苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感性检测

【目的】明确苹果轮纹病菌对二甲酰亚胺类杀菌剂腐霉利的敏感性现状,建立敏感基线。【方法】采用菌丝生长速率法,测定了采自山东、辽宁、河北、河南、山西和陕西等地的106株苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感性,比较了不同省份苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感性差异。【结果】腐霉利对供试的106个苹果轮纹病菌菌株的EC50值差别不大,在0.327 0~3.322 8 mg·L-1,平均EC50为(1.289 1±0.060 0)mg·L-1,呈连续性偏正态分布,可以作为田间苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感基线。其中,陕西省的苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感程度最高,其他依次为山西省、河北省、辽宁省和河南省,山东省的敏感性最低,山东省的EC50平均值是陕西省2.63倍。【结论】田间苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感性水平较高,未发现敏感性下降的抗药性群体,所测得的EC50平均值可作为苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感基线。     

拮抗放线菌MY-4的分离、鉴定及其对果蔬病原菌的抑制作用

【目的】为了鉴定从沙糖橘果实表面分离得到的拮抗放线菌株MY-4,并确定该菌株对果蔬病原菌的拮抗作用,【方法】采用分析MY-4形态学、生理生化特性及16S rDNA序列相似性方法以确定其分类地位,并采用平板对峙培养法和生长速率法测定了其抑菌活性。【结果】结果显示,菌株MY-4为小白链霉菌(Streptomyces albulus Routien),菌株MY-4及其无菌发酵液对供试16种果蔬病原真菌均具有拮抗作用,其中菌株MY-4对香蕉炭疽病菌的拮抗作用最强,平板抑菌带宽度达17.08 mm,无菌发酵液对柑橘绿霉病菌的拮抗作用最强,菌丝生长抑制率高达98.82%,【结论】小白链霉菌菌株MY-4具有活性高、抑菌谱广的特点,有望继续研究开发成新的生防剂。     

嗜线虫致病杆菌HB310对五种苹果病原菌抑菌活性的影响

以苹果轮纹病菌、苹果腐烂病菌、苹果黑斑病菌、苹果斑点落叶病菌和苹果灰霉病菌为供试菌种,采用生长速率法和孢子萌发法测定嗜线虫致病杆菌HB310的发酵液和上清液对病原菌菌丝生长发育的抑制作用及对孢子萌发的影响。结果表明:嗜线虫致病杆菌HB310发酵液和上清液对苹果轮纹菌菌丝生长的抑制效果最好,抑制率分别为76.90%和80.79%。嗜线虫致病杆菌HB310发酵液致使苹果腐烂病原菌菌丝形态异常;浓度为50和25mL/L的嗜线虫致病杆菌HB310对供试苹果病原真菌的孢子萌发均有很好的抑制作用,抑制率均在98%以上。嗜线虫致病杆菌HB310对苹果病原真菌的菌丝和孢子均具有较好的抑制作用。     

不同培养条件对苹果轮纹烂果病病菌的影响

近年来 ,苹果轮纹烂果病发生严重 ,给苹果生产造成了很大的损失 ,严重影响了苹果的质量和产量。造成苹果轮纹烂果病的病原菌有2种类型 ,一类是贝伦格葡萄座腔菌(Botryosphaeria berengerianade Not.) ,即苹果干腐病菌 ,另一类是贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型 (Botryosphaeria berengeriana deNof.f.sp piricola) ,即苹果轮纹病菌。在生物学特性方面 ,对这 2种病原菌已有过较多报道。作者于 1 998～ 1 999年做了不同培养条件对苹果轮纹病病原菌菌丝生长影响的试验 ,现将试验方法和结果报道如下。1　材料和方法　　供试菌种为苹果轮纹病菌和苹…     

贮藏期苹果轮纹病拮抗菌的筛选研究

以苹果、姜、蒜为试材,采用对峙培养法研究了健康苹果果实、姜、蒜内的可培养内生细菌和健康苹果植株根际土壤微生物对苹果轮纹病的拮抗作用。结果表明:根际土壤中分离到可培养细菌9种,姜、蒜、苹果内分别分离到可培养菌株5种、3种和1种;对分离到的微生物进行拮抗性测定,除土2对苹果轮纹病菌菌丝生长无抑制效果外,其余菌株都对苹果轮纹病菌有抑菌效果,且从根际土壤中分离到的微生物对苹果轮纹病菌具有拮抗性的所占比例较大,为44.4%;其次为姜和蒜,所占比例分别为27.8%和16.7%。所有菌株中除蒜12,土1和土5与对照比较抑菌效果差异不显著外,其余菌株抑菌效果差异都显著。所有菌株中抑制效果最好的为姜4,其真菌菌落直径只有(30.78±0.49)mm,其次为土4,真菌菌落直径为(35.12±0.13)mm。     

萝芙木内生真菌的分离及发酵产物抑菌活性的研究

从萝芙木的果实中分离得到5株内生真菌:LG-A、LG-B、LG-C、LG-D与LG-E,以5株内生真菌为试验材料,采用微量滤纸片法,研究了5株内生真菌发酵乙醇粗提物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌与苹果果实链格孢菌的抑菌活性,以期筛选出具有农用抗植物病原真菌的活性菌株。并采用菌丝生长速率法,进一步测定了菌株LG-B与LG-D乙醇粗提物的不同溶剂萃取物的抑菌活性。结果表明:菌株LG-B与LG-D对3种苹果病原真菌均有明显的抑制作用。LG-B与LG-D发酵产物的乙酸乙酯萃取物抑菌活性较好,菌株LG-B对苹果腐烂病菌的EC50仅为16.2mg·L~(-1),LG-D对苹果腐烂病菌与苹果轮纹病菌的EC50分别为21.0mg·L~(-1)和52.8mg·L~(-1)。     

苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵、克菌丹和代森联的敏感性

【目的】检测我国主要苹果产区田间苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵、克菌丹和代森联3种杀菌剂的敏感性现状。【方法】采用菌丝生长速率法,检测了我国6个省份的106株苹果轮纹病菌对3种杀菌剂的敏感性,采用Spearman’s秩相关系数法对3种杀菌剂的敏感性分别进行两两相关分析,比较了不同省份苹果轮纹病菌对同一种杀菌剂的敏感性差异。【结果】甲基硫菌灵对苹果轮纹病菌的EC50值介于0.814 5~10.700 8 mg·L~(-1),平均为(3.357 9±0.160 7)mg·L~(-1),敏感性频率分布呈连续性偏正态分布,田间苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵仍然较为敏感。克菌丹的EC50值介于1.672 2~38.487 3 mg·L~(-1),呈不连续单峰曲线,有敏感性下降的菌株XY7(采自河南信阳,EC50为38.487 3 mg·L~(-1))出现。剔除该菌株后,剩余105个菌株对克菌丹的敏感性频率分布呈连续偏正态分布,EC50平均值为(10.268 1±0.460 0)mg·L~(-1),可建立田间苹果轮纹病菌对克菌丹的敏感基线。代森联的EC50值介于1.276 3~32.132 4 mg·L~(-1),平均为(15.511 9±0.710 7)mg·L~(-1),敏感性频率分布呈连续性偏正态分布,可建立田间苹果轮纹病菌对代森联的敏感基线。相关性分析结果表明,甲基硫菌灵和代森联、克菌丹和代森联之间的敏感性不存在相关性,但甲基硫菌灵和克菌丹的敏感性呈显著正相关。不同省份苹果轮纹病菌对同一种杀菌剂的EC50平均值不存在明显差异(P0.05)。【结论】田间苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵、克菌丹和代森联的敏感性水平相对较高,并建立了田间苹果轮纹病菌对克菌丹和代森联的敏感基线。     

杏树根际芽孢杆菌BJ-6抗菌蛋白的分离纯化及抑菌机理

芽孢杆菌(Bacillus sp.)BJ-6菌株分离自杏树根际土壤中。研究表明,该菌株对供试的8种植物病原真菌有明显的抑菌作用,采用硫酸铵分级沉淀可获得菌体培养液中的抗菌蛋白粗提物,经过sephadex G-150柱层析系统抗菌蛋白粗提物纯化和SDS-PAGE检测,明确了该菌株分泌的抗菌物质为分子量10 ku左右的抗菌蛋白。该蛋白对温度有较高的稳定性,121℃高压灭菌20 min仍有较强的抑菌活性。抗菌蛋白可以导致白菜黑斑病菌菌丝细胞透性增加,细胞内含物外渗,菌丝畸形并出现溶菌现象,而且促使苹果树腐烂病菌菌丝出现泡状膨大。     

山东省苹果轮纹病菌对多菌灵抗药性及其地理分布

采用菌丝生长速率法测定了苹果轮纹病菌对多菌灵的敏感性。结果表明:多数苹果轮纹病菌菌株对多菌灵表现敏感,建立了以敏感性苹果轮纹病菌菌株的EC50平均值(0.2582±0.1208)mg/L为准的敏感性基线;11.11%的菌株已产生2~4倍的低水平抗药性,抗药性菌株主要分布于山东西部区域。     

来源于产黄青霉病毒科成员的分离物对梨轮纹病菌生长及其致病力的影响

【目的】明确产黄青霉病毒科成员(Botryosphaeria dothidea Chrysovirus 1,BdCV1)对寄主梨轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)菌株生物学性状的影响,证实单独感染BdCV1梨轮纹病菌分离株是弱毒菌株;以期确定BdCV1是否为引起梨轮纹病菌弱致病力的单一因子。【方法】从前期弱致病力复合感染双分体病毒科成员Bd PV1和BdCV1的梨轮纹病菌LW-1中经多代菌丝分离获得的疑似仅单独感染BdCV1分离株(命名为LW-C)为材料;采用dsRNA检测、RTPCR,鉴定LW-C菌株中仅携带BdCV1。采用菌丝块接种于PDA培养基以及3针针刺法接种梨果实,观察其菌落形态以及发病情况,测定菌落生长速度和致病性,明确LW-C生物学特性。将LW-C对无毒菌株Mock进行水平转染,检测其传染后衍生菌株的dsRNA并测定其生物学特性。【结果】证实了LW-C仅感染BdCV1,具有弱毒特性;水平转染结果明确了BdCV1因子对梨轮纹病菌的菌落形态、生长速度有抑制作用,对寄主有弱致病力。【结论】确认了BdCV1是引起梨轮纹病菌致病力衰退的主要因子,为真菌病毒防治果树轮纹病害提供了新颖的生防材料。     

苹果叶片应答轮纹病菌胁迫的叶绿体蛋白质组学分析

【目的】开展苹果叶片应答轮纹病菌胁迫的叶绿体蛋白质组学研究,筛选苹果叶片应答轮纹病胁迫后差异表达的叶绿体蛋白。【方法】以未受轮纹病菌胁迫和受轮纹病胁迫的苹果叶片为试材,分别提取叶片叶绿体及其蛋白,利用双向电泳技术(2-DE)结合质谱技术(MALDI-TOF-TOF/MS)检测并分析差异表达蛋白点。【结果】叶绿体蛋白样品经双向电泳分离后,获得了背景清晰的双向电泳凝胶图谱。经质谱检测及数据库检索,成功鉴定得到21个差异表达蛋白点,按照功能划分为6类,分别为光合作用相关、能量代谢相关、蛋白代谢相关、氨基酸合成相关、抗氧化相关及未知功能蛋白。【结论】苹果叶片受轮纹病菌侵染后,叶绿体光合作用、能量代谢等多个代谢过程中的相关蛋白差异表达,应答轮纹病菌的胁迫。     

苹果轮纹病和炭疽病病原菌生物学研究

通过 1994～ 1999年研究 ,明确了生长最适温度苹果轮纹病菌为 2 5～ 2 8℃ ,苹果炭疽病菌为 2 8～ 30℃ ,最适 p H值苹果轮纹病菌为 p H7～ 8,苹果炭疽病菌为 p H4～ 7。 2种病原菌菌丝生长和子实体形成均以蔗糖为最佳碳源 ,天门冬素和硝酸钠为最佳氮源 ,硫酸铵明显抑制菌丝生长和子实体的形成。燕麦粉对菌丝生长不利 ,但能促进轮纹和炭疽病菌子实体的形成。轮纹病菌只有在光照条件下才能形成子实体。短光波 36 0～ 4 0 0 nm黑光灯连续照射有利于 2种病菌子实体的大量产生。苹果叶片、果实组织液能激发孢子的萌发     

苹果轮纹病菌对戊唑醇有抗药性

<正>采用菌丝生长速率法,测定了51株采自山东、河北、陕西等地苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性,并通过紫外线诱变野生敏感菌株获得抗药性突变体,然后进一步利用菌丝生长速率法测定抗性菌株对其他一些交菌剂的交互抗性,并比较其与敏感菌株之间的部分生物学特性。结果表明,51株苹果轮纹病菌菌株EC50值分布于0.011~     

5种植物提取物抑制苹果树3种病原菌活性的研究北大核心

以苹果树腐烂病病菌(Valsa mali Miyabe et Yamada)、苹果轮纹病病菌(Botryospuaeria berengeriana)、苹果斑点落叶病病菌(Alternaria alternata)为研究对象,采用生长速率法对侧柏、五倍子、藿香、百部和旋覆花5种植物提取物的抑菌活性进行了测定,并测定了5种植物提取物对3种病原菌中3种细胞壁降解酶活力的影响。结果表明,5种植物提取物对3种病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,其中侧柏对3种病原菌的抑制活性最高,抑菌率分别为74.34%、62.13%、65.36%,其次为五倍子和藿香;5种植物提取物对3种病原菌纤维素酶(Cx)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)都有一定的抑制作用。结合5种植物提取物对3种病原菌菌丝生长及病原菌细胞壁降解酶的抑制作用,侧柏可作为防治这3种病害进一步开发的植物源药剂。     

5种植物提取物抑制苹果树3种病原菌活性的研究

以苹果树腐烂病病菌(Valsa mali Miyabe et Yamada)、苹果轮纹病病菌(Botryospuaeria berengeriana)、苹果斑点落叶病病菌(Alternaria alternata)为研究对象,采用生长速率法对侧柏、五倍子、藿香、百部和旋覆花5种植物提取物的抑菌活性进行了测定,并测定了5种植物提取物对3种病原菌中3种细胞壁降解酶活力的影响。结果表明,5种植物提取物对3种病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,其中侧柏对3种病原菌的抑制活性最高,抑菌率分别为74.34%、62.13%、65.36%,其次为五倍子和藿香;5种植物提取物对3种病原菌纤维素酶(Cx)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)都有一定的抑制作用。结合5种植物提取物对3种病原菌菌丝生长及病原菌细胞壁降解酶的抑制作用,侧柏可作为防治这3种病害进一步开发的植物源药剂。     

山东寿光茄子褐纹病病原鉴定及药效试验

以携带褐纹病菌的茄子叶片为试材,采用室内分离鉴定、致病性测定、室内抑菌试验等方法进行病原分离,并研究了病原菌的致病性及抗药性,为田间茄子褐纹病的诊断与防治提供参考依据。结果表明:共分离到9个菌株,菌株类型有产生α型分生孢子、β型分生孢子、混合型分生孢子及只产生菌丝不产生载孢体类型;致病性测定发现菌株PvTF-11、PvVSJ-22、PvVL-211对茄子叶片致病性较强;茄子褐纹病菌的室内抑菌试验发现PvVL-621、PvVL-211属于药剂敏感型菌株,PvVSJ-101、PvVSJ-102属于抗药型菌株。说明在人工培养条件下茄子褐纹病菌也可以产生β型分生孢子及混合型分生孢子类型;且茄子褐纹病菌已产生抗药性菌株。     

果树真菌病害拮抗细菌的筛选、鉴定及拮抗机制初探

【目的】分离获得对果树真菌病害[苹果轮纹病(Botryospuaeria dothidea)、苹果斑点落叶病(Alternaria alternaria)、葡萄炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)、葡萄白腐病(Coniella diplodiella)和葡萄霜霉病(Plasmopara viticola)]具有明显拮抗作用的菌株,初步研究其作用机制,为果树真菌病害的生物防治提供潜在的材料菌株。【方法】从不同植物上分离内生菌,采用平板对峙法、菌落生长速率法及叶盘法等试验筛选拮抗菌;根据菌株的形态、生理生化特征、16S rDNA序列分析、gyrA基因序列分析等对其进行鉴定;通过测定拮抗菌发酵液对温度、pH值的敏感度分析拮抗物质的稳定性;通过测定拮抗菌发酵液对菌丝的影响,初步分析其拮抗机制。【结果】从不同植物根、茎、叶中共分离得到58株细菌,其中编号为YTB1407的细菌菌株对上述5种植物病原真菌有较好的拮抗作用,经鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌,且该菌株发酵液的拮抗活性在温度为20~100℃、pH为2.0~10.0,比较稳定。经该菌株发酵液处理后的病原菌菌丝畸形。【结论】该拮抗菌株为Bacillus amyloliquefaciens;温度和pH值对该菌株拮抗物质活性影响不大;该拮抗菌株可以通过影响病原菌菌丝正常生长发挥其拮抗作用。     

梨火疫病拮抗细菌FX1及其抑菌物质的防病作用

以前期从植物酵素液中初筛出的梨火疫病菌（Erwinia amylovora）拮抗细菌为供试菌株，采用打孔抑菌圈法、共培养法复筛出对梨火疫病菌具有强抑菌活性的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）FX1菌株。FX1菌株的除菌发酵滤液对梨火疫病菌的抑菌圈直径为26.11mm，与梨火疫病菌共培养的抑菌率为99.99%。比较不同方法提取的FX1菌株发酵滤液粗提物的抑菌活性，结果显示：酸沉淀法和硫酸铵饱和沉淀法得到的粗提物具有显著的抑菌作用，酸沉淀法提取物抑菌活性更强。利用特异性引物在FX1菌株中扩增检测到脂肽类（bmyB、fenD、ituC、srfAA、srfAB、bioA、yngG和yndJ）和抑菌蛋白类（TasA）抑菌物质合成相关基因，表明该菌株可能具有合成脂肽类和抑菌蛋白类物质的能力。利用库尔勒香梨（Korla Fragrant Pear）离体花序和杜梨（Pyrus betulaefolia）盆栽苗测定FX1菌株抑菌物质的防病效果显示，喷施FX1菌株脂肽类物质粗提液、除菌发酵滤液和菌体发酵液对香梨花序3～5 d的保护性防效分别为79.07%、56.85%和50.02%；...     

苹果轮纹病菌拮抗细菌J4的作用机理研究

采用对峙培养法研究了内生细菌J4对苹果轮纹病菌菌丝生长的抑制作用。用Excel软件对数据进行处理作图以及Spss16.0软件进行方差分析,结果表明:不同浓度的J4发酵上清液,对苹果轮纹病菌菌丝生长的抑制效果不同。浓度为1 L/mL、5 L/mL发酵上清液对菌丝生长有促进作用,而浓度25 L/mL、50 L/mL、100 L/mL的发酵上清液对菌丝生长有抑制作用,且浓度为100 L/mL的抑菌效果显著。通过菌丝生长速率法分析得出,J4内生细菌对苹果轮纹病菌菌丝的回归方程为y=4.0169x-2.7794,相关系数r=0.879428,理论抑制菌丝生长速率的EC_(50)=86.434 L/mL。     

地衣芽孢杆菌对苹果轮纹病菌和炭疽病菌的抑制及其对贮藏期苹果轮纹病的防治作用

为了明确地衣芽孢杆菌W10及其抗菌蛋白对苹果贮藏期重要病害的防治作用,进行了对苹果轮纹病菌、炭疽病菌的抑制以及对轮纹病的防治试验。结果表明,W10菌液、培养滤液、抗菌蛋白对2种病菌的形态、菌丝生长、产孢和分生孢子萌发都有明显的破坏或抑制作用,其中抗菌蛋白的作用最强,5倍稀释液可以完全抑制病菌菌丝生长,20倍液对病菌产孢或分生孢子萌发的抑制率均达100%。菌液、培养滤液与抗菌蛋白对病菌菌丝形态的破坏作用相似,都可以使菌丝细胞原生质收缩、肿大呈泡囊状、细胞壁破损导致原生质外泄,甚至菌丝断裂。W10细菌液或抗菌蛋白能够明显抑制果实病斑的扩展,用其浸果后接种病菌,贮藏90 d时,抗菌蛋白对轮纹病的防效仍达到50.0%,与多菌灵效果相当。