原发性心肌病β肌球蛋白重链基因突变研究

目的 探讨β－肌球蛋白重链（βMHC）基因点突变与肥厚型心肌病（HCM）及扩张型心肌病（DCM）发病的关系。方法 选择56例原发性心肌病病人（HCM13例，DCM43例）及53例健康对照，应用聚合酶链反应（PCR）限制性扩增心脏β－肌球蛋白重链基因第13、14外显子，用DdeⅠ、NⅠaⅢ限制性内切酶酶解其扩增产物，分析有无8848位及9124位点突变。结果 1例扩张型心肌病病人出现8848位点突变应产生的394bp片段，提示该病人可能存在8848位点突变。HCM病人未发现突变。结论 β－肌球蛋白重链基因可能是DCM遗传易感性的基因标志之一。     

线粒体脑肌病患者骨骼肌mtDNA点突变与发病类型的关系

目的：探讨线粒体脑肌病患者骼肌mtDNA在3243及8344位点的点突变与发病类型的关系,方法：提取5例患者骨骼肌中的总DNA,对2对寡核苷酸为引物行PCR扩增,分别应用BglI和Apal酶酶切后,琼脂糖电泳判定,结果：2例患者nt3243位点出出A→G点突变,座中样发病型（MELAS）和不整红边纤维型9MERRF）各1例,2例MERRF患者nt8344位点出现A→G点突变,其中1例同时存在着3243位点突变,结论：nt3243及nt8344位点突变分别与MELAS和MERRF的发病有关,1例MERRF中层得同时在上述2个位点的突变,这可能与线粒体脑肌病临床表现的多样化有关。     

原发性心肌病β肌球蛋白重链基因突变研究

目的探讨β-肌球蛋白重链(βMHC)基因点突变与肥厚型心肌病(HCM)及扩张型心肌病(DCM)发病的关系。方法选择56例原发性心肌病病人(HCM13例,DCM43例)及53例健康对照,应用聚合酶链反应(PCR)限制性扩增心脏β-肌球蛋白重链基因第13、14外显子,用DdeⅠ、NⅠaⅢ限制性内切酶酶解其扩增产物,分析有无8848位及9124位点突变。结果 1例扩张型心肌病病人出现8848位点突变应产生的394bp片段,提示该病人可能存在8848位点突变。HCM病人未发现突变。结论β-肌球蛋白重链基因可能是DCM遗传易感性的基因标志之一。     

线粒体脑肌病中线粒体DNA的部分缺失

在2例Kearns－Sayre综合征（KSS）和2例慢性进行性眼外肌麻痹（CPEO）患者的骨骼肌线粒体DNA（mtDNA）中发现存在单一的大片段缺失突变。缺失的长度2．5～5．5kb，突变只发生在部分线粒体DNA中，突变型mtDNA占全部mtDNA的60．5％～84．6％。在10例其它的线粒体脑肌病患者骨骼肌标本和外周血标本及数例正常骨骼肌和胎肝标本的mtDNA中均未发现缺失突变。上述发现支持mtDNA的缺失突变为KSS和CPEO主要病因的观点。     

扩张型心肌病患者血清中抗β受体抗体的研究

应用免疫转印法研究20例扩张型心肌病(DCM）患者血清中抗心肌抗体，发11例患者抗心肌细胞膜66.47ku肽类抗体阳性，20例正常人血清均为阴性（P＜0.01）。Betaloc（倍他乐克）抑制试验发现,Betaloc可以抑制该抗体介导的心肌细胞毒性反应。本文提示抗心肌细胞膜66.47ku肽类抗体是抗心肌β受体抗体，用免疫转印法检测抗心肌β受体抗击体，对DCM的诊断具有重要价值，Betaloc对DCM患者心肌可能具有保护作用。     

帕金森病患者线粒体DNA突变位点G1719A、G4580A、C7028T分析

目的研究有关线粒体DNA（mtDNA）点突变与我国人群散发性帕金森病（Parkinson disease,PD）的关系。方法采用经典的酚／氯仿抽提法对88例PD患者（研究组）和60例健康体检者（对照组）的全血基因组DNA进行抽提,针对与PD发病有关的mtDNA突变位点G1719A、G4580A、C7028T设计特异的引物,经过PCR鉴定和基因测序,在NCBI基因库上进行BLAST比对分析,发现突变位点。结果PD患者有10例在C7028T位点发现突变,8例在G1719A位点发现突变,3例在G4580A位点发现突变,对照组未发现突变位点。结论散发性PD患者存在线粒体基因的点突变,线粒体基因的点突变可能参与PD的发病过程。     

食管癌组织中线粒体DNA突变检测

目的：检测食管癌组织中线粒体DNA(mtDNA)的突变。方法：提取8例食管癌组织的mtDNA；PCR扩增mtDNA的控制区，纯化PCR产物、与T载体连接，转化人肠杆菌，筛选出阳性克隆，用引物T7／SP6做PCR鉴定后测序，与GenRank序列对比。结果：8例标奉mtDNA的控制区共有36个位点发生突变，其中转换32个，颠换4个；同义突变13个，错义突变23个。结论：mtDNA突变很可能在食管癌的发生中发挥一定作用。     

核素心肌灌注显像对扩张型心肌病和缺血性心肌病的鉴别诊断价值

目的探讨^99mTc-MIBI心肌灌注显像（MPI）对扩张型心肌病（DCM）和缺血性心肌病（ICM）的鉴别诊断价值。方法55例确诊心肌病患者,根据病史、超声心动图检查,分成扩张型心肌病组（25例）和缺血性心肌病组（30例）。同时完成核素^99mTc-MIBI心肌灌注显像与冠脉造影（CAG）检查。观察^99mTc-MIBI在心肌的分布情况,分析病损心肌、病变血管之间的关系。结果①所有55例患者,心肌灌注显像都^99mTc-MIBI放射性分布异常：DCM组节段性灌注完全缺损2例（8%）,均匀减低14例（56%）,不均匀减低3例（12%）,花斑样改变6例（24%）;ICM组节段性灌注完全缺损29例（96.67%）,均匀减低1例（3.33%）。冠脉造影检查：DCM组仅1例（4%）发现冠脉异常,但狭窄程度〈50%,ICM组30例（100%）都有不同程度的冠脉狭窄（≥50%）;②以核素^99mTc-MIBI在心肌不均匀减低和/或花斑样分布为标准,MPI诊断DCM的敏感性为96.15%,特异性为95.6%,以核素^99mTc-MIBI在心肌呈节段性灌注完全缺损分布为标准,MPI诊断ICM的敏感性是96.7%,特异性是92%。结论核素^99mTc-MIBI心肌灌注显像在心肌的这种特征性分布,对扩张型心肌病和缺血性心肌病的诊断和鉴别诊断有较高的临床价值,与冠脉造影有很好的相关性,值得在临床推广应用。     

超声心动图与心电图检查诊断扩张性心肌病的比较分析

目的：扩张性心肌病（DCM）是一种以心腔扩大、心肌收缩功能障碍为主要特征的、原因的不明的心肌疾病，其临床表现以进行性心力衰竭、心律失常、血栓栓塞、甚至猝死为基本特征，可见于病程中任何阶段，至今尚无特异性治疗方法，预后极差，5a生存率不及50％。本文回顾性分析经临床确诊的50例扩张性心肌病患者超声心动图及心电图表现，就超声心动图与心电图对DCM的诊断价值进行分析讨论。方法：本文通过对50例扩张性心肌病患者超声心动图与心电图特征分析，探讨超声心动图（UCG）、心电图（ECG）对扩张性心肌病（DCM）诊断的临床意义。结论：DCM在UCG上显示，各腔室扩大及室壁运动减弱为主要表现，对诊断和治疗有一定的特异性和临床意义。ECG为治疗前后提供心肌缺血改善及心律失常的检测提供一定参考数据。     

线粒体DNA13731点突变与脊髓小脑性共济失调相关性研究

目的探索线粒体DNA（mtDNA）突变位点与脊髓小脑性共济失调（SCA）的关系。方法采用聚合酶链反应（PER）对基因确诊的四个SCA家系10例患者及其亲属共34例与40例健康对照的线粒体ND5基因片段进行扩增,扩增产物进行单链构象多态性分析（SSCP）,对SSCP出现异常的样本进行相应mtDNA片段测序。结果在一家系的1名确诊患者及1名症状前患者检测到mtDNA13731（T〉C）点突变。结论脊髓小脑性共济失调的发生、发展可能与mtDNA突变有关。     

Point mutations of muscle mitochondrial DNA from patients with mitoch ondrial encephalomyopathies

Objective To study the relation between point mutations at nt3243 and nt8344 of muscle mit ochondrial DNA from patients with mitochondrial encephalomyopathies and phenotyp es. Methods DNA was extracted from muscle specimens from 5 patients with mitochondrial encep halomyopathies and amplified by PCR method, using corresponding oligonucleotide primers. DNA fragments were digested with restriction enzymes BglⅠ and ApaⅠ, then the digested DNA fragments were analyzed with an electrophoresis method. Results The point mutation at nt3243 of mtDNA was found in 2 patients, one with mitochon drial encephalomyopathy, lactic acidosis and stroke- like episodes (MELAS) and a nother with myoclonic epilepsy with ragged red fibers (MERRF). The point mutati on at nt8344 was found in 2 patients with MERRF, including the one with point mu tation at nt3243. Conclusion The point mutation of DNA at nt3243 correlated with MELAS and nt8344 correlated with MERRF. In addition, the detection of point mutations at both nt3243 and nt 8344 in a patient with MERRF shows the association of mutation with diversity i n clinical manifestations of mitochondrial encephalomyopathies.     

97例线粒体肌病/脑肌病患者的线粒体DNA突变分析

目的 探讨我国不同临床类型的线粒体脑肌病的线粒体DNA(mtDNA)突变特点以及基因型和表型之间的相关性.方法 对经临床和病理诊断为线粒体肌病/线粒体脑肌病的97例患者,提取其肌肉和/(或)白细胞mtDNA,用Southern杂交检测mtDNA的大片段缺失、以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测常见类型的点突变(包括A3243G、A8344G、T8993G、　T8993C、T3271C突变)、并对部分患者进行mtDNA伞长测序寻找有无其他的突变位点.结果 97例患者中有81例患者存在mtDNA突变,突变类型包括单一的大片段缺失21例,多发的大片段缺失4例,A3243G突变43例,A8344G突变6例,T8993G、T8993C、T3271C突变各1例.KSS/CPEO与单发的mtDNA大片段缺失相关、MELAS与A3243G点突变、MERRF与A8344G点突变、母系遗传的Leigh　病与8993位点的突变相关.另外在4例线粒体肌病患者中发现细胞色素b编码基因A15316G　(T194A)、G15221A(D159N),ATPase6编码基因G9196A(D224N)和16SrRNA C2835T突变各1例.结论 国人不同类型线粒体肭肌病的mtDNA突变类型与国外外的报道道基本一致.虽然线粒体脑肌病的临床表刑和基因型之间有一定的相关件,但不同的基因型和临床表型之间也存在一定的交叉,反映了线粒体病的异质性特点.     

首次发现肥厚型心肌病肌球蛋白结合蛋白C基因Arg856fs突变

目的： 研究中国人群肥厚型心肌病(HCM)患者的致病基因突变位点，并对基因型与临床表型之间的关系进行分析。方法: 对76例HCM先证者进行聚合酶链反应(PCR)扩增心肌肌球蛋白结合蛋白C基因（MYBPC3）第15 16,18,26,28,34号外显子，产物做单链构象多态性(SSCP)分析，出现异常条带者将其目的片段和正常对照组该片段送检测序。结果: 在1例52岁男性患者的MYBPC3基因第26号外显子上发现了一个新的移码突变位点Arg856fs。由于在100名正常对照组中未见异常，故我们认为此突变位点为该患者的致病基因位点。结论: MYBPC3基因是我国HCM的致病基因之一。     

Infantile-onset glycogen storage disease type II (Pompe disease): report of a case with genetic diagnosis and pathological findings

Glycogen storage disease type II (GSD-II), also known as Pompe disease, is a rare autosomial recessive disease due to deficiency of lysosomal acid alpha-glucosidase (GAA). The infantile-onset form is the most severe, and most patients present with hypotonia and cardiomyopathy in early infancy. We report on a typical case of Pompe disease in a patient who died at 8 months of age due to aspiration pneumonia and hypertrophic cardiomyopathy. Genetic studies showed deficient GAA activity and mutation of the GAA gene with Gly615Arg (exon 13, G1845A). On autopsy, glycogen had markedly accumulated in the liver, myocardium and skeletal muscle. The neurons of the anterior horn of the spinal cord and medulla were also involved, but the cortex was spared. These neurological-histologic findings may explain the clinical features of poor motor function, decreased deep tendon reflexes and lack of mental retardation.     

Detection of A3243G point mutation in mitochondrial DNA from 10 cases of MELAS

目的：对10例MELAS型线粒体脑肌病患者进行线粒体DNA A3243G点突变的检测。方法：用PCR-限制性内切酶分析法（restriction analysis）,检测10例MELAS患者及其8名母系亲属的肌肉和/或外周血细胞中有无mtDNA的A3243G点突变,并进行突变型mtDNA的定量。结果：在10例患者的肌肉和/血细胞中,均检测到A3243点突变。突变型mtDNA的比例在血细胞（7例）中为10.8％-47.8％,在肌肉（5例）中为39.4％-67.7％。有2例患者同时进行了肌肉和血细胞标本的检测,突变型mtDNA的比例肌肉组织均高于血细胞。在血细胞中,年轻患者的突变型比例通常较高。在1个家系中可证实为母系遗传 。但在3例先证者的母亲及2例先证者抽胞均未检测到此突变。结论：10例MELAS综合征患者均携有mtDNA A3243G点突变。在6个家庭中,只有1个家庭可证实为母系遗传,另外5个家庭中此突变可能为散发性,提示在中国人MELAS的发病机制中,mtDNAA3243G点突变为新生突变的居多。     

Mutations in the D-loop region of mitochondrial DNA in g astric cancer

Objective: To investigate the mutations in the D-loop region of mitochondrial DNA (mtDNA) in gastric cancer.Methods: The mtDNA of D-loop region was amplified by PCR and ,sequenced in 20 samples from gastric cancer tissue and adjacent normal membrane. Results: There were 7/20(35% ) mutations in the mtDNA of D-loop region in gastric cancer patients. There were four microsatellite instabilities among the 18 mutations. Nine new polymorphisms were identified in 20 patients. Conclusion: The mtDNA of D-loop region might be highly polymorphoric and the mutation rate is high in patients with gastric cancer.     

神经肌肉性疾病的病理与血液PCR检测线粒体DNA缺失分析

目的 :探讨神经肌肉性疾病的临床表现与病理、血液 PCR检测之间的关系。　方法 :采用肌肉活检病理检查与血液 PCR检测有无线粒体脱氧核糖核酸 ( mt DNA)缺失的方法 ,对 2 0例神经肌肉性疾病患儿进行临床分析研究。　结果 :神经肌肉性疾病主要表现为肌无力 ,肌肉病理检查多为非特异性的肌萎缩、肌营养不良改变 ,血 PCR分析发现 6例有 mt DNA缺失。　结论 :神经肌肉性疾病病因复杂、表现多样 ,肌肉病理改变是该病发生的结果而不是原因 ,血液 PCR检测对线粒体肌病的诊断有很高的价值     

Mitochondrial gene defect in patients with chronic progressive external ophthalmoplegia

Objective To detect the gene defect of mitochondrial DNA(mtDNA) from skeletal muscles in 2 patients with chronic progressive external ophthalmoplegia (CPEO).Methods After extraction of mtDNA, Southern hybridization was performed after restrictive digestion by PvuⅡ, EcoRI, Hind Ⅲ, and SacI. Then, we carried out polymerase chain reaction(PCR) and the enzyme digestion of the PCR products. Finally, mtDNA sequencing was done by automatic DNA sequence analyzer. Results In case 1, a 5 kb deletion was found by Southern blot analysis and PCR. And dosage analysis showed a heteroplasmic change with 44% mtDNAs deleted. In case 2, PCR plus restriction endonuclease PvuⅡ digestion demonstrated a mutation which was confirmed by DNA sequencing to be a single base substitution (T→C) inducing a novel PvuⅡ site around 10909 on mtDNA sequence. The laser image analyzer measurement revealed the mutation was almost homologous (99.4% mutant).Conclusions In case 1, a 5 kb deletion found in mtDNA is called "common deletion" according to the literature. In case 2, a novel PvuⅡ site was found. It seems to be a de novo point mutation affecting ND4 in published CPEO research and is first reported in Chinese population. This point mutation does not induce an amino acid(Phe) change according to the published human mitochondrial genetic code as well as the mtDNA sequence. Whether it affects the translation efficiency or transportation of signals between mitochondrial and nuclear genome needs further studies.