卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的水平分析及临床意义

目的 探讨卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的表达水平,分析3者与卵巢癌临床病理特征的关系。方法 收集本院确诊的65例卵巢癌患者经手术切除的上皮性卵巢癌组织标本（卵巢癌组）,采用实时定量RT-PCR（qRT-PCR）法检测miR-29c、miR-133b及miR-1水平,收集对应卵巢癌患者的临床病理参数（年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移）,同时选取32例正常卵巢上皮组织（正常组）和39例良性卵巢上皮囊肿组织（良性组）作对照,以正常组的各指标均数为界值,将卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平分为高水平组（＞正常组）和低水平组（≤正常组）,比较miR-29c、miR-133b及miR-1不同表达水平与卵巢癌临床病理参数的关系,同时分析卵巢癌组织中3者水平的关系。结果 卵巢癌组miR-29c水平高于正常组和良性组,而miR-133b和miR-1水平均低于正常组和良性组,差异有统计学意义（P＜0.05）;卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平均与分化程度有关,miR-29c水平与临床分期及淋巴结转移有关,而miR-133b亦与淋巴结转移有关,差异均有统计学意义（P＜0.05）;卵巢癌miR-29c水平与miR-133b和miR-1均呈负相关（r=-0.541、-0.361）,miR-133b与miR-1呈正相关（r=0.447）,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 卵巢癌患者组织中miR-29c呈高表达,miR-133b及miR-1呈低表达,与临床病理学特征有关,且在卵巢癌诊断中有一定的价值,可用于辅助卵巢癌的诊断和病情评估。     

高危人乳头状瘤病毒感染宫颈癌患者miR-34a-5p表达及意义

摘 要：［目的］ 探讨高危人乳头状瘤病毒（high risk human papillomavirus，HR-HPV）感染宫颈癌患者组织及血清miR-34a-5p的表达以及血清miR-34a-5p对宫颈癌的诊断价值。［方法］ 采用RT-PCR检测70例HR-HPV阳性宫颈癌组织和癌旁组织、100例HR-HPV阳性宫颈癌患者血清、80例HR-HPV阳性宫颈上皮内瘤病变(CIN)患者血清、80例健康体检者血清中miR-34a-5p的表达水平。Pearson法分析组织和血清中miR-34a-5p表达量的相关性，分析miR-34a-5p与宫颈癌临床病理特征的关系，分析血清miR-34a-5p诊断宫颈癌的价值。［结果］ 宫颈癌组织miR-34a-5p相对表达量明显低于癌旁组织（P＜0.05）。宫颈癌患者血清miR-34a-5p相对表达量明显低于CIN患者和正常人（P＜0.05），CIN患者血清miR-34a-5p相对表达量明显低于正常人（P＜0.05）。癌组织miR-34a-5p相对表达量与淋巴结转移有关(P<0.05)。血清miR-34a-5p相对表达量与淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05)。miR-34a-5p在癌组织与血清中的相对表达量呈正相关（r=0.459，P＜0.05）。血清miR-34a-5p诊断宫颈癌的ROC曲线下面积为0.860（95%CI：0.803~0.917）。［结论］ HR-HPV宫颈癌患者血清miR-34a-5p下调，与癌组织miR-34a-5p表达呈正相关，有望成为宫颈癌诊断的分子标志物。     

miR-133a-3p在胃癌组织和血浆中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

[摘要] 目的：检测miR-133a-3p 在胃癌组织及患者血浆中的表达水平及其对胃癌细胞增殖的影响,并探讨其与患者预后的关系。方法：收集河北医科大学第四医院普外科2012 年5 月至2013 年5 月胃癌手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本52例,每例组织标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织。采用实时荧光定量RT-PCR（RT-qPCR）法检测miR-133a-3p 在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康体检者血浆（35 例）的表达情况,分析miR-133a-3p 的表达水平与胃癌患者中位DFS及临床病理特征的关系。CCK-8 法检测过表达或沉默miR-133a-3p 对胃癌SGC7901 细胞增殖的影响。结果：miR-133a-3p 在胃癌组织中的表达明显降低（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤侵润深度（T）、淋巴结转移（N）及脉管瘤栓相关（P<0.01）;在胃癌患者血浆中的表达明显升高（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移（N）及脉管瘤栓相关（P<0.05）;与患者血清中CA199的表达水平正相关（P<0.01）。胃癌组织中miR-133a-3p 高表达组患者中位DFS 明显高于低表达组（20.8 vs 14.8 个月,P<0.05）。血浆中miR-133a-3p 的高表达组患者中位DFS明显低于低表达组（14.4 vs 20.3 个月,P<0.05）。过表达miR-133a-3p 可明显抑制SGC7901 细胞的增殖能力,同样沉默其表达可明显促进SGC701 细胞的增殖能力（均P<0.05）。结论：miR-133a-3p 可明显抑制胃癌细胞SGC7901 的增殖能力,在胃癌组织和血浆中存在明显异常表达,其表达与患者预后明显相关,可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物。     

血清miR-29a-5p和miR-222的表达与肝癌的诊断和预后的关系

目的：研究血清中miR-29a-5p和miR-222表达与肝细胞肝癌（HCC）的诊断价值和预后的关系.方法：采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）对比检测76例HCC患者、62例肝良性疾病患者和60例健康对照组血清中miR-29a-5p和miR-222水平.分析miR-29a-5p和miR-222的表达与患者临床病理参数以及肝癌切除术预后的关系.结果：HCC患者血清miR-29a-5p和miR-222表达明显高于良性肝病和正常对照组（P＜0.05）,与AFP、肿瘤大小、癌栓、病理分化、TNM分级有关（P＜0.05）.HCC患者中miR-29a-5p和miR-222低表达组的复发转移率显著低于高表达组,其术后生存率也显著高于高表达组（P＜0.05）.结论：血清miR-29a-5p和miR-222与HCC的临床病理特征密切相关,不仅是潜在的HCC早期检测指标,且miR-29a-5p和miR-222在HCC患者血清中表达上调与HCC复发转移率高及预后差密切相关,提示其也可能是判断HCC手术预后的分子标志物.     

MiR-132、miR-143、miR-638、AFP在104例乙肝相关肝癌中的表达分析

摘 要：［目的］ 探讨miR-132、miR-143、miR-638、AFP在乙肝相关肝癌中的表达及相关性。［方法］ 选取乙肝相关肝癌患者104例,取患者手术切除的癌组织及癌旁组织标本进行免疫组化染色,实时荧光定量PCR法检测miR-132、miR-143、miR-638表达,酶联免疫吸附实验法检测AFP水平。［结果］ 与癌旁组织比较,乙肝相关肝癌癌组织中miR-132、miR-638表达较低,miR-143、AFP表达水平较高（P<0.05）。与无淋巴结转移患者相比,有淋巴结转移患者miR-132、miR-638表达水平较低,miR-143、AFP表达水平较高（P<0.05）。与Ⅰ、Ⅱ期患者相比,Ⅲ、Ⅳ期患者miR-132、miR-638表达水平较低,miR-143、AFP表达水平较高（P＜0.05）。与高分化患者相比,中分化患者miR-132、miR-638表达水平较低,miR-143、AFP表达水平较高（P<0.05）;与中分化患者相比,低分化患者miR-132、miR-638表达较低,miR-143、AFP表达水平较高（P＜0.05）。乙肝相关肝癌患者miR-132与miR-638表达呈正相关,miR-132表达与miR-143、AFP表达呈负相关;miR-638表达与miR-143、AFP表达呈负相关;miR-143与AFP表达呈正相关。［结论］ MiR-132、miR-143、miR-638、AFP在乙肝相关肝癌组织中表达水平明显异常,可能共同参与乙肝相关肝癌的发生发展。     

结直肠癌中医辨证分型与miR-29、miR-34a表达的相关性分析

目的:探究结直肠癌患者血清miR-29、miR-34a表达水平及其与中医辨证分型的相关性。方法:选取2014年06月至2015年06月本院收治的127例结直肠癌患者作为研究对象（结直肠癌组）,并根据中医辨证分型标准分为湿热内蕴型21例、气滞血瘀型40例、脾肾阳虚型29例、气血两虚型18例、肝肾阴虚型19例;另选取同期在本院体检的127例健康者作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测血清miR-29、miR-34a表达水平,并进行比较;采用Pearson法分析血清miR-29与miR-34a表达水平的相关性;采用Logistic回归模型分析影响结直肠癌患者不良预后发生的危险因素。结果:结直肠癌组患者血清miR-29、miR-34a表达水平均明显低于健康对照组（P＜0.05）。低分化、浸润程度T3-T4、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移患者血清miR-29、miR-34a表达水平明显低于高中分化、浸润程度T1-T2、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期、无淋巴结转移、无远处转移患者（P＜0.05）。结直肠癌患者血清miR-29与miR-34a表达水平呈正相关（r=0.529,P=0.000）。低分化、浸润程度T3-T4、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、淋巴结转移、低miR-29水平、低miR-34a水平是影响结直肠癌患者不良预后发生的危险因素（P＜0.05）。脾肾阳虚型、气滞血瘀型、湿热内蕴型预后不良患者比例依次明显增加（P＜0.05）。肝肾阴虚型、气血两虚型、脾肾阳虚型、气滞血瘀型、湿热内蕴型结直肠癌患者血清miR-34a表达水平依次显著降低（P＜0.05）,miR-29表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:结直肠癌患者血清中miR-29、miR-34a低表达,与肿瘤分期升高、分化程度降低、浸润程度增加、淋巴结转移、远处转移、不良预后等密切相关,且miR-34a对结直肠癌不同中医辨证分型有一定的分型参考意义。     

肝细胞癌患者外周血中miR-30a、miR-106b的表达及其与预后的关系

目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者血清miR-30a、miR-106b的表达及其与 预后的关系。方法:选取2015年6月-2017年2月本院收治的HCC患者80例为研究对象,20例同期健康人群作为对照组。荧光定量PCR检测外周血中miR-30a、miR-106b的表达水平,分析患者血清miR-30a、miR-106b水平与HCC临床病理的关系。分析HCC患者预后的影响因素以及血清miR-30a、miR-106b水平与HCC患者预后的相关性。结果:HCC患者血清miR-30a表达水平（1.03±0.02）低于正常人群（5.15±0.06）（P=0.00）;血清miR-106b表达水平（2.62±0.35）高于正常人群（1.15±0.06）（P=0.00）。miR-30a、miR-106b表达与患者肿瘤直径、组织分化类程度、肝内转移、淋巴结转移、甲胎蛋白（AFP）水平、门静脉癌栓、肿瘤数目及TNM分期有显著相关性(P＜0.05) 。miR-30a低表达组患者3年总生存率（39.8%）低于miR-30a高表达组（64.6%）（P=0.002）;miR-106b低表达组患者3年总生存率（75.8%）高于miR-106b高表达组（51.2%）（P=0.003）。二元Logistic回归分析提示,淋巴结转移、TNM分期、miR-106b及miR-30a水平是患者预后的重要影响因素。结论:miR-30a在HCC患者血清中低表达,miR-106b在HCC患者血清中高表达,与肿瘤的进展、预后不良有关。     

miR-125a-5p通过靶向STAT3 抑制肾癌细胞增殖和侵袭及其可能机制

目的：探究miR-125a-5p 靶向STAT3 对肾癌细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其作用机制。方法：选取2017 年3月至2018 年2 月于北部战区空军医院泌尿外科接受肾癌手术治疗的癌组织及配对的癌旁组织灶边缘（距癌缘>3 cm）标本各48例,体外培养正常肾细胞HK-2、和肾癌细胞A498、GRC-1、786-O及ACHN,采用qPCR 检测组织和细胞中miR-125a-5p 的表达。分别将miR-125a-5p-NC、miR-125a-5p-mimics、pLV-STAT3 及pLV-STAT3+miR-125a-5p mimics 转染A498 细胞作为NC组（阴性对照组）、miR-125a-5p-mimics 组、pLV-STAT3 组及pLV-STAT3+mimics 组,另外以正常培养A498 细胞作为空白对照组（Control,Ctrl）,采用qPCR检测各组细胞中miR-125a-5p、信号转导和转录激活因子3（STAT3）mRNA的表达。应用生物信息学预测软件和双荧光素酶法分析miR-125a-5p 与STAT3 的靶向关系;采用CCK-8 检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞侵袭能力;WB检测细胞中STAT3、B 细胞淋巴瘤/白血病-2 蛋白(Bcl-2)、B 细胞淋巴瘤/白血病-2 相关X 蛋白(BAX)、活化半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3 蛋白（cl-caspase-3）、抑癌基因p21、神经钙黏素（N-cadherin）、钙黏蛋白（E-cadherin）、血管内皮生长因子（VEGF）及缺氧诱导因子-1（HIF-1）的表达。结果：miR-125a-5p 在肾癌组织和细胞中表达显著低于癌旁组织和正常肾细胞（均P<0.05）;相较于NC组,转染miR-125a-5p-mimics 后A498 细胞中miR-125a-5p 的表达显著上升、STAT3mRNA的表达显著下降（均P<0.01）。实验证实STAT3 为miR-125a-5p 的靶基因。与NC组相比,miR-125a-5pmimics 组细胞增殖活性、侵袭细胞数及Bcl-2、N-cadherin、VEGF、HIF-1、STAT3 及其磷酸化水平均显著下降（均P<0.05）,凋亡率及BAX、p21、cl-caspase-3 及E-cadherin 表达显著上升（均P<0.05）;pLV-STAT3 组细胞增殖活性、侵袭细胞数及Bcl-2、N-cadherin、VEGF、HIF-1、STAT3 及其磷酸化水平显著上升（均P<0.05）,凋亡率及BAX、p21、cl-caspase-3、E-cadherin 表达显著下降（均P<0.05）。与pLVSTAT3组相比,pLV-STAT3 mimics 组细胞增殖活性、侵袭细胞数、Bcl-2、N-cadherin、VEGF、HIF-1、STAT3 及其磷酸化水平显著下降（均P<0.05）,凋亡率、BAX、p21、cl-caspase-3 及E-cadherin 表达显著上升（均P<0.05）。结论：miR-125a-5p 在肾癌组织和细胞中呈低表达,可通过下调其靶基因STAT3 抑制A498 细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡。     

结肠癌患者血清中miR-30a、miR-106b的表达及其临床意义

目的:探讨结肠癌患者血清miR-30a、miR-106b的表达及其在结肠癌进展及预测患者预后中的价值。方法:选取2012年06月至2013年02月本院收治的接受结肠癌手术治疗的患者80例为研究对象,20例同期健康人群作为对照组。逆转录 PCR法检测外周血血清中 miR-30a、miR-106b的表达水平,分析患者血清miR-30a、miR-106b表达与结肠癌临床病理及预后的关系。Spearman分析miR-30a、miR-106b表达的相关性。采用多因素logistic回归模型对结肠癌患者的预后影响因素进行分析,采用Kaplan-Meier生存分析miR-30a低表达组、miR-30a高表达组,miR-106b低表达组、miR-106b高表达组患者中位生存时间。结果:结肠癌患者血清miR-30a表达水平（1.03±0.02）低于正常人群（5.15±0.06）,差异具有统计学意义（t=16.38,P=0.01）;结肠癌患者血清miR-106b表达水平（2.62±0.35）高于正常人群（1.15±0.06）,差异具有统计学意义（t=10.17,P=0.03）。miR-30a、miR-106b表达与患者的组织分化类型、浆膜侵犯、淋巴结转移、远处转移、TNM分期有显著相关性(P＜0.05)。多因素logistic回归模型对结肠癌患者预后影响因素进行分析,TNM分期（Ⅲ+Ⅳ）、miR-106b高表达及miR-30a低表达是结肠癌患者预后不良的危险因素。miR-30a低表达组患者总体生存时间（55.3±4.1）个月低于miR-30a高表达组（76.4±2.4）个月（P=0.000）;miR-106b低表达组患者的总体生存时间（75.1±7.3）个月高于miR-106b高表达组（51.8±3.1）个月（P=0.000）。结论:miR-30a在结肠癌患者血清中低表达,miR-106b在结肠癌患者血清中高表达,二者的表达与肿瘤的进展、预后不良有关。     

非小细胞肺癌组织中miR-92a、miR-196b表达水平及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中微小核糖核酸-92a(miR-92a)、微小核糖核酸-196b(miR-196b)表达水平及其临床意义。方法以经手术治疗的120例NSCLC患者作为研究对象,根据随访期间患者复发转移情况将患者分为出现复发或转移的预后不良组(62例)和未出现复发和转移的预后良好组(58例),临床资料、癌组织标本和随访2年的资料进行NSCLC患者预后不良的单因素、多因素Logisitic回归分析以及ROC曲线分析,探讨癌组织中miR-92a、miR-196b的表达水平、相关性及其与预后的关系。结果经实时定量RT-PCR检测,预后不良组癌组织中miR-92a、miR-196b的相对表达量明显高于预后良好组(P<0.05),且miR-92a与miR-196b的表达存在明显的正相关性(P<0.05);单因素分析结果显示,两组在肿瘤TNM分期、术前淋巴结转移、癌组织miR-92a表达和癌组织miR-196b表达方面存在明显差异(P<0.05);多因素回归分析结果显示,TNM分期为Ⅲ期~Ⅳ期、术前有淋巴结转移、癌组织miR-92a≥3.0和癌组织miR-196b≥3.3是NSCLC患者出现预后不良的独立预测因素;ROC曲线分析结果显示,癌组织中miR-92a、miR-196b表达量单独预测NSCLC患者预后不良的ROC曲线下面积分别为0.718和0.736,均低于两指标联合预测的ROC曲线下面积0.804(P<0.05)。结论miR-92a、miR-196b在NSCLC预后不良患者癌组织中呈高表达,并互为正相关性;两者联合检测对于临床上预测NSCLC患者预后具有较好的应用价值,可作为预测NSCCL患者术后不良预后的分子标志物。     

吉非替尼获得性耐药非小细胞肺癌患者miR-21、miR-155表达水平及临床意义

目的探讨吉非替尼获得性耐药非小细胞肺癌患者miR-21、miR-155表达水平及临床意义。方法选取接受吉非替尼治疗出现耐药的80例晚期NSCLC患者作为研究组,另选取60例吉非替尼治疗效果良好、6个月以上病情无进展NSCLC患者为对照组。采用RT-PCR检测患者组织及血清中miR-21、miR-155表达水平;采用免疫组织化学法检测肺癌组织中EGFR的表达;采用Kaplan-Meier生存曲线比较患者3年内生存情况。结果研究组血清、组织中miR-21水平及血清miR-155水平明显高于对照组(P<0.001),但组织中miR-155水平与对照组相比无统计学差异(P>0.05);EGFR低表达患者血清、组织中miR-21及血清miR-155水平明显高于EGFR高表达患者(P<0.05),而组织中miR-155水平无统计学差异(P>0.05)。生存曲线结果显示血清中miR-21、miR-155高表达患者生存率明显低于低表达患者(χ^(2)=14.179,P<0.001;χ^(2)=18.338,P<0.001);组织中miR-21高表达患者生存率明显低于低表达患者(χ^(2)=12.195,P<0.001),但miR-155高表达患者生存率较低表达患者无统计学差异(χ^(2)=1.162,P>0.05)。结论吉非替尼获得性耐药NSCLC患者血清及组织中miR-21、miR-155水平与患者组织中EGFR水平及预后相关,可能在吉非替尼获得性耐药中发挥作用。     

血清miR-375、miR-155与原发性肝癌临床分期及预后的关系

目的 探讨原发性肝癌患者血清miR-375、miR-155与其临床分期及预后的关系。方法 回顾性分析86例原发性肝癌患者资料,比较不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平,应用Spearman相关系数分析相关性;将患者以肝外转移分成转移组、非转移组,比较两组患者血清miR-375、miR-155差异,应用受试者曲线(ROC)分析两者诊断临床分期效能;随访1年内生存情况,应用Kaplan-Meier法、COX比例风险模型进行生存分析。结果 不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375表达水平与肿瘤临床分期呈负相关(P<0.05),miR-155表达水平与临床分期呈正相关(P<0.05);转移组血清miR-375表达水平低于非转移组,miR-155表达水平高于非转移组,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375、miR-155及联合诊断肿瘤转移的AUC分为0.898、0.847、0.941;miR-375高表达患者平均生存时间均长于miR-375低表达患者,miR-15...     

血清中miR-29a和miR-92a在结直肠癌诊断和预后判断中的价值

目的探讨血清微小RNA（miR-29a和miR-92a）在结直肠癌（CRC）诊断和预后判断中的价值。方法选取无转移的结直肠癌患者50例和存在肝转移的患者48例,同时募集50名健康志愿者为对照组,按类似的年龄和性别相匹配的队列组合。应用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测微小RNA（miR-29a和miR-92a）水平,判断该血清微小RNA在结直肠癌早期诊断和预后判断中的价值。结果结直肠癌患者血清中miR-29a和miR-92a水平均显著高于健康对照者（P〈0.01）;血清miR-29a和miR-92a分别进行结直肠癌诊断时的灵敏度为71.4%和75.3%,特异度为84.0%和88.3%;结直肠癌肝转移患者血清中miR-29a和miR-92a水平均显著高于未转移的CRC患者（P〈0.05）;miR-29a和miR-92a分别鉴别转移性与非转移性CRC患者的敏感性为79.4%和78.6%,特异性为85.3%和86.6%。结论 miR-29a和miR-92a可能是新的非侵入性指标用于结直肠癌患者的早期诊断,血清中miR-29a和miR-92a水平升高与结直肠癌患者预后有关,miR-29a和miR-92a有望成为结直肠癌筛查和早期诊断和预后判断的指标。     

lncRNAHOXA-AS2靶向miR-520a-3p调控卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探究长链非编码RNA HOXA-AS2（lncRNA HOXA-AS2）与微小RNA-520a-3p（miR-520a-3p）之间的靶向关系及其对卵巢癌SKOV3 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：qPCR检测lncRNA HOXA-AS2 与miR-520a-3p 在多种卵巢癌细胞（SKOV3、HO8910、OVCAR3 细胞）及正常卵巢上皮细胞HOSE中的表达水平。生物信息学手段预测HOXA-AS2 与miR-520a-3p之间的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。将si-HOXA-AS2、miR-520a-3p mimic、anti-miR-520a-3p 和相应对照片段分别或共转染SKOV3 细胞，MTT、Transwell 和Western blotting 法分别检测各组SKOV3 细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白（CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14）表达情况。结果：与HOSE细胞相比，多种卵巢癌细胞中HOXA-AS2 均呈高表达（均P<0.05）、miR-520a-3p 均呈低表达（均P<0.05）；HOXA-AS2 可靶向下调miR-520a-3p 的表达。si-HOXA-AS2 和miR-520a-3p mimics 组SKOV3 细胞的增殖、迁移及侵袭能力均较对照组均显著降低（ 均P<0.01），且p21、p27 蛋白表达显著升高，而CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14 蛋白表达显著减少（均P<0.01）；si-HOXA-AS2+anti-miR-520a-3p 组SKOV3 细胞增殖、迁移及侵袭能力较si-HOXA-AS2 和si-HOXA-AS2+anti-miR-NC 组显著增强（均P<0.05）。结论：lncRNA HOXA-AS2 通过靶向抑制miR-520a-3p表达进而增强卵巢癌SKOV3 细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭

背景与目的：生物信息学分析提示GATA6是miR-203a-3p的潜在靶基因，明确miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭。方法：采用Lipofectamine ^TM RNAiMAX对培养的KYSE-70和KYSE-180细胞瞬时转染。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测miR-203a-3p和GATA6的表达水平。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测GATA6蛋白的水平。质粒联合转染后检测相对萤光素酶活性。对食管鳞癌患者标本进行恶性肿瘤与异型增生组织miR-203a-3p和GATA6的表达检测。结果：RTFQ-PCR及Western blot检测结果显示，与对照组比较，GATA6基因和蛋白的表达在miR-203a-3p转染组中降低，在miR-203a-3p inhibitor组却升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，miR-203a-3p转染组KYSE-70细胞增殖能力下降，miR-203a-3p inhibitor组中却升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。在KYSE-180中虽然差异无统计学意义，但其趋势却与KYSE-70一致。与对照组比较，在KYSE-70和KYSE-180细胞系中，侵袭细胞数值/视野在miR-203a-3p转染组中均明显下降（P<0.01），在miR-203a-3p inhibitor组中却明显升高（P<0.05）。与miR-203a-3p掠夺型+GATA6野生型组和miR-203a-3p野生型+GATA6突变型组比较，相对萤光素酶活性在miR-203a-3p野生型+GATA6野生型组中降低，差异有统计学意义（P<0.05）。与异型增生组织相比较，100%（10/10）食管鳞癌患者miR-203a-3p在恶性肿瘤组织的表达下调，而GATA6表达水平上调。结论：miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭能力。     

lncRNA BLACAT1靶向结合miR-29a-3p调控甲状腺癌细胞TPC-1的生物学行为

目的:探讨长链非编码RNA BLACAT1(lncRNA BLACAT1)调控microRNA-29a-3p（miR-29a-3p）对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能机制。方法:收集2018年06月至2019年03月在我院行甲状腺癌切除术的31例患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p在甲状腺癌组织、癌旁组织、5种甲状腺癌细胞系（SW579、 PDTC-1、 HMGA1、 TPC-1、 KAT-5）及正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平;调控TPC-1甲状腺癌细胞系中lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p的表达,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。用生物信息分析和双荧光素酶报告基因法预测和验证lncRNA BLACAT1与miR-29a-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织和正常甲状腺细胞相比,甲状腺癌组织和细胞系中lncRNA BLACAT1的表达水平显著上调,miR-29a-3p的表达水平显著下调（P＜0.05）;过表达lncRNA BLACAT1促进TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭;在甲状腺癌组织中lncRNA BLACAT1的表达水平与miR-29a-3p的表达水平呈负相关（r2 =0.492,P＜0.001）;双荧光素酶分析证实lncRNA BLACAT1能特异性结合miR-29a-3p,并能降低其表达;过表达miR-29a-3p抑制TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,且miR-29a-3p可以抑制由lncRNA BLACAT1过表达引起的TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的增强。结论:lncRNA BLACAT1通过靶向调控miR-29a-3p表达影响甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,从而促进甲状腺癌的发展。     

miR-21和PTEN在食管癌中的表达及其与放疗敏感性和预后的关系

目的:探讨miR-21和PTEN在食管癌中的表达及其与放疗敏感性和预后的关系。方法:采集放疗的57例食管癌组织和癌旁组织,采用RT-PCR和Western blot检测miR-21、PTEN的表达水平,分析miR-21和PTEN的相关性及其表达与临床病理特征的关系,分别观察miR-21、PTEN表达与患者预后的关系。结果:癌组织中miR-21表达显著高于癌旁组织,PTEN表达显著低于癌旁组织。癌组织中miR-21表达与PTEN表达呈负相关（r=-0.813,P=0.000）。57例患者中完全缓解20例,部分缓解32例,无效5例,总有效率为91.23％。完全缓解者miR-21表达显著低于部分缓解和无效者（P＜0.05）,部分缓解者miR-21表达显著低于无效者（P＜0.05）;完全缓解者PTEN表达显著高于部分缓解和无效者（P＜0.05）。miR-21表达与患者淋巴结转移、病变长度和浸润深度有关,PTEN表达与患者淋巴结转移、肿瘤分化程度和浸润深度有关。 57例患者3年总生存率为49.12％,miR-21低表达组3年生存率（61.76％）显著高于高表达组（30.43％）（P＜0.05）;PTEN低表达组3年生存率（29.63％）显著低于高表达组（66.67％）（P＜0.05）。结论:食管癌组织中miR-21和PTEN表达异常,二者呈负相关;前者低表达存活率高,后者恰恰相反,有望成为可监测患者放疗敏感性及预后的指标。     

miR-203a-3p 在胰腺癌组织与细胞中的表达及其对 BxPC-3 细胞增殖、 迁移和侵袭的影响

目的：探讨miR-203a-3p对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：运用癌症基因组图谱（TCGA） 数据库筛选胰腺癌组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,分析miRNA高表达与低表达时胰腺癌患者的生存率和临床分期;利用 TarBase数据库分析miRNA与癌症相关的GO功能与KEGG通路,利用DIANA Tools、miRDB和TargetScan网站预测miR-203a-3p 的靶基因。将miR-203a-3p mimic及NC mimic、miR-203a-3p inhibitor及NC inhibitor转染至BxPC-3细胞,用qPCR法检测胰腺癌 细胞和胰腺正常上皮细胞HPNE中miR-203a-3p、miR-192-5p和miR-451a表达水平,以CCK-8法、Transwell小室法和克隆形成实 验分别检测BxPC-3细胞的增殖、迁移、侵袭和集落形成能力。结果：通过TCGA数据库筛选出18个胰腺癌组织中差异表达的 miRNA,其中miR-203a-3p、miR-192-5p、miR-451a具有物种保守性 ,且其与胰腺癌临床癌症分期、细胞周期和患者生存率相 关（均P<0.05）;生物信息学网站预测显示miR-203a-3p的候选靶基因是PPM1A,PPM1A与多基因存在相互作用。miR-203a-3p、 miR-192-5p和miR-451a在BxPC-3和Aspc-1细胞中均高表达（均P<0.01）。miR-203a-3p mimic组BxPC-3细胞中miR-203a-3p表 达水平以及细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著提高（均P<0.01）：miR-203a-3p inhibitor组细胞中miR-203a-3p表达水平以及细胞 增殖、迁移和侵袭能力均显著降低（均P<0.01）。结论：miR-203a-3p在胰腺癌组织及细胞中均高表达,其表达与患者生存和临床 分期相关,可调控BxPC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

外泌体中circ_0044366调控肿瘤相关成纤维细胞MMP2的表达促进结直肠癌转移的机制研究

背景与目的：结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是全球癌症死亡的主要原因之一,大量研究发现,环状RNA（circular RNA,circRNA）作为miRNA分子海绵参与CRC细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等病理生理学过程,circRNA/miRNA/靶基因/靶蛋白轴可能是CRC发生的重要原因之一。探讨CRC细胞来源circ_0044366介导的细胞间通讯调控对CRC进展的影响及其作用机制。方法：选取2018年1月—2019年12月于天津医科大学肿瘤医院诊治的46例CRC患者血清样本为观察组,取同期收治的46例非癌症患者血清样本作为对照组;选取同期CRC手术切除（术前均未接受过放疗和化疗）的CRC患者的肿瘤组织标本和配对癌旁标本40对,利用测序筛选出CRC患者及非癌症人群血清差异表达的环状非编码RNA circ_0044366并预测miR-29b的靶基因。免疫组织化学染色法检测肿瘤组织与癌旁组织中基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证靶基因。采用蛋白质印迹法（Western blot）分别检测用SW480细胞外泌体（SW480 exosomes,480 exos）或circ_0044366敲低的SW480细胞外泌体（circ_0044366-deleteSW480 exosomes,480 exos circ_0044366 del）共培养及用miR-29b mimics/inhibitor/NC mimics/inhibitor转染的肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblast,CAF）的MMP2蛋白的表达水平。采用细胞功能回复实验分别检测同时转染过表达circ_0044366质粒与miR-29b mimics、同时转染降表达circ_0044366质粒与miR-29b inhibitor后MMP2蛋白的表达水平,验证circ_0044366与miR-29b之间的相互调控对MMP2表达的调控作用。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测MMP2 mRNA、circ_0044366和miR-29b的表达水平。建立体内转移模型：给BALB/c裸小鼠分别皮下注射SW480细胞悬液、稳定过表达circ_0044366（circ_0044366-overexpression,circ_0044366-OE）的SW480细胞及敲低circ_0044366（circ_0044366-knockdown,circ_0044366-KD）的SW480细胞悬液,与未移植瘤裸小鼠共计4组,验证circ_0044366对肿瘤迁移的影响。结果：与非癌症人群血清外泌体相比,在CRC血清外泌体中circ_0044366的表达水平与组织中MMP2蛋白的表达水平显著相关（P<0.05）。采用生物信息软件预测circ_0044366与miR-29b的作用靶点及MMP2 mRNA的3’非翻译区（3’-untranslated region,3’-UTR）miR-29b结合位点,通过荧光素酶报告基因实验证实靶点;通过转染上调miR-29b后MMP2蛋白表达明显下降,而下调miR-29b后MMP2蛋白表达明显升高;上调circ_0044366后MMP2蛋白表达明显升高,而下调circ_0044366后MMP2蛋白表达明显下降。细胞功能回复实验结果显示,同时上调或下调circ_0044366和miR-29b时MMP2蛋白表达水平变化不显著。体内实验显示,circ_0044366-KD组瘤体中circ_0044366含量及MMP2蛋白的表达水平降低,而circ_0044366-OE组瘤体中circ_0044366含量及MMP2蛋白的表达水平显著升高。结论：CRC外泌体中circ_0044366转运至CAF中,通过吸附miR-29b促进MMP2表达进而促进肿瘤转移。敲低CRC细胞中的circ_0044366有望通过调控miR-29b/MMP2轴来抑制CRC的侵袭和转移。     

miR-21的功能分析及其在结肠癌中的临床意义

目的:分析miR-21的功能及其在结肠癌中的临床意义。方法:采用miRWalk在线工具预测和筛选miR-21的靶基因,并使用DAVID分析靶基因的功能和信号通路;检测结肠癌患者和健康对照人群血清以及癌组织和癌旁组织标本的miR-21的表达水平;使用TCGA数据库中结肠癌的数据,分析miR-21表达水平与临床病理参数的关系以及与患者预后的关系。结果:共筛选出429个miR-21的靶基因,靶基因功能分析提示这些基因主要参与了正性调节代谢过程、蛋白结合等。结肠癌患者血清miR-21表达水平显著高于健康对照人群,差异有统计学意义（P<0.05）。TCGA数据显示,结肠癌组织中的miR-21表达水平与肿瘤的临床分期、肿瘤侵袭程度、淋巴结转移分期、远处转移分期无显著差异（P>0.05）。生存分析显示组织中高表达miR-21的患者其生存时间较低表达者短（P<0.05）。结论:miR-21调控多个肿瘤发生相关的基因,在结肠癌发生过程中具有重要的调控作用。结肠癌患者miR-21表达水平显著高于健康人群,且miR-21高表达的患者预后差。