黄芪甲苷和黄芪总皂苷对特发性肺纤维化小鼠治疗作用的对比研究

目的:研究比较黄芪甲苷和黄芪总皂苷对BLM诱导的肺纤维化模型EMT的干预作用。方法:KM小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松阳性组、黄芪甲苷组、黄芪总皂苷组。模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素(10 mg·kg~(-1)),造模后治疗组予黄芪甲苷和黄芪总皂苷灌胃,模型组予等量生理盐水灌胃。给药28 d后取材,进行HE、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,免疫组化检测EMT相关蛋白表达,western-bloting检测TGF-β/smad信号及EMT相关蛋白表达。结果:BLM诱导肺纤维化TGF-β1明显上调(P0. 05),Smad3表达增强(P 0. 05),EMT标记蛋白α-SMA表达增高而E-cadherin减少(P 0. 05)。黄芪甲苷和黄芪总皂苷对上述改变均具有逆转作用,从而抑制EMT的形成。结论:黄芪甲苷和黄芪总皂苷对BLM诱导的肺纤维化小鼠模型EMT有抑制作用,从而延缓肺纤维化的发生发展,黄芪甲苷和黄芪总皂苷在对于炎症的治疗作用较明显,对于胶原纤维的抑制作用不甚明显,总体看来,黄芪甲苷的抑制作用优于黄芪总皂苷。     

黄芪-丹参药对对特发性肺纤维化小鼠肺泡炎症及纤维化的影响

目的研究黄芪-丹参药对对特发性肺纤维化小鼠肺泡炎症及纤维化的影响。方法从软骨环间隙向心端一次性滴注博莱霉素构建小鼠模型,60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松组、黄芪组、丹参组、黄芪-丹参药对组,灌胃给药28 d。HE染色观察肺组织病理学的改变;Masson染色及羟脯氨酸含有量测定观察肺组织纤维化;利用碱性水解法检测肺组织中羟脯氨酸含有量;免疫组化检测TNF-α表达;Western blot检测TNF-α、p-IKK、NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白表达。结果 HE、Masson染色结果显示,模型组炎症细胞增多,大量浸润肺泡组织,肺组织间质性纤维化大量增生,经黄芪-丹参药对干预后肺组织炎症细胞、间质性纤维化有所改善。与模型组比较,黄芪-丹参药对组羟脯氨酸含有量降低(P0.01),TNF-α、p-IKK、NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。结论黄芪-丹参药对可以有效抑制肺泡炎症和控制肺纤维化发展,其作用可能与抑制TNF-α、P-IKK、NF-κB、NLRP3、IL-1β表达有关。     

黄芪多糖对肺纤维化大鼠细胞因子及肺组织病理结构的影响

目的 观察肺纤维化大鼠血清中IFN-γ、IL-4、TNF-α的含量、肺组织病理结构变化,进一步探讨黄芪多糖干预治疗肺纤维化的作用机理.方法 Wistar大鼠60只随机分为5组:空白组、博莱霉素(BLM)组、地塞米松组、黄芪多糖组、黄芪水提物组.采用气管内注入BLM复制肺纤维化模型,造模后第2天开始各药物组开始干预治疗,14 d采用酶联免疫吸附法测定血清IFN-γ、IL-4、TNF-α的含量,14 d、28 d采用HE染色观察肺组织病理结构的变化.结果 与空白组相比较,BLM组大鼠血清IFN-γ含量降低,IL-4、TNF-α的含量升高(均P<0.05),肺组织的肺泡炎及纤维化程度升高(均P<0.05);与BLM组比较,黄芪多糖组、黄芪水提物组、地塞米松组大鼠血清IFN-γ含量升高,IL-4、TNF-α含量降低(均P<0.05);肺组织的肺泡炎及纤维化程度降低(P<0.05).结论 应用黄芪多糖可以明显减轻大鼠肺纤维化进程,不仅降低Ⅱ型细胞因子(IL-4)含量,而且升高Ⅰ型细胞因子(IFN-γ)及TNF-α含量,从而调整Ⅰ型/Ⅱ型细胞因子平衡及及TNF-α表达达到抗纤维化作用.     

黄芪注射液对肺纤维化小鼠肺组织上皮-间质转分化的影响

目的观察黄芪注射液对肺纤维化小鼠肺组织上皮-间质转分化(EMT)的影响,研究其对肺泡上皮细胞EMT过程的干预作用及可能机制。方法将30只实验小鼠随机平均为纤维化组、黄芪组、PBS对照组。纤维化组小鼠气管内灌注博莱霉素3 mg/kg;PBS对照组小鼠于气管灌注等量PBS;黄芪组小鼠给予气管灌注博莱霉素3 mg/kg,并且于实验造模后10 d腹腔注射黄芪注射液5 m L/kg,连续给药2周。实验第24天处死小鼠,肺组织切片行Masson染色观察肺组织病理改变,碱裂解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量,ELISA法检测小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,Western blot法检测肺组织中上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达量。结果与纤维化组比较,黄芪组小鼠肺组织肺纤维化病理损伤明显减轻,胶原沉积减少;黄芪组小鼠肺组织中HYP含量和α-SMA蛋白表达量均明显低于纤维化组(P均<0.05),E-cadherin蛋白表达量明显高于纤维化组(P<0.05);黄芪组血清TNF-α和TGF-β1水平均明显低于纤维化组(P均<0.05)。结论黄芪注射液能下调TNF-α和TGF-β1表达,抑制肺泡上皮细胞EMT现象,从而改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化病理改变。     

黄芪多糖对肺纤维化大鼠mTOR、p-S6、α-SMA的影响

目的:观察黄芪多糖(APS)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法:实验动物随机分为6组,采用BLM气管注入法复制肺纤维化模型,造模后分别给予生理盐水、APS、雷帕霉素(RAPA)灌胃,连续给药28天后提取样本。采用HE和Masson染色观察大鼠肺组织病理学改变,免疫组化法观察大鼠肺组织中p-S6、α-SMA、mTOR的表达。结果:HE和Masson染色结果显示,APS可降低肺纤维化大鼠的肺泡炎积分和肺组织纤维化积分;免疫组化结果显示,APS和雷帕霉素可抑制肺纤维化大鼠肺组织中p-S6、α-SMA、mTOR的表达。结论:APS可能通过抑制mTOR及其下游p-S6的表达,影响α-SMA生成,干预肺纤维化的发生。     

黄芪沙参煎剂对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的干预作用

目的：观察中药黄芪沙参煎剂对肺纤维化大鼠病理、肺泡灌洗液中细胞因子（TGF-β1）表达的影响,探讨黄芪沙参煎剂作用机制,为其临床治疗肺纤维化提供实验依据。方法：取体重190-210g的健康雌性SD大鼠90只,采用随机数字表随机分为6组,每组15只。博莱霉素（B组）、黄芪沙参煎剂高剂量组（H组）、中剂量组（M组）、低剂量组（L组）、强的松组（P组）、生理盐水组（N组）,各组大鼠于造模后第7、14和28天分别随机处死5只。行HE染色、Masson三色染色;右肺支气管肺泡灌洗,收集灌洗液（BALF）,用ELISA法测BALF上清液细胞因子TGF-β1的表达。结果：H组、M组、P组与B组早期肺泡炎和晚期肺纤维化程度比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;第7、14、28天P组、H组、M组的BALF中TGF-β1水平与Β组相比差异有显著统计学意义（Ρ〈0.01）。结论：黄芪沙参煎剂具有与强的松相似的疗效,但副反应小、服用方便,可以明显减少肺泡炎症及肺纤维化形成。黄芪沙参煎剂治疗肺纤维化机制可能与早期抑制炎症细胞浸润,减少炎症细胞分泌释放细胞因子TGF-β1,从而抑制成纤维细胞产生胶原和ECM积聚,起到对肺纤维化的治疗作用。     

化纤汤治疗博莱霉素致小鼠肺纤维化实验研究

目的研究中药化纤汤对博莱霉素致肺纤维化小鼠的防治作用,并与丹参及地塞米松治疗进行对照,从而探讨中药治疗肺纤维化的临床价值及可能的作用机制。方法6～8周龄雄性ICR小鼠分8组,模型组（BM组）经鼻滴入博莱霉素（BLM）5mg／kg建立肺间质纤维化模型,化纤汤预防治疗组（PHT组）于滴入BLM前48h予化纤汤灌胃,化纤汤治疗组（HT组）于滴入BLM后第14天用化纤汤灌胃,同时设立丹参预防治疗组（PDST组）及丹参治疗组（DST组）,地塞米松预防治疗组（PDT组）及地塞米松治疗组（DT组）,并与正常小鼠（Nc组）进行对照。第28天收获其支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织,右肺行苏木精-伊红（HE）和Masson三色染色,并观察电镜下细胞超微结构的改变,左肺经酸解法检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF中转化生长因子β1（TGF—β1）的浓度。结果各药物干预组与BM组比较,小鼠肺系数明显下降（P〈0．05）;肺泡炎、纤维化程度均有改善（P〈0．05）,其中化纤汤预防治疗组改善最明显;肺HYP含量下降（P〈0．05）;BALF中TGF—β1含量亦明显下降。结论早期应用化纤汤可以在某种程度上减轻BLM诱导的肺泡炎及肺纤维化程度,提示益气活血中药对肺纤维化有一定预防作用;抑制TGF-β1在肺组织中的表达可能是其作用机制之一。     

黄芪总皂苷对特发性肺纤维化小鼠上皮间质转分化的干预作用

目的:探讨黄芪总皂苷对博莱霉素(Bleomycin,BLM)诱导的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)小鼠上皮间质转分化(epithelial-mesenchymal transdifferentiation,EMT)的干预作用。方法:将90只小鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、地塞米松组、黄芪总皂苷高剂量组、黄芪总皂苷中剂量组、黄芪总皂苷低剂量组,每组各15只。模型组及黄芪总皂苷各剂量组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素(5 mg·kg~(-1)),造模后,黄芪总皂苷各剂量组以120mg·kg~(-1)、60 mg·kg~(-1)、30 mg·kg~(-1)灌胃,地塞米松组予地塞米松0. 0125 mg·kg~(-1)灌胃,模型组每天予等体积生理盐水灌胃。给药28 d后取材,进行HE、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,免疫组织化学法检测EMT相关蛋白表达,western-bloting检测TGF-β/smad信号及EMT相关蛋白表达。结果:黄芪总皂苷各剂量组小鼠肺质量指数低于模型组,黄芪总皂苷中剂量组降低明显,但均高于空白组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。模型组与空白组比较,羟脯氨酸含量明显增加,而黄芪总皂苷各剂量组羟脯氨酸含量明显下降(P 0. 05);与空白组比较,模型组α-SMA表达增多,黄芪总皂苷各剂量组α-SMA表达比模型组明显减少(P 0. 05);与空白组比较,模型组E-caderin表达减少,黄芪总皂苷各剂量组E-caderin表达增多(P 0. 05)。结论:黄芪总皂苷中剂量组对BLM诱导的肺纤维化小鼠模型EMT抑制作用最好,其抗炎作用优于对胶原纤维的抑制作用。     

黄芪总黄酮对特发性肺纤维化miRNA-21、let-7 d及TGF-β/smad信号干预作用

目的:研究黄芪总黄酮对BLM诱导的肺纤维化模型miRNA-21、let-7 d表达水平和TGF-β1/smad信号干预作用。方法:C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪总黄酮组。模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素(10 mg/kg),假手术组予等量生理盐水,造模后治疗组予黄芪总黄酮(43 mg/kg)灌胃,假手术组和模型组与等量生理盐水灌胃。第28天取材,进行HE、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,realtime-PCR分析miRNA-21、let-7 d表达变化,Western-Bloting检测TGF-β/smad信号及EMT相关蛋白表达。结果:BLM诱导肺纤维化miRNA-21明显上调,而let-7 d下调,在此过程中信号蛋白smad7表达增强mad3磷酸化水平减弱,EMT标记蛋白α-SMA表达增高而E-cadherin减少,黄芪总黄酮对上述改变具有逆转作用,但对let-7 d表达无影响。结论:黄芪总黄酮可通过抑制miRNA-21,增加smad7表达,使TGF-β1/smad激活能力下降,抑制肺纤维化EMT作用。     

黄芪甲苷对博来霉素诱导的小鼠特发性肺纤维化自噬和焦亡的影响

目的:探究黄芪甲苷对特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)小鼠自噬和焦亡的影响及其作用机制,为黄芪抗肺纤维化的研究治疗提供新思路。方法:C57bl/6小鼠随机分为4组,分别为假手术组、模型组、黄芪甲苷组和地塞米松组。小鼠模型行气管切开术,滴注博来霉素(BLM)诱导成模。黄芪甲苷组和地塞米松组每天分别灌胃黄芪甲苷(50 mg·kg-1)和地塞米松(0.125 mg·kg-1),假手术组和模型组每天予等量生理盐水。小鼠于14 d取材,通过组织病理学染色评估黄芪甲苷对IPF诱导的肺损伤的治疗作用,通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中,LC3Ⅱ,白细胞介素-1β(IL-1β),IL-18和半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)的水平以评估炎症反应程度和焦亡水平的表达水平。以苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)三色染色观察肺组织形态和胶原纤维的表达水平。免疫组化(IHC)及Western blot分析自噬和焦亡标记蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组肺组织炎症反应明显、胶原蛋白显著增加(P0.05),与模型组比较,黄芪甲苷组明显抑制肺组织炎症反应,下调胶原蛋白表达(P0.05)。IHC和Western blot检测结果均显示,黄芪甲苷能显著提高LC3Ⅱ蛋白表达(P0.05)同时抑制p62蛋白积累(P0.05),降低Caspase-1,IL-1β和IL-18蛋白表达(P0.05,P0.01)的表达水平。结论:黄芪甲苷治疗显着改善了BLM诱导的小鼠肺纤维化,其作用机制可能与抑制焦亡并增强自噬有关。研究表明黄芪甲苷在抑制肺纤维化方面具有的治疗潜力。