PTPRO基因启动子甲基化在大肠癌中的表达及作用

目的 :研究大肠癌组织及癌旁正常组织PTPRO基因启动子甲基化状态及m RNA表达情况,并探讨其在大肠癌发生中的关系。方法 :应用甲基化特异性PCR(MSP)和RT-PCR分别检测30例大肠癌组织及癌旁正常组织中PTPRO基因启动子甲基化状态及m RNA表达状态。结果 :大肠癌组织中PTPRO基因启动子甲基化率高于癌旁正常组织,其甲基化样本中PTPRO基因m RNA表达明显受抑。结论 :PTPRO基因启动子甲基化在大肠癌发生中起着重要作用,可能与大肠癌的发生、发展及预后有关。     

大肠癌组织MALmRNA、蛋白表达及其启动子甲基化状态研究

目的探讨MAL基因对大肠癌筛查及早期诊断的价值。方法选取10例正常大肠组织作为对照,应用RT-PCR、甲基化特异性PCR、Westernblot方法分别检测并比较大肠癌组织（40例）及相应癌旁组织（40例）中MALmRNA、蛋白的表达情况以及MAL基因启动子甲基化状态。结果大肠癌组织中MALmRNA、蛋白的表达阳性率（10.0%、20.0%）均低于其在癌旁组织（75.0%、85.0%）和正常大肠组织（100.0%、100.0%）中的表达阳性率（均P＜0.05）,而大肠癌组织中MAL基因启动子甲基化率（90.0%）均高于其在癌旁组织（40.0%）和正常大肠组织（0.0%）中的甲基化率（均P＜0.05）。结论大肠癌组织中MAL基因或可作为大肠癌筛查及早期诊断的高潜力分子标志物。     

The significance of mRNA expression and methylation of SFRP1 promoter in invasive breast cancer

目的 探讨浸润性乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中分泌型卷曲相关蛋白1(the secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)基因的表达及其启动子CpG岛的异常甲基化状态,并分析其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR技术及甲基化聚合酶链反应(MSP)技术检测58例浸润性乳腺癌组织和相应癌旁乳腺组织中SFRP1基因的mRNA表达及其启动子CpG岛的异常甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的关系.结果 浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于癌旁乳腺组织组(P<0.05);腋窝淋巴结有转移的浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于腋窝淋巴结无转移组(P<0.05),而与其他临床病理参数无关.SFRP1在浸润性乳腺癌组的mRNA表达量与乳腺癌旁组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在23例SFRP1基因启动子CpG岛发生异常甲基化的浸润性乳腺癌组,均未检测到SFRP1的mRNA表达.结论 SFRP1基因异常甲基化可能影响其 mRNA的转录水平;SFRP1基因启动子的甲基化与浸润性乳腺癌的发生发展有关,对其进行检测有可能为浸润性乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助.     

子宫内膜癌中SFRP1基因启动子甲基化及其mRNA表达

目的研究子宫内膜癌中SFRP1基因启动子甲基化及其对SFRP1 mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性PCR技术检测36例子宫内膜癌组织和对应癌旁组织中SFRP1基因启动子甲基化状态,RT-PCR方法检测上述样本的mRNA表达水平,并对结果进行统计学分析。结果子宫内膜癌组织中SFRP1基因启动子甲基化的阳性率为47.2%,癌旁组织中为11.1%,两者比较差异有统计学意义(P=0.001)。14例存在启动子甲基化和5例无启动子甲基化的子宫内膜癌组织中缺乏SFRP1 mRNA表达或表达较癌旁组织明显下降。结论SFRP1基因启动子甲基化在子宫内膜癌中常见,部分成为其表达下降的原因。     

大肠癌FHIT和CHFR基因甲基化状态分析

目的:分析大肠癌组织中FHIT和CHFR基因启动子区甲基化水平及其临床意义。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)技术检测46例大肠癌及癌旁正常组织的FHIT和CHFR基因启动子区甲基化状态。结果:大肠癌组织的FHIT和CHFR基因甲基化率分别为54.35%、49.15%,高于癌旁组织13.04%、8.69%,组间差异均有统计学意义(P<0.05),FHIT和CHFR基因甲基化状态与分化程度、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤部位、Dukes分期无相关性(P>0.05)。结论:FHIT和CHFR基因启动子区的甲基化可能与大肠癌的发生、发展及预后相关。     

大肠癌DAPK、FHIT基因启动子区的甲基化水平研究

目的:评价DAPK、FHIT基因启动子区甲基化状态在大肠癌发生发展中的作用和临床意义。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测23例大肠癌及相应癌旁正常组织的DAPK、FHIT基因启动子区甲基化状态。结果:大肠癌组织的DAPK、FHIT基因甲基化率分别为60.86%(14/23)、52.17%(12/23),高于癌旁正常组织的13.04%(3/23)、8.69%(2/23),组间差异均有统计学意义(P<0.05),DAPK、FHIT基因甲基化状态与分化程度、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位、Dukes分期无相关性(P>0.05)。结论:DAPK基因和FHIT基因启动子区的高甲基化可能与大肠癌的发生、发展、预后有关。     

大肠癌组织中p16、Rb及p27基因启动子区甲基化状态检测

目的:探讨大肠癌组织中p16、Rb和p27基因启动子区甲基化状态的改变及意义.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应方法检测56例大肠癌及其相应癌旁正常上皮、42例腺瘤组织中p16、Rb和p27基因启动子区甲基化状态.结果:腺瘤、癌组织中p16和p27基因启动子区甲基化率均较正常组织增加(,=4.680、9.091和4.0...     

浸润性乳腺癌SFRP1基因的表达及其启动子甲基化的意义

目的探讨浸润性乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中分泌型卷曲相关蛋白1(the secreted frizzled-relat-ed protein 1,SFRP1)基因的表达及其启动子CpG岛的异常甲基化状态,并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR技术及甲基化聚合酶链反应(MSP)技术检测58例浸润性乳腺癌组织和相应癌旁乳腺组织中SFRP1基因的mRNA表达及其启动子CpG岛的异常甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于癌旁乳腺组织组(P<0.05);腋窝淋巴结有转移的浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于腋窝淋巴结无转移组(P<0.05),而与其他临床病理参数无关。SFRP1在浸润性乳腺癌组的mRNA表达量与乳腺癌旁组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在23例SFRP1基因启动子CpG岛发生异常甲基化的浸润性乳腺癌组,均未检测到SFRP1的mRNA表达。结论 SFRP1基因异常甲基化可能影响其mRNA的转录水平;SFRP1基因启动子的甲基化与浸润性乳腺癌的发生发展有关,对其进行检测有可能为浸润性乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助。     

食管癌组织中SFRPs基因异常甲基化检测及意义

目的检测食管鳞状细胞癌和癌旁正常组织SFRPs基因启动子区甲基化变化特征及其与临床病理变化的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)。结果 110例食管鳞癌组织SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子区甲基化阳性率分别为61.8%(68/110)、66.7%(73/110)、62.7%(69/110)、64.3%(71/110),明显高于癌旁正常组织的13.3%(4/30)、13.3%(4/30)、20%(6/30)、26.7%(8/30)。淋巴结转移组和中、低分化食管鳞癌组织甲基化阳性率明显高于无淋巴结转移组及高分化食管癌组织,但是与性别,年龄及肿瘤分期无明显关联。结论本研究结果显示,SFRPs基因启动子区甲基化与食管鳞癌发生发展密切相关.这些基因的甲基化检测可为食管癌的防治和预后评价提供遗传学理论依据。。     

食管癌组织Ras相关区域家族1A基因启动子区甲基化检测

目的:检测食管癌和癌旁正常组织Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化变化.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测79例食管鳞癌患者癌组织及对应的20例癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区甲基化,并观察食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化与临床病理变化的关系.结果:79例食管鳞癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率(67%,53/79)明显高于癌旁正常组织(15%,3/20).食管癌组织中不同年龄、分化程度的RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),而淋巴结转移与否、肿瘤分期间甲基化阳性率差异无统计学意义.20例同一个体癌组织甲基化阳性率明显高于癌旁正常组织(50%(10/20)vs 15%(3/20))(P＜0.05),仅3例同时出现甲基化,一致率为15%.结论:RASSF1A基因启动子区甲基化是食管鳞癌频发的分子事件.食管鳞癌组织RASSF1A基因甲基化明显高于癌旁正常组织,并且和年龄、分化程度有关.     

分泌型Wnt拮抗基因甲基化在结直肠肿瘤发生发展中的作用

目的 探讨分泌型Wnt拮抗基因启动子CpG岛甲基化在结直肠肿瘤发生中的作用。方法 5-氮杂-2’-脱氧胞苷（DAC）和曲古菌素A（TSA）对结直肠癌细胞株HCT116、SW480进行去甲基化处理。甲基特异性PCR和逆转录PCR分别检测结直肠肿瘤组织及细胞株中分泌型卷曲相关蛋白（sFRP）和Wnt抑制因子1（WIF-1）基因甲基化和mRNA表达。结果 正常大肠黏膜不存在sFRP和WIF-1基因甲基化。sFRPl2、4、5和WIF-1在结直肠腺癌甲基化率分别为93．1％（67／72）、83．3％（60／72）、36．1％（26／72）、52．8％（38／72）、84．7％（61／72）;腺瘤中分别为87．9％（29／33）、81．8％（27／33）、24．20k（8／33）、57．6％（19／33）、72．7％（24／33）;瘤旁正常组织中分别为52．6％（20／38）、28．9％（11／38）、2．6％（1／38）、18．4％（7／38）、23．7％（9／38）;与正常黏膜及瘤旁正常组织比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。变性隐窝灶（ACF）中sFRP1、2、4和5甲基化率分别为94．4（17／18）％、77．8％（14／18）、27．8％（5／18）和55．6％（10／18）。sFRP和WIF-1基因甲基化与结直肠腺癌、腺瘤的临床病理特征无关（P〉0．05）。HCT116细胞株sFRP1、2、4、5和WIF-1基因启动子CpG岛均存在高甲基化。SW480细胞株中仅sFRP1、2和WIF-1存在甲基化。甲基化的基因mRNA不表达或降低;联合使用DAC和TSA能有效恢复sFRP和WIF-1基因表达。结论 Wnt拮抗基因甲基化是结直肠肿瘤发生常见的早期事件,sFRP1、2、5和WIF-1甲基化有可能成为早期发现结直肠肿瘤的生物学标志。     

Combination analysis of hypermethylated SFRP1 and SFRP2 gene in fecal as a novel epigenetic biomarker panel for colorectal cancer screening

Objective:To investigate the feasibility of the combination of detecting hypermethylated secreted frizzled-related protein 1(SFRP1)and secreted frizzled-related protein 2(SFRP2)in feces as a panel of biomarkers for colorectal cancer(CRC)screening.Methods:Methylation-specific PCR(MSP)was performed to analyze methylation status of SFRP1 and SFRP2 in a blinded fashion in tumor tissues and in matched stool samples from 39 patients with primary CRC,34 patients with adenomas,17 patients with hyperplastic polyps and 20 endoscopically normal subjects as normal controls.Simultaneously we analyzed the correlation of hypermethylated SFRP1 and SFRP2 with the clinicopathological features of CRC.Results:Hypermethylated SFRP1 was detected in 92.3%,76.5%,47.1% of tissue samples and in 89.7%,64.7%,35.3% of matched fecal samples from CRC,adenoma and hyperplastic polyp,respectively.Hypermethylated SFRP2 was detected in 87.2%,67.6%,35.3% of tissue samples and in 82.1%,55.9%,29.4% of matched fecal samples from CRC,adenoma and hyperplastic polyp,respectively.Of these two genes,at least one hypermethylated was 94.9%,82.4%,52.9% in tissue samples and 92.3%,73.5%,47.1% in matched fecal samples from CRC,adenoma and hyperplastic polyp,respectively.In contrast,no hypermethylated SFRP1 and SFRP2 were detected in mucosa tissues of normal controls,only 2 cases of fecal samples was detected with hypermethylated SFRP1 and another 1 case was detected with hypermethylated SFRP2.Moreover,no significant associations were observed between hypermethylated SFRP1,SFRP2 and clinicopathological features of CRC.Conclusion:Hypermethylation of SFRP1 and SFRP2 in feces are novel epigenetic biomarkers of CRC and carried high potential for the remote detection of CRC as non-invasive screening method,and combined analysis of hypermethylated SFRP1 and SFRP2 in fecal could further increase the detection rate of CRC and premalignant lesions.     

DLEC1基因在结直肠癌中的甲基化水平及临床意义

目的 检测DLEC1 (deleted in lung and esophageal cancer 1) 基因在结直肠癌 (colorectal cancer, CRC) 患者组织和血清中的甲基化状态,分析其临床意义。方法 留取71例CRC患者癌组织、相应正常组织及术前血清标本,20例肠道良性病变及20例健康志愿者血清标本,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测DLEC1基因启动子区域甲基化情况。结果 71例CRC组织中,DLEC1基因启动子甲基化比例为45.1%(32/71),而正常组织为7.1%(4/56),差异有统计学意义(P<0.001);DLEC1基因启动子甲基化与患者临床病理特征及CEA、CA19-9水平之间无相关性。相应CRC血清DNA中DLEC1甲基化比例为39.4%(28/71),而对照组为2.5%(1/40),差异有统计学意义(P<0.001),且血清DNA甲基化状况与组织中具有良好的一致性。结论 DLEC1基因启动子甲基化在CRC患者中有着较高的检出率,可望成为CRC辅助诊断的新型分子标记。     

子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛甲基化状况的研究

目的 :检测子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况 ,分析其与临床病理特征之间的关系 ,探讨FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法 :采用甲基化特异的PCR方法对亚硫酸氢盐修饰过的 35例子宫内膜癌组织、癌旁组织及患者自身外周血白细胞DNA和 2 0例非癌患者子宫内膜组织DNA的FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况进行分析。结果 :癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化率为 2 5 .71 % ,癌旁组织和外周血中也存在相似的甲基化率。非癌患者的子宫内膜组织中FHIT基因的CpG岛无甲基化。癌组织与非癌患者子宫内膜组织的甲基化率之间的差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。DNA甲基化与临床病理特征之间无相关性。FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件。结论 :子宫内膜癌组织中存在FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化 ,CpG岛的甲基化与临床病理特征之间无相关性。DNA甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件。癌旁组织和外周血可用于癌相关基因启动子区域CpG岛甲基化的检测     

hMLH1甲基化在散发性大肠癌中的临床意义

目的:了解散发性大肠癌中hMLH1基因启动子区域5'端CpG岛的过度甲基化现象,探讨其与微卫星不稳定性(MSI)在散发性大肠癌发生中的相关性.方法:取散发性大肠癌患者肿瘤组织及其正常对照组织(阴性切缘组织,距肿瘤10 cm以上)标本41对,提取DNA后,以甲基化特异性PCR方法检测标本中hMLH1启动子的甲基化情况,并与相应的临床病理学资料进行统计学分析;将BAT25、BAT26作为检测位点,以自动荧光DNA序列分析法检测MSI,并与甲基化情况进行相关分析.结果:41例散发性大肠癌标本中,75.6%(31/41)存在hMLH1启动子过度甲基化,非甲基化患者年龄(49.2岁)与甲基化患者年龄(63.6岁)相比差异有显著性(P<0.05);43.9%(18/41)的标本表现为MSI阳性;在MSI阳性标本中,94.4%(17/18)有甲基化现象存在,明显高于MSI阴性标本(60.9%,14/23),两者相比差异有显著性(P<0.05).结论:散发性大肠癌中普遍存在年龄相关的hMLH1基因启动子过度甲基化现象,由此引起的MSI可能是老年人大肠癌发病的相关因素之一.     

APC基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的检测及临床意义

目的观察结肠腺瘤性息肉病（APC）基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的作用及临床意义。方法59例上皮性卵巢癌组织原发灶，32例相应的盆、腹腔转移灶，12例癌旁卵巢组织及30例正常卵巢组织，采用甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）法检测APC基因启动予区甲基化状态。结果上皮性卵巢癌组织原发灶及相应的盆、腹腔转移灶中存在APC基因启动子区异常甲基化，发生率分别为32．2％、40．6％，显著高于正常卵巢组织（P〈0．01）。12例癌旁卵巢组织中1例检测到APC基因启动子区甲基化，30例正常卵巢组织未检测到。APC基因启动子区甲基化的发生率在临床Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期（P〈0．05），在高分化癌中低于低分化癌（P〈0．05）。结论APC基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌发生密切相关，并可能与上皮性卵巢癌临床分期及分化程度有关。     

候选抑癌基因Syk启动子甲基化与胃癌转移相关

目的：探讨Syk（spleen tyrosine kinase）基因启动子甲基化在胃癌发生、转移过程中的作用及其临床意义。方法：采用RT-PCR检测61例胃癌组织、癌旁组织中SykmRNA的表达．并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Syk基因启动子甲基化情况。结果：61例癌旁组织均检测到Syk基因的表达，胃癌组织有14例检测到Syk基因的表达，Syk基因在胃癌组织中表达率显著降低（P〈0．05）。61例胃癌旁组织未发现有Syk基因启动于的甲基化。而61例癌组织中有21例检测到Syk基因启动子的甲基化。癌组织Syk基因启动于甲基化率显著高于癌旁组织（P〈0．05）。有淋巴结转移的31例胃癌组织中，有17例Syk基因启动子甲基化，有淋巴结转移的Syk基因启动于甲基化姓著高于无淋巴结转移组（P〈0．05）。结论：Syk基因启动于甲基化是导致Syk基因失活的原因之一。Syk基因启动子的甲基化可能与胃癌的发生、转移有关。     

MSP法检测胰腺癌Syk基因甲基化改变的研究

目的 :探讨胰腺癌Syk基因启动子区 5’CpG岛甲基化改变的特点与临床病理特征的关系。方法 :采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Syk基因启动子甲基化情况。结果 :32例癌旁正常胰腺组织未发现有Syk基因启动子的甲基化 ,14 /32例胰腺癌组织检测到Syk基因启动子的甲基化 ,癌组织Syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 5 )。有淋巴结转移的 15例胰腺癌组织中 ,有 10例Syk基因启动子甲基化 ,有淋巴结转移的Syk基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 )。结论 :Syk基因启动子甲基化是导致Syk基因失活的原因之一 ,Syk基因启动子的甲基化与胰腺癌的发生、转移相关。