荧光定量PCR快速检测革兰阴性菌qacE-sul Ⅰ基因

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实时荧光定量PCR检测胃癌组织Twist基因的结果分析

目的分析实时荧光定量PCR检测胃癌组织Twist基因的临床意义。方法用实时荧光定量PCR的方法检测正常胃黏膜、胃癌原发灶、胃癌转移灶组织中TwistmRNA的表达含量。并以Twist基因和18stRNA含量的比值作为评价Twist表达水平的指标,组间进行配对t检验。结果Twist／18stRNA（10g比值）正常组为0．139±0．003;原发组为0．304±0．046;转移组为0．654±0．015。原发性胃癌组织及转移组织中Twist基因表达水平与正常胃黏膜组织比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;转移组与原发组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Twist基因在正常胃黏膜组织中表达量较低,在胃癌及其转移组织中表达水平较高,而且Twist基因的表达水平与胃癌转移程度存在一定相关性。可以辅助诊断和观察胃癌术后疗效。     

嗜肺军团菌荧光定量PCR检测方法的建立

目的：建立嗜肺军团菌mip基因荧光定量PCR检测方法。方法：利用Primer Express软件设计特异性引物和探针,对质粒标准品、嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他菌株进行检测,验证方法的特异性、敏感性和重复性,最后采集环境样本进行检测。结果：该方法特异性好,嗜肺军团菌呈现阳性结果,而非嗜肺军团菌及其他菌株均为阴性结果。检测灵敏度达293copies／μl;重复性较好,Ct值变异系数较小;检测的12份环境样本中5份阳性。结论：该方法快速且具有较好的特异性、敏感性、重复性,适于外环境嗜肺军团菌污染调查及应急事件的快速检测。     

实时荧光定量PCR检测膀胱癌TWIST1基因启动子的甲基化状态

目的建立针对TWIST1基因启动子甲基化状态的荧光定量检测方法,进而评估其在膀胱癌临床研究的应用前景。方法应用实时荧光定量PCR方法检测南通地区50例确诊膀胱癌患者和25例非膀胱癌的健康对照者的尿液标本中TWIST1基因启动子的甲基化和非甲基化含量,对其甲基化率进行对比。结果正常人的TWIST1启动子的甲基化率为8.1%～17.3%,平均值为12.3%,膀胱癌患者的甲基化率为25.2%～48.3%,平均值为38.2%,膀胱癌患者的TWIST1基因启动子甲基化率有明显的增高（P〈0.05）。结论 TWIST1基因启动子区在膀胱癌中异常甲基化,能够作为有效检测膀胱癌的基因。     

实时荧光定量PCR检测膀胱癌TWIST1基因启动子的甲基化状态

目的建立针对TWIST1基因启动子甲基化状态的荧光定量检测方法,进而评估其在膀胱癌临床研究的应用前景。方法应用实时荧光定量PCR方法检测南通地区50例确诊膀胱癌患者和25例非膀胱癌的健康对照者的尿液标本中TWIST1基因启动子的甲基化和非甲基化含量,对其甲基化率进行对比。结果正常人的TWIST1启动子的甲基化率为8.1%～17.3%,平均值为12.3%,膀胱癌患者的甲基化率为25.2%～48.3%,平均值为38.2%,膀胱癌患者的TWIST1基因启动子甲基化率有明显的增高(P<0.05)。结论 TWIST1基因启动子区在膀胱癌中异常甲基化,能够作为有效检测膀胱癌的基因。     

食品中副溶血弧菌荧光定量PCR方法快速检测

目的利用荧光定量PCR技术，建立食品中副溶血弧菌污染的快速、准确的定量检测方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列设计合成副溶血弧菌FQ-PCR诊断试剂盒，研究其灵敏度、特异性，并应用于模拟食品样本检测。结果在31株不同菌株的检测中，8株副溶血弧菌结果均为阳性，而其他23株弧菌科及其他菌属的菌株均为阴性；纯菌条件下定量检测低限10cfu／ml；对模拟样本直接进行，检测低限为10^3cfu／g，经培养增菌后，检测低限则达到2cfu／g。结论该方法特异性强、敏感性高，操作简便快速，检验周期仅需36h，扩增与检测在封闭单管进行，可避免常规PCR方法易污染缺陷，具有很好的推广应用前景。     

2种荧光定量PCR扩增仪检测结果的比较

目的:观察2种荧光定量PCR扩增仪测定乙肝病毒定量(HBV DNA)的结果是否一致。方法:用2台PCR扩增仪同时对20份标本进行检测,观察2台荧光定量PCR定量扩增仪对HBV DNA测定结果的差异。结果:对20份标本HBV DNA含量的对数值进行相关性分析,二者相关性良好(r=0.96)。结论:通过2种荧光定量PCR扩增仪对20份随机样本的检测结果比较,2种仪器检测结果具有较好的一致性,可用于同时检测HBV DNA。     

沙门菌invA基因荧光定量PCR检测

沙门菌是引起食源性感染的常见致病菌^[1],常规检测方法有分离培养、生化鉴定、血清学试验等.由于沙门菌有2 000多种血清型,因而监测工作多繁琐、费时、费力.实时荧光定量PCR检测技术是近年来的新方法,已经愈来愈多地用于病原体诊断^[2].研究表明,沙门菌侵袭基因invA高度保守,几乎存在于沙门菌所有血清型中,其编码吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白,决定沙门菌对肠粘膜细胞的侵袭力,与其致病性显著相关^[3].根据这一特点,为探讨快速、敏感、稳定的沙门菌检测方法,本研究应用沙门菌侵袭基因invA设计引物和探针序列,建立沙门菌荧光定量检测方法并研制沙门菌检测试剂盒.     

裂谷热病毒荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种快速、敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,用于裂谷热病毒的检测。方法通过序列对比在裂谷热病毒L基因保守区设计引物及Taqman探针,建立实时荧光定量PCR反应体系。结果经优化的荧光定量PCR方法有较好的灵敏度和特异性,对阳性对照质粒标准品的灵敏度可达37拷贝/μl,通过检测同为蚊媒传播的日本脑炎病毒、黄热病毒、登革病毒、基孔肯亚病毒无交叉反应。结论本方法的建立在国境口岸传染病的防控方面有较好的应用前景。     

应用荧光定量PCR检测阴道加特纳菌

目的:确定荧光定量PCR方法检测细菌性阴道病相关细菌阴道加特纳菌的可行性。方法:采用SYBR Green方法建立了阴道加特纳菌荧光定量PCR方法,评价荧光PCR方法的特异性、灵敏度、重复性;并对568例临床分泌物样本进行检测。结果:本实验所建立的荧光定量PCR方法可准确、特异的检测阴道加特纳菌;该方法的灵敏度可达到1拷贝/μl;194例细菌性阴道病患者分泌物标本中荧光定量PCR法检出116例(59.79%)阴道加特纳菌;而在374例非细菌性阴道病患者分泌物标本中荧光定量PCR法检出35例(9.36%)阴道加特纳菌;荧光定量PCR法检出率明显高于细菌培养方法,差异具有显著性,χ2=24.89,P<0.01。结论:荧光定量PCR方法能够应该用于临床分泌物标本中的阴道加特纳菌的检测。     

聚合酶链反应结合斑点杂交测定乙型肝炎病毒DNA的评价

分别以Ｄｏｔｂｌｏｔ，ＰＣＲ－ＥＢ，ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ法测定了１４６例慢性乙型肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ。结果显示在ＨＢｅＡｇ组，ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ阳性率（１００％）显著高于ＰＣＲ－ＥＢ（９４．８％），在ＨＢｅＡｂ组，ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ的检出率为５４％，ＰＣＲ－ＥＢ为３８％。两者总检出率分别为８４．２％和７５．３％，统计学处理差异显著。有３例ＰＣＲ－ＥＢ再现生信号，但ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏ     

无症状HBsAg携带者血清HBV DNA定量检测的评估

目的　探讨一种新的高灵敏度血清 HBV DNA水平检测方法以及病毒 DNA检测用于献血员筛选的可行性。方法　采用 Am pli Sensor定量荧光 PCR技术定量检测经 EL ISA法筛选的 32 1名健康志愿者和37名 HBs Ag携带者血清 HBV DNA水平。结果　 32 1名志愿者中 2名 HBV DNA阳性 (0 .6 % ) ;37例 HBs Ag携带者 DNA检出率 1 0 0 % ,但 DNA含量相差较大 (7.98± 5 .37)。结论　 Ampli Sensor定量荧光 PCR技术灵敏度可达对数值 1拷贝 /毫升 ,该法用于献血员病毒 DNA检测有一定意义 ,但更适合用于临床健康检查 ;同时发现 HBV在无症状 HBs Ag携带者体内病毒复制差异较大 ,可能与不同个体的免疫状况有关。     

荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果比对分析

目的:探讨分析应用荧光定量PCR仪检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA的结果。方法:选取2018年8月~2019年9月本院收治的30例乙型肝炎患者,按数字法随机分两组,各15例,对照组仪器采用RLC480仪检测,观察组仪器采用荧光定量PCR仪检测,通过对患者HBV DNA水平的测定,对比分析不同仪器检测的结果。结果:RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器两种仪器测定结果未出现离群值;两台仪器的检测HBV DNA结果的相关性良好(r>0.975);两台PCR检测仪器检测结果的偏倚度百分比为3.18%(<7.51%),一致性良好,且系统误差在可接受的范围内。结论:ABI7500型荧光定量PCR仪器和RLC480型荧光定量PCR仪器检测HBA DNA的一致性极高,误差小,测算乙型肝炎DNA结果偏倚度在可控范围内,两种仪器运用于乙型肝炎的测量结果可用于以后的临床检测中。     

沙门菌检测方法的循证确定

目的将循证医学的研究方法应用于卫生检验，寻找沙门菌快速检测的最佳方案。方法通过检索多个数据库，全面查找沙门菌检测方法的文献，并对找到的文献进行评估和筛选，找到符合要求的文献确定检测方法。结果从5256篇检索到的文献中，共找到相关Ⅱ级文献4篇，Ⅲ级综述文献1篇用于确定沙门菌快速检测的最佳方案。结论在沙门菌的快速检测中，宜采用以139-141为引物的PCR检测法。     

PCR方法从脑脊液中检测脑膜炎奈瑟菌的实验

[目的]探索快速、可靠的检测脑膜炎奈瑟菌的方法。[方法]以煮沸法裂解细菌获取PCR反应模板,或以基因组DNA纯化试剂盒提取DNA后,用PCR法扩增脑膜炎奈瑟菌crgA基因;对PCR产物进行DNA测序。扩增siaD(C)基因确认C血清群脑膜炎奈瑟菌。[结果]煮沸法和试剂盒提取DNA法均可从1份标本中PCR扩增crgA基因阳性,PCR产物DNA序列与NCBI GenBankcrgA基因(登录号AF190471)序列一致。PCR扩增siaD(C)基因确认为C血清群脑膜炎奈瑟菌。[结论]建立的从脑脊液中检测脑膜炎奈瑟菌的PCR方法,可以更快速、可靠地诊断流脑。     

子宫颈人乳头瘤病毒PCR检测及临床意义的研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对２３６例正常子宫颈，１０５８例宫颈炎，５６例宫颈癌的分泌物进行人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）及１６、１８分型的检测。结果发现正常子宫颈中ＨＰＶ及ＨＰＶ－１６型和１８型的检出率明显低于宫颈炎和宫颈癌（Ｐ＜０．０１），宫颈癌中ＨＰＶ及ＨＰＶ－１６型和１８型的检出率明显高于宫颈炎（Ｐ＜０．０１）。提示ＨＰＶ感染与宫颈炎、宫颈癌的发生有一定的关系     

荧光定量PCR检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞乙肝病毒 DNA

目的探讨定量检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC)乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)的临床意义.方法采用荧光定量PCR检测PBMC及血清中HBV-DNA含量.结果 49例慢性乙肝患者PBMC及血清中HBV-DNA阳性率分别为44.9%(22/49),51.0%(25/49),两者阳性率无统计学意义的差异(P＞0.05),具有一致性;血清HBV-DNA高水平组PBMC的HBV-DNA含量与低水平组比较,两者有统计学意义差异(P＜0.01);血清HBV- DNA高水平组PBMC的HBV-DNA阳性率(100%)与血清低水平组PBMC的HBV-DNA阳性率(42.9%)比较,两者有统计学意义的差异(P＜0.05);在24例血清HBV-DNA阴性患者中,发现5例PBMC HBV-DNA阳性.结论 PBMC的HBV-DNA检测可反映病毒在体内的复制程度,是对慢乙肝患者血清HBV-DNA检测有意义的补充,有助于临床上对慢乙肝患者血清病毒复制状态的了解及指导治疗用药.     

军团菌16SrRNA聚合酶链反应方法的建立及应用

建立了１６ＳｒＲＮＡ基因检测军团菌的多聚酶链反应方法。扩增参考菌株染色体ＤＮＡ（Ｌ．Ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ１～１４、Ｌ．ｂｏｚｅｍａｎｎｉ、Ｌ．ｄｕｍｏｆｉ、Ｌ．ｌｏｎｇｂｅａｃｈａｅ、Ｌ．ｍｉｃｄａｄｅｉ、Ｌ．ｊｏｒｄａｎｉｓ）,均可检出出３８６ｂｐ的基因片段,敏感性为１０３ｃｆｕ／ｍｌ（平均值）;而扩增９株非军团菌均为阴性。对模拟血标本的检测,其敏感性可达１０２ｃｆｕ／ｍｌ。应用本检测系统检测了２４例临床标本,包括１９份血、５份胸水,阳性率为７０．８％（１７／２４）。与血清学检测和临床诊断治疗结果相符合。上述结果表明该方法敏感、特异、快速、简便。     

实时荧光定量 PCR 仪原理与技术关键点分析

本文主要阐述实时荧光定量PCR技术的基本构成、测量原理,以及实时荧光定量PCR仪的部件构成、质量控制和影响其检测精密度的因素.     

梅毒螺旋体荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立梅毒螺旋体的荧光定量PCR检测方法。方法依据梅毒螺旋体（Treponema pallidum,TV）DNA多聚酶I（polA）基因序列,设计MGB—Taqman探针和PCR引物,对TPPA法检测到的不同国家和人种梅毒螺旋体抗体阳性患者和阴性人员血液样本进行检测,验证该PCR方法的灵敏度和特异性,以及2种检测方法的一致性。结果PCR产物测序证实新建的荧光PCR方法可以扩增到梅毒螺旋体polA基因区200bp长DNA片段。该方法特异性强、灵敏度高,可检出每微升血液中10拷贝梅毒DNA。在31例TPPA法检测结果为阳性的样本中,有21例为PCR阳性。证明其中10例TPPA法阳性为非现行感染,可能不具有传染性。统计分析表明该荧光PCR方法与TPPA方法对不同国家和种族人群检测结果未出现显著差异。结论新建的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,可排除TPPA法阳性梅毒患者中非现行感染的旅行者,是适用于不同地区和种族的旅行者进行梅毒检测的新方法。