小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体放射配基受体结合分析方法

目的　建立简便、快速的小鼠腹腔巨噬细胞PAF放射配基受体结合分析法 ,考察巨噬细胞表面PAF受体的特性。方法　以♂C5 7BL/ 6小鼠腹腔巨噬细胞为受体材料 ,[3 H] PAF为标记配基 ,非膜过滤法进行结合放射配基分离 ,液闪计数测定。结果　小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体结合符合简单单位点受体结合模型 ,Scatchard分析求出的PAF受体结合参数Bmax=10 0 2fmol·1× 10 6cells-1,KD=3 2nmol·L-1。 [3 H] PAF与小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体的结合呈现单一、饱和特点 ,并可被特异性PAF受体拮抗剂BN5 2 0 2 1竞争性抑制。结论　利用小鼠腹腔巨噬细胞贴壁特性 ,采用非滤过法处理细胞 ,能够在保持受体生理学活性的状态下 ,用于特异性PAF受体拮抗剂的筛选     

北京鸭红细胞膜β肾上腺素受体放射配基结合测定法

本文以[~3H]dihydroalprenolol([~3H]DHA)为放射配基。对北京鸭红细胞(RBC)膜β受体进行了系统研究。结果表明,[~3H]DHA与北京鸭RBC结合具有饱和性,肾上腺素能激动剂与[~3H]DHA竞争结合的强弱顺序与它们的生物活性一致,提示结合有结构特异性和立体特异性,[~3H]DHA与鸭RBC结合迅速、可逆。可见北京鸭RBC膜存在β受体,用于放射配基结合测定有取材方便,受体较丰富,膜蛋白得率高,[~3H]DHA非特异结合低和易于保存等优点,可以代替火鸡RBC。     

放射受体结合实验(RRA)的基本方法

放射受体实验(RRA)的方法学选择合适的标记配体标记配体应该具有非标记配体同样的化学性质,即同位素标记并不改变对受体的专一性.其次,为了保证最大灵敏度和减少非专一结合,标记配体必须具有高比活性.非专一结合是指标记配体与非受体部位的不可逆结合.     

G蛋白连接受体的三维模拟

G 蛋白连接受体包括毒蕈碱受体和β-肾上腺素受体越来越引起人们研究的兴趣。它们的 X 射线结晶学方面的性质尚未获得,但从其它一些膜受体的衍射数据可提供 G 蛋白家族的有关信息。综合这些信息及对克隆产生受体的氨基酸序列分析,可获得这些蛋白的三维模型,从而能确认配基结合及 G 蛋白连接区域,具有实际意义。     

大鼠胃壁细胞胃泌素受体的放射配基结合法

目的　建立大鼠胃壁细胞胃泌素受体放射配基结合实验方法。方法　以12 5I [Leu15] gastrin17 I为标记配基 ,以大鼠胃壁细胞悬液为受体制备 ,反应体系总体积为 2 0 0 μl,37℃恒温水浴振荡孵育 30min ,以 49型玻璃纤维滤膜分离结合和游离配基。结果　胃泌素受体结合符合简单单位点结合模型 ,Scatchard作图求出胃泌素受体结合参数Bmax=4 46 0 4× 10 -12 mol·L-1,Kd=1 2 49× 10 -10 mol·L-1。单点法求出特异结合位点数 70 3 2sites·cell-1。细胞浓度在0 2 5× 10 9～ 2× 10 9cells·L-1范围内 ,与标记配基特异性结合容量成正比。同一样品特异结合测定方法变异系数为7 0 4%。竞争抑制实验证明12 5I Gastin与大鼠胃壁细胞结合特异性良好。结论　大鼠胃壁细胞胃泌素受体的放射配基结合实验方法符合受体结合实验方法学要求     

Molecular modeling of μ opioid receptor and receptor-ligand interaction

目的：构建μ阿片受体（μＯＲ）的三维结构模型并研究它与芬太尼衍生物的相互作用．方法：以细菌视紫红质为模板，模拟μＯＲ的三维结构；然后，将芬太尼衍生物对接到μＯＲ的七个α螺旋束之内，并计算结合能．结果：（１）得到受体－配基作用模型．（２）模型中，基本结合位点可能是Ａｓｐ１４７和Ｈｉｓ２９７．Ａｓｐ１４７与配基的正电性铵基形成强的静电和氢键相互作用，这种作用在Ｈｉｓ２９７和配基的羰基Ｏ原子之间较弱．受体、配基间还存在某些π－π相互作用．（３）受体配基结合能与芬太尼衍生物的镇痛活性间有良好的相关性．结论：模型有助于理解受体配基的相互作用和设计新的阿片μ选择性配基．     

甲状腺激素对小鼠脑β-肾上腺素能受体的影响

甲状腺激素可通过调节外周组织β受体的数量,从而影响交感神经的活动。为证实甲状腺激素对中枢神经系统的影响是否也与β受体的变化有关,我们用注射T_3的方法使小鼠体内甲状腺激素增高(甲高),用放射配基结合分析法测定甲高小鼠脑β受体最大结合容量(B_(max))和亲和力(KD)的变化,并以滋阴药进行实验性治疗。结果表明:甲高小鼠脑组织β受体B_(max)较对照组显著增加(P<0.001),KD无明显变化。滋阴药生地可使甲高时升高的β受体结合位点数下降(P<0.001)。     

M 受体配基结合位点与其细胞外氨基末端的多肽有关

目的：探讨Ｍ受体配基结合位点的分子特点。方法：人工合成ｍ１和ｍ２胆碱受体蛋白在细胞外侧的一段多肽，联接蛋白ＫＬＨ后免疫家兔，制备出抗血清。经ＥＬＩＳＡ法，该抗血清具有效价高和特异性强的特点。观察该抗体对Ｍ受体配基结合位点的影响。结果：特异抗体可影响３Ｈ－ＱＮＢ与Ｍ受体的结合。结论：Ｍ受体的配基结合位点与其细胞外氨基末端的氨基酸序列有关。人工抗原制备高效价特异性Ｍ受体亚型抗体对进一步了解药物与Ｍ受体相互作用的分子机制以及建立新型Ｍ受体的检测方法均有重要意义。     

盐酸小檗碱对毒蕈碱型受体的作用

目的：研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱系统的影响。 方法：采用离体血管环、离体支气管螺旋体及放射配基-受体结合实验等方法。结果：较低浓度的盐酸小檗碱（Ber）对乙酰胆碱的舒张反应有浓度依赖性的增强作用;而较高浓度的Ber可浓度依赖性地直接舒张带内皮的动脉环,此作用在去内皮或阻断M-受体后被完全抑制。在豚鼠离体气管条上,Ber可引起浓度依赖性的收缩反应,而阿托品可阻断这种作用。放射配基-受体结合实验显示盐酸小檗碱可特异性与大鼠脑组织的毒蕈碱受体结合,Ki值为1.6 μmol.L^-1。结论：盐酸小檗碱可激动毒蕈碱受体,从而引起血管的内皮依赖性的舒张反应及支气管的收缩。     

特非那丁对豚鼠肺组织β—受体向下调节影响的实验研究

应用放射配基结合分析法，分别测定了空白对照、沙丁胺醇（沙）、特非那丁（特）以及沙丁胺醇＋特非那丁（沙＋特）组豚鼠肺组织中β肾上腺素受体的βmax和Kd结果显示：（1）沙和特皆分别使β受体发生明显的向下调节。（2）沙＋特组β受体亲和力升高，并加剧受体向下调节，使其明显受抑。