磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂LY29400联合吲哚-3-甲醇对人甲状腺未分化癌细胞FRO增殖的抑制作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY29400(简称LY)联合吲哚-3-甲醇(I3C)对人甲状腺未分化癌细胞FRO增殖的抑制作用。方法:取对数生长期FRO细胞,分为空白对照组、I3C(250μmol/L)组、LY(10μmol/L)组和联用(I3C 250μmol/L+LY 10μmol/L)组,药物作用24、48、72 h。采用MTT法测定并计算各组细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测作用48 h后的细胞凋亡率;Western blot法检测作用48 h后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达;免疫组化法检测作用48 h后Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:细胞增殖抑制率随药物作用时间的延长而明显升高,联用组各时间点间差异具有统计学意义(P<0.05)。与I3C组和LY组比较,联用组细胞的增殖抑制率、细胞凋亡率和Caspase-3、Bax蛋白表达均增强,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:LY与I3C联用对FRO细胞的增殖具有协同抑制作用,其机制可能与下调Bcl-2表达、上调Bax表达、激活Caspase级联反应诱导细胞凋亡有关。     

甜菜红苷对人结肠癌HT29细胞凋亡的影响

目的:研究甜菜红苷对人结肠癌HT29细胞凋亡的影响。方法:体外传代培养HT29细胞。以不同质量浓度[0(空白对照)、0.5、1、1.5、2、3 mg/ml]的甜菜红苷培养细胞24 h,以1.5 mg/ml甜菜红苷培养细胞不同时间[0(空白对照)、1、3、6、12、24 h]后,采用MTT法测定细胞活力并计算抑制率;以0(空白对照)、1、1.5、2 mg/ml甜菜红苷培养细胞24 h后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,测定含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Caspase-9的活性,采用实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot法测定Bcl-2、Bax m RNA与蛋白的表达。结果:与空白对照比较,0.5、1、1.5、2、3 mg/ml甜菜红苷培养细胞24 h后,1.5 mg/ml甜菜红苷培养细胞1、3、6、12、24 h后,细胞抑制率升高(P<0.01)。与空白对照比较,1、1.5、2 mg/ml甜菜红苷培养细胞24 h后,细胞凋亡率升高,Caspase-3、Caspase-9活性增强,Bcl-2 m RNA与蛋白表达减弱、Bax m RNA与蛋白表达增强(P<0.01)。结论:甜菜红苷可诱导HT29细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3、Caspase-9活性和Bax m RNA与蛋白表达,下调Bcl-2 m RNA与蛋白表达有关。     

磁性纳米Fe3O4颗粒对藤黄酸诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的研究磁性纳米Fe3O4颗粒(MNP-Fe3O4)对藤黄酸(GA)诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用。方法将HepG2细胞分为GA 0.5μmol/L单药组(A组)、GA 0.5μmol/L和MNP-Fe3O420μg/ml两药联合组(B组)及空白对照组(C组)。采用MTT法检测HepG2细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)及半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达。结果 GA对HepG2细胞生长的抑制作用呈剂量依赖性。与C组相比,A、B组HepG2细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05),且B组各指标变化更为显著(P<0.05)。结论 MNP-Fe3O4能增强GA对肝癌HepG2细胞的凋亡诱导作用;其机制可能与Bcl-2表达下调及Caspase-3表达上调有关。     

Effects of magnetic nanoparticle Fe3O4 on apoptosis of HepG2 cells induced by gambogic acid

目的 研究磁性纳米Fe3O4颗粒( MNP-Fe3O4)对藤黄酸(GA)诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用.方法 将HepG2细胞分为GA 0.5 μmol/L单药组(A组)、GA 0.5μmol/L和MNP-Fe3O4 20μg/ml两药联合组(B组)及空白对照组(C组).采用MTT法检测HepG2细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)及半胱天冬氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)蛋白的表达.结果 GA对HepG2细胞生长的抑制作用呈剂量依赖性.与C组相比,A、B组HepG2细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(P＜0.05),且B组各指标变化更为显著(P＜0.05).结论 MNP-Fe3O4能增强GA对肝癌HepG2细胞的凋亡诱导作用;其机制可能与Bcl-2表达下调及Caspase-3表达上调有关.     

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究

目的观察葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTr比色法和流式细胞术检测葛根素对H446细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;免疫组化法检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果40、80μg/ml浓度的葛根素体外作用24、48h,对H446细胞有促增殖作用,在160—640μg／ml浓度范围内,葛根素能够抑制H446细胞的生长,并呈现良好的剂量依赖和时间依赖关系。435μg/ml的葛根素可以诱导H446细胞凋亡。检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响显示葛根素能够下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达。结论在一定浓度范围内,葛根素可能通过下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达而诱导H446细胞凋亡。     

注射用胸腺法新对人肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:研究注射用胸腺法新对人肺癌A549细胞凋亡的影响。方法:以0(空白对照)、25、50、100、200、400 mg/L注射用胸腺法新作用于肺癌A549细胞24、48、72 h后,用MTT法检测并计算细胞增殖抑制率。以0(空白对照)、50、100 mg/L注射用胸腺法新作用于肺癌A549细胞48 h后,用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,用Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:与空白对照比较,注射用胸腺法新作用后A549细胞的增殖抑制率增加,与浓度和作用时间呈正相关(P<0.05);50、100 mg/L的注射用胸腺法新作用48 h后A549细胞的凋亡率增加(P<0.05);100 mg/L的注射用胸腺法新作用48 h后A549细胞中Caspase-3表达增强、Bcl-2/Bax和Akt磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:注射用胸腺法新可通过激活Caspase-3、下调Bcl-2/Bax比例、抑制Akt信号通路来抑制A549细胞增殖,并促进其凋亡。     

柴油废气颗粒物诱导小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨柴油废气颗粒物(diesel exhaust particles,DEP)对小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响,为探讨DEP对血脑屏障的损伤作用机制提供线索。方法小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)分别用不同浓度的DEP(0、12.5、25、50和100μg/ml)处理24和48 h;用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Bcl-2、Bax和Caspase-3基因表达水平,Western blot法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果分别用不同浓度DEP处理bEnd.3细胞培养24和48 h后,其中0、12.5、25、50和100μg/ml剂量组的细胞活力、细胞凋亡数量各剂量组与对照组相比,细胞活力呈下降趋势,且细胞早期凋亡数量呈上升趋势,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,12.5、25、50和100μg/ml DEP剂量组处理24和48 h后,Bcl-2 mRNA呈下降趋势,Bax、Caspase-3 mRNA呈上升趋势,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,24和48 h 12.5、25、50和100μg/ml DEP剂量组处理24和48 h后,Bcl-2蛋白呈下降趋势,Bax、Caspase-3蛋白呈上升趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论 DEP可能通过诱导小鼠脑微血管内皮凋亡,从而对血脑屏障产生损伤作用。     

双氢青蒿素对人骨肉瘤细胞株143B增殖和凋亡的作用

目的观察双氢青蒿素(dihydroarteminin,DHA)对人骨肉瘤细胞143B的增殖和凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞株143B;MTT比色法和克隆形成实验检测不同浓度DHA对骨肉瘤细胞存活与克隆形成能力的影响。Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态变化。构建β-Catenin荧光素酶报告基因(β-Catenin-Luc,p-Top)检测DHA作用143B后细胞内β-Catenin活性变化。不同浓度的DHA作用后,Western blot检测与细胞增殖(如PC-NA、Cyclin D1、c-Myc)、凋亡(如Bad、Bcl-2、Caspase-3)密切相关的标志物蛋白质表达变化。结果 DHA作用于143B细胞24 h后,MTT结果显示143B细胞的增殖活性受到明显抑制,且其克隆形成能力减弱(P<0.05),在DHA浓度达35μmol.L-1时,抑制效率最明显。Western blot结果显示PC-NA表达下调;而促凋亡蛋白Bad和Caspase-3表达上调,Bcl-2蛋白表达明显减弱。结论双氢青蒿素具有较明显的抑制人骨肉瘤细胞的增殖且促进其凋亡的作用,可能通过下调细胞增殖相关蛋白PCNA、Bcl-2和上调促凋亡蛋白Bad和Caspase-3,启动凋亡程序,致143B细胞发生凋亡。     

紫草素衍生物Z7对Burkitts淋巴瘤CA-46细胞的作用

目的 本研究探讨紫草素衍生物Z7对Burkitts淋巴瘤细胞株CA-46增殖及凋亡的作用.方法 运用MTT比色法检测紫草素衍生物Z7对细胞增殖的抑制作用,DNA片段化、Caspase-3酶活性检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase家族蛋白表达变化.结果 紫草素衍生物Z7能明显抑制CA-46细胞株的增殖,作用48 h后的IC50为(0.835±0.086 3)μmol/L;高浓度组可见到典型的DNA凋亡梯带;药物组的Caspase-3活性显著升高;Western blot可见Caspase-9、Caspase-3蛋白表达下调,PARP蛋白上调.结论 紫草素衍生物Z7对CA-46具有抑制增殖及诱导凋亡的作用,其作用机制可能与激活线粒体通路有关.     

苦参碱诱导卵巢癌SKOV_3细胞凋亡的机制研究

目的探讨苦参碱(matrine,Mat)诱导SKOV3细胞凋亡及可能的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度Mat(0.4、0.8、1.2、1.6、2.0g·L-1)处理24、48、72h对SKOV3细胞增殖作用;流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测Survivin mRNA表达,Western blot检测Sur-vivin和Caspase-3蛋白的表达。结果一定浓度范围的Mat对SKOV3细胞的增殖均有抑制作用,且呈量效和时效关系,24、48、72h的IC50分别为3.38、1.57、1.13g·L-1;0.8、1.6g·L-1Mat作用48h后SKOV3细胞凋亡率分别为(11.44±0.56)%、(17.68±0.98)%,与空白对照组(4.85±0.31)%比较差异具有显著性(P<0.05)。RT-PCR及Western blot分析表明药物处理后SKOV3细胞的Survivin mRNA和蛋白表达均明显下调,而Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05)。结论 Mat能抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与下调Survivin表达和提高Caspase-3活性有关。