槲皮素对人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的作用

目的:探讨槲皮素对体外培养的人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2生长的影响及作用机制,研究槲皮素治疗喉癌的可行性.方法:采用MTT法、倒置相差显微镜及流式细胞仪观察槲皮素对人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的作用情况.结果:槲皮素呈时间和浓度依赖性抑制Hep-2细胞的增殖,使Hep-2细胞贴壁能力减弱,形态变小变圆,悬浮细胞和颗粒增加,引起Hep-2凋亡,细胞周期阻滞于S期.结论:槲皮索能够抑制喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的生长和增殖,其抑制作用与细胞凋亡有关.     

人乳头瘤病毒16 E6和E7基因对人喉鳞癌细胞系增殖和分化的影响

目的研究人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）16E6和E7基因对Lscc-02人喉鳞癌细胞系增殖和分化的影响，以探讨HPV16与喉鳞癌演进的关系。方法采用阳离子脂质体基因转染技术将携带有HPV16和E7DNA的真核表达质粒导入HPV阴性的Lscc-02喉鳞癌细胞系，以载体质粒转染的细胞以及未转染细胞为对照，观察并比较体外及裸鼠体内细胞的增殖状态和分化程度。结果转染HPV16和E7的喉鳞癌细胞体外增殖加快，增殖A比值为2．96，高于载体质粒转染的细胞1．90以及未转染细胞1．85，软琼脂克隆形成率较载体质粒转染的细胞以及未转染细胞增大，分别为23．6％、12．7％、12．0％，血清依赖降低；增殖核抗原Ki-67表达的阳性百分数为93．8％，明显高于载体质粒转染细胞的80．7％以及未转染细胞的79．2％；角蛋白13表达的阳性百分数为80．9％，明显低于载体质粒转染细胞的91．0％以及未转染细胞的93．7％；裸鼠体内转染HPV16和E7的喉鳞癌细胞移植瘤潜伏期及体内倍增时间较载体质粒转染的细胞以及未转染细胞缩短，潜伏期分别为19d、28d、30d，体内倍增时间分别为2．15d、3．28d,3．47d，瘤组织细胞变小，异形性增大，细胞核分裂象多，有向低分化鳞癌发展趋势。结论HPV16和E7促进Lscc-02喉鳞癌细胞系增殖，抑制其分化，使肿瘤细胞的恶性增强，提示HPV16在喉鳞癌的演进过程中可能起重要作用。     

金丝桃素联合放射线照射对喉癌细胞Hep-2的影响

目的：探讨金丝桃素（HY）联合放射线照射对喉癌细胞Hep-2的影响。方法：体外培养的喉癌细胞Hep-2分别给予0、1、2、3Mg／ml终浓度的HY,加药1h后,给予5Gy的放射线照射（HY加放射组）;另取喉癌细胞Hep-2分别给予5、10、20、25μg／ml终浓度的HY,不给予放射线照射（单纯HY组）;各实验组均设空白对照。继续培养48h后,应用显微镜、MTT法和流式细胞仪（FCM）分析HY加放射组和单纯HY组对喉癌细胞Hep-2的影响。结果：光镜下可见喉癌细胞生长密集,细胞呈梭型或多角型,细胞彼此之间相接触,放射后的喉癌细胞主要改变为部分细胞肿胀,HY和喉癌细胞共同经放射线作用后,在HY低剂量时即可见细胞数量明显减少,肿胀细胞比例明显增多,高剂量时可见细胞坏死。MTT结果显示放射后HY可显著抑制喉癌细胞的生长;FCM分析表明放射后HY可将喉癌细胞阻滞在G0／C1期,并诱导喉癌细胞凋亡。HY单独应用,对喉癌细胞的抑制作用相对较弱。结论：HY联合放射线照射可有效地抑制喉癌细胞的增殖,并可诱导喉癌细胞凋亡。     

西妥昔单抗联合放化疗对喉鳞状细胞癌的协同杀伤效应

目的：观察西妥昔单抗诱导人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2凋亡的敏感性,并探讨西妥昔单抗与顺铂、放射线联合应用对Hep-2细胞的杀伤效应及机制。方法：采用CCK-8试剂盒分别检测西妥昔单抗、顺铂、放射线对Hep-2生长抑制率,流式细胞仪检测不同干预方案对Hep-2凋亡率及细胞周期分布情况。结果：不同浓度西妥昔单抗对Hep-2细胞均有抑制作用,并在一定浓度范围内呈时间一剂量依赖性,24h半数抑制浓度为1036．84μg／ml;顺铂,放射线分别与西妥昔单抗联合应用时,Hep-2凋亡率显著高于顺铂、放射线单独或联合应用（P〈0．01）,并产生Go／G1期阻滞。结论：Hep-2细胞对西妥昔单抗诱导的细胞凋亡敏感,顺铂和（或）放射线与西妥昔单抗联用对Hep-2细胞的增殖具有协同抑制效应;显著的凋亡诱导作用和对Hep-2细胞周期的影响为其机制之一,为临床喉鳞状细胞癌靶向EGFR并联合放化疗方案提供了理论依据。     

榄香烯治疗人喉癌裸鼠模型的实验研究

目的：研究榄香烯对人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2细胞荷瘤裸鼠模型移植瘤的生长抑制作用,探讨其抑瘤机制。方法：建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下移植模型。应用榄香烯治疗,观察移植肿瘤和裸鼠生长情况,计算肿瘤抑制率;逆转录PCR检测肿瘤组织中血管内皮生长因子C（VEGF-C）和血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）mRNA表达情况。结果：榄香烯对人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2细胞荷瘤裸鼠模型移植瘤的增殖具有明显抑制作用,抑瘤率为52.24%。在实验组和对照组之间,鼠净重、瘤重和瘤体积相比,差异有统计学意义（均P〈0.01）;实验组VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达低于对照组（P〈0.01）。结论：榄香烯可显著抑制人喉鳞状细胞癌裸鼠模型肿瘤的生长,其机制与榄香烯抑制VEGF-C和VEGFR-3的表达有关。     

miR-129-5p靶向调节果蝇形态同系物2基因抑制喉鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的　探讨miR-129-5p对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的调控机制。方法　运用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time f luorescence quantification polymerase chain reaction，qRT-PCR）法检测人支气管上皮细胞HBE、喉鳞状细胞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p、DIAPH2的表达；将miR-NC组（转染miR-NC）、miR-129-5p组 （转染miR-129-5p mimics）、anti-miR-NC组（转染antimiR-NC）、anti-miR-129-5p组（转染anti-miR-129-5p）、si-NC组（转染si-NC）、si-DIAPH2（果蝇形态同系物2，Drosophila Homologue of Diaphanous2，DIAPH2）组（转染si-DIAPH2）、miR-129-5p+pc DNA组（共转染miR-129-5p和pc DNA）、miR-129-5p+pc DNA-DIAPH2组（共转染miR-129-5p和pc DNA-DIAPH2），用脂质体法转染HN4、TU177细胞；Western blot检测细胞中DIAPH2、细胞周期蛋白依赖激酶1（cyclinD1）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase-3）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（cleaved-caspase-9）的蛋白表达；MTT法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-129-5p与DIAPH2的结合力。结果　与人支气管上皮HBE相比，喉鳞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p 表达均显著降低，DIAPH2表达显著升高（P <0.05）；过表达miR-129-5p、敲减DIAPH2均可显著抑制HN4、TU177细胞增殖、促进凋亡、下调cyclinD1、上调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9；miR-129-5p可抑制野生型DIAPH2细胞的荧光活性，并负向调控DIAPH2的表达；过表达DIAPH2可逆转miR-129-5p对Hep-2细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论　miR-129-5p可抑制喉鳞状细胞癌的增殖，促进凋亡，其机制可能与靶向DIAPH2相关，将可为miR-129-5p靶向治疗喉鳞状细胞癌提供新的依据。     

HIF-1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌hep-2细胞放疗的增效作用

目的：通过HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株，观察细胞凋亡及对放疗的反应情况。方法：体外培养人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株，脂质体介导反义寡核苷酸转染，6h后4Gy7射线照射。低氧培养24h后RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达，流式细胞仪检测HIF-1α蛋白水平及细胞凋亡率，MTT检测细胞存活情况。结果：低氧使人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射的敏感性下降；低氧并未影响HIF-1αmRNA的表达，HIF-1α蛋白在低氧6h时表达已开始升高，低氧36h时达高峰，之后表达逐渐下降；放射刺激对HIF-1α蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）；各浓度的反义寡核苷酸转染组降低HIF-1α的转录及蛋白水平；MTT结果显示随反义核苷酸浓度增高，其增殖抑制效应越强（P〈0．05），正义对照核苷酸及脂质体对照没有显著的抑制效应（P〉0、05），但转染浓度在400nmol／L以上时，正义对照也表现出一定的增殖抑制作用（P〈0．05）；放疗后反义寡核苷酸转染组蛋白表达下降明显，较对照组及单纯放射组细胞凋亡率增加（P〈0．01）。结论：低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射有抵抗作用，这种抵抗作用与低氧时HIF-1α蛋白表达上调有关，而放射本身并未上调HF-1α蛋白的表达；HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株能够降低HIF-1α蛋白表达，提高低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放疗的敏感性。     

RNA干扰细胞周期蛋白D1对Hep-2周期和凋亡的影响

目的研究小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)抑制细胞周期蛋白D1(cyclin D1)对喉鳞状细胞癌(简称喉癌)细胞生长和凋亡的影响。方法通过脂质体转染试剂将针对cyclin D1的特异小干扰RNA转入喉癌细胞,利用MTT法检测喉癌细胞生长抑制情况,流式细胞技术检测喉癌细胞周期变化和细胞凋亡。结果MTT结果表明喉癌细胞生长受到抑制,并具有时间依赖性。同时实验组喉癌细胞周期受到影响,并检测到喉癌细胞的凋亡。结论Cyclin D1基因沉默后,喉癌细胞生长受到了抑制,细胞周期受到影响,并能够最终导致喉癌细胞凋亡。     

紫杉醇对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株的作用

目的：了解紫杉醇对喉鳞状细胞癌细胞株Ｈｅｐ－２生长抑制作用,为治疗喉癌提供实验依据。方法：应用肿瘤细胞培养技术,随机分组和空白对照设计,观察紫杉醇对喉癌细胞生长抑制的剂量和时间效应。培养４８ｈ后作流式细胞仪分析,观察细胞周期分布和凋亡发生率。结果：紫杉醇浓度为１×１０－８组的癌细胞全部死亡,２．５×１０－９的低浓度已能明显影响细胞的生长,５×１０－９浓度组的细胞生长受到明显抑制。细胞周期分析显示：在中等或低浓度紫杉醇作用下,Ｈｅｐ－２细胞被阻止于Ｇ０／Ｇ１期,并能诱导细胞发生凋亡。结论：喉癌细胞株Ｈｅｐ－２对紫杉醇是高度的敏感,能使细胞生长阻止于Ｇ０／Ｇ１期,并诱导细胞凋亡,为紫杉醇治疗喉癌提供可靠的实验依据。     

吲哚-3-甲醇抑制喉癌细胞体外生长的研究

目的通过体外实验，研究吲哚 3 甲醇（indole 3 carbinol，I3C）对Hep 2喉癌细胞的抑制增殖和促进凋亡及机制。方法根据I3C浓度分组，用不同浓度的I3C即 0、100、200 μM 和300 μM作用于Hep 2喉癌细胞株0、24、48和72 h后，测定Hep 2细胞增殖能力。测定不同浓度I3C处理Hep 2喉癌细胞株48 h后细胞凋亡率。测定不同浓度I3C处理Hep 2喉癌细胞株后PI3K/Akt通路相关蛋白的表达情况。结果当I3C浓度增加时，Hep 2喉癌细胞株的增殖能力明显减弱，凋亡率显著增加，同时监测到PI3K/Akt通路相关蛋白的表达水平降低。结论在体外实验，I3C可以有效地抑制Hep 2喉癌细胞的生长，同时诱导凋亡，抑制PI3K/Akt信号通路可能是其作用机制。     

表达HPV16-E6/E7基因的人喉鳞癌细胞系的建立

目的建立表达HPV16-E6/E7基因的人喉鳞癌细胞系。方法用阳离子脂质体基因转染技术将携带有HPV16-E6/E7DNA的真核表达质粒导入体外连续传20代的HPV阴性的Lscc-02喉鳞癌细胞系,采用PCR和Western blot检测HPV16-E6/E7基因在Lscc-02细胞系中的整合和表达。结果第22代和第35代细胞中,PCR和Western blot均分别检测出E6/E7基因和蛋白的存在,显示HPV16-E6/E7基因整合于Lscc-02细胞系中并能稳定表达。结论成功建立了表达HPV16-E6/E7基因的人喉鳞癌细胞系,为进一步研究HPV16-E6/E7基因在喉癌细胞中的作用机制以及喉癌的基因治疗奠定了基础。     

Anti-tumor effect of vitamin A and D on head and neck squamous cell carcinoma

Objectives: Vitamin A and D₃ have a very strong differentiation induction effect. Study design: We examined the anti tumor effect on head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) by treatment with several vitamins having strong differentiation induction effects in vitro. Methods: We used KB cell that an oral floor squamous cell carcinoma, vitamins as all-trans retinoic acid (ATRA), 4-[3,5-bis (trimethylsilyl) benzamido] benzoic acid (TAC-101), 1,25(OH)₂D₃ (calcitriol) and 22-oxa-1,25-(OH)₂D₃ (OCT). We determined receptors of vitamin A and D₃ using RT-PCR. Furthermore, we investigated the proliferation of tumor cells in concentration dependency using [³H]TdR uptake method, apoptosis and apoptosis related factors using TUNEL method and real-time PCR, cell cycle changes using flow cytometry, changing of the sensitivity of using MTT method, cytokine production and the angiogenesis factor using ELISA, by treatment with these vitamins. Results: The deficit of RAR-β was found in the KB cell. Each vitamin suppressed the cell proliferation, induced apoptosis, and cell cycle arrest, upregulated sensitivity of the chemotherapeutics drugs and downregulated several angiogenesis factors and an apoptotic factor; survivin. Conclusions: These results support the idea that vitamin A, D₃ and their derivatives are useful for preventing and/or treating patients with HNSCC.     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：体外观察塞来昔布对人鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法观察其对鼻咽癌细胞生长的影响;透射电子显微镜检测细胞凋亡,应用流式细胞术观察DNA的含量和凋亡的变化情况,TUNEL染色法计数细胞凋亡指数。结果：体外塞来昔布抑制CNE-2细胞生长,呈浓度和时间依赖性。透射电镜观察到细胞皱缩、胞质丢失、核质浓缩以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。流式细胞术显示细胞凋亡率显著增高,在80、100gmol／L浓度下细胞凋亡率分别为（10．47±0．18）％和（20．17±0．55）％,与对照组（1．57±0．27）％比较差异均有统计学意义;塞来昔布使G0／G1期细胞比例升高,S和G2／M期比例下降,呈一定剂量效应关系。TUNEL染色法显示药物组凋亡率明显高于对照组（P〈0．01）。结论：塞来昔布能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖,并诱导其凋亡;其机制可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关。     

塞来昔布抑制人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞增殖与血管内皮生长因子的表达

目的 研究环氧化酶2抑制剂塞来昔布对鼻咽癌细胞株HNE-1细胞增殖作用及对血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响。方法 采用噻唑蓝法[3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT]观察塞来昔布对人鼻咽癌细胞增殖的影响，流式细胞仪分析细胞周期分布，免疫细胞化学检测VEGF蛋白表达。结果 塞来昔布50μmol／L作用48h后使HNE-1细胞G0／G1期细胞显著增多（由62．13％上升至91．35％），而G2／M期和S期细胞显著减少（分别由21．59％降至3．56％和16．28％降至5．01％），细胞生长停滞于G1／S期，细胞VEGF蛋白表达明显减弱。结论 塞来昔布对体外培养的鼻咽癌细胞具有明显抑制作用，使细胞生长停滞于G1／S期，且能抑制VEGF蛋白表达。     

RNAi沉默miRNA-224-5p对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术,来探讨沉默miRNA-224-5p对人喉鳞状细胞癌（简称喉鳞癌）Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-224-5p-RNAi-LV3转染喉鳞癌Hep-2。设为干扰组（miRNA-224-5p-siRNA,SI组）、阴性对照组（NC组）和空白对照组（BC组）,分别采用聚合酶链反应方法检测miRNA-224-5p的表达情况,用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况。结果 miRNA-224-5p-RNAi-LV3可显著降低miRNA-224-5p的表达,转染后Hep-2细胞增殖能力显著降低,细胞侵袭能力明显减弱,细胞周期及细胞凋亡均未见明显影响。结论 RNAi沉默miRNA-224-5p可以抑制Hep-2细胞增殖,并降低其侵袭能力。     

三氧化二砷与紫杉醇联合诱导Hep-2细胞凋亡的体外研究

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)与紫杉醇联合应用对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株(简称Hep-2细胞)作用的影响及机制.方法 以不同浓度的As2O3与浓度为10 nmol/L紫杉醇共同作用于Hep-2细胞,利用瑞氏-吉姆萨(Wrighs-Gimesa)染色及流式细胞术,观察两者对细胞...