高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱分析水苏碱及其大鼠体内代谢物

目的鉴定水苏碱在大鼠体内的代谢物。方法应用高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(HPLC-ESI/MSⁿ)技术研究水苏碱的一级质谱电离规律、二级质谱裂解规律及其色谱保留，以此作为水苏碱大鼠体内代谢物分析鉴定的依据；再将健康大鼠空腹灌胃25 mg·kg^-1水苏碱，收集0～24 h的尿样，经C₁₈小柱固相萃取分离纯化后，应用HPLC-ESI/MS分析尿样中水苏碱代谢物。结果在大鼠尿样中发现了母药及其N-去甲基、氧化脱氢、环氧化等6种I相代谢产物及两种环氧化物的甘氨酸轭合II相代谢产物。结论HPLC-ESI/MS法灵敏度高，快速，定性能力强，适合于水苏碱大鼠体内代谢物的分析。     

HPLC-MSn法鉴定葫芦巴碱及其在大鼠体内的主要代谢产物

目的建立快速灵敏的LC-MSⁿ检测葫芦巴碱及其在大鼠体内代谢物的分析方法。方法以葫芦巴碱对LC-MS²色谱及质谱条件进行优化，分析其电喷雾质谱的一级电离规律和多级质谱裂解规律，以此作为葫芦巴碱大鼠体内代谢物分析鉴定的依据。健康大鼠尾静脉注射8 mg·kg^-1葫芦巴碱，收集0～48 h的尿样，经C₁₈小柱固相萃取分离纯化后，直接采用LC-MSⁿ方法对尿样进行测定。结果根据生物体内药物代谢转化规律及母体药物的色谱-质谱行为规律，在尿样中鉴定出母药及其N-去甲基、N-去甲基环氧化产物，以及母药及其N-去甲基环氧化物的甘氨酸轭合物。结论本方法灵敏、快速、选择性高、专属性好，可用于葫芦巴碱的代谢产物研究。     

液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱法鉴定大鼠尿液中大豆黄素的羟基化代谢产物及其硫酸酯轭合物

目的鉴定大豆黄素在大鼠体内的羟基化及其结合形代谢产物。方法SD大鼠分别单剂量给药500 mg·kg^-1，收集0～24 h尿样。尿样经SPE ODS C₁₈固相萃取柱纯化后，用LC-ESI/MSⁿ对尿样中的代谢物分别进行选择离子监测(SIM)和多级质谱(MSⁿ)分析。结果在大鼠尿中检测到几种尚未在国内外报道过的羟基化代谢产物及其硫酸酯轭合物。结论LC-ESI/MSⁿ法可以快速、简捷、准确地鉴定大豆黄素在大鼠体内羟基化及其结合形代谢产物。     

HPLC-ESI-ITMSn法鉴定麻黄碱及其大鼠体内主要代谢产物

目的建立快速灵敏的LC-ESI-ITMSⁿ分析检测麻黄碱及其大鼠体内代谢物的方法。方法以麻黄碱对照品对LC-ESI-ITMS²色谱及质谱条件进行了优化，分析总结其电喷雾质谱的一级电离规律和多级质谱裂解规律，以此作为麻黄碱大鼠体内代谢物分析鉴定的依据。健康大鼠空腹灌胃麻黄碱10 mg·kg^-1，收集0~48 h的尿样，经C₁₈小柱固相萃取分离纯化后，直接采用LC-ESI-ITMSⁿ方法对尿样进行测定。结果根据生物体内药物代谢转化规律及母体药物的色谱-质谱行为规律，在尿样中鉴定出3个第I相代谢产物，未发现第II相代谢产物。结论本方法灵敏、快速、选择性高、专属性好，可用于麻黄碱的代谢产物研究。     

LC/MS分析大鼠体内氧化苦参碱及其主要代谢物LC/MS分析大鼠体内氧化苦参碱及其主要代谢物

目的研究氧化苦参碱在大鼠体内的主要代谢产物。方法以氧化苦参碱和苦参碱为对象优化液相色谱/电喷雾离子阱质谱(LC/ESI-ITMSⁿ)实验条件，分析总结其电喷雾质谱的一级电离规律和二级质谱裂解规律，作为氧化苦参碱大鼠体内代谢物结构分析的依据。健康大鼠腹腔肌注40 mg·kg^-1氧化苦参碱，收集0~24 h的尿样，尿样中的代谢物经C₁₈小柱进行富集与纯化后，在优化的LC/ESI-ITMSⁿ条件下进样分析。代谢物的结构推导主要依据代谢物的色谱保留时间及其电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMSⁿ)电离规律。结果在大鼠尿样中有原药及其6种I相氧化及还原代谢产物，且主要代谢物为苦参碱。未发现II相代谢物。结论本法不仅操作简便、快速，而且灵敏度高、专属性强。该分析技术是研究药物代谢最有效的方法之一。     

罂粟碱的体内与体外代谢物研究

利用HPLC-MSⁿ检测罂粟碱及其在大鼠体内(大鼠粪便)和体外(肝微粒体, 肠道菌)代谢物。体内与体外的代谢物经C₁₈小柱进行富集和纯化后, 直接采用优化的HPLC-ESI/ITMSⁿ方法对样品进样分析。以罂粟碱标准品为对象优化高效液相色谱/电喷雾离子阱质谱(HPLC-ESI/ITMSⁿ )实验条件, 分析总结其电喷雾质谱的一级电离规律和多级质谱裂解规律, 作为罂粟碱大鼠体内与体外代谢物结构分析的依据。代谢物的结构推导主要依据代谢物的色谱保留时间及其电喷雾离子阱质谱HPLC-ESI/ITMSⁿ电离规律。在大鼠粪便中有原药及其8种代谢产物。体外代谢物检测到原药的脱甲基和羟基化。     

HPLC-ESI/ITMSn法分析大鼠体内4-甲基哌嗪-1-二硫代甲酸-(3-氰基-3，3-二苯基)丙酯盐酸盐及其主要代谢物

目的研究新化合物4-甲基哌嗪-1-二硫代甲酸-(3-氰基-3，3-二苯基)丙酯盐酸盐(TM208)在大鼠体内的主要代谢产物。方法大鼠ig TM208 500 mg·kg^-1后，收集粪样、尿样和血样，用液相色谱-电喷雾离子阱质谱法测定。根据TM208及其代谢产物的色谱保留时间和电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMSⁿ )电离规律及生物体内药物代谢转化规律，推导代谢物的结构。结果在粪样中发现8种I相代谢产物，在尿样和血样中发现5种I相代谢产物，未发现II相代谢产物。结论本法操作简便、快速、灵敏度高、专属性强，是一种研究TM208体内代谢产物的有效方法。     

牡荆素在大鼠体内的代谢研究

目的 研究黄酮碳苷牡荆素在大鼠体内的代谢产物,并推测其代谢途径。方法 SD大鼠灌胃给予5 mg·kg^-1牡荆素,收集0~3 h,3~6 h,6~12 h的尿液,采用UPLC-Q-TOF检测尿样中代谢产物。结果 采用Metabolynx XS代谢物分析软件,根据质谱碎片信息对代谢物进行结构鉴定,最终得到3个代谢产物。结论 牡荆素在大鼠尿液中检测得到1个一相代谢产物,2个二相代谢产物,推测牡荆素在大鼠体内主要发生氧化、甲基化和葡萄糖醛酸结合反应,其中葡萄糖醛酸化反应是较强的代谢种类。     

甲基莲心碱在大鼠肝脏中的代谢产物及其途径

大鼠灌胃给予甲基莲心碱 20 mg·kg^-1，采用液相色谱-串联质谱联用法对大鼠肝脏中的代谢产物进行分析；并建立肝微粒体温浴及NADPH再生体系，采用高效液相色谱-紫外检测法研究CYP450亚型的特异性抑制剂对甲基莲心碱体外代谢的影响。在正离子检测方式下，除甲基莲心碱外共检测到4种代谢产物M₁、M₂(主要代谢产物)、M₃和M₄。其中，M₂和M₄通过与对照品的色谱和质谱比对，确认为莲心碱和异莲心碱，而M₁ 和M₃可能为去甲基莲心碱和去甲基异莲心碱。CYP3A1的特异性抑制剂酮康唑和CYP2D1的特异性抑制剂奎尼丁均可抑制甲基莲心碱在肝微粒体温孵液中的代谢，其主要代谢产物莲心碱的生成抑制率分别为25.7%和80.5%。因此提示，甲基莲心碱在肝脏中的主要代谢途径是苄基和喹啉环上的甲氧基脱甲基化，其主要代谢物为莲心碱，CYP2D1和CYP3A1均参与了其生物转化。     

五味子酯甲在大鼠体内代谢产物的鉴定

目的 考察五味子酯甲在大鼠体内的代谢转化。方法 采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS/MS)分析鉴定大鼠灌胃五味子酯甲后,其在尿样中的代谢产物。Phenomenex UPLC C₁₈色谱柱,流动相为乙腈-1‰甲酸水,梯度洗脱,质谱仪离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子方式检测。结果 经代谢物软件处理后,根据MS/MS给出质谱碎片信息对五味子酯甲代谢产物进行结构推测,共检测到5种代谢产物。结论 五味子酯甲在大鼠体内的代谢途径主要为氧化反应和还原反应。     

液相色谱-电喷雾离子阱质谱法研究人尿中1,5-二咖啡酰奎宁酸的代谢产物

目的 研究健康受试者口服1,5-二咖啡酰奎宁酸后尿液中的代谢产物.方法 健康受试者每人口服1,5-二咖啡酰奎宁酸600 mg,收集0-24 h的尿样,经C_(18)小柱固相萃取纯化后,用液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术对人尿中的代谢产物进行分析鉴定.结果 在人尿中发现了1,5-二咖啡酰奎宁酸的甲基化、葡萄糖醛酸化及甲基-葡萄糖醛酸化代谢产物共28个.其中,有2个代谢产物结构经标准品对照得到确证.结论 甲基化、葡萄糖醛酸化和异构化反应是1,5-二咖啡酰奎宁酸在人体内的3种重要代谢途径.     

Identification of metabolites of tectoridin in-vivo and in-vitro by liquid chromatography-tandem mass spectrometry

In this work, liquid chromatography-electrospray ionization tandem ion-trap mass spectrometry (LC-MS(n)) was used to investigate the in-vivo and in-vitro metabolism of tectoridin. After oral administration of a single dose (100 mg kg(-1)) of tectoridin to healthy rats, faeces and urine samples were collected for 0-48 h and 0-24 h, respectively. Tectoridin was also incubated with rat intestinal flora and rat liver microsomes. Samples from in-vivo and in-vitro metabolism studies were purified using a C(18) solid-phase extraction cartridge, then separated using a reverse-phase C(18) column with methanol/ water (30:70, v/v, adjusted to pH 10.0 with ammonia water) as mobile phase and detected by an on-line MS(n) system. The structure of the metabolites was elucidated by comparing their molecular weights, retention times and full-scan MS(n) spectra with those of the parent drug. The results revealed six metabolites of tectoridin in urine (tectorigenin, hydrogenated tectorigenin, mono-hydroxylated tectorigenin, di-hydroxylated tectorigenin, glucuronide-conjugated tectorigenin and sulfate-conjugated tectorigenin); three metabolites in faeces (tectorigenin, di-hydroxylated tectorigenin and sulfateconjugated tectorigenin); one metabolite in the intestinal flora incubation mixture (tectorigenin), and four in the liver microsomal incubation mixture (tectorigenin, hydrogenated tectorigenin, mono-hydroxylated tectorigenin and di-hydroxylated tectorigenin). Except for tectorigenin, all other metabolites of tectoridin are reported for the first time.     

左旋一叶碱的代谢转化

目的研究一叶碱［securinine,(-)SE］在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法对(-)SE的代谢转化进行了研究,优化了代谢体系,建立了反相HPLC法同时分离检测(-)SE及其体外代谢产物的分析方法。用液液萃取,制备TLC及半制备HPLC分离纯化了4个代谢产物并进行了光谱鉴定。在此基础上,建立了生物体液中(-)SE及其代谢物的反相HPLC分析方法,并用该法检测了ip给药后大鼠的胆汁、尿样及其经β-葡糖醛酸苷酶水解后的样品。结果代谢物分别鉴定为6-位羟基,6-位羰基及5-位α及β羟基取代的(-)SE,还证实了体内6-位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论基本阐明(-)SE在大鼠体内外代谢转化的途径。     

Identification of in‐vivo and in‐vitro metabolites of palmatine by liquid chromatography–tandem mass spectrometry

Objectives Despite its important therapeutic value, the metabolism of palmatine is not yet clear. Our objective was to investigate its in‐vivo and in‐vitro metabolism. Methods Liquid chromatography–tandem electrospray ionization mass spectrometry (LC‐ESI/MSⁿ) was employed in this work. In‐vivo samples, including faeces, urine and plasma of rats, were collected after oral administration of palmatine (20 mg/kg) to rats. In‐vitro samples were prepared by incubating palmatine with intestinal flora and liver microsome of rats, respectively. All the samples were purified via a C₁₈ solid‐phase extraction procedure, then chromatographically separated by a reverse‐phase C₁₈ column with methanol–formic acid aqueous solution (pH 3.5, 70: 30 v/v) as mobile phase, and detected by an on‐line MSⁿ detector. The structure of each metabolite was elucidated by comparing its molecular weight, retention time and full‐scan MSⁿ spectra with those of the parent drug. Key findings The results revealed that 12 metabolites were present in rat faeces, 13 metabolites in rat urine, 7 metabolites in rat plasma, 10 metabolites in rat intestinal flora and 9 metabolites in rat liver microsomes. Except for six of the metabolites in rat urine, the other in‐vivo and in‐vitro metabolites were reported for the first time. Conclusions Seven new metabolites of palmatine (tri‐hydroxyl palmatine, di‐demethoxyl palmatine, tri‐demethyl palmatine, mono‐demethoxyl dehydrogen palmatine, di‐demethoxyl dehydrogen palmatine, mono‐demethyl dehydrogen palmatine, tri‐demethyl dehydrogen palmatine) were reported in this work.