠癌细胞SW480和HCT116、结肠癌淋巴结转移细胞SW620的表达;将HCT116、SW620细胞系稳定转染Piezo2敲低慢病毒载体,利用RT-qPCR和Western blot检测转染后HCT116和SW620细胞的Piezo2表达情况;CCK-8法检测转染后HCT116和SW620细胞的增殖能力;Transwell法和细胞划痕修复实验检测转染后HCT116和SW620细胞的侵袭和迁移能力;通过裸鼠皮下成瘤检测HCT116和SW620细胞敲低Piezo2后肿瘤大小变化,通过免疫组化检测ki67表达。结果 RT-qPCR及Western blot实验显示,癌组织Piezo2的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织（P均<0.05）;Wes...     

Lnc-CRCMSL在结直肠癌中的表达及对癌细胞生长的影响

目的探讨长链非编码RNA-CRCMSL(Lnc-CRCMSL)在结直肠癌组织和癌细胞中的表达及对癌细胞生长的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测Lnc-CRCMSL在结肠癌组织和癌旁正常组织、正常结肠上皮细胞及结直肠癌细胞中的表达特点。建立SW480耐药株SW480/DDP,并通过基因干扰实验过表达其Lnc-CRCMSL水平,采用流式细胞术测定细胞的凋亡率,CCK-8测定细胞的增殖活力,划痕愈合实验测定细胞的迁移能力,Transwell测定细胞的侵袭能力,免疫蛋白印迹实验测定基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果Lnc-CRCMSL在结直肠癌组织的表达低于癌旁正常组织,在Ⅱ期、Ⅲ期结直肠癌组织中的表达低于Ⅰ期,且在结直肠癌细胞中的表达量低于正常结肠上皮细胞(P＜0.05)。过表达Lnc-CRCMSL提高了SW480/DDP的凋亡率,抑制了SW480/DDP的增殖、迁移和侵袭活力(P＜0.05)。同时,过表达Lnc-CRCMSL降低了SW480/DDP的MMP2和MMP9表达水平(P＜0.05)。结论Lnc-CRCMSL在结直肠癌中表达异常,对结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭行为具有调控作用。     

hsa_circ_0016788对结直肠癌迁移和侵袭的影响

目的探讨hsa_circ_0016788对结直肠癌迁移和侵袭的影响。方法对cDNA芯片（含80例结直肠癌组织和15例癌旁正常组织）进行RT-PCR检测,比较结直肠癌组织与癌旁正常组织中hsa_circ_0016788的表达差异,同时分析结直肠癌组织中hsa_circ_0016788表达与患者临床特征的关系及预后影响。构建敲减hsa_circ_0016788表达的结直肠癌细胞株HCT116,并对其迁移和侵袭功能进行测定。结果结直肠癌组织中hsa_circ_0016788相对表达量明显高于癌旁正常组织（P＜0.05）,且与患者N分期、TNM分期有关（均P＜0.05）,与患者年龄、性别、T分期等均无关（均P＞0.05）。体外细胞实验敲减hsa_circ_0016788后,结直肠癌细胞株HCT116迁移、侵袭能力均明显下降（均P＜0.05）。在所有结直肠癌患者及Ⅱ、Ⅲ期患者中,hsa_circ_0016788高表达者生存率均明显低于低表达者（均P＜0.05）。结直肠癌组织中hsa_circ_0016788高表达是影响患者预后的独立危险因素（RR=22.712,P＜0.05）。结论hsa_circ_0016788可能促进了结直肠癌细胞的迁移和侵袭,其高表达提示结直肠癌患者预后不良。     

银杏内酯B诱导人结直肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 通过制备HCT116裸鼠瘤模型,观察GB对肿瘤生长的影响,并通过体外培养人结直肠癌HCT116细胞,分别加入不同质量浓度GB,与其共孵育72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,Giemsa染色观察细胞形态,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2蛋白(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)、Bax蛋白(Bcl-2-associated protein x,Bax)和线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)的表达.结果 GB抑制裸鼠瘤的生长(P＜0.05),并显著抑制HCT116细胞的增殖(P＜0.01),诱导HCT116细胞发生凋亡.同时,GB能够显著下调HCT116细胞Mfn1蛋白和Bcl-2蛋白的表达水平(P＜0.01),并上调Bax蛋白的表达(P＜0.05).结论 GB可能通过抑制Mfn1的表达,调节促凋亡蛋白Bax活性,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进结直肠癌细胞的凋亡.     

miR-27a靶向调控SFRP1对结直肠癌生物学行为的影响

目的 探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blot检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中SFRP1蛋白表达水平;运用TargetScan预测软件及双荧光素酶报告基因实验检测miR-27a对SFRP1的靶向调控作用;将miR27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制物(miR-27a inhibitor)及阴性对照(NC)转染至HCT116细胞中;采用qRT-PCR测定各组细胞中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达水平;运用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验评估各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中SFRP1、Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子Wnt4和β-catenin的蛋白表达水平。结果 与癌旁正常组织相比,miR-27a在结直肠癌组织中高表达,而SFRP1在结直肠...     

长链非编码RNA LINC01106通过STAT3通路调控结直肠癌细胞增殖及凋亡

目的 探讨LINC01106在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖及凋亡能力的影响。方法 分析公共数据库结直肠癌患者的肿瘤组织及正常组织LINC01106表达水平及其对患者预后的影响;构建LINC01106敲减及过表达结直肠癌细胞株;采用CCK-8实验检测LINC01106敲减及过表达对结直肠癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞凋亡水平的影响;免疫印迹检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞p-STAT3、STAT3、Bcl-2蛋白表达的影响;建立裸鼠移植 瘤模型观察LINC01106表达水平对结直肠肿瘤体内生长的影响,随机分为2组,9只/组。对照组：接种SW480细胞,敲减组：接种LINC01106敲减的SW480细胞。结果 TCGA数据库分析结果显示结直肠癌肿瘤组织LINC01106的表达水平明显高于正常组织,且LINC01106的表达水平与结直肠癌患者预后相关,差异具有统计学意义（P<0.05）;敲减LINC01106可以明显抑制SW480结直肠癌细胞增殖,促进凋亡（P<0.05）,过表达LINC01106可以明显促进SW480结直肠癌细胞增殖;敲减LINC01106可以抑制p-STAT3和Bcl-2蛋白表达水平;下调LINC01106可以抑制裸鼠移植瘤体内生长。结论 LINC01106在结直肠癌患者肿瘤组织中表达显著上调,且与患者预后相关。INC01106可以通过STAT3/Bcl-2信号调控SW480结直肠癌细胞增殖及凋亡;LINC01106有望成为结直肠癌诊断及预后评估的潜在标志物。     

SARI及CCN1基因在结直肠癌中的表达及其意义

目的 探讨SARI及其下游CCN1基因表达与结直肠癌发生、发展的关系及对预后的影响。方法 实时定量PCR检测32例冻存新鲜结直肠癌及癌旁组织SARI、CCNl mRNA表达,逆转录PCR检测人结直肠癌细胞株（Caco-2、HT-29、Lovo）SARI、CCNl mRNA表达。免疫组织化学法检测116例结直肠癌根治切除标本癌及癌旁组织SARI、CCN1蛋白表达。对SARI、CCN1蛋白表达进行关联分析,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。分析SARI、CCN1蛋白表达水平对患者预后的影响。结果 癌组织中SARI mRNA表达下调,而CCN1 mRNA表达上调（均P＜0.05）,在癌细胞株中二者表达趋势与在组织中一致。癌旁组织和癌组织SARI蛋白阳性表达率分别为76. 7％和28.4％,CCN1蛋白阳性表达率分别为26. 7％和74.1％,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;癌组织中SARI蛋白表达与CCN1蛋白表达呈负相关（r= -0.24,P＜0.05）。SARI蛋白阴性表达者肿瘤分化程度差、浸润深度深及TNM分期高（均P＜0. 05）;CCN1蛋白阳性表达者,肿瘤浸润深度深且TNM分期高（均P＜0.05）。SARI蛋白阴性表达者,患者术后生存时间明显缩短(X2=8.47,P＜0.05),SARI蛋白阴性且同时CCN1蛋白阳性表达者,患者术后生存时间进一步缩短(X2=12.56,P＜0.05)。结论 SARI与CCN1异常表达与结直肠癌恶性生物学行为有关,且SARI蛋白阴性表达与结直肠癌患者不良预后有关。     

长链非编码RNA LINC01977在结直肠癌中的表达及临床意义

目的 研究长链非编码RNA LINC01977对结直肠癌(CRC)及细胞系增殖的影响,分析与病理特征之间的关系,探讨LINC01977对结直肠癌的临床意义。方法 收集2020年6月-2022年6月在郑州市中心医院首次确诊为CRC的50例患者的组织标本及临床病理资料,实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CRC组织和正常组织中LINC01977的表达情况;检测LINC01977在结肠正常上皮细胞系NCM460和CRC细胞系Caco2、HCT8、HT29、SW620、HCT116、SW480中表达水平。分析LINC01977与患者临床病例特征之间的相关性。通过特异性siRNA敲低HCT116、SW480靶基因表达,将细胞分为对照组(si-NC组)和实验组(si-LINC01977组),检测敲低效率,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成与EdU试验检测细胞增殖情况。结果 LINC01977在CRC组织中表达为5.582(0.190,10.714),正常组织为2.151(0.022,6.076),差异有统计学意义(P<0.05)。LINC01977在HCT116中的表达量5.2...