胶体金免疫层析法快速检测CRE碳青霉烯酶的效果评价

目的分析胶体金免疫层析法对碳青霉烯酶耐药肠杆菌科细菌（CRE）产碳青霉烯酶快速检测的有效性。方法收集蚌埠医学院第一附属医院临床分离的CRE 80株和对碳青霉烯类抗生素敏感肠杆菌科细菌21株,PCR法检测blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48耐药基因作为金标准,采用胶体金免疫层析法进行CRE产碳青霉烯酶检测,并与PCR结果进行一致性分析和效能评价。结果80株CRE中,表达碳青霉烯酶类基因为79株,该79株经胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶结果均为阳性,包括61株产KPC酶、10株产NDM酶、6株产IMP酶及2株产VIM酶;21株敏感菌胶体金检测结果均为阴性;与PCR结果相比,胶体金免疫层析法对四种酶的检测敏感性与特异性均为100%,与PCR结果一致性kappa值均为1。结论胶体金免疫层析法可快速区分CRE碳青霉烯酶类型,操作简便,具有很高的敏感度和特异性,对临床抗生素合理化用药具有重要意义。     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学研究

目的 分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药情况及耐药基因,为临床治疗提供依据。方法 收集并鉴定临床分离非重复CRKP 27株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪鉴定和药敏试验,碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测A类丝氨酸碳青霉烯酶和B类金属β内酰胺酶,聚合酶链反应（PCR）法和基因测序技术检测常见的耐药基因。使用肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)对菌株进行同源性分析。结果 27株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、头孢菌素类、喹诺酮类等抗生素的耐药率均>96%。碳青霉烯酶抑制剂增强试验显示,26株A类丝氨酸碳青霉烯酶阳性,1株B类金属β内酰胺酶阳性。PCR和基因测序结果显示,26株CRKP携带KPC-2基因,1株携带NDM-1基因。ERIC-PCR将27株CRKP分为8型,以Ⅰ型和Ⅱ型为主。结论 分离的CRKP对临床常用抗生素表现出高水平耐药,其耐药机制主要是该类细菌产KPC-2型碳青霉烯酶。     

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制及其控制

目的探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制及其控制方法。方法常规细菌鉴定,药敏试验筛选CRE菌株．琼脂稀释法测定抗菌药对CRE菌株的MlC,改良Hodge试验与PCR检测碳青霉烯酶。结果CRE菌株标本分离率以尿液、痰液较高;药敏试验84．44％菌株对亚胺培南、美罗培南及厄他培南同时耐药;琼脂稀释法分离CRE菌株大多数以对碳青霉烯类高度耐药：改良Hodge检测93．33％菌株为碳青霉烯酶产生株;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶的灵敏度与特异度均明显高于PCR方法（P〈0．05）。结论细菌产生碳青霉烯酶是CRE菌株对碳青霉烯类药物耐药的主要机制之一,改良Hodge试验方法检测更为敏感。     

阴沟肠杆菌对碳青霉烯酶类抗生素耐药机制的研究

目的：研究碳青霉烯类高水平耐药的阴沟肠杆菌临床分离株对碳青霉烯类耐药主要机制。方法：筛选对碳青霉烯类高水平耐药的阴沟肠杆菌临床分离株21株,同时采用微量肉汤稀释法测定这些细菌对不同抗生素的最小抑菌浓度（minimal in－hibitory concentration,MIC）,改良Hodge实验、Carba NP试验检测是否产碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶类型（blaKPC、blaIMP、blaNDM、blaVIM、blaIMI、blaSPM、blaNDMOXA-23、blaNDMOXA-24、blaNDMOXA-48、blaNDMOXA-58）。结果：药敏试验显示碳青霉烯类高水平耐药阴沟肠杆菌具有多重耐药性。改良Hodge实验、Carba NP试验阳性率分别为61.9%（13/21）、90.5%（19/21）;PCR扩增碳青霉烯酶基因,21株试验阴沟肠杆菌19株有扩增产物,IMP、KPC、NDM阳性率分别为23.8%（5/21）、9.5%（2/21）、61.9%（13/21）,其中一株阴沟肠杆菌既产IMP又产NDM。结论：产碳青霉烯酶是临床分离碳青霉烯类高水平耐药阴沟肠杆菌的主要耐药机制,应当引起院感控制人员的高度重视。     

胶体金免疫层析法快速检测血培养肠杆菌目细菌碳青霉烯酶的对比研究

目的 评估胶体金免疫层析法快速检测血培养肠杆菌目细菌碳青霉烯酶.方法 收集西安交通大学第二附属医院血培养79株肠杆菌目细菌,其中碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌57株和碳青霉烯类敏感肠杆菌目细菌22株,按照NG-Test CARBA 5试剂盒说明书检测待测菌株五种主要碳青霉烯酶[klebsiella pneumoniae c...     

一株耐碳青霉烯阴沟肠杆菌金属β-内酰胺酶的检测

目的初步探究一株耐碳青霉烯阴沟肠杆菌的耐药机制。方法采用K-B法检测该菌株对碳青霉烯类及其他常用抗菌药物的耐药性,采用改良Hodge实验和EDTA双纸片协同试验对碳青霉烯酶进行初筛,并用4对金属酶基因引物进行PCR扩增,同时进行AmpC酶的检测。结果药敏试验显示,该菌株对碳青霉烯和三代头孢耐药,并不被传统β-内酰胺酶抑制剂所抑制(对阿莫西林-克拉维酸和头孢哌酮-舒巴坦耐药),但对单环类的氨曲南敏感。改良Hodge试验和组合纸片法金属酶的初筛试验均为阳性,PCR检测结果显示该菌株携带Vim-2及Vim-5型金属酶基因。AmpC酶检测结果表明受试菌产诱导型AmpC酶。结论产Vim-2和Vim-5型金属酶是此株阴沟肠杆菌对碳青霉烯类耐药的重要原因,产诱导型AmpC酶可能参与其多重耐药机制,同时提示碳青霉烯类耐药性有向肠杆菌科扩散的趋势。     

耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的临床感染特征及其耐药基因分析

目的 分析耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)的临床特点及耐药基因携带情况.方法 收集作者医院2018-01/2019-12月临床研究标本中所产生分离出的CRE 72株,采用VITEK2 Compact全自动微生物鉴定/药敏检测系统,进行不同菌株鉴定和药敏结果分析.碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测碳青霉烯酶表型.用特异性引物检测blaKPC、blaIMP、blaOXA-48、blaVIM和blaNDM基因聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,将PCR阳性扩增反应产物进行分析测序和BLAST比对,检测菌株耐药基因的携带情况.结果 CRE感染患者主要分布在重症监护室(intensive care unit,ICU) (34/72,47.22％),其次为老干部保健病房(14/72,19.44％)和呼吸内科病区(11/72,15.28％).CRE菌株的标本主要分离自呼吸道分泌物(46/72,63.89％),其次为尿液(18/72,25.00％),分泌物(5/72,6.94％),血液(3/72,4.17％).药敏试验结果表明,CRE对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的耐药率分别为85.2％、86.4％和100％,对头孢菌素、单环内酰胺和内酰胺抑制剂/复合物的耐药率分别为100％,但对氨基糖苷类(阿米卡星)和四环素类(米诺环素)药物的耐药率相对较低,分别为62.1％和47％.72株CRE进行碳青霉烯酶抑制剂增强试验表型检测,70株阳性.PCR扩增出72株CRE,产碳青霉烯酶的菌株70株,其中有56株blaK-PC基因和11株blaNDM基因,3株同时携带blaKPC基因和blaNDM基因,但未检出blaOXA-48、bla VIM基因和bla IMP基因.两种方法的符合率为100％.产碳青霉烯类肠杆菌最多的是肺炎克雷伯菌(56株),其次是大肠埃希菌(11株).肺炎克雷伯菌主要产生KPC型碳青霉烯,而大肠杆菌仅产生NDM型碳青霉烯.结论 CRE的主要临床分布在ICU等重症科室,耐药现象比较严重,CRE的基因型以blaKPC型为主,临床应加强对医院感染的预防和控制,避免耐药菌在医院中的播散.     

MALDI-TOF MS检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的应用价值

目的 评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法快速检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的价值.方法 以34株产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌及50株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌为研究对象,美罗培南与细菌37℃孵育2h后,上清液进行MALDI-TOF MS检测.结果 碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌的质谱峰有3个,质荷比(m/z)依次为384、406、428;而产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌由于可以水解美罗培南,其质谱峰有6个,m/z依次为358、380、402、424、446、468,通过质谱峰的变化可以鉴定产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,MALDI-TOF MS法与测序法结果高度一致(P=1.000).结论 MALDI-TOF MS可以快速、准确检测产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌,指导临床合理使用抗生素.     

产气肠杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制研究

目的 探讨产气肠杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制.方法 收集耐碳青霉烯类抗生素产气肠杆菌16株,采用改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株;采用PCR扩增和基因测序技术检测并验证耐药基因;利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)对菌株的外膜蛋白进行分析.结果 改良Hodge试验结果发现16株产气肠杆菌均产碳青霉烯酶;PCR扩增和基因测序结果显示16株产气肠杆菌均存在KPC-2基因,但未携带IMP-1、IMP-2、VIM-1、VIM-2、NDM-1、OXA-1和OXA-9等其他碳青霉烯酶基因;SDS-PAGE电泳结果显示16株产气肠杆菌中有5株出现Omp36膜孔蛋白的缺失.结论 16株耐碳青霉烯类抗生素产气肠杆菌主要耐药机制可能与产KPC-2型酶且部分菌株合并Omp36膜孔蛋白的缺失有关.     

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶检测方法及临床应用与治疗的研究进展

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶通常划分为A类、B类和D类,不同类型的碳青霉烯酶的治疗方案有所不同,故对碳青霉烯酶快速准确的检测以及抗菌药物的选择对临床治疗及患者预后十分重要。本文对肠杆菌目细菌碳青霉烯酶的检测方法以及抗菌药物进行总结整理,对其优缺点进行比较,旨在为临床监测及检测方法的制定提供思路。     

我院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌感染特点及碳青霉烯酶基因型分析

目的 研究丽水市中心医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的感染特点、药物敏感性和碳青霉烯酶基因携带情况。 方法 收集2011年3月—2015年12月期间丽水市中心医院共140株CRE的临床资料并分析,Vitek 2-Compact鉴定细菌,K-B纸片法进行药物敏感性试验,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,PCR扩增常见的碳青霉烯酶基因KPC、IMP、VIM、NDM和OXA-48。 结果 140株CRE以肺炎克雷伯菌为主(占70.71%),其次为产气肠杆菌(占6.44%)和阴沟肠杆菌(占5.71%)。标本来源以痰液为主(占69.29%),其次为尿液(占12.86%)、分泌物和血液(均各占4.29%)。临床科室分布以重症监护室为主(占44.29%),其次为神经外科(占18.57%)和血液内科(占5.00%)。药敏结果提示CRE对大部分β内酰胺类药物高度耐药,耐药率>80%,对米诺环素、阿米卡星的耐药率分别为14.78%和35.43%。改良Hodge试验有127株阳性(阳性率为90.71%)。PCR扩增及基因测序比对结果提示99株携带KPC-2基因,14株携带IMP-4基因,2株携带IMP-1基因,13株携带NDM-1基因。 结论 CRE对多种抗菌药物高度耐药,耐药基因以KPC为主,其次为IMP和NDM,临床应根据药物敏感性结果合理选用抗菌药物,做好院感监测及防护,以防止耐药菌株的传播和流行。      

长沙地区临床分离碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的分子流行病学特征

目的: 了解长沙地区临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性,探讨碳青霉烯类抗生素耐药菌株的分子流行病学特征。方法: 收集长沙地区10所综合性医院2010年3月至2010年12月间临床分离的非重复鲍曼不动杆菌株205株;采用K-B法检测药物敏感性,改良双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶(金属酶),改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶;PCR扩增OXA-23,OXA-24,OXA-51,OXA-58及IMP-1和VIM-2型碳青霉烯酶基因,并进行测序分析。应用肠杆菌科基因间一致重复序列聚合酶链反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus PCR,ERIC-PCR)对菌株进行DNA分型及同源性分析。结果: 在监测的18种药物中,耐药率超过50%的达14种。其中哌拉西林耐药率最高(80.5%),头孢哌酮/舒巴坦耐药率最低(2.5%)。共筛选出耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌115 株,其金属酶表型及基因检测均为阴性;改良Hodge试验阳性71株,其中64株OXA-23基因扩增阳性。115株菌株OXA-51均阳性,未检出OXA-24,OXA-58基因。115株菌株共分为7个ERIC基因型。其中A型19株,B型72株,为主要的流行克隆。结论: 长沙地区临床分离鲍曼不动杆菌多重耐药十分严重;产OXA-23 和OXA-51型碳青霉烯酶是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制,且碳青霉烯类耐药菌株存在克隆流行。     

Detection of metallo-beta-lactamase producing Pseudomonas aeruginosa in intensive care units

Background

Metallo-beta-lactamase (MBL) producing Pseudomonas aeruginosa has emerged as a threat to hospital infection control, due to its multi-drug resistance, especially in intensive care units (ICUs).

Aims

This study was carried out to detect MBL producing P. aeruginosa isolates from medical and surgical ICUs, to compare and evaluate different phenotypic methods currently in use and to determine antibiograms.

Method

A prospective study was undertaken to detect MBLs in P. aeruginosa isolates obtained from various clinical samples. A total of 49 strains were recovered from patients admitted in inpatient wards and ICUs, and screened for imipenem resistance by Kirby Bauer disk diffusion method. Detection of MBLs was further done by imipenem-EDTA disk synergy test and combined disk test.

Results

Out of 49 isolates, 11 isolates (22.4 per cent) were imipenem resistant. All 11 imipenem resistant P. aeruginosa strains, when further tested, were positive for MBL production by combined disk test, but, only eight showed positive results by imipenem-EDTA disk synergy test.

Conclusion

MBL production was the main resistance mechanism in the 11 carbapenem resistant P. aeruginosa isolates collected, with multidrug resistance associating significantly with MBL production in P. aeruginosa from our institution.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及金属β-内酰胺酶基因的检测

目的初步分析铜绿假单胞菌的耐药机制。方法采用纸片扩散法（K-B法）进行药物敏感试验;用2-巯基丙酸（2-MPA）协同试验筛查金属酶;通过改良三维水解试验、聚合酶链反应（PCR）、基因测序等方法,分析本地区铜绿假单胞菌所产的碳青霉烯酶表型及基因类型。结果在20株铜绿假单胞菌中,其中9株（45%）为耐亚胺培南的铜绿假单胞菌;2-巯基丙酸协同试验9株结果为阳性;PCR产物电泳,IMP-1引物有5株菌阳性,IMP-2引物有3株菌阳性,VIM通用引物有4株菌阳性,VIM-2引物有2株菌阳性,OXA-23引物有2株菌阳性,OXA-24引物均为阴性;选取3株产IMP-2条带的菌株基因进行测序,结果为IMP-16金属β内酰胺酶基因。结论铜绿假单胞菌耐药机制复杂,存在多种类型的碳青霉烯酶的流行,在医院病区存在产碳青霉烯酶铜绿假单胞菌克隆株的流行。     

碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌β-内酰胺类耐药基因研究

目的 探讨碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌β-内酰胺类耐药基因携带情况.方法 收集242株临床分离的粘质沙雷菌,采用Vitek-2 Compact全自动微生物系统对其鉴定并进行药敏试验,筛选出对亚胺培南耐药18株、中介1株;再用K-B法检测19株细菌对厄他培南和美罗培南的药物敏感性,确认均为耐药;采用改良Hodge试验及EDTA协同试验检测碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶基因blakpc、blanmc、blaimp、blagim、blavim、blaoxa-23及超广谱β-内酰胺酶基因blaveb、blaper、blatem、blashv、blactx-m-1、blactx-m-2、blactx-m-9,阳性结果进行DNA测序,BLAST比对确定基因型.结果 药敏结果显示,19株细菌对美罗培南、厄他培南、氨曲南、环丙沙星、头孢唑林、头孢曲松、头孢噻肟全部耐药,对亚胺培南18株耐药、1株中介;对阿米卡星全部敏感;对庆大霉素敏感率为57.9%;妥布霉素敏感率不到30%;对头孢替坦、头孢他啶、头孢吡肟敏感率均不足20%;左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦敏感率均不足10%;改良Hodge试验阳性18株,阴性1株;EDTA协同试验全部阴性;PCR扩增和DNA测序显示,7株含blakpc-2、6株含blactx-m-14、3株含blashv-11、2株含blashv-12、1株含blaoxa-23基因;19株细菌均未检出blanmc、blaimp、blagim、blavim碳青霉烯酶基因及blaveb、blaper、blatem、blactx-m-1、blactx-m-2超广谱β-内酰胺酶基因.结论 分离的碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌,耐药现象较为严重,主要携带blakpc-2型、blactx-m-14型耐药基因.     

碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨天津医科大学第二医院分离得到的碳青霉烯耐药克雷伯菌的耐药机制。方法:2013-2014年度临床微生物实验室分离到36株碳青霉烯耐药克雷伯菌,改良Hodge试验、EDTA协同试验及 PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因,PCR法检测ESBLs及Ampc酶耐药基因,PCR、实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测外膜蛋白基因Ompk35及Ompk36存在及表达情况。结果:9株改良Hodge试验阳性,EDTA协同试验均阴性,碳青霉烯酶耐药基因均阴性;36株碳青霉烯耐药克雷伯菌至少存在1种β内酰胺酶耐药基因;外膜蛋白基因无缺失,33株存在外膜蛋白表达量下降。结论: 分离的碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制可能为ESBLs及Ampc酶表达合并外膜蛋白表达下降。     

西安地区鲍曼不动杆菌耐亚胺培南的机制研究

目的 调查和研究西安地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药分子机制和产碳青霉烯酶情况.方法 收集西安地区六所三级甲等医院一年间临床分离的非重复鲍曼不动杆菌株146株,采用K-B法进行药敏试验,E-test法检测金属酶,NaCl抑制试验检测OXA型碳青霉烯酶,PCR扩增OXA-23、OXA-58型碳青霉烯酶基因,其阳性产物经双向测序分析.结果 筛选出对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌非重复株15株,14株耐药菌经E-test法鉴定未产金属酶,经NaCl抑制后发现其对亚胺培南的敏感性增加,提示产生OXA型碳青霉烯酶,其中11株PCR扩增bla_(OXA-23)阳性,1株PCR扩增bla_(OXA-58)阳性,NaCl抑制试验与PCR检测结果的一致率达85.7%.结论 产OXA型碳青霉烯酶是西安地区该菌对亚胺培南耐药的主要原因,其OXA-58型基因在国内尚属新型碳青霉烯酶基因型;NaCl抑制试验是一种简单、有效、价廉的表型筛选OXA型碳青霉烯酶的新方法.

Abstract：

Objective To investigate the molecular mechanism of carbapenem resistance in the clinical isolates of A cinetobacter baumannii from Xi'an and their profile of carbapenemase production. Methods A total of 146 A cinetobacter baumannii strains were isolated from 6 general hospitals in Xi'an.Antimicrobial susceptibility test was performed for all the strains,followed by detection of imipenem resistance using E-test for metallo-β-lactamase(MBL)and NaCl inhibition test for OXA type carbapenemase.Bla_(OXA-23) and bla_(OXA-58) were amplified by PCR,and the positive products were sequenced.Results From the collected strains,15 non-repetitive imipenem-resistant A cinetobacter baumannii strains were identified,among which 14 yielded negative results in E-test for MBL production. All the resistant strains showed increased sensitivity to imipenem after NaCl inhibition.suggesting the presence of carbapenemase production.Eleven of the strains harbored OXA-23 type gene and 1 harbored OXA-58 type gene.The concordance rate of the results by NaCl inhibition test and PCR was 85.7%. Conclusions Production Of OXA-type carbapenemases is the most important reason for carbapemen resistance in A cinetobacter baumannii in Xi'an.The OXA-58 type gene is a novel carbapenemase genotype in China.NaCl inhibition test is a convenient and cost-effective method for detecting carbapenemases in A cinetobacter baumzmnii.