紧密连接Occludin蛋白在缺血性脑卒中肠屏障改变中的作用

目的 研究缺血性脑卒中时是否存在肠黏膜屏障功能改变以及紧密连接蛋白Occludin在其中的可能机制.方法 杂种犬20只,随机分为实验组和对照组(即假手术组),每组10只.实验组采用双硅柱置入法制作缺血性脑卒中模型.实验前及实验后12、24 h行血浆内毒素脂多糖(LPS)浓度检测;光镜下对肠黏膜病理形态进行观察;免疫组化法分析肠黏膜紧密连接Occludin蛋白的表达.结果 实验组动物均形成脑梗死.与对照组比较,实验组实验后12、24 h 血浆LPS浓度显著增高,紧密连接蛋白Occludin蛋白平均光密度显著降低(P均<0.01).相关和回归分析显示,Occludin蛋白平均光密度与实验后12、24 h 血浆LPS浓度均呈负相关(P均<0.05).光镜下观察,实验组存在小肠病理损伤,对照组小肠结构正常.结论 缺血性脑卒中时肠道屏障功能有明确的损害.血浆LPS能反映缺血性脑卒中时的肠屏障损伤.缺血性脑卒中时肠黏膜紧密连接蛋白Occludin表达降低,从而导致紧密连接破坏,这是肠屏障功能障碍的重要分子机制之一.     

ZO-1、Occludin、IL-18在急性重症胰腺炎肠黏膜中的表达

目的:观察急性重症胰腺炎肠黏膜紧密连接蛋白-1(ZO-1)、Occludin及IL-18的表达变化,探讨急性重症胰腺炎时肠道屏障功能损伤的机制。方法:选取60例胰腺炎患者为胰腺炎组,选取正常健康人30名为对照组。采用免疫组织化学SP法检测肠组织ZO-1、Occludin、IL-18蛋白表达,采用Western bloting法检测肠组织ZO-1、Occludin、IL-18蛋白半定量检测。结果:胰腺炎组ZO-1阳性率低于对照组(P0.05),胰腺炎组Occludin阳性率低于对照组(P0.05),胰腺炎组IL-18阳性率高于对照组(P0.05),胰腺炎组ZO-1、Occludin蛋白表达水平均低于对照组,IL-18高于对照组(P0.05)。结论:急性重症胰腺炎时,紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin表达降低,IL-18表达增加,可能共同参与了急性胰腺炎肠黏膜屏障功能损伤的病理过程。     

细胞凋亡在脑出血肠屏障功能障碍中的作用

目的:评估脑出血应激时肠粘膜细胞凋亡的状况。方法:健康成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为脑出血组和对照组,各15只。实验组建立急性脑出血模型。免疫组化法检测肠粘膜细胞Bax和Bcl-2表达;TUNEL法检测肠粘膜细胞凋亡情况。结果:脑出血组大鼠均成功建成脑出血模型。脑出血组肠粘膜细胞Bax阳性细胞率高于对照组,Bcl-2阳性细胞率低于对照组,凋亡指数高于对照组(均P0.05)。结论:脑出血后肠屏障功能障碍可能与肠粘膜上皮细胞的加速凋亡相关。     

核因子κB在重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障损伤中的作用机制

目的探讨核因子κB(NF-κB)在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障损伤中的作用机制。方法 24只Wastar大鼠按随机数字表法分为对照组、SAP组和NF-κB抑制剂组即二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组,每组各8只。制作SAP大鼠模型,对照组仅翻动胰腺,PDTC组于建模后2 h经尾静脉注射PDTC溶液40 m L/kg。各组大鼠于建模后24 h处死,观察各组大鼠腹腔内大体改变,比较各组肠黏膜的病理改变、通透性的变化及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)的表达水平,应用免疫组织化学法检测大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白Occludin的表达。结果对照组大鼠腹腔内无明显炎症征象,肠管无水肿充血;SAP组和PDTC组大鼠均有不同程度的腹水、肠管水肿、充血,且SAP组更为严重。光学显微镜下对照组肠黏膜未见明显损伤,SAP组和PDTC组大鼠回肠可见不同程度的肠黏膜破坏,且PDTC组较轻。三组大鼠的病理评分[(3.6±1.4)、(21.3±3.7)、(33.8±4.2)分]和肠黏膜通透性[(22±6)、(188±26)、(328±35)n L·min-1·cm-1]比较,差异均有统计学意义(F=7.259、6.402,P均0.05),且SAP组肠黏膜通透性较PDTC组增加更为显著(P0.05)。三组大鼠TNF-α[(146±37)、(1 684±80)、(2 896±99)ng/L],IL-1[(53±10)、(1 756±60)、(2 893±88)ng/L]表达水平比较,差异均有统计学意义(F=5.751、7.247,P均0.05),其中SAP组和PDTC组肠道TNF-α、IL-1表达水平均较对照组显著增加(P均0.05),且SAP组大鼠TNF-α和IL-1表达水平均较PDTC组更高(P均0.05)。免疫组织化学结果显示,对照组Occludin蛋白沿肠黏膜上皮细胞分布,呈很强的棕褐色线状信号;PDTC组Occludin的定位与对照组没有明显区别,但棕褐色阳性信号有所减弱;SAP组阳性细胞明显减少。三组大鼠Occludin[(15.6±3.0)、(6.4±1.4)、(3.1±1.2)]表达水平比较,差异有统计学意义(F=5.427,P0.05)。结论 SAP大鼠肠黏膜屏障损伤可能与肠组织中NF-κB表达升高有关,从而下调肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin的表达,抑制NF-κB表达对SAP肠黏膜屏障损伤具有保护作用。     

梗阻性黄疸对大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1和肠黏膜通透性的影响

目的研究梗阻性黄疸对大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO－1和肠黏膜通透性的影响。方法30只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组、假手术组、梗阻性黄疸组（OJ组）。OJ组制成梗阻性黄疸动物模型,7d后各组同一时间点取材。检测门静脉血D-乳酸含量,免疫组化检测肠黏膜紧密连接蛋白ZO-I的分布。结果OJ组大鼠门静脉血D晋L酸水平显著高于正常对照组和假手术组（P〈0．05）,ZO-1染色变淡,分布不均匀,边缘粗糙,强阳性表达率下降。结论梗阻性黄疸时大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白ZO－1分布紊乱、表达下降,肠黏膜通透性增加,肠黏膜屏障受损。     

脓毒症诱导血脑屏障通透性增加的机制研究

目的:探究脓毒症对血脑屏障通透性的影响。方法:采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症大鼠模型。根据干预时间随机（随机数字法）分组：假手术组、脓毒症1 d组、脓毒症4 d组、脓毒症7 d组。采用荧光素钠检测血脑屏障的通透性变化;采用Western blot和免疫荧光方法检测脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白的表达变化。结果:和假手术组大鼠相比较,脓毒症组的大鼠呼吸急促,精神萎靡、反应迟钝,活动量少、进食饮水少,腹胀明显,排稀便。腹腔解剖可见肠系膜黏连,近端肠管扩张,盲肠结扎部位颜色暗红且表面有脓液渗出,整个腹腔可见血性渗出液。和假手术组大鼠相比较,脓毒症组的大鼠体质量下降,随着脓毒症的病程发展,大鼠体质量持续降低,脓毒症7 d组的大鼠体质量最低,且明显低于脓毒症4 d（ P < 0.05）、脓毒症1 d（ P < 0.05）以及假手术组（ P < 0.05）的大鼠。和假手术组大鼠相比较,盲肠结扎穿孔1 d后大鼠脑组织中的荧光素钠的渗漏显著增加（ P < 0.05）。随着脓毒症的病程发展,荧光素钠渗漏含量持续增加。脓毒症7 d的大鼠脑组织中的荧光素钠含量最高,并且明显高于脓毒症4 d、脓毒症1 d以及假手术组的大鼠（均 P < 0.05）。和假手术组大鼠相比较,盲肠结扎穿孔1 d后大鼠脑组织的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin和ZO-1的蛋白表达量明显降低（均 P < 0.05）。随着脓毒症的病程发展,紧密连接蛋白的表达量持续降低。脓毒症7 d的大鼠脑组织中的紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达量最低,并且明显低于脓毒症4 d、脓毒症1 d以及假手术组的大鼠（均 P < 0.05）。 结论:脓毒症可诱导大鼠的血脑屏障通透性增加,并且脓毒症持续的时间越久,血脑屏障的通透性越高。     

脑出血模型大鼠脑组织脑红蛋白的表达

目的:观察脑红蛋白在实验性脑出血模型大鼠脑组织内表达水平的动态变化。方法:实验于2004-10/2005-10在解放军沈阳军区总医院动物实验科和神经中心实验室完成。66只大鼠随机分为3组:正常对照组6只,脑出血组30只和假手术组30只。脑出血组和假手术组再根据动物模型建立后1,6,24,48和72h5个时间点随机分为5个亚组,每个亚组6只大鼠。采用立体定向自体血注入大鼠尾状核建立脑出血模型(假手术组注入生理盐水),用Westernblot和免疫组织化学法检测脑出血后不同时间脑组织内脑红蛋白的表达。结果:脑出血组有3只大鼠术后死亡,有4只大鼠术后模型制备失败,均予以剔除并随机补充,66只大鼠最终纳入分析。Westernblot结果显示脑出血组术后1h血肿周围脑组织内脑红蛋白相对表达水平开始增高(0.45±0.03),48h达到高峰(0.83±0.05),72h开始下降(0.55±0.11),均明显高于假手术组(0.31±0.06,0.31±0.01,0.33±0.04)和正常对照组(0.32±0.07)。免疫组化染色显示在血肿周围脑红蛋白表达比其他脑区明显增多。结论:脑出血后脑内脑红蛋白表达上调,提示脑红蛋白可能对脑出血继发神经损伤起重要的保护作用。     

从TLR4/NF-κB通路探讨芪药鸡金粥对化疗后大鼠肠道紧密连接蛋白的影响

目的:从TLR4/NF-κB信号通路的角度探讨芪药鸡金粥对化疗后大鼠肠道紧密连接蛋白的影响,进一步明确芪药鸡金粥调控化疗后肠黏膜损伤的作用机制;初步明确芪药鸡金粥不同剂量与相关指标变化间的量效关系。方法:将40只SPF级Wistar大鼠随机分为模型组、高剂量药膳组、常规剂量药膳组、低剂量药膳组和空白组,每组各8只。实验第1天对模型组及各剂量药膳组行5-FU150mg/kg一次性腹腔注射,复制化疗所致胃肠黏膜损伤大鼠模型,空白组给予等量生理盐水腹腔注射。实验结束采用ELISA法检测各组大鼠肠道TLR4/NF-κB信号通路蛋白以及大鼠肠道紧密连接蛋白的表达水平。结果:各组大鼠Claudin-1、ZO-1和JAM-1紧密连接蛋白表达水平的差异有统计学意义(P0.05);各组大鼠Occludin紧密连接蛋白表达水平差异无统计学意义;各组大鼠IκBα和TLR4通路蛋白变化水平的差异有统计学意义(P0.05);各组大鼠NF-κBp50及NF-κBp65通路蛋白表达水平差异无统计学意义。结论:芪药鸡金粥可上调化疗后大鼠胃肠道Claudin-1及JAM-1紧密连接蛋白水平,但对Occludin及ZO-1紧密连接蛋白表达的调控作用尚不明确;其对TLR4/NF-κB信号通路中的IκBα蛋白具有一定的抑制作用,但对该通路TLR4、NF-κBp50及NF-κBp65蛋白的调控作用尚不明确;不同剂量芪药鸡金粥与相关指标的量效关系尚不明确,仍需进一步研究探讨。     

急性脑出血大鼠肠屏障功能的变化

目的:研究急性脑出血对肠粘膜屏障功能的影响。方法:成年雄性Wistar大鼠60只,随机分为脑出血组和对照组各30只。脑出血组采用立体定向技术将大鼠自体尾动脉不抗凝动脉血液50μL缓慢注入尾状核制备脑出血模型,对照组注射等量生理盐水。2组分别于造模前和造模后0.5、3、6、12、24 h检测血浆二胺氧化酶(DAO)活性和D-乳酸(D-Lac)浓度,于造模前和造模后12、24 h检测血浆内毒素(LPS)浓度;造模后24 h取空肠l cm,光镜下观察肠粘膜。结果:与对照组比较,脑出血组造模后12、24 h DAO活性和造模后6、12、24 h D-Lac浓度及造模后12、24 h LPS浓度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。光镜下观察,脑出血组小肠存在病理性损伤,对照组小肠结构正常。结论:急性脑出血早期即发生肠屏障功能障碍。     

急性重症大鼠胰炎大鼠肠黏膜超微结构的改变

目的 探讨肠黏膜超微结构改变在急性重症胰腺炎时肠膜屏障功能障碍中的意义。方法 对急性重症胰腺炎（ASP）模型大鼠及假手术组大鼠（SO）于术后6、12h取回肠黏膜组织进行光镜及电镜（利用辣根过氧化酶作为黏膜通透性改变的示踪剂）。同时对血、肠系膜淋巴结（LMN）、肝、脾、肺组织进行了细菌培养及鉴定,测定门静脉血中内毒素水平。结果 ASP大鼠6及12h时相点肠黏膜组织结构基本正常;电镜观察制膜12h肠上皮细胞紧密连接间有高密度电子物质沉着,细胞紧密连接开放;假手术组肠黏膜上皮细胞紧密连接完整,细胞间隙无示踪剂沉着。12h时相点ASP组大鼠远隔部位细菌移位率较假手术组显著增加,培养出的细菌为大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、芳香杆菌、枯草杆菌及肺炎克雷伯杆菌,几乎均为肠源性细菌;12h时相点ASP组大鼠血浆内毒水平较SO组显著增加。结论 肠黏膜上皮细胞间紧密连接开放,通透性增加是ASP早期肠道细菌、内毒素移位,肠黏膜屏障功能障碍的形态学基础。     

高压氧对脑出血大鼠脑内血管新生的影响

目的:探讨高压氧对脑出血大鼠脑内血管新生的作用机制。方法:将120只SD大鼠随机分为假手术组、脑出血组和高压氧组。采用组织切片HE染色显微镜下观察各组大鼠血肿周围脑组织新生血管形成情况;采用免疫组织化学分析方法检测各组大鼠脑内缺氧诱导因子(HIF)1-α、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达含量;采用荧光定量RT-PCR方法测定各组大鼠脑组织HIF1-αm RNA、VEGF m RNA的表达水平。结果:血肿周围脑组织切片经HE染色后光镜下观察可见,随着出血后时间延长,高压氧组血肿已基本吸收,较脑出血组可见大量分布的血管样结构和微血管,新生血管数目明显增多,假手术组未见明显血肿及新生血管的病理改变。脑出血组和高压氧组HIF1-α和VEGF蛋白表达在第14、21、28天比较差异均有显著性意义(P<0.01)。三组(假手术组、脑出血组、高压氧组)比较,高压氧组HIF1-αm RNA、VEGF m RNA表达值分别高于脑出血组和假手术组,HIF1-αm RNA在第14、21、28天时三组比较差异均有显著性意义(P<0.05);VEGF m RNA在第21、28天时三组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:高压氧能增加脑出血大鼠脑内HIF1-α、VEGF蛋白和m RNA表达水平,促进新生血管形成,加快血肿吸收,改善脑出血大鼠损伤神经功能,促进其康复。     

NF-κB在重症急性胰腺炎小鼠肠黏膜屏障损伤中的作用

目的探讨NF-κB在重症急性胰腺炎小鼠肠黏膜屏障功能损伤中的调控机制。方法 36只BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、NF-κB干预组,每组12只。18h后处死小鼠,比较各组的腹腔内大体改变、肠黏膜病理改变,肠道通透性的变化及血清细胞因子水平,肠上皮紧密连接蛋白occludin的表达。结果模型组小鼠腹腔内呈明显炎症反应,肠管水肿,肠黏膜水肿,肠道通透性显著增高,NF-κB特异性阻断剂能降低肠道损伤,改善肠黏膜水肿,上调肠上皮紧密连接蛋白occludin的表达,显著降低肠道通透性,降低细胞因子水平。结论 NF-κB阻断剂能够通过选择性的抑制NF-κB活性,改善受损的肠屏障功能。这一作用通过上调肠上皮紧密连接蛋白occludin的水平而实现。     

白藜芦醇对炎症型肠应激综合征小鼠肠上皮屏障功能的作用

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,RES）对小鼠炎症性肠易激综合征（Post inflammatory irritable bowel syndrome,PI-IBS）作用及其机制。方法：将30只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组（Control）、炎症性肠易激综合征模型组（PI-IBS组）和白藜芦醇干预组（PI-IBS+RES）。建立PI-IBS模型,通过粪便含水量和排便次数分别评估小鼠肠粘膜屏障损伤和道通透性变化;内脏敏感性实验来测定大鼠肠道敏感程度;使用免疫组化和Western blot方法测定小鼠海马体和结肠cAMP依赖性蛋白激酶（PKA）,磷酸化cAMP反应元件结合蛋白（p-CREB）、脑源性神经营养因子（BDNF）、紧密连接（Tight junction,TJ）蛋白（Occludin、ZO-1、Claudin-2）表达水平。结果：RES对PI-IBS小鼠粪便含水量和粪便颗粒数的增加有明显的抑制作用;改善PI-IBS小鼠肠道高敏状态;显著增加PI-IBS+RES小鼠结肠粘膜中ZO-1和Occludin的表达,下调PKA、p-CREB、BDNF和Claudin-2的...     

非酒精性脂肪肝大鼠小肠黏膜上皮屏障及紧密连接蛋白表达的变化

目的：非酒精性脂肪性肝病（ NAFLD）与肠道屏障功能受损密切相关,本研究探讨非酒精性脂肪肝时肠上皮紧密连接蛋白Zonula Occluden-1（ZO-1）和Occludin的表达变化及其在肠黏膜屏障功能减退中的作用。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组（普通饮食）和高脂模型组,分别于造模的12周、16周检查肝指数（肝湿重/体重）、血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）、血清胆固醇（ TC）、甘油三酯（ TG）、肝组织匀浆丙二醛（ MDA）和超氧化物歧化酶（ SOD）水平,光镜下观察末端回肠黏膜形态,透射电镜下观察小肠上皮细胞紧密连接超微结构,免疫组化方法检测小肠紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达。结果16周模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,肝指数[（6.3±0.18）％ vs．（5.8±0.12）％]、血清 ALT [（68.61±12.12） U/L vs．（25.10±9.06）U/L]、血 TG[（1.30±0.14）mmol/L vs．（0.72±0.06）mmol/L]和肝组织匀浆 MDA 水平[（6.02±0.92）μmol/g vs．（2.15±0.66）μmol/g]均显著高于对照组（P＜0.01）,肝组织匀浆SOD水平显著低于对照组[（5.12±1.88）U/g vs．（10.52±2.2）U/g,P＜0.01];模型组大鼠末端回肠黏膜形态和小肠上皮细胞紧密连接超微结构未见明显异常,但肠上皮细胞凋亡增加。与对照组比较,16周模型组大鼠小肠ZO-1及Occludin蛋白的表达皆显著下降（0.65±0.12 vs．1.08±0.08;0.62±0.08 vs．0.95±0.10, P ＜0.01）。结论非酒精性脂肪肝时肠黏膜上皮屏障功能减退可能与小肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达异常有关。     

急性坏死性胰腺炎时P物质在肠壁的表达及与肠黏膜通透性之间的关系

目的观察急性坏死性胰腺炎（ANP）时大鼠回肠组织中P物质的表达，探讨P物质表达与肠黏膜病理学改变和肠黏膜通透性的关系。方法将150只健康成年SD大鼠随机分为假手术组（50只）和ANP组（100只）。假手术组开腹后只翻动胰腺；ANP组经胰胆管恒速逆行注射质量分数为5％的牛磺胆酸钠制备ANP模型。分别于制模成功后0、6、12、24和48h处死两组大鼠，并留取标本；利用同位素法测定肠黏膜通透性，分别用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测P物质在肠组织中的mRNA和蛋白表达水平。结果ANP组大鼠制模后各时间点血清淀粉酶水平显著升高，肠组织中P物质的mRNA和蛋白表达水平均明显上调，肠黏膜通透性[^99m锝-亚锡喷替酸法（^99mTc—DTPA）排泄率]较假手术组也明显升高（P均〈0．01）。P物质mRNA表达水平分别与肠黏膜病理学评分（r=0．67，P〈0．01）和肠黏膜通透性指数（r=0．78，P〈0．01）呈明显正相关。结论ANP时大鼠回肠组织中P物质表达升高，P物质的表达水平与大鼠肠黏膜通透性相关。     

DEHP体外对大鼠睾丸支持细胞紧密连接作用及相关基因表达影响

目的探讨邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)体外对大鼠睾丸支持细胞紧密连接的作用以及相关基因表达的影响。方法体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,建立支持细胞原代双室培养模型,以只加入二甲基亚砜(DMSO)的细胞孔作为对照,以10、50、100 nmol/L浓度的DEHP(DEHP低、中、高剂量组)染毒24 h。应用跨上皮电阻测定法检测单层细胞两侧跨上皮细胞电阻值(TER),荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测支持细胞闭锁蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(Zonula occluden-1,ZO-1)、紧密连接蛋白11(Claudin 11)基因mRNA表达,应用Weastern blot检测支持细胞Occludin、ZO-1、Claudin 11蛋白的表达。结果与对照组比较,不同浓度的DEHP各组细胞TER值均降低。同时大鼠睾丸支持细胞Occludin、ZO-1、Claudin 11基因mRNA表达随DEHP浓度增加而降低(P0.05),Occludin、ZO-1、Claudin 11蛋白表达也随DEHP浓度增加而降低(P0.05)。结论 DEHP可通过下调Occludin、ZO-1、Claudin 11基因表达而影响大鼠睾丸支持细胞的紧密连接,进而影响支持细胞的功能。     

合成MRI评估高血糖大鼠脑缺血再灌注早期血脑屏障结构和基质金属蛋白酶9表达

目的 观察高血糖大鼠脑缺血再灌注(CIR)早期血脑屏障(BBB)结构和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达及其与合成MRI(syMRI)定量参数的关系。方法 选取SD雄性大鼠30只，随机分为高血糖短暂性大脑中动脉栓塞再灌注(tMCAOR)组(HG组，n=12)、正常血糖tMCAOR组(NG组，n=12)及正常血糖假手术组(Sham组，n=6)。行syMRI-T2WI,观察每组大鼠脑梗死体积百分比，计算相对T1(rT1)值、相对T2(rT2)值和相对质子密度(rPD)值。采用免疫组织化学染色观察免疫球蛋白G(IgG)外渗和MMP-9含量。采用蛋白质印迹法检测BBB紧密连接蛋白[闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)、紧密连结蛋白-5(Claudin-5)]和MMP-9表达水平。结果 HG组、NG组及Sham组分别有9、9及6只大鼠建模成功。HG组大鼠脑梗死体积百分比、rT1值、rT2值、rPD值、IgG染色光密度、MMP-9染色光密度及MMP-9表达水平均高于NG组(P均<0.05),而ZO-1、Occludin及Claudin-5表达水平均低于NG组(P均<...     

紧密连接蛋白Occludin在早孕绒毛组织中的表达及其意义☆

背景:Occludin蛋白是否在人早孕期胚泡植入中发挥作用,目前尚不能确定.目的:探讨紧密连接蛋白Occludin在早孕绒毛组织中的表达及意义.方法:早孕的正常人流绒毛组织和稽留流产绒毛组织各30例,用半定量RT-PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证紧密连接蛋白Occludin在各组绒毛组织中的表达.结果与结论:紧密连接蛋白Occludin主要表达在于绒毛外的合体滋养细胞的胞浆,胞核和少许间质,细胞滋养细胞Occludin表达低.半定量RT-PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证紧密连接蛋白Occludin在正常人流和稽留流产绒毛组织中均有表达,前者的表达低于后者,但差异无显著性意义(P>0.05).说明紧密连接蛋白Occludin在绒毛组织有表达,细胞滋养细胞Occludin低表达可能是细胞滋养细胞极性消失的原因之一,参与细胞滋养细胞浸润能力形成,但胚胎发育停滞并不单是细胞滋养细胞侵润能力不足引起.     

化瘀涤痰汤对急性硬膜下血肿模型大鼠脑组织中HIF-1α和Claudin-5蛋白表达的影响

目的:探讨化瘀涤痰汤对急性硬膜下血肿大鼠脑组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和紧密连接蛋白5(Claudin-5)蛋白表达的影响。方法:复制急性硬膜下血肿大鼠模型,造模成功后将大鼠分为:假手术组、模型组、化瘀涤痰汤高剂量组(HG组)、化瘀涤痰汤中剂量组(HZ组)、化瘀涤痰汤低剂量组(HD组)、天丹通络胶囊阳性组(TD组),每组10只大鼠,每日给药1次,持续给药14天后处死取脑组织,免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠血肿侧脑组织中HIF-1α和Claudin-5的蛋白表达量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠注血侧脑组织中HIF-1α蛋白表达量上调(P0.01),Claudin-5的蛋白表达量显著降低(P0.05),与模型组比较,HG、HZ、HD组和TD组HIF-1α的表达均显著下调(P0.05,P0.01),HG组和TD组大鼠脑组织中Claudin-5表达均升高(P0.01)。结论:化瘀涤痰汤降低急性硬膜下血肿大鼠脑组织中HIF-1α蛋白表达并增加Claudin-5蛋白的表达。     

痉挛型瘫痪大鼠骨骼肌肌球蛋白重链亚型的蛋白表达研究

目的:探讨痉挛型瘫痪大鼠骨骼肌肌球蛋白重链亚型的蛋白水平。方法:将50只5d龄新生Sprague-Dawley大鼠随机分成假手术组和模型组,每组25只。建模后大鼠20日龄时,HE染色观察锥体束病理损伤情况,Western blotting检测瘫痪侧比目鱼肌和腓肠肌中MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱb蛋白的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠患侧肢体屈曲痉挛、走路缓慢、跛行,HE染色显示仅锥体束处出现细胞坏死、核固缩;模型组比目鱼肌MHC-Ⅰ蛋白表达(3.78±0.32)显著高于假手术组(0.24±0.11),P0.001;模型组腓肠肌MHC-Ⅰ蛋白表达(3.68±0.28)显著高于假手术组(2.34±0.26),P0.001;模型组比目鱼肌MHC-Ⅱb蛋白表达(0.34±0.16)显著低于假手术组(0.77±0.21),P0.001;模型组腓肠肌MHC-Ⅱb蛋白表达(0.32±0.18)显著低于假手术组(0.78±0.22),P0.001。结论:痉挛状态下大鼠骨骼肌肌球蛋白重链亚型MHC-Ⅰ蛋白高表达、MHC-Ⅱb蛋白低表达。