常染色体显性多囊肾组织差异表达基因的初步研究

目的应用基因芯片技术及最新公共数据库，筛选常染色体显性多囊肾组织中差异表达的基因，对其进行功能分类，并对其中1条基因利用原位杂交技术进行验证。方法将代表8398条人类基因的PCR产物制成基因芯片。将等量的多囊肾组织和正常肾组织mRNA分别用Cy5、Cy3荧光标记，逆转录合成cDNA探针，混合后与上述基因芯片杂交。扫描杂交信号荧光强度，找出差异表达基因，对获得的基因进行分子生物信息学分析。并对其中的上调表达基因IGF1 mRNA进行原位杂交，验证基因芯片结果的准确性。结果（1）在进入研究的8398条基因中，共发现357条差异表达基因。94条基因在多囊肾组织中低表达，263条基因高表达；（2）上调表达基因主要属于原癌基因，细胞骨架蛋白和运动相关蛋白，凋亡相关蛋白，细胞信号和传递蛋白，细胞因子；下调表达基因主要属于抑癌基因，DNA结合、转录和转录因子，细胞信号和传递蛋白，参与代谢的基因；（3）IGF1 mRNA原位杂交结果与芯片结果一致。结论基因表达谱芯片可快速、高效地筛选差异表达基因；多囊肾病的发生、发展中存在着多种不同功能基因表达调控的改变。     

含日本脑炎病毒pre—M／E蛋白基因真核表达质粒的构建及…

本文作者将日本脑炎病毒（ＪＥＶ）的前膜蛋白和囊膜蛋白（ｐｒｅＭ／Ｅ）的基因插入到真核表达载体ｐＳＧ５中，构建了重组表达载体ｐＳＧＪＥ。用其体外转染地鼠肾细胞ＢＨＫ－２１，经间接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测，证实了ＪＥＶ－Ｅ的瞬时，大量制备和纯化重组质粒，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，结果显示该重组质粒可明显促进小鼠在受到ＪＥＶ活病毒攻击中特异性抗体的产生。     

胃癌高表达cDNA片段W41的克隆及组织表达谱分析

目的：从人胃癌组织中克隆新的相关易感基因。方法：利用cDNA末端快速扩增PCR技术得到了扩增片段，将其克隆、核苷酸序列分析，并将序列在GenBank进行同源性比较。利用Northern杂交、多组织Northern及基因表达系列分析了所得基因片段的组织表达谱。结果：获得1条533bp带有poly(A)尾的cDNA片段，可见加尾信号AATAAA，与GenBank基因数据库同源比较，该序列未见与任何已知基因同源，登录GenBank(登录号为AF325202）。该序列在胃癌组织的表达强度高于对应正常组织，多组织Northern及基因表达系列分析表明该序列在多种肿瘤组织中高表达，在正常组织中表达减弱。结论：得到了1条与胃癌可能相关的新的cDNA序列。     

HCV非结构蛋白质5A基因全长和高免疫源区的表达及免疫活性检测

目的探讨HCV非结构蛋白质5A（NS5A）基因全长和高免疫源区的表达并比较其检测灵敏度。方法以含HCV全基因组的质粒pBR^tm／HCV-3011（1b型）为模板，采用PCR方法扩增出NS5A全长基因（以下用NS5AL代替）和高免疫源区基因（以下用NS5AS代替），与pET-32a载体相连接构建重组表达载体pET-NS5AL和pET-NS5AS，分别转化E.coli Rosetta（DE3）pLysS和BL21（DE3）感受态细胞，经异丙幕-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后，蛋白质印迹法检测其表达，镍螯合（Ni2^＋-NTA）琼脂糖亲和层析柱纯化重组NS5AL和NS5AS蛋白，最后通过ELISA法检测重组蛋白的免疫活性并对其榆测灵敏度进行比较。结果SDS—PAGE鉴定与蛋白质印迹验证结果表明，重组NS5AL和NS5AS蛋白均得到很好地表达；纯化的重组NS5AL和NS5AS蛋白浓度分别为0．146和0．426mg／ml，纯度均〉96％；ELISA检测结果表明，重组NS5AL和NS5AS蛋白均具有较好的免疫活性，且重组NS5AL蛋白的检测灵敏度明显高于NS5AS。结论成功地表达出重组NS5AL和NS5AS蛋白，均具有较高的免疫活性，将有助于提高HCV临床检测的灵敏度。     

NET-1蛋白表达与肝癌临床病理因素相关性探讨

NET-1属于四次跨膜蛋白（TM4S）家族成员,其有显著上调癌形成的作用。我们在研究人体组织中NET-1表达及分析肝与肝癌组织中NET-1表达差异的基础上,通过基因生物工程的方法制备NET-1多克隆抗体,用免疫组织化学方法检测肝癌中NET-1蛋白表达,探讨其临床病理因素的关系。     

生物信息学分析导致类风湿关节炎性别差异的关键基因与信号通路北大核心CSCD

目的:通过生物信息技术分析探讨类风湿关节炎(RA)发病机制中性别间生物学差异的关键基因和通路。方法:从GEO数据库中获取GSE55457、GSE55584、GSE12021中正常男女性滑膜样本和RA男女性患者滑膜样本的基因表达数据,将数据整合并使用R软件对差异表达基因(DEGs)进行鉴定。使用在线工具DAVID数据库对DEGs进行GO分析和KEGG分析。使用Cytoscape 3.6.0构建DEGs的蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI),并进行模块分析。结果:男性组高表达基因416个,低表达基因336个,女性组高表达基因744个,低表达基因309个。在男性RA发病中,IL-6、MYC、EGFR、FOS和JUN被认为是关键基因;在女性RA发病中,IL-6、ALB、PTPRC、CXCL8和CCR5被认为是关键基因。结论:生物信息学分析筛选出的差异基因分别参与男性和女性RA疾病进展的不同机制,为RA发病机制的探究提供了理论依据。     

Ⅲ期鼻咽癌p53蛋白表达与生物学行为及预后的关系及其与p53基因突变、潜伏膜蛋白-1表达的相关研究

目的：探讨Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌中P53蛋白的表达与生物学行为及预后的关系,以及P53蛋白表达与P53基因突变和潜伏膜蛋白（LMP）－1蛋白表达的关系。方法：应用免疫组织化学EnVison法和聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）检测58Ⅲ例鼻咽分化型非角化性鳞癌标本。结果：58份Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌中,P53蛋白总阳性率为65．5％（3858）,生存期在5年以下的患者阳性率为82．1％（32／39）,5年以上患者31．6％（6／19）,两组间P53蛋白表达差异有显著性意义（P＜0．05）,P53蛋白表达在有预底侵袭组为74．4％（29／39）,无颅底侵袭组为47．4％（919）,两组间差异有显著性意义（P＜0．05）,PCR－SSCP检测15例P53蛋白阳性的病例,P53基因5－8外显子突变率为0（0／15）,LMP－1蛋白免疫组织化学总阳性率为72．4％（42／58）,与P53蛋白表达呈正相关关系（r=0.504)。结论：本组Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌患者中P53蛋白表达与P53基因突变无相关关系。与LMP－1蛋白的表达相关,P53蛋白的表达阳性率随着患者生存期的延长而降低,有颅底侵袭组P53蛋白表达阳性率高于无颅底侵袭组。     

野生型RET和RET/PTC融合基因在成人散发性甲状腺乳头状癌中的表达及其意义

目的探讨野生型BET（WT-RET）及RET／PTC1、3融合基因在成人散发性甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及其与临床病理学指标的关系和意义。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测102例石蜡与新鲜（43例）甲状腺病变组织（PTC66例,对照组各种良恶性肿瘤及良性病变共36例）中WT-RET和RET／PTC1、3融合基因的表达并结合临床资料进行分析。结果（1）62％（41／66）PTC患者≥40岁。38％（25／66）PTC伴淋巴细胞性甲状腺炎,59％（39／66）伴淋巴结转移,5例（7.6％）有远处转移。（2）RET原癌基因的酪氨酸激酶区（BET-TK）检出率为68．1％（45／66）。BET原癌基因断裂点（BP）与TK的同时检出率在PTC中28．8％（19／66）,腺瘤中12．5％（1／8）,表明存在WT-BET转录物。（3）RET／PTC检出率21．2％（14／66）,其中5例BET／PTC1阳性（7．6％）,9例RET／PTC3阳性（13．6％）。6例（9％）PTC同时表达BET／PTC和WT-BET。36例对照组病例中未检测到RET／PTC融合基因。（4）统计学分析,PTC病例中WT-BET与RET／PTC1融合基因的表达与性别、年龄、肿瘤大小、多灶性、伴淋巴细胞浸润及淋巴结转移等临床病理学指标无关（P〉0．05）。结论RET／PTC融合基因在散发性成人PTC中表达率低,其诊断和判断预后的价值不大。WT-BET在甲状腺肿瘤的滤泡形成过程中起一定作用。     

同种MHC基因胸腺转移诱导小鼠心肌移植耐受

目的：通过胸腺内注射表达外源性主要组织相容性抗原复合物（MHC）抗原质粒PXN（N2－B19－H－2Kb），诱导异基因小鼠心肌移植耐受。方法：给BALB／C小鼠胸腺内注射质粒PXN（N2－B19－H－2Kb），将外源性的编码C57BL／6小鼠MHCI类抗原的H－2KbcDNA转移到BALBC／C小鼠胸腺，2周后行C57BL／6小鼠心肌移植。用聚合酶链反应（PCR），反转录聚合酶链反应（RT－PCR），单克隆抗体免疫萤光染色流式细胞仪检测BALB／C小鼠胸腺细胞DNA，mRNA和MHC蛋白质表达。结果：BALB／C小鼠胸腺细胞表面有外源性MHC分子表达，转染效率为5．1％，胸腺内注射质粒PXN（N2－mg－H－2Kb）能明显延长移植小鼠心肌的存活时间，平均17d，对照为8d（P＜0．01）。结论：同种MHC基因转移至受体鼠胸腺可以诱导特异性的免疫耐受。     

淋巴组织增生性疾病组织中c—myc基因表达及其 …

目的：探讨ｃ－ｍｙｃ基因的表达与淋巴瘤发生及其与ＥＢ病毒ＬＭＰ基因的关系，方法：用免疫组织化学方法，对２１２例以前作过程ＥＢ病毒ＬＭＰ（潜伏感染膜蛋白）基因原位杂交检测的淋巴组织增生性疾病组织中，ｃ－ｍｙｃ基因的表达进行检测，结果：显示ｃ－ｍｙｃ阳性率霍奇金淋巴瘤（ＨＤ）为８３．６７％，非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）为８４．３４％，均显著高于淋巴组织良性增生病例ｃ－ｍｙｃ阳性率（５４．２８％）（Ｐ〈０．