卵巢癌腹水中肿瘤干/祖细胞的筛选及鉴定

目的:从人卵巢癌腹水细胞中分离肿瘤干/祖细胞并进行鉴定。方法:采用无血清培养法从腹水中分离培养球形体细胞(ASC);用流式细胞仪检测腹水ASC和腹水细胞(AC)中SP(side population)亚群含量;采用PCR和Western blot方法测定两种细胞干/祖细胞相关标志物ABCG2、Oct-4、Nanog基因和蛋白的表达;NOD/SCID小鼠检测其体内致瘤性。结果:腹水球形体细胞和腹水细胞中SP亚群分别为0.9%,0.2%;腹水球形体细胞较腹水细胞高表达干/祖细胞相关标志物Oct-4、ABCG2、Nanog;1×104个球形体细胞就能在NOD/SCID鼠中成瘤,而1×106个腹水细胞也不能成瘤。结论:无血清培养法可以从卵巢癌患者腹水中筛选出肿瘤干/祖细胞。该结果可为今后研究卵巢癌的发生、复发机制及筛选其化疗药物提供简便实用的体外模型。     

子痫前期蜕膜组比较蛋白组织学探讨及筛选

目的 分析子痫前期患者蜕膜组织差异蛋白表达,探讨差异蛋白与子痫前期发生的可能关系.方法 双向电泳技术对总蛋白进行分离,考马斯亮兰显色,获得蛋白质图谱.用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异蛋白.结果 获得了正常妊娠及子痫前期重度患者蜕膜组织双向电泳凝胶蛋白质图谱,蛋白质点子痫前期组(410±10)个,正常妊娠组(398±12)个,图像分析结果 显示表达丰度相差2倍发上的差异蛋白质点有12个,它们在子痫前期中均表现下调.结论 子痫前期患者蜕膜组织中存在差异蛋白表达.这些蛋白质在子痫前期的发病过程可能起重要作用.     

不同地域东亚钳蝎蝎毒的双向电泳鉴定

摘要 目的利用蛋白质组学中双向电泳技术,定性鉴定、分析不同地域东亚钳蝎蝎毒活性的差别,探索不同产地蝎毒的蛋白质组成及功能差异。方法将不同产地的冷冻干燥蝎毒粉经溶解、除盐、浓缩后测定蝎毒蛋白质含量,进行定量的蝎毒鉴定。采用pH梯度等电聚焦和SDS PAGE凝胶电泳技术分离蝎毒蛋白质。银染后通过凝胶成像系统获得双向电泳凝胶图谱,用PD Quest图像分析软件比较分析,确定差异的特征蛋白点,从而定性鉴定不同产地蝎毒。结果获得3个样品的蛋白质指纹图谱。分别检测出80,69和77个点,特征差异蛋白点依次为56,46和55个。结论不同产地的东亚钳蝎蝎毒通过双向电泳分离蛋白后,表现出明显不同的蛋白点分布。     

耐卡铂人卵巢癌细胞相关蛋白的筛选研究

目的：筛选耐卡铂人卵巢癌细胞相关蛋白质,从蛋白质水平探讨耐药的分子机制。方法：提取人卵巢癌亲代细胞SKOV3和对卡铂耐药的细胞SKOV3/CB的总蛋白,用二维液相色谱技术分离、筛选二者之间的差异蛋白,用电喷雾离子阱质谱技术分析鉴定蛋白质。结果：共分离筛选出差异蛋白54个,其中SKOV3细胞系表达上调者20个,SKOV3/CB细胞系表达上调者34个。初步鉴定出SKOV3/CB细胞系4个表达上调的耐药相关差异蛋白,即超氧化物歧化酶1、周期蛋白依赖激酶6抑制因子、转录适配蛋白1和垂体腺苷酸环化酶促多肽。这些蛋白涉及氧化还原、细胞周期调控及凋亡等多方面。结论：人卵巢癌对卡铂耐药的机制可能与多种蛋白质有关;有关实验数据对进一步研究人卵巢癌对铂类的耐药有一定价值。     

紫杉醇耐药卵巢癌细胞亚株的蛋白组学研究

目的:建立卵巢癌细胞株与紫杉醇耐药卵巢癌细胞亚株的差异蛋白表达图谱,寻找对紫杉醇药物耐受的相关蛋白.方法:以人卵巢浆液性囊腺癌细胞株(SKOV3)和对紫杉醇稳定耐药卵巢浆液性囊腺癌细胞亚株(SKOV3-TR30)为研究对象,应用双向电泳技术建立SKOV3与SKOV3-TR30的蛋白质差异表达图谱,并对图谱进行质谱分析.然后应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学方法对其中3个有差异的蛋白进行定量和定位检测.结果:(1)经过组内与组间3次重复,发现每次实验均有相似变化的差异点23个.其中与SKOV3细胞株相比,在SKOV3-TR30细胞株表达上调大于3倍的蛋白质点有16个(P＜0.05),表达下调大于3倍的蛋白质点有7个(P＜0.05).(2)通过质谱分析和数据库搜索,其中7个蛋白点得到初步鉴定,分别为可溶性抗药性相关钙结合蛋白(Sorcin)、组织蛋白酶B前体(CathepsinB)、调宁蛋白3、热休克蛋白27(HSP27)、波形纤维蛋白、尼克酰胺乙酰乙酸水解酶和血红蛋白β链.(3)蛋白免疫印迹结果显示,Sorcin、CathepsinB及HSP27在SKOV3-TR30细胞中的表达显著高于SKOV3细胞株(P＜0.05).免疫细胞化学的结果表明,SKOV3及SKOV3-TR30均可检测到Sorcin、Cathepsin B及HSP27阳性表达的细胞,并且3个蛋白均分布在细胞浆内,以核周最为明显.结论:低浓度紫杉醇诱导的上皮性卵巢癌耐药细胞亚株中存在细胞骨架相关信号转导分子表达上调,上调的细胞骨架相关信号转导分子在卵巢癌临床预示耐药与逆转耐药治疗中的作用值得进一步研究.     

宫颈癌与非宫颈癌组织的差异蛋白表达

目的：用蛋白质组学的方法,获得宫颈癌组织和非宫颈癌组织的差异蛋白表达图谱。寻找与宫颈癌发生、发展相关的特异蛋白,为探讨宫颈癌发病机制提供实验室依据。方法利用双向电泳、蛋白质串联质谱（MS／MS）分析宫颈癌的差异蛋白表达图谱,并于 NCBI 数据库中检索明确蛋白身份。结果经比对分析差异蛋白表达图谱及数据库检索,初步鉴定了12种蛋白,分别为：膜联蛋白 V 、膜联蛋白 I 、膜联蛋白 A1、膜联蛋白 A4、锰超氧化物歧化酶、转羟乙醛酶、假定蛋白、核不均一性核糖核蛋白 H2、载脂蛋白 A‐I 、热休克蛋白、L1蛋白、复杂的 T‐蛋白亚基伽玛亚型。结论这些蛋白可能与宫颈癌的发生、发展有关。     

卵巢癌患者腹水细胞遗传学检查的意义

检查卵巢癌的方法较多,腹水细胞染色体检查是方法之一,对临床诊断、治疗、预后有参考价值。尤其是某些临床体症不明显且其它检查阴性的患者,腹水细胞染色体检查阳性可做为确诊的依据。兹将有关内容简述如下。一、卵巢癌患者腹水细胞遗传学检查的临床意义腹水是卵巢癌临床常见体征。由于实体肿瘤增殖指数低,核型改变复杂,显带不佳,不易获得满意的染色体标本。所以,腹水癌细胞分裂相是进行卵巢癌染色体分析的主要来源。     

细粒棘球蚴囊液蛋白质组学的分析研究

目的分析细粒棘球绦虫幼虫生长环境即囊液的蛋白质构成情况,为深入了解棘球蚴的发育、代谢奠定基础。方法采用双向凝胶电泳分离蛋白质,经过图像分析标记,通过自动切胶仪切胶、回收,胶内酶解、纯化以及质谱分析技术分析蛋白样点的数据,最后结合生物信息学方法进行注解。结果在囊液二维电泳图谱上提取约30个蛋白斑点,成功获取21种蛋白的肽指纹图谱,利用生物信息学检索工具MASCOT进行了蛋白鉴定。结论通过建立细粒棘球蚴囊液的二维电泳图谱,初步鉴定出囊液中含人血清铁传递蛋白、人白蛋白、人β-血红蛋白3种蛋白,为从外界干扰囊液中蛋白质构成比方面寻找包虫病治疗的新方法提供了参考依据。     

siRNA沉默卵巢癌CXCR4基因对卵巢癌腹腔转移的影响

目的研究应用基因靶向治疗对卵巢癌腹腔转移的实验疗效观察。方法制作好的卵巢癌大鼠模型60只,采用随机数字表法随机分为实验组和对照组,实验组应用基因靶向治疗,对照组采用阴性治疗,siRNA沉默卵巢癌CXCR4基因后,观察CXCR4蛋白的表达情况,对卵巢癌细胞增殖的影响,观察应用基因靶向治疗后腹腔转移情况,评价大鼠生存情况。结果实验组在治疗后腹水中的CXCR4显著减少（P〈0．05）;对照组治疗后腹水中的CXCR4量显著性增加（P〈0．05）;实验组与对照组相比,治疗前腹水中CXCR4,差异无统计学意义（P〉0．05）;治疗后差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组腹水抽出量与实验组相比,明显减少（P〈0．05）。结论应用基因靶向治疗方法siRNA沉默卵巢癌CXCR4基因对卵巢癌腹腔转移,具有较好的疗效,临床预后较好。     

小干扰RNA对人卵巢癌细胞株CXCR4基因表达和侵袭力的影响

目的探究小干扰RNA对人卵巢癌细胞株CXCR4基因表达和侵袭力的影响。方法利用单细胞克隆技术从人卵巢癌细胞系SW626中分离培养细胞株CXCR4,并设计合成针对CXCR4基因的小干扰RNA,在脂质体介导下,重组表达质粒转染人卵巢癌细胞株,利用RT-PCR方法对CXCR4基因表达进行检查,观察转染后细胞株的侵袭能力。实验细胞分为不做处理的空白对照组、转染空病毒载体的阴性对照组、siRNA组。结果 siRNA组的CXCR4 CXCR4 mRNA水平、蛋白表达率、穿膜细胞数均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),而空白对照组与阴性对照组之间无明显差异(P>0.05)。结论小干扰RNA可有效抑制人卵巢癌细胞株CXCR4基因表达和侵袭力。     

整合素连接激酶在卵巢癌组织中的表达及相关性研究

目的：探讨整合素连接激酶（ILK）在卵巢癌组织中的表达及相关性。方法检测65例卵巢癌、28例良性卵巢肿瘤、28例正常卵巢组织中的ILK表达情况,观察ILK在不同卵巢组织中的表达情况及与病理特征的相关性。结果卵巢癌患者卵巢组织中ILK阳性表达率高于良性及正常卵巢组织中ILK阳性表达率（P〈0.05）;卵巢癌患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移、腹水与ILK表达有显著相关性（P〈0.05）;卵巢癌患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移、腹水是ILK强阳性表达的独立危险因素。结论 ILK表达与卵巢癌分化程度、临床分期、淋巴结转移、腹水等病理特征显著相关,有望成为卵巢癌诊断、治疗及预后判断的分子学指标。     

Selective removal of ovarian cancer cells from human ascites fluid using magnetic nanoparticles

A majority of ovarian cancer metastases result from the shedding of malignant cells from the primary tumor into the abdominal cavity. Free-floating cancer cells in serous effusions of late-stage ovarian cancer patients may spread to internal organs, making effective treatment extremely difficult. Selective removal of ovarian cancer cells from serous fluids may abate metastasis and improve long-term prognoses. We have already shown that superparamagnetic nanoparticles conjugated to an ephrin-A1 mimetic peptide with a high affinity for the EphA2 receptor can be used to capture and remove cultured human ovarian cancer cells from the peritonea of experimental mice. Here we demonstrate the potential clinical utility of the methodology by in vitro capture and isolation of cancer cells from the ascites fluid of ovarian cancer patients.From the Clinical EditorOvarian cancer metastases usually are the result of shedding of malignant cells from the primary tumor into the abdominal cavity. In this paper, a novel nanotechnology-based method is demonstrated for the in vitro capture and isolation of cancer cells from the ascites fluid of ovarian cancer patients.     

水通道蛋白在卵巢上皮癌中的表达及意义

目的探讨水通道蛋白1、3(AQP1、AQP3)在上皮性卵巢癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法检测上皮性卵巢良性、交界性、恶性肿瘤中肿瘤及腹膜组织中AQP1和AQP3的表达,同时检测血管内皮生长因子(VEGF)表达并以CD105标记各组织微血管内皮细胞测定微血管密度(MVD)。结果卵巢癌患者腹膜中AQP1、AQP3表达明显高于良性肿瘤者(P<0.05)。与卵巢肿瘤性质有关;卵巢癌患者中,有腹水(尤其是腹水量≥1000ml)和淋巴结转移者AQP1、AQP3的表达明显高于无腹水者(P<0.05)。AQP3的表达与卵巢癌病理分期分级有关。结论 AQP1、AQP3参与卵巢癌发生发展、侵袭转移和腹水形成。腹膜组织上AQP1、AQP3的高表达与肿瘤盆腔扩散和腹水生成有密切关系。     

晚期卵巢癌新辅助化疗的疗效分析

目的观察新辅助化疗治疗晚期卵巢癌的疗效。方法实验组42例患者采用新辅助化疗,对照组34例患者不进行新辅助化疗。实验组患者新辅助化疗1~3个疗程后行卵巢癌细胞减灭术。对照组直接采用卵巢癌细胞减灭术。术后化疗方案两组相同。通过观察疗效和手术并发症等,评价新辅助化疗治疗卵巢癌的效果。结果实验组组患者经治疗后,总有效率为92.86%,对照组经治疗后,总有效率79.41%,两组治疗效果比较,P=0.0386<0.05,具有差异性,有统计学意义;实验组胸腹水控制有效率为95.23%,对照组胸腹水控制有效率82.36%。两组胸腹水控制情况比较分析,P=0.032<0.05,实验组治疗过程中出现胃肠反应和骨髓抑制者各5例;对照组治疗过程中出现胃肠反应4例和骨髓抑制者2例。两组患者均对不良反应可耐受,且未见其他不良反应。结论卵巢癌采用新辅助化疗是安全有效的,不良反应轻微。     

12例胃癌卵巢转移临床特点及误诊分析

目的分析总结胃癌卵巢转移的临床特点、胃镜及病理特征、诊断要点、治疗预后及误诊原因,从而提高对胃癌卵巢转移的认识,提高诊治率。方法对12例胃癌卵巢转移患者的既往史、现病史、临床表现、内镜及超声特点、病理学检查、治疗情况及误诊原因进行分析。结果胃癌卵巢转移患者的年龄较轻多为青壮年,常以腹水及双侧卵巢转移灶为首发表现。胃镜多表现为BorrmannⅢ及Ⅳ型,组织学类型多为印戒细胞癌及低分化腺癌,超声检查以混合性肿块或实质性肿块为主要表现,多伴有腹腔积液,治疗以化疗为主,预后较差。结论胃癌卵巢转移患者常以腹水、盆腔肿块就诊于妇科,继发症状常常掩盖原发症状,导致初诊医生忽略其他系统的详细问诊及必要的胃镜检查,是造成误诊的主要原因。     

Complete remission of ovarian cancer induced intractable malignant ascites with intraperitoneal bevacizumab. Immunological observations and a literature review

Malignant ascites resistant to conventional drugs frequently affects ovarian cancer patients at the end of life. Here we report the case of a patient who benefited from complete resolution of ascites after low dose intraperitoneal administration of bevacizumab. Immunological analyses showed an initial increase in proportion and function of CD8⁺ effector T cells and a reduction of circulating T_reg cells. A review of the current literature regarding bevacizumab in ovarian cancer is reported. Bevacizumab has shown a high efficacy in the treatment of ovarian cancer. Intraperitoneal administration induces an immune activation and appears promising in the treatment of malignant ascites.     

影响老年复发卵巢上皮性癌患者预后的临床病理因素分析

目的 探讨病理因素在判断老年复发卵巢上皮性癌患者预后中的价值.方法 随机在本院选择150例明确诊断为老年复发卵巢上皮性癌患者,收集总结此类患者的一般信息、治病经过、疗效观察、生存状态等,采用Kaplan-meier生存曲线、Log rank检验以及Cox模型多因素回归分析法三种方法,研究影响老年复发卵巢上皮性癌患者预后的因素.结果 影响老年复发卵巢上皮性癌患者预后的单因素主要是复发部位、复发距离末次化疗时间、复发后伴有腹水、FIGO分期、最大复发病灶、再次治疗化疗方案、CA125升高、复发后二次肿瘤细胞减灭术、化疗疗程(P＜0.05),年龄、组织分化与预后无关(P＞0.05).采用Cox模型多因素回归分析法研究影响老年复发卵巢上皮性癌患者预后的单因素发现,复发后再次化疗疗程、复发后伴腹水、复发部位为独立危险因素.调查试验者的总体中位生存时间,结果显示为19个月(95％CI:15.956-20.143).结论 老年复发卵巢上皮性癌预后临床病理因素主要是复发后再次化疗疗程、复发后伴腹水、复发部位等为独立危险因素,临床医生应严格把握临床指征,尽量避免影响患者预后,准确判断患者的状态.     

不同剂量顺铂腹腔灌注联合全身化疗治疗无腹水期卵巢癌的临床观察

目的:观察不同剂量顺铂腹腔灌注联合全身化疗治疗无腹水期卵巢癌的疗效和不良反应。方法:43例无腹水期卵巢癌患者随机分成高剂量组和低剂量组。高剂量组(22例)腹腔灌注顺铂75mg·m-2;低剂量组(21例)腹腔灌注顺铂50mg·m-2。同时配合全身化疗,紫杉醇135mg·m-2,第1天,静脉滴注,每3周重复1次。3周期后评价疗效。结果:高剂量组和低剂量组有效率分别为86.36%和52.38%,2组比较有显著性差异(P<0.05);高剂量组和低剂量组一般状况改善率分别为81.82%和47.62%,2组比较有显著性差异(P<0.05);高剂量组Ⅲ～Ⅳ度恶心、呕吐的发生率达31.82%,高于低剂量组9.52%(P<0.05)。结论:高剂量顺铂腹腔灌注联合全身化疗临床疗效确切,并且可明显改善患者的生存质量,但不良反应发生率较低剂量组高。