异丹叶大黄素对低氧肺动脉平滑肌细胞增殖的作用及机制

摘要：目的:观察异丹叶大黄素（ISO）对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响,并探讨其可能机制。方法:不同浓度的ISO在低氧或常氧培养条件下孵育大鼠PASMCs 24 h后,CCK-8试剂盒检测细胞增殖与细胞毒作用,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR（RT-PCR）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白E（Cyclin E）、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）、细胞周期蛋白依赖性激酶6（CDK6） mRNA的表达,Western Blot检测总的及磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）与蛋白激酶B（Akt）表达,荧光酶标仪检测活性氧族（ROS）的产生。结果:CCK-8检测结果表明ISO能够抑制低氧PASMCs增殖（P<0.05）,且实验浓度ISO对PASMCs无明显毒性作用（P>0.05）;流式细胞仪结果表明ISO使处于G0/G1期的PASMCs比例增加（P<0.05）,处于S期PASMCs比例减少（P<0.05）; RT-PCR检测结果表明ISO能够抑制Cyclin D1、CyclinE、CDK2、4、6 mRNA的表达（P<0.05）; Western Blot检测结果表明ISO能够抑制PI3K/Akt信号通路的活化（P <0.05）;荧光酶标仪检测结果表明ISO能够抑制ROS的产生（P <0.05）。结论:ISO可抑制低氧PASMCs增殖,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的活化及ROS的产生有关。     

IL-6、GATA6在大鼠肺动脉平滑肌细胞中的表达及对 细胞增殖的影响

目的　探讨白细胞介素（IL）-6、转录因子GATA6在血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖中的表达及作用。方法　从8周龄SD大鼠中分离肺动脉,采用Ⅰ型胶原酶消化法原代培养PASMCs;采用倒置显微镜观察和免疫荧光染色鉴定细胞;采用CCK-8检测不同剂量（0、15、30、45、60、75 μg/L）PDGF-BB分别作用12、24、48 h对PASMCs增殖能力的影响;采用流式细胞术检测30 μg/L PDGF-BB诱导细胞增殖48 h的细胞周期;应用qPCR和Western blot技术检测30 μg/L PDGF-BB诱导细胞增殖12、24、48 h后IL-6和GATA6 mRNA及蛋白的表达水平。结果　15~60 μg/L的PDGF-BB诱导24 h、48 h后PASMCs增殖显著,其中以30 μg/L诱导48 h效果最佳（P＜0.05）;流式周期结果表明,PDGF-BB组G1期的百分比较对照组降低,而S期和G2期百分比增高（P＜0.01）。PDGF-BB能够诱导细胞增加IL-6 mRNA和蛋白的分泌并降低GATA6 mRNA和蛋白表达水平。相关性分析提示PASMCs的增殖与IL-6 mRNA表达呈正相关,与GATA6 mRNA表达呈负相关（r分别为0.538和-0.647,均P＜0.05）;IL-6与GATA6的表达呈负相关（r=-0.705,P＜0.01）。结论　PDGF-BB诱导体外培养的PASMCs增殖;IL-6、GATA6参与了PDGF-BB诱导PASMCs增殖的发生和发展;PASMC增殖与IL-6 mRNA表达上调和GATA6 mRNA表达下调有关。     

吉马酮通过调控miR-297表达对H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激的影响

摘要：目的:探讨吉马酮对H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激的影响及分子机制。方法:分离培养小鼠海马神经元,将其分为对照组、H2O2组、H2O2+吉马酮低、中、高(50,100,200μmol·L-1)浓度组、H2O2+miR-NC组、H2O2+miR-297组、H2O2+吉马酮(200μmol·L-1)+anti-miR-NC组、H2O2+吉马酮(200μmol·L-1)+anti-miR-297组。流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X（Bax）蛋白表达;丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒分别检测MDA含量和SOD活性;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-297表达水平。结果:吉马酮低、中、高浓度处理后,H2O2诱导的小鼠海马神经元中细胞凋亡率、Bax表达水平和MDA含量降低,Bcl-2表达水平、SOD活性和miR-297表达水平升高,且呈浓度依赖性（P<0.05）。miR-297过表达可降低H2O2诱导的海马神经元细胞凋亡率和MDA含量,提高SOD活性（P<0.05）。抑制miR-297表达逆转了吉马酮对H2O2诱导的海马神经元细胞凋亡和氧化应激的作用。结论:吉马酮可能通过上调miR-297表达抑制H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激。     

飞燕草素葡萄糖苷通过上调SOX2OT减轻高糖诱导的心肌细胞损伤

摘要：目的:探讨飞燕草素葡萄糖苷（DPg）对高糖（HG）诱导的心肌细胞H9C2损伤的影响及可能机制。方法:体外培养H9C2细胞,不同剂量(1,10,100μmol·L-1)的DPg作用于33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导的H9C2细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中兔抗鼠B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关蛋白（Bax）的蛋白表达,试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平,RT-qPCR检测SRY盒转录因子2重叠转录本（SOX2OT）表达。转染SOX2OT过表达载体、小干扰RNA至H9C2细胞,经33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导24 h后,检测细胞增殖、凋亡、Bax和Bcl-2蛋白表达及MDA和SOD水平。结果:DPg可提高高糖诱导的H9C2细胞吸光度（A）值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）,且呈剂量依赖性。DPg可剂量依赖性促进高糖诱导的H9C2细胞中SOX2OT的表达,过表达SOX2OT可提高高糖诱导的H9C2细胞A值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。与未敲减SOX2OT的H9C2细胞比较,敲减SOX2OT的H9C2细胞经100μmol·L-1DPg和高糖处理后A值、Bcl-2蛋白表达和SOD活性降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量升高（P<0.05）,并抑制Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。结论:DPg可能通过上调SOX2OT表达抑制HG诱导的H9C2细胞凋亡和氧化应激。     

咪达唑仑对低氧/复氧诱导的HK-2细胞凋亡及Nrf2/HO-1通路的影响

摘要：目的:探讨咪达唑仑对低氧/复氧诱导HK-2细胞凋亡的作用,及对核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）通路的影响。方法:HK-2细胞分为正常对照组、低氧/复氧组、不同浓度(2,4,8μmol·L-1)咪达唑仑组,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,试剂盒检测细胞活性氧簇（ROS）和丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性,蛋白质免疫印迹技术（WB）检测HK-2细胞Nrf2和HO-1表达水平。结果:相较于正常对照组,低氧/复氧组细胞活性及SOD活性明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率、ROS和MDA含量明显升高（P<0.05）。相较于低氧/复氧组,咪达唑仑各浓度组细胞活性、SOD活性及Nrf2和HO-1表达明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率、ROS和MDA含量明显降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性。结论:咪达唑仑可促进Nrf2/HO-1信号通路,提高细胞抗氧化能力,抑制低氧/复氧诱导的HK-2细胞凋亡。     

间尼索地平对5-羟色胺诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的探讨间尼索地平(m-Nis)对5-羟色胺(5-HT)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖和迁移的影响,并深入研究其作用机制。方法采用植块法培养大鼠PASMCs。实验分为6组:空白对照组、5-HT(1μmol·L-1)组,m-Nis(10-5、10-6、10-7、10-8mol.L-1)组。噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell迁移小室法分别测定PASMCs的增殖和迁移,Western blot法检测大鼠PASMCs中增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达及细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)的磷酸化水平,研究m-Nis对ERK1/2/MAPK信号通路的影响。结果不同浓度m-Nis明显抑制了5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖(P<0.05或P<0.01)和迁移(P<0.01),并呈现一定的浓度依赖性;另外,Western blot结果显示m-Nis对5-HT诱导的大鼠PASMCs中PCNA的蛋白表达有不同程度的抑制作用(P<0.05或P<0.01),10-5,10-6,10-7mol.L-1m-Nis还明显抑制了5-HT诱导的大鼠PASMCs中ERK1/2磷酸化水平的升高,p-ERK1/2/ERK1/2比值均有不同程度地降低(P<0.05或P<0.01)。结论m-Nis对5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖和迁移有明显的抑制作用,可能与其抑制PCNA蛋白表达及ERK1/2/MAPK信号通路有关。     

麦冬皂苷B促进细胞铁死亡抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖的机制

目的：研究麦冬皂苷B对A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法：细胞计数试剂盒（CCK-8）检测不同浓度麦冬皂苷B处理后A549细胞的存活率;将A549细胞分为对照组和麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组干预24 h,分析细胞克隆形成情况;DCFH-DA、C11-BODIPY、FeRhonox-1荧光探针分别检测细胞内活性氧、脂质过氧化水平、Fe²⁺浓度的荧光强度变化;GSH和MDA试剂盒分别检测细胞内GSH和MDA水平;Real-time PCR法和Western blot法分别检测SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Transferrin、Nrf2、HO-1的mRNA水平和蛋白表达情况。结果：与对照组比较,A549细胞存活率随麦冬皂苷B药物浓度增大逐渐降低,其IC₅₀为 23.7 μmol·L^-1。麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著细胞克隆形成（P<0.05）。与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内脂质过氧化水平的荧光强度和脂质过氧化产物MDA 积累（P<0.05）,且呈剂量依赖性,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内ROS和亚铁离子的荧光强度（P<0.05）,明显降低细胞内GSH含量（P<0.05）。RT-PCR结果显示,与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11 mRNA 水平（P<0.05）,只有OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC40A1 的mRNA水平;Western blot结果显示,与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）。与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低Nrf2的mRNA水平和Nrf2和HO-1的蛋白水平（P<0.05）,而OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低HO-1的mRNA水平（P<0.05）。结论：麦冬皂苷B能够抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖,其机制可能与抑制Nrf2/HO-1抗氧化通路促进细胞铁死亡有关。     

类叶升麻苷调控CREG表达对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

摘要：目的:探讨类叶升麻苷对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的影响及机制。方法:不同浓度(1,10,100μmol·L-1)的类叶升麻苷作用于oxLDL诱导的HUVEC细胞,酶联免疫吸附法检测细胞中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽还原酶（GSH-Px）活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹（Western blot）法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和E1A激活基因阻遏子（CREG）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测CREG mRNA表达水平。转染CREG过表达载体或CREG小干扰RNA至HUVEC细胞,构建CREG过表达或CREG表达抑制的HUVEC细胞。oxLDL诱导CREG过表达的HUVEC细胞,或类叶升麻苷作用于oxLDL诱导的CREG表达抑制的HUVEC细胞,上述相同方法检测MDA含量、SOD和GSH-Px活力、细胞凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:oxLDL诱导HUVEC细胞后,MDA含量、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高,SOD和GSH-Px活力、Bcl-2蛋白及CREG mRNA和蛋白水平降低（P<0.05）。类叶升麻苷或过表达CREG可降低oxLDL诱导的HUVEC细胞MDA含量、凋亡率和Bax蛋白表达,提高SOD和GSH-Px活力及Bcl-2蛋白表达（P<0.05）。类叶升麻苷可促进oxLDL诱导的HUVEC细胞CREG mRNA和蛋白表达（P<0.05）,抑制CREG表达降低了类叶升麻苷对oxLDL诱导的HUVEC细胞MDA含量、SOD和GSH-Px活力、细胞凋亡率及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响（P<0.05）。结论:类叶升麻苷通过上调CREG表达降低oxLDL诱导的HUVEC细胞氧化应激和凋亡,减轻细胞损伤。     

金雀异黄素对MCP-1诱导人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及c-fos mRNA转录的影响

目的研究金雀异黄素对单核细胞趋化蛋白1(MCP1)诱导的人脐静脉血管平滑肌细胞(hUVSMC)增殖及cfosmRNA转录的影响。方法用不同浓度(10,30,90μmol·L-1)金雀异黄素预作用hUVSMC2h后加入终浓度为10μg·L-1的MCP1作用30min;采用逆转录聚合酶链反应检测细胞中cfos基因的表达;作用48h,用细胞计数检测细胞增殖的情况。结果金雀异黄素在低剂量(10μmol·L-1)即能抑制平滑肌细胞的增殖(P<0.05),在高剂量(30,90μmol·L-1)才能抑制细胞内cfosmRNA的表达(P<0.01,P<0.01)。结论金雀异黄素能抑制MCP1诱导的hUVSMC增殖,其机制可能与降低cfos的表达有关。     

桃叶珊瑚苷对谷氨酸诱导的兴奋性神经毒性的抑制作用研究

目的：研究桃叶珊瑚苷对谷氨酸诱导的兴奋性神经毒性的抑制作用。方法 采用20 mmol·L–1谷氨酸诱导PC-12细胞损伤建立神经毒性模型，加入1，5，10，20，40 μmol·L–1的桃叶珊瑚苷处理24 h后，通过MTT法检测细胞活力，用流式细胞术检测细胞内Ca2+和活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平，采用In Cell Western检测谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor，NMDA)亚基NMDAR1的水平，采用Elisa试剂盒检测细胞上清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)水平。结果 20 mmol·L–1谷氨酸作用24 h可使体外培养的PC-12细胞活力明显下降(P<0.01)，细胞内Ca2+，NMDAR1蛋白水平和氧化应激水平明显增加(P<0.01)。10 μmol·L–1的桃叶珊瑚苷可以明显提高谷氨酸诱导后PC-12细胞的细胞活力(P<0.01)，降低细胞内Ca2+、NMDAR1蛋白水平和ROS水平(P<0.01)，改善细胞内SOD、LDH、MDA水平(P<0.01)。结论 桃叶珊瑚苷可能通过抑制NMDAR1的表达，从而降低细胞内Ca2+的堆积，并抑制氧化应激水平来改善谷氨酸诱导的PC-12细胞损伤，抑制谷氨酸诱导的兴奋性神经毒性。     

丹参酮IIA在低氧诱导肺动脉高压中的保护作用

目的：通过低氧诱导肺动脉高压（PAH）小鼠及细胞模型,探讨丹参酮IIA（TanIIA）对PAH的疗效及可能的作用机制。方法：选取C57BL6雄性小鼠随机分为常氧组、低氧组及低氧+TanIIA组各5只。4周后采用右心导管法检测小鼠右心室压力,行肺组织氧化苏木精伊红染色法（HE）染色,采用硫代巴比妥酸（TBA）法和WST-8法检测肺组织中丙二醇（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平。取肺动脉平滑肌细胞（hPASMCs）随机分为常氧组、低氧组和低氧+TanIIA组,24 h后采用蛋白免疫印迹（WB）实验检测Bax、P62、Akt及P-Akt蛋白表达水平。结果：与常氧组小鼠比较,低氧组右心室收缩压升高（P<0.05）;与低氧组小鼠比较,低氧+TanIIA组右心室收缩压降低（P<0.05）。低氧组较常氧组肺血管明显重构,与低氧组比较,低氧+TanIIA组肺血管重构程度减轻;与常氧组比较,低氧组肺组织中SOD下降,MDA增加（P<0.05）;与低氧组比较,低氧+TanIIA组小鼠肺组织中SOD增加,MDA降低（P<0.05）。与常氧组比较,低氧组PASMCs中Bax蛋白表达降低,P62蛋白表达增加（P<0.05）;与低氧组比较,低氧+TanIIA组PASMCs中Bax蛋白表达增加,P62蛋白表达降低（P<0.05）。与常氧组比较,低氧组PASMCs中P-Akt/Akt比值增加（P<0.05）;与低氧组比较,低氧+TanIIA组PASMCs中P-Akt/Akt比值降低（P<0.05）。结论：TanIIA具有保护低氧PAH的作用,可能与TanIIA可减轻低氧PAH中氧化应激水平及抑制低氧PASMCs中PI3K/Akt信号通路的激活,部分逆转低氧状态下PASMCs凋亡的减少,改善PAH中肺血管重构有关。     

多巴胺毒性代谢产物对前成骨细胞的增殖、分化、矿化及凋亡的影响

摘要：目的:探究多巴胺的毒性代谢产物3,4-二羟基苯乙醛（DOPAL）对前成骨细胞增殖、分化、矿化及凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:培养MC3T3-E1前成骨细胞,将细胞分为对照组及不同浓度的DOPAL加药组,采用CCK-8检测DOPAL对前成骨细胞增殖的影响;qRT-PCR检测成骨细胞标志因子mRNA相对表达;茜素红染色检测其对成骨细胞骨矿化结节的影响;Tunel及Western Blot检测DOPAL对前成骨细胞凋亡的影响;Western Blot检测α-突触核蛋白（α-S）蛋白相对表达。结果:当DOPAL的加药浓度≥0.1μmol·L-1时,对MC3T3-E1前成骨细胞增殖有显著的抑制作用,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与对照组相比,DOPAL各浓度组的成骨细胞标志因子mRNA相对表达显著下调（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡标志因子cleaved-caspase-3蛋白相对表达、细胞凋亡率、α-S蛋白相对表达显著升高（P<0.01）;DOPAL 0.1μmol·L-1和0.5μmol·L-1两个浓度组以上各指标差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。未加入骨诱导剂的对照组,并未出现矿化结节;与骨诱导组相比,DOPAL 0.1μmol·L-1和0.5μmol·L-1组抑制MC3T3-E1细胞分化成熟。结论:DOPAL抑制前成骨细胞的增殖、分化及矿化作用,且促进前成骨细胞的凋亡,可能与前成骨细胞中α-S蛋白相对表达增加从而聚集形成有神经毒性的寡聚体有关,该实验为在体研究奠定基础。     

蒲公英总黄酮抑制Aβ25-35诱导的海马神经元细胞凋亡的研究

目的：研究蒲公英总黄酮用于防治阿尔兹海默症（AD）的机制,探讨蒲公英总黄酮对Aβ25-35诱导海马神经元细胞凋亡的影响,并进一步探究其潜在机制。方法：对海马神经元胞进行原代培养,经20 μmol·L-1 Aβ25-35诱导,细胞逐渐出现凋亡,用MTT法结合流式细胞仪,观察不同浓度的蒲公英总黄酮的细胞活力和细胞凋亡情况。用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法来检测各组细胞中丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性。Western blot检测各组细胞凋亡相关的基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。结果：20 μmol·L-1 Aβ25-35组细胞比对照组活力下降,凋亡增加,MDA 含量上升,SOD 活性降低。与20 μmol·L-1 Aβ25-35组相比,各浓度下的蒲公英总黄酮均能够提高细胞活力,升高细胞内SOD活性,抑制细胞凋亡,降低MDA含量,同时上调Bcl-2表达,降低Bax和活化状态下的Caspase-3蛋白的表达,并呈浓度依赖性相关。结论：蒲公英总黄酮能够减少Aβ25-35诱导神经元细胞的细胞凋亡,这可能与拮抗其氧化损伤有关。     

血根碱对脂多糖致H9c2细胞氧化损伤的改善作用

目的 观察血根碱（sanguinarine,SAN）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的H9c2细胞氧化应激的影响,并对其与HO-1/NOX2途径之间的关系进行探讨。方法 不同因素干预H9c2细胞后,采用细胞活性试剂盒检测不同浓度SAN和/或LPS对H9c2细胞生存的影响;酶标仪及荧光显微镜检测SAN对LPS诱导细胞产生活性氧（reactive oxygen species,ROS）的影响; Real time RT-PCR检测SAN对LPS诱导的NOX2、P47PHOX、HO-1、SOD1、SOD2基因表达的影响; MDA检测试剂盒检测MDA的变化。结果 单用SAN对H9c2细胞活性无影响,LPS可显著降低细胞活性,而SAN与LPS共同干预则可呈浓度依赖性地提高细胞活性,降低ROS产生。LPS处理12 h上调H9c2细胞NOX2、p47phox mRNA表达、下调HO-1 mRNA表达; SAN预处理后,细胞内NOX2、p47phox mRNA下调、HO-1 mRNA上调,而SAN与锌原卟啉IX预处理则可逆转这种现象。SAN上调SOD1及SOD2 mRNA表达,降低MDA产生。结论 SAN可通过活化HO-1/NOX2途径,抑制ROS的产生,从而使H9c2细胞免受LPS介导的损伤,提高细胞活力。     

吡那地尔对人肺动脉平滑肌细胞内Ca2+浓度的影响

目的 探讨ATP敏感性钾(KATP)通道开放剂吡那地尔(Pin)对内皮素1(ET-1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及细胞内[Ca2+]i的影响.方法 体外培养人PASMCs,用ET-1诱导其增殖,应用MTT法、Fluo-3和激光扫描共聚焦显微镜技术评价Pin对ET-1诱导的人PASMCs增殖及PASMCs[Ca2+]i调节的作用.结果 Pin显著抑制ET-1诱导的人PASMCs增殖.呈浓度依赖效应,KATP通道拮抗剂格列本脲呈浓度依赖性阻断Pin的作用;ET-1诱导人PASMCs内[Ca2+]i显著增加,Pin(10 μmol/L)拈抗ET-1诱导的人PASMCs内[Ca2+]i升高.结论 KATP通道开放剂Pin可明显抑制ET-1诱导的人PASMCs增殖作用,抑制细胞内Ca2+浓度增加.     

索拉菲尼和伊马替尼对肺动脉平滑肌细胞增殖和糖代谢作用的比较研究

目的比较索拉菲尼和伊马替尼对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及糖代谢途径转变的作用。方法分离培养SD大鼠PASMCs,给予PDGF刺激建立细胞增殖模型,分别使用不同浓度的索拉菲尼和伊马替尼处理细胞;MTT检测细胞增殖率;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞代谢关键蛋白表达;试剂盒检测葡萄糖摄取和乳酸生成。结果与正常对照组相比,PDGF明显促进PASMCs的增殖,并诱导细胞的代谢向糖酵解转变,表现在葡萄糖的摄取和乳酸生成明显增加,Glut1、Glut4、MCT4、LDH的表达水平显著增加,PDH表达水平明显减少;与PDGF处理组相比,索拉菲尼和伊马替尼均能显著抑制PDGF诱导的PASMCs的增殖,并有效逆转PDGF诱导的PASMCs有氧糖酵解;与索拉菲尼处理组相比,伊马替尼明显降低MCT4(2μmol·L~(-1))和LDH(2、4μmol·L~(-1))的表达,但PASMCs增殖和Glut1、Glut4、PDH表达差异无统计学意义。结论索拉菲尼和伊马替尼均可抑制PDGF诱导的PASMCs增殖和逆转有氧糖酵解,两者作用无明显差别。     

小檗碱对棕榈酸诱导大鼠心肌细胞H9c2脂毒性损伤的影响

摘要：目的:探讨小檗碱对棕榈酸（PA）诱导大鼠心肌细胞H9c2脂毒性损伤的影响。方法:在正常培养的H9c2细胞中,采用细胞计数试剂盒（CCK8）检测细胞存活率;采用ELISA试剂盒检测细胞裂解液中氧化还原指标：丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）;采用免疫印迹法Western blot检测细胞内能量感受器磷酸化AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）/AMPK及肝激酶B1（LKB1）、沉默调节蛋白1（SIRT1）和成纤维细胞生长因子-21（FGF-21）的蛋白表达。结果:PA在100μmol·L-1浓度时,处理H9c2细胞24 h以上产生明显细胞毒性,与正常对照组（不含PA）比较,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。使用5μmol·L-1小檗碱预处理H9c2细胞4 h可以逆转PA对H9c2中MDA、SOD和GSH的影响,同时细胞存活率明显上升,差异有统计学意义（P＜0.05）。同时,在给予小檗碱治疗后,p-AMPK/AMPK、LKB1、SIRT 1和FGF-21蛋白的表达水平亦显著增加（P＜0.05）。但使用FGF21的干扰RNA（siRNA）后,小檗碱激活AMPK的现象几乎被逆转,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:小檗碱可显著改善PA诱导的心肌细胞脂毒性,其机制可能与经典的FGF-21/AMPK信号通路有关。     

黄连素对高糖诱导的内皮祖细胞功能障碍的影响

摘要：目的:探讨黄连素对高糖诱导的内皮祖细胞（EPCs）功能障碍的影响及可能机制。方法:将不同浓度黄连素(100,200,400μmol·L-1)分别加入EPCs中孵育进行活性检测,选取最佳作用浓度。将最佳浓度的黄连素与高糖(40 mmol·L-1)共孵育,诱导小鼠骨髓来源EPCs损伤,采用CCK-8比色法检测不同时间点（24 h和48 h）的细胞活性;通过小管形成、迁移和黏附能力检测EPCs功能;检测一氧化氮（NO）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果:筛选出200μmol·L-1为黄连素最佳作用浓度;黄连素显著提高高糖诱导的EPCs细胞活性（P<0.05）;显著改善EPCs的小管形成、迁移和黏附功能（P<0.05）;显著上调高糖诱导的EPCs的NO含量和SOD活性（P<0.05）。结论:黄连素可能通过调节高糖诱导的NO和SOD水平改善EPCs功能。     

阿卡波糖抑制过氧化氢诱导小鼠MIN-6胰岛β细胞氧化应激及细胞凋亡

摘要：目的:通过过氧化氢（H2O2）诱导小鼠MIN-6胰岛β细胞氧化应激,探讨阿卡波糖对氧化损伤引起凋亡的影响。方法:将不同浓度H2O2（50,100,200,400,800μmol·L-1）分别加入小鼠MIN-6细胞中进行相关检测。采用CCK-8比色法观察细胞存活率;试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量; Elisa试剂盒检测胰岛素分泌量; Annexin-V-PI流式细胞术测MIN-6细胞凋亡率; caspase-3试剂盒检测caspase-3活性。结果:随H2O2浓度增高,作用时间延长,MIN-6细胞活性显著降低,H2O2200μmol·L-1作用3 h适宜作为后续MIN-6胰岛细胞氧化损伤研究。在H2O2诱导下,阿卡波糖显著提高MIN-6细胞活性,减少LDH释放;阿卡波糖抑制氧化应激水平,降低SOD活性和MDA含量;另外,阿卡波糖改善MIN-6细胞分泌胰岛素功能,降低凋亡水平。结论:阿卡波糖对H2O2诱导的小鼠MIN-6胰岛β细胞氧化应激和凋亡具有保护作用。     

MMI-0100调控MK2抑制前列腺基质细胞增殖和胶原沉积的机制研究

摘要：目的:探讨多肽抑制剂MMI-0100对人前列腺基质细胞（WPMY-1）增殖与胶原沉积的影响。方法:通过丙酸睾酮、重组人转化生长因子β1（TGF-β1）和重组人碱性成纤维细胞生长因子（b FGF）诱导WPMY-1增殖,MMI-0100孵育48 h后采用CCK-8法检测细胞存活率,分光光度法检测羟脯氨酸含量,实时荧光定量PCR（q PCR）检测Ⅰ型胶原α1（Col-1A1）和Ⅲ型胶原α1（Col-3A1） mRNA水平,Western Blot测定丝裂原活化蛋白激酶2（MK2）、磷酸化MK2（p-MK2）、丝裂原活化蛋白激酶6（MKK6）和磷酸化MKK6（p-MKK6）蛋白表达。结果:MMI-0100(20～100μmol·L-1)显著抑制丙酸睾酮、TGF-β1和b FGF诱导WPMY-1增殖（P<0.05或P<0.0.1）。100μmol·L-1的MMI-0100显著减少羟脯氨酸含量,降低Col-1A1和Col-3A1的mRNA水平,抑制MK2的磷酸化表达（P<0.05或P<0.0.1）。结论:MMI-0100能抑制WPMY-1增殖和胶原沉积,其机制与阻断MK2磷酸化表达有关。