siRNA 靶向沉默 KIF20A 基因对人肝癌 SMMC -7721细胞体外增殖和侵袭迁移的影响

目的：研究 KIF20A 对肝癌 SMMC -7721细胞系增殖和侵袭迁移能力的影响。方法：利用 RNA 干扰技术下调肝癌细胞系 SMCC -7721中 KIF20A 的表达。qRT - PCR 和 Western blot 分别检测细胞 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平表达中的变化。CCK -8实验检测增殖能力的改变。Transwell 实验检测迁移、侵袭能力的改变。结果：qRT - PCR 和 Western blot 结果显示 KIF20A - siRNA 能够成功下调 KIF20A 的表达,CCK -8和Transwell 实验分别证实肝癌 SMMC -7721细胞增殖和侵袭迁移能力下降。结论：抑制 KIF20A 的表达能够降低肝癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。     

miR-409-5p对肝癌细胞系HepG2增殖及迁移的影响

目的 观察过表达miR-409-5p对肝癌细胞系HepG2增殖及迁移能力的影响。方法 利用miR-409-5p mimics进行转染肝癌细胞系HepG2,并通过实时荧光定量PCR进行验证。高表达miR-409-5p后,使用MTT法和划痕实验分别检测HepG2细胞增殖能力及迁移能力的变化。结果 MTT实验显示,HepG2细胞转染miR-409-5p mimics后细胞增长趋势减缓,且随miR-409-5p mimics浓度和时间成正比。划痕实验显示,在24h和48h两个时间点三组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),证实过表达miR-409-5p mimics的细胞体外迁移能力明显低于转染阴性对照组(NC mimics)组和对照组。结论 上调miR-409-5p可抑制肝癌细胞系HepG2的增殖及迁移能力。     

沉默环状RNA hsa_circ_0000591表达对肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0000591在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织以及肝癌细胞系中的表达,及其对肝癌细胞增殖和迁移的影响.方法 收集2014—2018年广西医科大学附属肿瘤医院手术切除的84例HCC组织及其相应癌旁正常组织标本,采用qRT-PCR检测hsa_...     

CNTN1基因对乳腺癌细胞株Hs578T增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的：研究CNTN1基因对乳腺癌细胞株Hs578T细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。方法：将前期构建的稳定表达pEGFP－N1－CNTN1的Hs578T细胞系,采用MTT、流式细胞仪技术、平板克隆实验及Transwell实验检测pEGFP－N1－CNTN1对Hs578T细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。结果：与空白组及对照组相比,过表达CNTN1基因的Hs578T细胞增殖能力、克隆形成、迁移及侵袭能力增强（P＜0．05）。结论：CNTN1基因能够增强Hs578T细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。     

黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移及侵袭的影响

  目的  通过观察黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移侵袭能力及Ezrin、MMP-9、VEGF表达的影响, 探讨黄芩素对人肝癌细胞株SMMC- 7721体外迁移侵袭的作用及其可能机制。  方法  体外培养SMMC-7721, 经黄芩素干预后用划痕愈合实验和侵袭小室实验分别检测黄芩素对SMMC-7721细胞迁移运动能力和侵袭能力的影响; RT-PCR和免疫细胞化学法检测黄芩素作用于SMMC-7721细胞48h后对Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白表达的影响。  结果  划痕愈合实验显示各浓度实验组划痕愈合宽度占原宽度的比例比对照组明显下降（P < 0.05）; 体外侵袭实验显示实验组穿过人工基底膜胶的细胞数明显减少（P < 0.05）; 实验组Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白表达均明显下调（P < 0.05）。  结论  黄芩素可能通过直接或间接下调Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白的表达而抑制人肝癌细胞株SMMC- 7721体外迁移侵袭, 传统中药黄芩可望为肝癌临床治疗提供新的安全、有效、价廉的治疗方法。      

沉默ANLN基因对胃癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响

目的 探讨肌动蛋白结合蛋白ANLN在体外对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞株、胃黏膜细胞株中ANLN的表达情况和验证siRNA对ANLN基因的敲减情况。划痕实验和Transwell检测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。CCK-8实验、细胞荧光染色和流式细胞术检测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞增殖和凋亡的变化。结果 胃癌细胞株SGC-7901/MGC-803中的ANLN的mRNA和蛋白表达显著高于正常胃黏膜细胞株GES-1（P<0.001）。siRNA干扰后RT-PCR和Western blot结果证明转染成功,转染组的mRNA和蛋白表达量与对照组差异有统计学意义（P<0.05）。下调ANLN能够显著降低胃癌细胞的迁移、侵袭、增殖和凋亡能力。结论 下调ANLN的表达可以显著降低胃癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡能力。     

免疫抑制剂FTY720对Hepa1-6肝癌细胞抑制作用的体外研究

目的探讨免疫抑制剂FTY720对小鼠肝癌细胞Hepa1-6的影响。方法培养小鼠Hepa1-6肝癌细胞,将其分为对照组及0．1、1、10、100μg／ml质量浓度组,处理24h及48h。采用MTT法检测细胞增生,流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡。结果小鼠肝癌细胞增生能力在FTY720作用48h后明显受抑,最大抑制率为62．10％;FTY720对肝癌细胞有促进凋亡作用,在1．0～100．0μg／ml质量浓度范围内,凋亡率随药物浓度增加而增加,分别为：4．07％、8．16％、19．84％;FTY720使G1期显著延长。结论FTY720对肝癌细胞的增生有抑制作用,能使G1期阻滞,促进细胞凋亡。     

肝癌组织中EGFL9基因的表达及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究表皮生长因子样结构域9（epiderma growth factor-like domain 9,EGFL9）基因在肝癌组织及细胞系中的表达水平及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）方法检测EGFL9基因在20例肝癌及对应的癌旁肝组织标本中的表达水平。下载癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库内肝癌基因表达数据,对EGFL9在肝癌中的表达进行分析。RT-qPCR检测EGFL9基因在Huh-7、SMMC-7721及HepG2三种常见的肝癌细胞系和HL-7702正常肝脏细胞系中的表达水平。采用慢病毒介导的siRNA及基因转导技术分别构建EGFL9基因敲减及过表达的Huh-7肝癌细胞,以噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、Transwell侵袭实验和迁移实验观察EGFL9基因敲减及过表达对Huh-7肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:RT-qPCR结果显示,EGFL9基因在20例肝癌组织中的表达量高于对应的癌旁组织。TCGA数据库分析结果也显示,EGFL9在肝癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织。EGFL9在3株肝癌细胞系中的表达水平均高于正常肝脏细胞系。EGFL9基因敲减的Huh-7肝癌细胞的增殖速度明显慢于对照Huh-7肝癌细胞,其侵袭、迁移能力也明显被抑制;EGFL9基因过表达的Huh-7肝癌细胞实验结果则与之相反。结论:EGFL9在肝癌组织和细胞中的表达水平明显上调,且可促进肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示EGFL9可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。     

miR－338对人肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的：观察过表达miR－338对人肝癌细胞SMMC－7721增殖及迁移能力的影响。方法：化学合成miR－338寡聚核苷酸,并行测序确认。利用pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR 质粒构建miR－338真核表达载体。pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒载体瞬时转染SMMC－7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR－338的mRNA表达水平。高表达miR－338后,CCK－8法和划痕实验分别检测SMMC－7721细胞增殖能力及迁移能力的变化。结果：设计的miR－338序列与寡核苷酸测序结果比对,匹配程度达100％。pcD-NA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒瞬转后人肝癌SMMC－7721细胞 miR －338的表达量与对照组相比显著增加（P＜0．05）。miR－338过表达SMMC－7721细胞的增殖能力与各对照组相比均有显著下降（P＜0．05）;miR－338过表达细胞迁移速度降低。结论：上调的miR－338可抑制人肝癌SMMC－7721细胞的增殖及迁移能力。     

沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探究沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:选用37例ccRCC组织及癌旁组织样本,通过提取样本总RNA并行逆转录及转染,利用qRT-PCR检测lncRNA TUG1在ccRCC组织、细胞系及癌旁组织中的表达,并通过CCK-8法、流式细胞检测法及划痕实验检测沉默lncRNA TUG1对ccRCC细胞A704、A498增殖、凋亡及迁移的影响,采用统计软件进行数据处理,探究lncRNA TUG1在ccRCC中的表达及临床意义。结果:qRT-PCR检测lncRNA TUG1表达情况,结果显示:lncRNA TUG1在ccRCC组织中的表达显著高于癌旁组织,在肾细胞癌细胞系A704和A498中的表达明显高于正常细胞系HK2,差异有统计学意义（P＜0.05）;CCK-8检测细胞增殖情况,结果显示:A704和A498细胞经转染干扰后细胞增殖活性较对照组显著降低（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可抑制细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况,结果显示:A704和A498细胞凋亡比例较空白对照组明显增多（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可促进细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移能力,结果显示:A704和A498细胞迁移能力较空白对照组降低（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可抑制细胞迁移。结论:沉默lncRNA TUG1可诱导ccRCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移,可作为临床研究的新靶点。     

腺病毒介导的Hes1基因抑制肝细胞癌细胞的增殖与迁移CSCD

目的探讨Hes1基因对肝细胞癌细胞系Hep1-6细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法通过重组腺病毒载体介导Hes1基因在Hep1-6细胞系中过表达,随后测定细胞克隆形成率、增殖速率及体外迁移与侵袭能力的改变。结果Hep1-6细胞分别感染Ad-Hes1和阴性对照Ad-GFP后,感染Ad-Hes1的细胞系克隆形成数显著少于对照组(P<0.001);感染病毒6天后,CCK-8检测感染Ad-Hes1的细胞系在OD450 nm的吸光度值显著低于对照组(P<0.01);感染Ad-Hes1的细胞系24 h和48 h的划痕愈合率显著低于对照组(P<0.001);感染Ad-Hes1的细胞系在Transwell小室培养48 h后迁移进入Transwell下室的细胞数量显著低于对照组(P<0.001);感染Ad-Hes1的细胞系在铺有Matrigel基质胶的Transwell小室培养48 h后侵袭进入Transwell下室的细胞数量显著低于对照组(P<0.01)。结论Hes1有抑制Hep1-6细胞增殖、迁移与侵袭的作用。     

MiR-129-5p靶向HMGB1抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移

目的 探讨miR-129-5p对骨肉瘤(OS)细胞增殖和迁移的影响以及对HMGB1的调控作用.方法 RT-PCR和Western blot法分别检测骨肉瘤细胞株MG-63、Saos-2和成骨细胞hFOB1.19中miR-129-5p和HMGB1的表达.生物信息学预测miR-129-5p与HMGB1基因是否存在结合位点,...     

转4-1BBL 基因的小鼠肝癌细胞瘤苗刺激脾细胞产生细胞因子的研究

 目的 研究转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗体外刺激同系小鼠脾细胞产生细胞因子（IL-2、TNF-α和GM-CSF）的能力。方法 以丝裂霉素C（MMC）处理高表达转m4-1 BBL基因的小鼠Hepa1-6肝癌细胞，制成肿瘤细胞瘤苗（TCV），体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养后，观察其对脾细胞产生细胞因子（IL-2、TNF-α和GM—CSF）的影响。结果 TCV-4-1 BBL刺激后，脾细胞体外分泌细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF的水平明显增高。结论 转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗能刺激脾细胞产生细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF。     

Twist 促进人肝癌细胞的迁移*

目的：研究Twist对肝癌细胞迁移能力的影响。方法：RT-PCR 方法检测Hep-11和Hep-12中Twist的表达情况。将Twist-cDNA转染Hep-11筛选得到稳定高表达Twist的细胞克隆Twist-Hep- 11。构建pSuper-Twist-shRNA 干扰载体,瞬时转染Hep-12细胞。用Boyden 小室检测过表达和抑制Twist基因后对细胞迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR 和Western blot检测Hep-11上调Twist后的EMT 标志分子的表达。结果：与Hep-11相比,Hep-12的Twist基因表达显著上调,Hep-12的迁移能力也强于Hep-11。Hep-11细胞过表达Twist后,其迁移能力明显增强;而干扰Hep-12细胞Twist表达后,其迁移能力亦明显下降。Hep-11过表达Twist后,N-cad、Vimentin 表达明显上调,E-cad 变化不明显。结论：Twist可以促进肝癌细胞的迁移,其机制可能与N-cad、Vimentin 表达上调有关。     

敲低DCLK1抑制神经胶质瘤细胞增殖、 迁移与侵袭CSCD

目的探讨双肾上腺皮质激素样激酶 1(DCLK1)对胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法 RT-qPCR、免疫组织化学染色和Western blot检测胶质瘤组织和细胞(U87和A172)中DCLK1 mRNA和蛋白的表达情况;sh-DCLK1和阴性对照(sh-Con)转染U87和A172细胞;MTT和Transwell法分析敲低DCLK1对神经胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;蛋白印迹法检测敲低DCLK1对神经胶质瘤细胞中TGF-β/Smads信号通路相关蛋白TGF-β1、p-Smad2、p-Smad7表达的影响;将已转染sh-DCLK1或sh-Con的U87细胞注射到BALB/c裸鼠颈部皮下,定期测量瘤体体积,收集瘤体并称重。结果胶质瘤组织和细胞中DCLK1 mRNA和蛋白表达较癌旁正常组织和正常神经胶质细胞均显著升高(P<0.001)。与sh-Con组比,sh-DCLK1组的胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力及细胞中TGF-β1、p-Smad2和p-Smad7表达显著降低(P<0.01;P<0.001);sh-DCLK1组裸鼠体内的瘤体体积和瘤体质量明显降低(P<0.001)。结论敲低DCLK1能抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制TGF-β/Smads信号活性有关。     

食管鳞癌中LncRNA DLEU1的表达及对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达,及其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响.方法 收集58例手术切除的ESCC及其相应癌旁组织,RT-qPCR检测ESCC组织和细胞中DLEU1的表达水平.Log rank Test法分析ESCC组织中DLEU1的表达与患者临...     

多西紫杉醇联合丝裂霉素C 抑制宫颈癌细胞 的增殖与迁移作用

 目的　探讨多西紫杉醇(Doc) 联合丝裂霉素C (MMC) 抑制宫颈癌细胞的増殖与迁移作用。 方法　MTT实验测定HeLa 细胞増殖能力,损伤修复实验测定细胞迁移速度。计算Q 值反映多西紫杉 醇和丝裂霉素C 联合用药效果。结果　多西紫杉醇、丝裂霉素C 都能够抑制HeLa 细胞的増殖,作用具 有浓度依赖性(Doc :0. 5μg/ L vs 0. 1μg/ L , P < 0. 05 ;MMC:10 μg/ L vs 2. 5 μg/ L , P < 0. 05) ;Q 值> 1 , 显示两者联合用药有相加作用;同时损伤修复实验显示联合用药组细胞迁移速度(0. 035 μm/ h) 显著低 于空白对照组(0. 173μm/ h , P < 0. 05) 及单独用药组(Doc 0. 079 μm/ h ,MMC 0. 075 μm/ h) 。结论　多 西紫杉醇和丝裂霉素C 能抑制宫颈癌细胞増殖与迁移,具有一定量效关系;两者联合用药具有协同作 用,这可能与两者药效学靶点不同有关。     

内源性谷氨酰胺合成酶对C6胶质瘤细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的建立稳定高表达和靶向干扰谷氨酰胺合成酶（GS）细胞株观察GS对C6胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法将已构建的GS- pEGFP-N3、GS-shRNA真核表达载体和空载体pEGFP-N3通过脂质体介导分别转染C6胶质瘤细胞株,G418持续筛选并用Western blot鉴定,MTS法和克隆形成实验观察GS对C6胶质瘤细胞增殖的影响,用MTS黏附实验、划痕损伤实验和transwell侵袭实验检测GS对细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响。结果Western blot证实过表达细胞株有超量GS蛋白表达,而shRNA细胞株未检测到GS信号;GS过表达细胞增殖、克隆形成能力和侵袭性显著降低而黏附能力显著增强;shRNA细胞增殖和克隆形成能力无显著性变化,黏附能力显著降低,而侵袭性显著增强。结论成功建立GS稳定高表达和靶向干扰C6胶质瘤细胞株,并证实GS表达水平影响胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。