干扰素与维拉帕米逆转乳腺癌细胞耐药作用的研究

目的:研究α-干扰素与维拉帕米对体外培养的乳腺癌细胞多药耐药(MDR)的逆转作用。方法:以对药物敏感的人乳腺癌细胞系MCF-7和经阿霉素(ADM)诱导具有MDR表型的人乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADR为体外试验模型,分别单用及联用α-干扰素与维拉帕米对细胞系进行处理,MTT法检测各组细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和逆转倍数;流式细胞术定量检测细胞表面P-170的表达。结果:α-干扰素与维拉帕米联用后使乳腺癌细胞耐ADM的IC50降低为0.32μmol·L-1,优于二者单用(2.29、1.23μmol·L-1),逆转倍数升高到51.88(二者单用为7.25、13.49),P-170表达低于二者单用。结论:单独应用α-干扰素、维拉帕米均可达到部分逆转MCF-7/ADR对ADM的耐药作用,但二者联用效果更强。     

熊果酸衍生物与查耳酮缀合物的合成及抗肿瘤活性研究

目的 设计、合成喹喔啉熊果酸-查耳酮缀合物.方法 以喹喔啉熊果酸为先导化合物,将查耳酮通过酯化反应拼接到喹喔啉熊果酸得到了一系列喹喔啉熊果酸-查耳酮缀合物,并通过MTT法测试其抗癌活性.结果 合成了6个喹喔啉熊果酸-查耳酮缀合物,其结构均通过1H NMR,13C NMR和HRMS加以确认.初步的生物活性结果表明,这些缀合物对MCF-7、PC-3、GBC-823和KB细胞均有抑制活性,尤其是对MCF-7细胞的抑制活性与熊果酸相比均有提高,其中化合物5(IC50=14.2μmol·L-1),6(IC50=15.3μmol·L-1)和7(IC50=10.6μmol·L-1)对MCF-7细胞的抑制活性甚至强于临床上应用的药物他莫昔芬(IC50=15.9μmol·L-1).同时,这些缀合物对正常的乳腺上皮细胞MCF-10A没有毒性.结论 本研究为开发高效、低毒的的熊果酸衍生物提供了信息和依据.     

利多卡因在异丙酚抑制巨噬细胞膜P2X_7受体电流中的双向调节作用

目的观察利多卡因和异丙酚对RAW264.7巨噬细胞P2X7受体电流的影响及两药之间的相互作用。方法应用小鼠RAW264.7巨噬细胞,采用全细胞膜片钳记录模式,记录ATP(100～5000μmol·L-1)诱发的P2X7受体电流。向细胞施加不同浓度的异丙酚(1～100μmol·L-1)或利多卡因(10～1000μmol·L-1),然后再施加2倍EC50水平的ATP。计算异丙酚或利多卡因对P2X7受体电流的IC50。向细胞先施加IC50水平异丙酚,再同时施加IC50水平的异丙酚与利多卡因(10～1000μmol·L-1),或向细胞先施加10μmol·L-1或1000μmol·L-1利多卡因,再同时施加相同浓度的利多卡因和IC50水平的异丙酚,观察异丙酚和利多卡因的相互影响。结果异丙酚或利多卡因可浓度依赖性的抑制2倍EC50ATP诱发的P2X7受体电流,异丙酚或利多卡因的IC50分别为(36.5±5.3)μmol·L-1和(223±34)μmol·L-1。先施加异丙酚后施加利多卡因300μmol·L-1或1000μmol·L-1可使P2X7受体电流幅度增强。先施加利多卡因后施加异丙酚对P2X7受体电流产生协同抑制作用。结论利多卡因和异丙酚可浓度依赖性的抑制巨噬细胞膜P2X7受体电流,在P2X7受体已受异丙酚抑制时,低浓度和高浓度的利多卡因对P2X7受体产生先抑制后兴奋的双向调节作用。     

褐藻素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的:探究褐藻素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度褐藻素处理MDA-MB-231细胞后,采用CCK-8法测定细胞抑制率、Live/DeadTM细胞成像试剂盒进行活死细胞荧光分析,TUNEL法、Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡,Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达,采用试剂盒检测Caspase-9和Caspase-3/7活性。结果:褐藻素处理MDA-MB-231细胞24 h时,16μmol·L-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC50为68.79μmol·L-1;处理48 h时,8μmol·L-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC50为38.08μmol·L-1;褐藻素对乳腺癌细胞的细胞活力和增殖的抑制作用表现出一定的时间和剂量依赖性(P<0.05)。与阴性对照组相比,16,32,64μmol·L-1,褐藻素可上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,提高Caspase-9和Caspase-3/7活性,诱导细胞凋亡,且呈现一定的剂量依赖性(P<0.05),还可以抑制JAK2、STAT3蛋白的磷酸化激活(P<0.05)。结论:褐藻素抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡,机制可能和抑制JAK2、STAT3蛋白磷酸化激活有关。     

蛇床子素对耐阿霉素人乳腺癌细胞耐药的逆转作用

目的:研究蛇床子素(Ost)对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株多药耐药(MDR)的逆转作用及其机制。方法:采用MTT比色法测定药物的细胞毒性,高效液相-紫外检测法检测细胞内ADR浓度。结果:Ost对MCF-7及MCF-7/ADR细胞均有增殖抑制作用,IC50值分别为(58.1±2.3)μmol.L-1和(59±5)μmol.L-1;在5~15μmol.L-1范围内,Ost可以不同程度地增强ADR对MCF-7细胞杀伤作用,与ADR联合用药降低ADR对MCF-7/ADR的IC50值,显著增加MCF-7/ADR细胞内ADR的积累。结论:Ost对人乳腺癌细胞株MCF-7及其阿霉素耐药株MCF-7/ADR细胞均有增殖抑制作用,而且Ost通过明显增加MCF-7/ADR细胞内ADR的浓度,逆转其阿霉素耐药性。     

氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的抑制作用及机制研究

目的观察氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7周期、周期蛋白相关基因及产物表达的影响,探讨氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞周期的影响及其机制。方法MTT检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR技术检测细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA的表达;Western blot检测细胞周期蛋白cyclinD1、p21的蛋白表达。结果氨氯地平剂量和时间依赖性的抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,IC50为14.439μmol.L-1。经7.22μmol.L-1(1/2IC50)、14.439μmol.L-1(IC50)、28.88μmol.L-1(2IC50)的氨氯地平作用人乳腺癌MCF-7细胞48h,G0/G1期细胞较对照组明显增高(P<0.05);并使人乳腺癌MCF-7细胞中cyclinD1mRNA及蛋白表达降低;p21mRNA及蛋白表达升高。结论氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞具有抗增殖作用,并使细胞阻滞于G1期。其G1阻滞机制可能与调控细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA及蛋白的表达相关。     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的观察8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxy-chrysin,BrMChR)诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡作用。方法体外培养SGC-7901细胞,MTT法测定细胞存活率;PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察梯形条带。结果MTT测定结果显示,BrMChR明显抑制SGC-7901细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50为2.6μmol·L-1,BrMChR的效价强度约是白杨素(ChR,IC50为16.5μmol·L-1)的8倍,约为氟尿嘧啶(5-FU,IC50为7.7μmol·L-1)的3倍。PI染色FCM分析发现BrMChR(1.25、5.00、20.00μmol·L-1)作用SGC-7901细胞48h的细胞凋亡率分别是19.8%±0.2%,36.8%±1.9%,45.5%±3.5%,BrMChR(1.25μmol·L-1)处理的细胞凋亡率较ChR(20.00μmol·L-1)的凋亡率(12.9%±1.5%)高;DNA琼脂糖凝胶电泳观察BrMChR(20.00μmol·L-1)作用24h和48h后SGC-7901细胞的基因DNA呈现典型梯形条带,且能被PPARγ阻断剂GW9662(10.00μmol·L-1)预孵育减弱。结论BrMChR可能部分通过活化PPARγ诱导SGC-7901细胞凋亡。     

戊地昔布联合阿霉素对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其机制研究

目的:研究戊地昔布联合阿霉素对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制作用及其机制。方法:将人MCF-7细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、阿霉素(0.25mg·L-1)组、戊地昔布(25、50、100μmol·L-1)组及联用组(阿霉素0.25mg·L-1+戊地昔布25、50、100μmol·L-1),加入相应药物继续培养,检测培养24、48、72h(n=6)后各组人MCF-7细胞的增殖抑制率;检测戊地昔布25μmol·L-1时培养48h后各组细胞周期和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白、细胞周期蛋白(CyclinD1)及环氧酶2(COX-2)蛋白表达。结果:与溶剂对照组比较,除戊地昔布25μmol·L-1培养24h外,阿霉素组、戊地昔布组及联用组增殖抑制率均明显增加(P均<0.01),且呈浓度、时间依赖性;与阿霉素组和戊地昔布组比较,联用组增殖抑制率均明显增加(P均<0.01)。戊地昔布组细胞阻滞于G0/G1期,S期细胞比例明显减少(P<0.05);联用组细胞阻滞于G0/G1期和G2/M期。与溶剂对照组比较,戊地昔布组、阿霉素组及联用组PCNA、CyclinD1蛋白表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),仅戊地昔布组和联用组COX-2蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:戊地昔布与阿霉素联用具有协同抑制人MCF-7细胞增殖的作用,可能与抑制CyclinD1和PCNA蛋白表达从而阻滞细胞周期有关。     

(-)-antofine及其新型衍生物体外抗乳腺癌活性

目的研究(-)-antofine及其新型衍生物抗乳腺癌活性。方法以高藜芦酸和3-苄氧基大茴香醛为初始原料设计合成一系列新型(-)-antofine衍生物,经熔点、电喷雾电离质谱(ESR-MS)、氢核磁共振(1H-NMR)和碳核磁共振(13C-NMR)等方法表征后,通过四甲基偶氮唑盐比色法测定其对人乳腺癌细胞MCF-7和大鼠扩散乳腺癌细胞F3Ⅱ的半数抑制浓度(IC50),并与紫杉醇、母体(-)-antofine作对比。结果衍生物5a、5b、5c、5e、5f、5h对MCF-7细胞的IC50>0.9μmol.L-1,对F3Ⅱ细胞的IC50>0.7μmol.L-1,均大于紫杉醇和母体(-)-antofine的IC50。(-)-antofine衍生物5g对MCF-7细胞和F3Ⅱ细胞的IC50分别是[(0.41±0.02)、(0.32±0.04)μmol.L-1],与紫杉醇[(0.46±0.02)、(0.38±0.03)μmol.L-1])比较无显著差异(P>0.05);小于(-)-antofine[(0.62±0.01)、(0.57±0.02)μmol.L-1],比较有显著差异(P<0.05)。衍生物5d对MCF-7细胞和F3Ⅱ细胞的IC50分别是[(0.48±0.01)、(0.42±0.02)μmol.L-1],与紫杉醇的IC50比较无显著差异(P>0.05);小于(-)-antofine的IC50,比较有显著差异(P<0.05)。结论 (-)-antofine衍生物5d和5g表现出优良的体外抗乳腺癌活性,均优于母体(-)-antofine。     

黄癸素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的体内外抑制作用

目的观察黄癸素对人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231及其裸鼠模型肿瘤的抑制作用。方法采用MTT法观察黄癸素对乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231的增殖抑制作用;建立MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤模型,观察黄癸素灌胃给药对荷瘤的抑制作用。TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡状况。结果黄癸素可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,具有明显的浓度依赖性和时间依赖性,作用48h的IC50为(1.26±0.30)mg·L-1,而对MCF-7细胞的IC50则为(32.07±9.09)mg·L-1。在体实验结果显示,中、高剂量(90、120 mg·kg-1)黄癸素对MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,抑瘤率分别为42.26%和71.57%(P<0.01)。TUNEL法表明黄癸素组细胞凋亡率明显高于空白组。结论黄癸素有抑制人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231肿瘤生长、促进瘤组织凋亡的作用。     

mfn2基因在猫爪草皂苷、红三叶异黄酮治疗乳腺癌中的作用机制研究

目的：研究mfn2基因在猫爪草皂苷、红三叶异黄酮抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导其凋亡中的作用。方法：采用不同浓度的猫爪草皂苷和红三叶异黄酮分别处理MCF-7细胞24,48及72h,进行体外细胞培养,用实时荧光定量PCR法检测mfn2基因的相对表达情况。结果：高浓度的猫爪草皂苷（100mg·L^-1）作用MCF-7细胞48h后,明显促进mfn2基因的表达,并且随时间延长更加明显;红三叶异黄酮在作用MCF-7细胞48,72h后,显著抑制mfn2基因的表达。结论：高浓度的猫爪草皂苷可能是通过促进mfn2基因的表达,来抑制MCF-7细胞增殖及诱导其凋亡,红三叶异黄酮的作用机制有待于进一步研究。     

美洛昔康对铝负荷致大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:观察美洛昔康对铝负荷致海马神经元损伤的保护作用。方法:离体培养新生SD大鼠海马神经元7d,分成空白对照组(200μmol·L-1NaCl)、铝模型组(200μmol·L-1AlCl3)、美洛昔康小、中、大剂量(10-8、10-7、10-6mol·L-1)组,给药24h后,检测各组神经元光密度值、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并观察神经元形态。结果:与空白对照组比较,铝模型组光密度值降低、LDH漏出率升高、SOD活性减弱、MDA含量升高(P<0.01),神经元形态发生明显损伤;与铝模型组比较,美洛昔康各剂量组光密度值升高、LDH漏出率降低、SOD活性增强、MDA含量降低(P<0.01或P<0.05),神经元形态出现明显改善。结论:美洛昔康对于铝负荷致离体海马神经元损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症反应和氧化应激有关。     

蛋白激酶C抑制药enzastaurin对吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞株生长的影响

目的：观察新型靶向制剂enzastaurin单独或联合吉非替尼对耐药人非小细胞肺癌细胞株的影响,设计合理的治疗药物组合。方法：CCK8法检测细胞增殖,Chou-Talalay联用指数法判定联合用药效果,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：单药吉非替尼及enzastaurin作用NCI-H460耐药肺癌细胞72 h的半数抑制浓度（IC50）分别为6.99μmol·L-1（95%CI 3.55~13.79μmol·L-1）,7.25μmol·L-1（95%CI 4.77~1.02μmol·L-1）。两药联合应用对肺癌细胞的抑制作用增强（P 〈0.05）,同时给药组抑制效果更显著（P〈0.01）。同时给药组、序贯给药组（先用吉非替尼）和序贯给药组（先用enzastaurin）吉非替尼对H460细胞的IC50值分别为0.006μmol·L-1（95%CI 0.002~0.020μmol·L-1）,0.02μmol·L-1（95%CI 0.011~0.037μmol·L-1）,0.085μmol·L-1（95%CI 0.042~0.170μmol·L-1）。联合指数法显示在吉非替尼浓度0.05μmol·L-1以上时,同时给药组联合指数均〈1。细胞周期分布实验结果显示同时给药组可显著提高G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,阻滞细胞于G1期。结论：蛋白激酶C抑制药enzastaurin与EGFR抑制药吉非替尼联用具有较好的协同作用,两药联合应用可能是出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌后续治疗的一个新选择。     

补阳还五汤对谷氨酸体外诱导脊髓神经元损伤大鼠的保护作用研究

目的:研究补阳还五汤对谷氨酸体外诱导脊髓神经元损伤大鼠的保护作用。方法:选用100μmol·L-1的谷氨酸作用于细胞1h,复制谷氨酸诱导原代脊髓神经元调亡的细胞培养模型。实验分为4组,即空白、甲基强的松龙(20μL·mL-1)和补阳还五汤高、低浓度(20、10μL·mL-1)组。药物血清与体外培养5d的原代脊髓神经元共同孵育24h,采用MTT法评价神经元损伤程度。结果:补阳还五汤高、低浓度组神经元线粒体内的琥珀酸脱氢酶的活性明显高于空白组(P<0.01)。结论:补阳还五汤可以部分地抑制谷氨酸的兴奋性神经毒性作用。     

二磷酸腺苷诱导的血小板聚集率测定方法研究

目的：研究二磷酸腺苷（ADP）诱导的血小板聚集率的测定方法。方法：收集30例急性冠脉综合征（ACS）患者的血样,选择5,10,20μmol·L＾-1不同浓度的ADP测定血小板1,3,5min的聚集率和最大聚集率。结果：5μmol·L^-1ADP组不同时间点的血小板聚集率与10,20μmol·L^-1ADP组差异显著（P〈0．01）,10μmol·L^-1ADP组不同时间点的血小板聚集率与20μmol·L。ADP组差异无统计学意义。研究发现血小板聚集率有直方双曲线和波形图两组有代表性的图形。结论：对于普利生公司的LBY—NJ4四通道血小板聚集仪,10μmol·L^-1为最适ADP诱导剂浓度。初步推断患者的血小板聚集率的图形为直方双曲线,可能对氯吡格雷的反应较高,氯吡格雷能起到较好的抗血小板作用。     

蛇毒三肽pENW对血管内皮的保护作用及机制探讨

目的：体外实验评价pENW对血管内皮细胞氧化应激损伤和炎性损伤的保护作用,并对其作用机制进行探讨,以提供pENW可开发成为抗血栓药物的依据。方法：原代培养的血管内皮细胞以消化合并刮取法取自牛胸主动脉。H2O2（800μmol.L-1）和LPS（1 mg.L-1）分别用于模拟氧化应激损伤和炎性损伤,经典的G riess Reagent法用于检测一氧化氮的含量。LPS（100μg.L-1）用于刺激血管内皮细胞分泌一氧化氮。在考察pENW对血管内皮细胞的保护作用时,设空白对照组（给予等体积的磷酸盐缓冲溶液）、模型组（分别给予H2O2800μmol.L-1或LPS 1 mg.L-1进行造模）、阳性药给药组（在H2O2造模前给予依达拉奉10-5mol.L-1或在LPS造模前给予阿司匹林10-4mol.L-1）和不同剂量pENW给药组（造模前分别给予pENW 10-4,10-5,10-6和10-7mol.L-1）。在探讨病理条件下pENW对血管内皮细胞释放一氧化氮的调节作用时,设空白对照组（给予等体积的磷酸盐缓冲溶液）、模型组（给予LPS 100μg.L-1）、阳性对照组（造模前给予阿司匹林10-4mol.L-1）和不同剂量pENW给药组（造模前分别给予pENW 10-4,10-5,10-6和10-7mol.L-1）,而在进行正常生理条件下pENW调节血管内皮细胞一氧化氮释放作用的研究时,除不设模型组外,其余各组亦不给LPS。结果：pENW能剂量依赖性地减轻H2O2和LPS引起的血管内皮细胞损伤。在pENW10-4mol.L-1＋H2O2和pENW 10-4mol.L-1＋LPS组,细胞存活率分别升高至（97.6±40.4）%和（64.7±8.0）%;10-4mol.L-1的pENW使血管内皮细胞在正常生理条件下合成的一氧化氮由空白组的（15.50±2.82）升高至（48.68±10.81）μmol.L-1（P〈0.01）;但pENW能抑制LPS（100μg.L-1）引起的一氧化氮大量升高,且抑制作用呈剂量依赖性。结论：pENW对血管内皮细胞损伤具有保护作用,其作用与调节内皮细胞一氧化氮的释放有关。     

姜黄素对尤文氏肉瘤细胞系RD-ES细胞的诱导凋亡作用研究

目的:研究姜黄素对尤文氏肉瘤细胞系RD-ES细胞的诱导凋亡作用。方法:体外培养人尤文氏肉瘤RD-ES细胞,实验分为4组,即空白对照(空白溶液)及姜黄素低、中、高剂量(1、10、100mg·mL-1)组。24～72h后观察各组细胞的形态变化,并分别用MTT、TUNEL染色、RT-PCR及图像分析技术检测各组细胞生长、凋亡率及Bcl-2基因表达水平的变化。结果:与对照组比较,姜黄素低、中、高剂量组RD-ES细胞生长受阻,细胞凋亡率增加,Bcl-2表达减少。结论:姜黄素可诱导RD-ES细胞凋亡,并与Bcl-2减少有关。     

HPLC法测定人血浆中比阿培南的浓度及其药动学研究

目的:建立一种简便、快速测定人血浆中比阿培南浓度的方法,并考察其药动学。方法:血浆样品加入5-羟基吲哚乙酸20μL,经7%硫酸锌蛋白沉淀后进样测定,其中色谱柱为AgilentZorbaxBonus-RP,流动相为甲醇-0.3%醋酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0mL·min~(-1),紫外检测波长为300nm,进样量20μL。结果:30名健康受试者随机分为低、中、高3个剂量组单次静脉滴注,血浆中比阿培南的药动学参数分别为:t_(1/2)(1.13±0.16)、(1.06±0.10)、(1.11±0.12)h,t_(max)(1.02±0.21)、(1.10±0.31)、(1.05±0.27)h,c_(max)(9.04±4.24)、(17.64±4.55)、(35.10±4.23)μg·mL~(-1),AUC_(0～12h)(18.17±3.86)、(36.44±7.68)、(70.24±8.91)mg·h·L~(-1),AUC_(0～∞)(20.42±4.69)、(37.21±7.63)、(72.40±9.03)mg·h·L~(-1);多次给药的t_(1/2)、t_(max)、c_(max)、AUC_(0～12h)、AUC_(0～∞)分别为(1.07±1.35)h、(1.04±0.60)h、(19.61±3.68)μg·h~(-1)、(32.47±3.90)mg·h·L~(-1)、(33.36±3.80)mg·h·L~(-1)。结论:3个剂量组的药动学参数呈线性相关,各剂量组内、间无显著性个体差异,不同年龄、性别、身高、体重之间也无显著性个体差异。