海参肠道组织蛋白酶B粗酶提取条件的优化

为了获得具有较高活力的海参肠组织蛋白酶B,研究了其粗酶的提取条件。以Z-Arg-Arg-MCA为特异性底物,采用荧光光度法测定了酶活力。对提取海参肠组织蛋白酶B的浸提缓冲液、浸提时间和硫酸铵饱和度进行优化。结果表明,采用含5 mmol/L L-半胱氨酸、1 mmol/L EDTA、0.2%TritonX-100的50 mmol/L pH5.0的NaAc-HAc缓冲液浸提7 h后,选择80%饱和度的硫酸铵进行沉淀,能够有效地从海参肠道中提取组织蛋白酶B;同时研究了巯基保护剂对酶活力的影响。结果表明,巯基保护剂可提高酶的活力,这符合组织蛋白酶B结构中含有巯基的特性。在提取粗酶的过程中,添加巯基保护剂可有效地保证酶活力。     

海参肠道组织蛋白酶B粗酶提取条件的优化

为了获得具有较高活力的海参肠组织蛋白酶B,研究了其粗酶的提取条件。以Z-Arg-Arg-MCA为特异性底物,采用荧光光度法测定了酶活力。对提取海参肠组织蛋白酶B的浸提缓冲液、浸提时间和硫酸铵饱和度进行优化。结果表明,采用含5 mmol/L L-半胱氨酸、1 mmol/L EDTA、0.2%TritonX-100的50 mmol/L pH5.0的NaAc-HAc缓冲液浸提7 h后,选择80%饱和度的硫酸铵进行沉淀,能够有效地从海参肠道中提取组织蛋白酶B;同时研究了巯基保护剂对酶活力的影响。结果表明,巯基保护剂可提高酶的活力,这符合组织蛋白酶B结构中含有巯基的特性。在提取粗酶的过程中,添加巯基保护剂可有效地保证酶活力。     

中性酶从米糠中制取抗氧化性活性肽的研究

以中性蛋白酶(Neutrase)为工具酶,在水相体系里水解米糠蛋白,制备具有抗氧化能力的活性肽溶液,以其对OH.自由基、O2-.自由基的清除率为指标,探讨了温度、时间、加酶量(基于米糠质量)、pH值、底物浓度对活性肽溶液制备的影响,得出较优条件为:温度45℃、时间4.5 h、加酶量0.8%、pH6.5~7.0,底物浓度1∶15.抗氧化实验表明,在此条件下制得的米糠活性肽溶液对超氧阴离子自由基和羟自由基具有良好的清除能力.     

海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定

通过RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到编码组织蛋白酶L(SjCL)基因,其中全长cDNA 1 287 bp,5′非编码区(UTR)202 bp,3′UTR 87 bp,开放阅读框(ORF)999 bp,编码332个氨基酸(aa),包括组织蛋白酶L成熟肽316 aa和信号肽16 aa,分子质量预测为35.3 ku。用SjCL序列与相似物种海胆、海葵等进行对比,可知SjCL具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守区域ERFNIN和GNFD,以及由Cys 139,His 278和Asn 299残基组成的保守活性位点。将编码SjCL基因克隆进原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-SjCL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞,再进行诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了纯化且具有活性的重组SjCL。酶活力检测结果表明,重组SjCL对组织蛋白酶L特异性底物Z-Phe-Arg-Nmec具有较高活性,而对组织蛋白酶B特异性底物Z-Arg-Arg-Nmec无活性。本实验对SjCL的cDNA序列进行了生物信息学分析并通过基因工程的手段表达出具有活性的重组SjCL,为进一步研究组织蛋白酶L在海刺参自溶过程中的作用提供理论基础。     

碱性蛋白酶水解豌豆蛋白的条件优化

采用碱性蛋白酶对豌豆蛋白进行水解,通过单因素试验,分析了温度、pH、酶与底物浓度比、底物浓度、水解时间对水解度影响,并在单因素试验的基础上,利用响应面分析法,优化确定的豌豆蛋白酶水解最佳条件为:温度54.5℃,pH7.9,酶与底物浓度比1.5%,底物浓度2.9%,水解时间3.0 h,最佳酶水解条件下的水解度为13.42%.     

海参蛋白酶解工艺条件的优化

为获得多肽含量高的海参蛋白水解液 ,研究了 3种蛋白酶对海参蛋白的水解能力 ,确定以A .S1 3 98中性蛋白酶为最佳用酶。又通过正交实验得出A .S1 3 98中性蛋白酶的最佳酶解工艺条件 :温度 50℃ ;pH7.0 ;底物浓度 8% ;加酶量 1 .5% ;水解时间 1 .5h     

酶法制备鲍鱼脏器呈味肽及呈味氨基酸

研究了酶法制备鲍鱼脏器呈味肽及呈味氨基酸的最佳条件.鲍鱼脏器分别经中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶水解,中性蛋白酶酶解产物的水解度和肽得率最大,鲜味氨基酸含量最高且口味最好.以中性蛋白酶为工具酶,通过单因素试验和响应面分析确定了酶解的最佳条件:酶加量3 000 U/g,温度46℃,pH 7.8,时间3 h,底物质量分数...     

Alcalase酶解芝麻蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

以芝麻蛋白为原料,采用酶解法制备血管紧张素转化酶(Angiotensin I-Converting Enzyme,ACE)抑制肽。通过比较Alcalase酶、碱性蛋白酶2709、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶和中性蛋白酶的酶解结果,筛选出Alcalase酶作为制备ACE抑制肽的工具酶。通过单因素试验,分析了时间、p H、加酶量、温度及底物浓度对短肽生成率和水解度的影响。基于单因素试验结果,固定加酶量为3 000 u/g和底物浓度为3%,以短肽生成率和ACE抑制率为考察指标,通过响应面优化试验确定Alcalase的最佳水解条件为:时间147 min,p H 8.24,温度55℃。在此条件下短肽生成率和ACE抑制率分别为75.27%和70.80%,IC50值为1.004 mg/m L。     

海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定

通过RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到编码组织蛋白酶L(SjCL)基因,其中全长cDNA 1 287 bp,5′非编码区(UTR)202 bp,3′UTR 87 bp,开放阅读框(ORF)999 bp,编码332个氨基酸(aa),包括组织蛋白酶L成熟肽316 aa和信号肽16 aa,分子质量预测为35.3 ku。用SjCL序列与相似物种海胆、海葵等进行对比,可知SjCL具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守区域ERFNIN和GNFD,以及由Cys 139,His 278和Asn 299残基组成的保守活性位点。将编码SjCL基因克隆进原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-SjCL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞,再进行诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了纯化且具有活性的重组SjCL。酶活力检测结果表明,重组SjCL对组织蛋白酶L特异性底物Z-Phe-Arg-Nmec具有较高活性,而对组织蛋白酶B特异性底物Z-Arg-Arg-Nmec无活性。本实验对SjCL的cDNA序列进行了生物信息学分析并通过基因工程...     

酶解大豆粉蛋白条件优化研究

从底物浓度、pH值、酶解温度、加酶量、酶解促进剂和酶解时间等方面研究了碱性蛋白酶Alcalase和木瓜蛋白酶复合对全脂大豆粉酶解的影响,并运用单因素和正交试验设计优化酶解条件.结果表明,底物体积分数4.5%、pH值8.5、温度60℃、复合酶加酶量（碱性蛋白酶Alcalase与木瓜蛋白酶活力之比为2∶1）2 640 U/g,添加5 mmol/L Mn2＋酶解180 min效果较好,水解度达到17.8%.