助孕3号方及拆方防治肾虚黄体抑制动物流产模型的实验研究

目的:了解助孕3号方及拆方对肾虚黄体抑制动物流产模型的治疗作用及机理。方法:对妊娠大鼠以羟基脲和米非司酮建立肾虚黄体抑制病证动物流产模型,分别用助孕3号方、补肾方、健脾方中药水提液及黄体酮治疗,同时设立未用药物治疗的模型对照组和正常妊娠组。测定各组流产率、子宫卵巢组织形态学变化、血清P及子宫蜕膜PR的含量。结果:补肾健脾的助孕3号方和补肾方均可增强黄体功能,提高血清孕酮含量,增加子宫蜕膜孕激素受体mRNA的表达,从而降低肾虚黄体抑制动物流产模型的流产率,单纯健脾方无此作用。结论:补肾药在防治黄体功能不全引起的流产方面起主导作用。     

子宫内膜异位症局部雌激素代谢酶的表达及意义

目的:研究子宫内膜异位症的异位内膜雌激素产生、代谢与在位内膜及正常内膜存在的差异及其意义.方法:采用RT-PCR及免疫组化方法检测67例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的异位子宫内膜、在位内膜组织P450芳香化酶(P450A)mRNA及蛋白质、17β羟基类固醇脱氢酶Ⅱ(17β-HSD Ⅱ)mRNA的表达,并与35例对照组正常子宫内膜比较.结果:①35例正常子宫内膜不表达P450AmRNA,但自增生晚期始有1713-HSD Ⅱ mRNA的微量表达,分泌期逐渐增高并于分泌晚期达到高峰;②患者在位内膜可有P450AmRNA微弱表达;而17β-HSD Ⅱ mRNA表达趋势与正常子宫内膜一致,但强度低于正常内膜;③67例卵巢异位内膜均有P450AmRNA的表达,但缺乏17β-HSD Ⅱ mRNA表达.结论:子宫内膜异位症患者的异位内膜能够自合成雌激素,但局部雌激素代谢缺陷,其导致持续的雌激素微环境是异位内膜生长的主要因素.     

IFN-γ对溴隐亭诱导的流产大鼠下丘脑-垂体-卵巢中TGF-β1表达的影响

目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)对流产大鼠下丘脑-垂体-卵巢中转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:将40只孕1 d SD大鼠随机分为4组,分别为正常组(A组)、流产模型组(B组)、流产模型+IFN-γ组(C组)和流产模型+IFN-γ抗体组(D组),每组10只。B～D组于孕6～8 d每日皮下注射溴隐亭0.3 mg/kg,建立流产模型;C组于孕9～11 d每日肌注IFN-γ(100 IU/kg);D组于于孕9～11 d每日肌注IFN-γ抗体(100μg/kg)。妊娠12 d灌注多聚甲醛固定后取材,采用免疫组织化学SP法对每组下丘脑、垂体和卵巢中TGF-β1的表达进行检测。结果:B、C组下丘脑、垂体和卵巢中TGF-β1阳性细胞数和OD值均较A组低,D组下丘脑和垂体中TGF-β1阳性细胞数和OD值较A组低;C组下丘脑、垂体和卵巢中TGF-β1阳性细胞数、下丘脑和卵巢中OD值均低于B组;D组下丘脑、垂体和卵巢中TGF-β1阳性细胞数和OD值均较B、C组低。结论:IFN-γ对流产大鼠下丘脑-垂体-卵巢中TGF-β1的表达具有下调作用。     

补肾益气清热方对溴隐亭致大鼠流产模型中垂体PRL-R、PrRP-R表达的影响

目的 :探讨补肾益气清热中药对溴隐亭致 SD大鼠流产模型中垂体 PRL- R、Pr RP- R表达的影响。方法 :将 SD孕大鼠随机分 5组 :其中 A～ D组在孕 6～ 8d皮下注射溴隐亭 0 .3mg/( kg· d) ,A组为模型组 ,B组、C组、D组孕 1～ 1 1 d分别灌胃中药粉剂 3g/( kg· d)、注射外源性 PRL 8IU/次 (每天 1 2 :0 0和 2 4 :0 0 ,bid)、黄体酮 8mg/( kg·d) ;E组为正常妊娠组。所有动物于孕 1 2 d处死 ,取垂体 ,用 RT- PCR方法测各组大鼠垂体 Pr RP- R、PRL- R的表达。结果 :B组、C组、D组的妊娠率与 A组相比 ,差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ,B组妊娠率与 C组、D组、E组相比差异无显著性。 A组垂体 Pr RP- R、PRL- R的表达明显高于其它各组 ( P<0 .0 5 )。结论 :补肾益气清热中药可能通过机体的整体调节并作用于下丘脑、垂体 ,影响 PRL的合成和释放     

补肾益气方对改良溴隐亭致大鼠流产模型黄体功能的影响

目的:探讨应用补肾益气中药对妊娠大鼠自然流产模型黄体形态的影响。方法:应用改良溴隐亭对大鼠进行干预,在孕d6-8皮下注射,能够稳定复制大鼠自然流产模型;对灌服补肾益气方中药的实验大鼠血清孕酮(P)及泌乳素(PRL)水平进行测定;肉眼观察子宫病变,记录胚胎数;对实验大鼠黄体组织进行病理学检查。结果:补肾益气中药能提高血清P及PRL水平;明显降低大鼠的流产率、增加胚胎数;明显减轻大鼠子宫妊娠黄体的病理变化。结论:补肾益气方对溴隐亭致妊娠大鼠流产模型具有良好的改善作用,可增强黄体功能,促进胚胎发育,起到保胎的作用。     

重度子痫前期孕妇脂氧素A4及11β羟基类固醇脱氢酶2的表达及意义

目的:检测重度子痫前期孕妇外周血中脂氧素A4(LXA4)水平以及胎盘组织中11β羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)表达,探讨LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期发生的机制。方法:选择在本院产前检查并分娩的妊娠妇女共45例,其中正常妊娠组20例,重度子痫前期组25例。ELISA法测定孕妇外周血血浆中LXA4水平;酶化学发光分析法检测孕妇血清中游离皮质醇浓度;免疫组织化学染色法检测胎盘组织11β-HSD2蛋白表达;实时荧光定量RT-PCR法测定胎盘组织11β-HSD2 mRNA的表达;分析LXA4与11β-HSD2蛋白或mRNA、皮质醇与平均动脉压之间的相关性。结果:重度子痫前期组与正常妊娠组相比,LXA4水平明显降低(P<0.05),皮质醇浓度虽有升高,但无显著性差异(P>0.05);胎盘组织中11β-HSD2蛋白及mRNA表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05);两组孕妇的LXA4水平与11β-HSD2蛋白表达量、LXA4水平与11β-HSD2 mRNA表达量、皮质醇与平均动脉压均无相关性(P均>0.05)。结论:LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期的发生。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导大鼠尿道下裂及对阴茎TGF-β1、TGF-βR3表达的影响

目的:探讨诱导建立大鼠先天性尿道下裂,研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)及胎鼠阴茎内转化生长因子(TGF-β1,TGF-βR3)在尿道下裂发生机制中的意义。方法:SD孕鼠随机分为DEHP组(每日500 mg/kg)和大豆油对照组,每组20只。分别于母鼠孕12 d至19 d(GDl2～19)持续经口灌注给药。每组分别留取10只孕鼠让其正常分娩,出生第1日计数新生大鼠,并在解剖显微镜下测量雄性新生鼠的肛门生殖器距离(AGD)和称体质量;雄性仔鼠70日龄时逐个检查尿道下裂的发生情况。另10只孕鼠于孕第19日行剖宫产取仔鼠,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测胎鼠阴茎TGF-β1、TGF-βR3 mRNA的表达水平。结果:DEHP成功诱导出尿道下裂大鼠动物模型,DEHP组仔鼠体质量及AGD较对照组明显缩小(P<0.05)。DEHP组胎鼠阴茎TGF-β1、TGF-βR3 mRNA表达水平增加(P<0.05)。结论:DEHP成功诱导建立先天性尿道下裂大鼠模型,胎鼠阴茎内TGF-β1、TGF-βR3异常表达可能是尿道下裂的发生机制之一。     

脂氧素受体激动剂5(S),6(R),7-三羟基庚酸甲酯对地塞米松所致小鼠胎儿生长受限的保护作用及可能机制

目的 探讨5(S),6(R),7-三羟基庚酸甲酯[5(S),6(R),7-trihydroxyheptanoic acid methyl ester,BML-111]对地塞米松所致小鼠胎儿生长受限的影响及可能机制. 方法 60只清洁级ICR雌性小鼠受孕后随机分为对照组、地塞米松组和BML-111组.地塞米松组孕鼠妊娠第9天开始皮下注射地塞米松(5 mg/kg),2h后皮下注射生理盐水(1 mg/kg) ;BML-111组孕鼠妊娠第9天开始皮下注射地塞米松,2h后腹腔注射BML-111(1 mg/kg);对照组孕鼠相应时间皮下注射生理盐水(1 mg/kg).均为每天1次,连续6d.妊娠第18天眼球取血后处死孕鼠,取胎盘和子宫组织,免疫组织化学方法检测胎盘组织11β-羟基类固醇脱氢酶2(11β-hydroxysteroid dehydrogenase 2,11β-HSD2)蛋白表达;逆转录聚合酶链反应技术检测胎盘组织11β-HSD2、白细胞介素- 1β(in terleukin-1β,IL-1β)及子宫组织脂氧素A4受体——甲酸基肽受体3(formyl peptide receptor 3,FPR3) mRNA的表达;酶联免疫吸附试验检测孕鼠血清脂氧素A4水平.组间差异比较采用单因素方差分析及两两检验.结果 地塞米松组胎鼠平均体重为(0.823±0.054)g,低于对照组[(1.103±0.218)g]及BML-111组[(0.992±0.207)g],差异均有统计学意义(t分别为-4.108和-2.890,P均＜0.05).免疫组织化学方法检测显示,11β-HSD2表达于绒毛部位合体滋养层细胞胞质内,地塞米松组11β-HSD2蛋白表达强度较对照组及BML-111组低(0.030±0.019与0.058±0.015和0.049±0.025),差异均有统计学意义(t分别为-3.107和-2.211,P均＜0.05).地塞米松组11β-HSD2 mRNA也较对照组及BML-111组低,分别为0.457±0.062、0.943±0.057和0.698±0.071,差异有统计学意义(t分别为-9.418和-4.617,P均＜0.05).地塞米松组IL-1β mRNA(0.543±0.103)介于对照组(0.710±0.085)及BML-111组(0.229±0.031)之间,差异有统计学意义(t分别为-3.736和7.025,P均＜0.05).地塞米松组FPR3 mRNA(0.323±0.019)较对照组(0.857±0.057)及BML-111组(0.499±0.050)低,差异有统计学意义(t分别为-14.630和-4.822,P均＜0.05).地塞米松组孕鼠血清脂氧素A4浓度[(64.463±22.144)pg/ml]低于对照组[(101.610±24.916)pg/ml],差异有统计学意义(t=3.152,P＜0.05). 结论 孕鼠过早过多接触地塞米松可导致胎儿生长受限.BML-111可能通过调节11β-HSD2的表达,从而改善糖皮质激素在孕鼠体内的代谢而对地塞米松所致胎儿生长受限起保护作用.     

胎盘11β-HSD表达调节与糖皮质激素治疗

糖皮质激索(GC)可对胎儿生长发育产生复杂的效应.胎盘11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)作为糖皮质激素代谢限速酶调节母胎间经胎盘转运糖皮质激素量,其分为11β-HSD1和11β-HSD2两种亚型.11β-HSD在不同物种胎盘之间表达具有种属差异,同一物种的胎盘不同部位表达也不完全一样.胎盘部位11β-HSD表达还随孕龄发生改变.胎盘部位11β-HSD表达调节机制复杂,尚未完全明确.雌激素、孕激素、某些金属离子、缺氧和细胞因子等参与11β-HSD表达调节.产前不同物种给予糖皮质激素后,胎盘11β-HSD表达具有差异,主要表现为灵长类动物胎盘11β-HSD2表达上调,而绵羊等动物11β-HSD2表达下调.胎盘11β-HSD与糖皮质激素的关系研究,将有助于阐明11β-HSD在糖皮质激素治疗中所起的作用以及指导临床用药.     

白介素β1及凝血酶降低孕早期蜕膜细胞同源框A10基因的表达

目的:探讨炎症及出血导致流产的作用机制。方法:选择复发性流产(RSA)及正常妊娠孕6~10周的蜕膜组织各10例,并在体外分离培养正常妊娠的蜕膜细胞,加入雌、孕激素、白介素β1(IL-β1)及凝血酶处理后,用实时荧光定量RT-PCR及Western blotting检测RSA患者、正常妊娠者蜕膜组织及培养处理的各组蜕膜细胞内的同源框A10(HOXA10)的表达情况。结果:1HOX A10基因在孕早期蜕膜细胞中有表达;与正常妊娠者相比,RAS患者蜕膜组织HOXA10的表达明显下降(P0.05)。2雌、孕激素处理组的蜕膜细胞HOXA10 mRNA的表达显著增加(P0.05),是未处理组的9.5倍。3进一步加入IL-β1或凝血酶后,HOXA10 mRNA表达显著下降(P0.05);与雌、孕激素组相比,分别下降89.5%和74.9%。结论:1 HOXA10基因在孕早期蜕膜细胞中有显著表达,在RAS患者中的表达显著下降。2雌、孕激素促进HOXA10的表达,而IL-β1及凝血酶抑制HOXA10的表达。     

Progesterone synthesis by the human placenta

One of the essential roles of the human placenta is to produce the steroid hormone progesterone, which is required for the maintenance of pregnancy. The rate-determining step of placental progesterone synthesis is the conversion of cholesterol to pregnenolone by cytochrome P450scc (CYP11A1) in placental mitochondria in a reaction requiring electrons delivered via adrenodoxin reductase and adrenodoxin. Pregnenolone is converted to progesterone by type 1 3beta-hydroxysteroid dehydrogenase located in the mitochondrion. Progesterone synthesis by the human placenta displays notable differences from steroid synthesis in the classical steroid producing tissues such as the adrenal cortex and corpus luteum. One important difference is that the placenta lacks short term modulation of steroid synthesis and does not express the steroidogenic acute regulatory (StAR) protein. The most notable difference between the placenta and other steroidogenic tissues is that electron supply to P450scc limits the rate at which cholesterol is converted to pregnenolone in the placenta. The limiting component for electron delivery to P450scc is the concentration of adrenodoxin reductase in the mitochondrial matrix which is insufficient to maintain the adrenodoxin pool in a fully reduced state. Evidence suggests that placental mitochondria have a near-saturating cholesterol concentration for P450scc, likely provided by the StAR-like protein MLN64, and cholesterol translocation to the P450scc is not a major site of regulation of progesterone synthesis. Cyclic AMP stimulates progesterone synthesis by the human placenta but uncertainty remains regarding the key hormones that control cyclic AMP levels. The mechanism of regulation of adrenodoxin reductase levels in the human placenta remains to be studied.     

胎盘11β-HSD表达调节与糖皮质激素治疗

糖皮质激素（GC）可对胎儿生长发育产生复杂的效应。胎盘11β-羟基类固醇脱氢酶（11β-HSD）作为糖皮质激素代谢限速酶调节母胎间经胎盘转运糖皮质激素量,其分为11β-HSD1和11β-HSD2两种亚型。11β-HSD在不同物种胎盘之间表达具有种属差异,同一物种的胎盘不同部位表达也不完全一样。胎盘部位11β-HSD表达还随孕龄发生改变。胎盘部位11β-HSD表达调节机制复杂,尚未完全明确。雌激素、孕激素、某些金属离子、缺氧和细胞因子等参与11β-HSD表达调节。产前不同物种给予糖皮质激素后,胎盘11β-HSD表达具有差异,主要表现为灵长类动物胎盘11β-HSD2表达上调,而绵羊等动物11β-HSD2表达下调。胎盘11β-HSD与糖皮质激素的关系研究,将有助于阐明11β-HSD在糖皮质激素治疗中所起的作用以及指导临床用药。     

补肾益气清热方对溴隐亭致低PRL大鼠流产模型蜕膜PRLR、PR、ER mRNA的影响

目的 :从基因转录水平探讨补肾益气清热中药对溴隐亭致低 PRL流产大鼠模型的 PRLR、PR、ER m RNA在蜕膜上表达的影响 ,同时观察血中 PRL、P、E2 的动态变化。方法 :采用 RT- PCR方法行半定量图像分析 ,观察溴隐亭致低 PRL流产大鼠模型组 ( A组 )与模型 +中药保胎组 ( A+ H组 )之间 PRLR、PR、ER m RNA表达的差异 ;放免法测定血清 PRL、P、E2 的水平。结果 :A组蜕膜PRLR、PR m RNA表达明显低于 A+ H组 ( P<0 .0 1 ) ,ER m RNA表达两组间无显著性差异 ( P>0 .0 5 ) ;A组流产率为 67% ,而 A+ H组流产率仅为 1 7% ,差异有显著性 ;A组孕 7～ 1 0 d血清PRL、P水平显著低于 A+ H组 ( P<0 .0 5 )。结论 :溴隐亭可导致血清 PRL、P水平下降 ,且下调早孕大鼠蜕膜 PRLR、PR m RNA的表达而导致流产发生 ,补肾益气清热方可能通过促进 PRL、P分泌 ,上调 PRLR、PR m RNA的表达 ,恢复正常的妊娠微环境而起到保胎作用。     

甘氨酰-酪氨酰胺和甘氨酰-丝氨酰-赖氨酸抑制黄体细胞孕酮生成机制的研究

在筛选12种人工合成小分子肽影响大鼠离体黄体细胞孕酮生成的活性研究中,我们曾发现二肽甘氨酰—酪氨酰胺(Gly-Tyr-NH_2)和三肽甘氨酰—丝氨酰—赖氨酸(GlySer-Lys)有很强的抑制孕酮生成的作用。本文研究了这两种小肽的可能作用途径。实验观察到:蛋白质合成抑制剂放线菌酮(Cyx)和放线菌素D(ActD)对两种小肽拮抗孕酮分泌的作用没有影响;此两种小肽对孕酮合成的关键酶3 β-HSD活性也没有影响;但这两种小肽对腺苷酸环化酶激动剂Forskolin引起的孕酮分泌有抑制作用。提示这两种小肽可能抑制腺苷酸环化酶活性或影响cAMP以后的过程。     

Paraquat inhibits progesterone synthesis in human placental mitochondria

IntroductionHuman placenta mitochondria produces huge amounts of progesterone necessary for maintaining the pregnancy. Lipid peroxidation in human placental mitochondria inhibits progesterone synthesis and that inhibition can be reversed by superoxide dismutase and other antioxidants. Paraquat (PQ) a highly toxic herbicide generates superoxide radical inside cells and induces lipid peroxidation. Hence, it is supposed to stimulate lipid peroxidation in human placental mitochondria and in consequence to inhibit a placental mitochondrial steroidogenesis.MethodsPlacentas were obtained from normal pregnancies. All experiments were done using isolated human placental mitochondria. Mitochondrial lipid peroxidation was determined as tiobarbituric acid reactive substances (TBARS). A conversion of cholesterol to pregnenolone or pregnenolone to progesterone was measured using radiolabeled steroids and thin layer chromatography.ResultsPQ enhanced the iron-dependent lipid peroxidation as also PQ heightened the inhibitory action of this process on progesterone synthesis in isolated human placental mitochondria. Paradoxically, a superoxide dismutase (SOD) reversed the inhibition of progesterone synthesis only minimally although it strongly inhibited PQ stimulated iron-dependent lipid peroxidation. When iron was absent, PQ stimulated only negligible lipid peroxidation but strongly inhibited progesterone synthesis. SOD had no effect on inhibition of progesterone synthesis by PQ. PQ strongly inhibited of the conversion of cholesterol to pregnenolone but had not got any influence on the enzymatic activity of mitochondrial 3β-hydroxysteroid dehydrogenase. PQ strongly decreased the efficiency of NADPH-dependent cytochrome P450 reduction as well as it promoted the rapid oxidation of the pre-reduced mitochondrial cytochrome P450. However PQ has not inhibited combined activity of adrenodoxin reductase and adrenodoxin.DiscussionWe conclude that the most important reason of the inhibition of progesterone synthesis by PQ is the escape of electrons from cytochrome P450scc to that compound what leads to cytochrome oxidation and, in consequence the inhibition of the reaction catalyzed by it. The action of PQ described here should be considered as potentially harmful for pregnancy and fetal development.     

Interleukin 1β regulates progesterone metabolism in human cervical fibroblasts

Progesterone plays a critical role in regulating cervical structure necessary for pregnancy maintenance. Preterm labor and early cervical ripening are often associated with localized infection. We hypothesized that proinflammatory cytokines enhance progesterone metabolism in human cervical fibroblasts (HCFs) in vitro, through the regulation of the expression of 20α-hydroxysteroid dehydrogenases (aldo-keto reductase [AKR]1C1, AKR1C2, or AKR1C3), 5α-reductase type 1 (5α-RDT1), and/or 17β-hydroxysteroid dehyrogenases (17β-HSD) type 1 and 2. The expression of both progesterone receptor (PR) and estrogen receptor α (ERα) was also studied. Human cervical fibroblasts were found to express AKR1C1, C2, and C3, with AKR1C1 exhibiting the greatest expression. These cells also expressed 5α-RDT1 and 17β-HSD1 and 2, albeit to a lesser level compared to the aldo-keto reductases. The fibroblasts also expressed both PR and ERα. Interleukin 1β (IL-1β) significantly increased the expression of AKR1C1 and C2 but not C3 but did not alter 5α-RDT1 nor 17β-HSD1 or 2 expression. Interleukin 1β treatment significantly increased progesterone metabolism by these cells. Use of specific inhibitors for aldo-keto reductases or 5α reductases confirmed that the increased progesterone metabolism was a consequence of the increased expression and/or activity of AKR1C1/2. Our results indicate that a major proinflammatory cytokine, IL-1β, can facilitate local progesterone metabolism in a cell type critical for maintaining cervical structure via regulating expression of AKR1C1 and 2.     

白血病抑制因子在正常早孕、先兆流产及难免流产患者绒毛组织中的表达

目的测定白血病抑制因子(LIF)在正常早孕、先兆流产及难免流产患者绒毛组织中表达的差异,探讨LIF在先兆流产及难免流产发病中的作用。方法采用放射免疫法检测正常早孕妇女(正常早孕组,30例)、先兆流产患者(先兆流产组,30例)及难免流产患者(难免流产组,30例)血清孕酮及人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平;采用免疫组化技术———链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)法对LIF在3组妇女绒毛组织中的表达进行组织学定位和半定量分析;采用蛋白印迹法对3组妇女绒毛组织中LIF的相对表达量进行测定。结果(1)血清孕酮及hCG水平在正常早孕组、先兆流产组及难免流产组分别为(95±26)、(90±26)、(36±17)nmol/L及(75±14)、(68±13)、(13±3)kU/L。正常早孕组与先兆流产组血清孕酮及hCG水平分别比较,差异均无统计学意义(P>0·05);而难免流产组与其他两组妇女血清孕酮及hCG水平分别比较,差异均有统计学意义(P<0·01)。(2)3组妇女绒毛组织中LIF均呈现阳性表达,阳性染色主要位于滋养细胞胞质中,胞核无明显着色。(3)正常早孕组、先兆流产组及难免流产组LIF相对表达量分别为1·17±0·13、1·06±0·10、0·30±0·02,难免流产组与其他两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0·01),而正常早孕组与先兆流产组比较,差异无统计学意义(P>0·05)。结论LIF对妊娠的正常维持有一定的保护作用,LIF在早孕绒毛组织中的低表达,可能与hCG及孕酮水平下降有关,是导致难免流产的原因之一。