结肠扩张刺激对P2X4受体在IBS大鼠神经中枢中表达的影响

目的观察P2X4受体在结肠扩张刺激引起的IBS大鼠骶髓后连合核（DCN）和骶髓后角中表达的变化，为探讨IBS的神经作用机制提供理论依据。方法采用免疫组织荧光化学的方法，通过对P2X4受体和小胶质细胞的标志物OX42的荧光双标记，观察其在小胶质细胞和神经元上的反应；通过免疫电镜同步观察P2X4受体与小胶质细胞和神经元的相互关系。结果对照组大鼠的DCN和骶髓后角中几乎没有发现P2X4的表达。而在IBS大鼠组，P2X4在DCN和骶髓后角神经元和小胶质细胞中表达明显增高。电镜下，在对照组的DCN和骶髓后角，少数P2X4-LI产物表达在胶质细胞突起上，此突起可与神经元胞体、轴突、树突或另外的胶质细胞突起接触。而在IBS大鼠的DCN和骶髓后角中，P2X4在抑制性突触上的表达明显增加。有的表达在突触复合体上，并且在神经元上也有发现。然而P2X4阳性产物更多的表达在胶质细胞的突起上。结论P2X4是小胶质细胞活化的启动因素，可能是IBS内脏敏感性增高的重要因素。     

结肠炎诱导大鼠行为学变化及骶髓后连合核和丘脑板内核群中GFAP表达的意义

目的探讨因福尔马林引起的大鼠急性结肠炎刺激诱导的行为学变化及骶髓后连合核(dorsal commissural nucleuse,DCN)和丘脑板内核群(thalamic intralaminar nuclei,ILN)胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达及其意义。方法给大鼠乙状结肠注射5%的福尔马林100μL制作急性结肠炎引发内脏痛大鼠模型。采用痛行为学积分方法观察不同时间点急性结肠炎大鼠行为学变化。采用免疫组织化学方法,观察不同时间点急性结肠炎大鼠骶髓后连合核和丘脑板内核GFAP表达变化情况。结果急性结肠炎大鼠痛行为表现高峰为造模后60 min,90 min时减低程度显著。GFAP在骶髓后连合核的表达在造模形成后的45 min最为明显,在90 min明显降低。而在丘脑板内核的表达60 min最为明显,120 min明显降低。结论大鼠痛行为学的变化是由于急性炎症引起的内脏痛而导致,与疼痛变化密切相关的胶质细胞中GFAP在脊髓内反应早且明显,而在与情绪变化密切相关的丘脑内的板内核群中变化相对较晚。     

直肠扩张刺激引起IBS大鼠痛行为学以及腹肌电活动的变化

目的观察直肠扩张刺激对IBS大鼠痛行为以及腹部肌电活动的影响,为探讨IBS发生机制提供理论依据。方法48只旋毛虫感染大鼠,随机均分为8组:空白对照组、放置气囊对照组、0.6ml组、0.8ml组、1.0ml组、1.2ml组、1.4ml组和1.5ml组。应用疼痛行为学观察方法,观察各组动物1h的痛行为学和腹外斜肌电活动变化。结果空白对照组和单纯放置气囊对照组无明显痛行为变化。正常大鼠痛行为表现最为明显的为1.2ml组(疼痛评分范围为72.66±8.75至53.67±5.84),它与1.4ml和1.5ml组的痛行为无明显差异(疼痛评分范围为68.36±6.24至48.55±6.01和70.15±6.57至47.18±6.66)。而1.0ml组大鼠的痛行为表现比1.2ml组为低(疼痛评分范围为44.16±6.34至35.11±6.27),0.8ml组的痛行为表现最低(疼痛评分范围为32.53±6.06至29.46±6.17)。实验组IBS大鼠,0.6ml时即出现明显的痛行为学表现(痛行为评分为51.55±7.57至53.23±5.46)与单纯给与气囊之对照组的痛行为(17.16±3.12至19.23±4.54)相比有显著性差异。0.8ml组的痛行为学最为明显(痛行为评分为93.53±4.07至90.33±4.79),基本上达到痛行为学反应的高峰,与0.6ml组相比,存在显著性差异,而与1.0ml组及以后各组相比无明显差异。正常大鼠中,未放置球囊及单纯直肠放置气囊组腹外斜肌电活动少而规律,1.2ml组正常大鼠腹外斜肌电活动最为明显,与1.4ml、1.5ml组相比没有显著性差异,而与其它组相比,均有显著性差异(P<0.05)。实验组IBS大鼠中,0.8ml组的腹外斜肌电活动明显有变化,基本趋于高峰,与0.6ml组有差异(P<0.05),但与1.0ml及以后各组没有显著性差异(P>0.05)。结论结肠扩张刺激明显引起IBS鼠痛行为和腹部肌电活动的变化,与其内脏敏感性增高有密切关系。     

rhG-CSF对脑梗死区周边神经元和星形胶质细胞的影响

将36只健康雄性SD大鼠随机分为观察组与对照组各18只，观察组于缺血再灌注后24h自颈部皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF），1次／d，连用5d；对照组予等体积生理盐水。于缺血再灌注后7、14、21d分别处死6只大鼠．观察两组神经功能缺损评分及梗死区周边神经元和星形胶质细胞的特异性标记物微血管相关蛋白-2（MAP-2）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果与对照组相比．观察组神经功能缺损评分较低，MAP-2表达增高而GFAP表达降低。提示rhG-CSF可抑制神经元死亡和胶质疤痕形成，从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

一氧化碳对脂多糖诱导大鼠纹状体炎性反应后的多巴胺能神经元的影响

目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导大鼠纹状体炎性反应2周后，急性一氧化碳（carbonmonoxide，CO）中毒对黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元的影响。方法160只SD雄性大鼠随机分为CO组、LPS组、CO＋LPS组和对照组，观察大鼠在染毒后不同时间点的尾静脉血24h内碳氧血红蛋白（HbCO）浓度变化、行为学改变、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）及OX-42（小胶质细胞标志物）的表达，高效液相色谱（HPLC）分析纹状体DA含量变化。结果染毒鼠均达到持续24hCO重度中毒（HbCO〉50％）。CO＋LPS组大鼠染毒后14、21、28d的30min内平均运动速度和运动距离下降（P〈0．05），小胶质细胞明显增生并异常激活，TH阳性神经元数量分别减少43．2％（P〈0．05）、46．5％（P〈0．05）和63．7％（P〈0．01）；DA分别降低33．0％、39．0％（P〈0．05）和53．6％（P〈0．01）。结论大鼠多巴胺能神经系统发生炎性反应后，将加重急性CO中毒对多巴胺能神经元的损害，增加CO中毒后患帕金森综合征的风险。     

成纤维细胞生长因子2对创伤后应激障碍模型大鼠行为及海马星形胶质细胞的影响

目的探讨成纤维细胞生长因子2（FGF2）对创伤后应激障碍（PTSD）模型大鼠的行为以及海马星形胶质细胞的作用。方法采用单次延长应激（SPS）建立大鼠PTSD模型,然后在SPS大鼠第7d给予高剂量FGF2因子腹腔注射,采用自发活。刃、高架十字迷宫方法观察高剂量FGF2单次给药对SPS模型大鼠行为学的影响;同时利用星形胶质细胞标志物——胶艇纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色方法,观察各组大鼠海马星形胶质细胞阳性表达的情况,并利用双重荧光Westernt印迹法验证GFAP在不同实验组的蛋白表达情况。结果与SPS组大鼠相比,FGF2高剂量给药后明显减轻SPS大鼠的焦虑或抑郁状态,且明显增强海马内GFAP免疫反应阳性星形胶质细胞的表达。结论FGF2可明显改善SPS大鼠的焦虑或抑郁症状,其治疗PTSD的机制可能与增加星形胶质细胞的活性有关。     

急性心肌损伤后大鼠孤束核的FOS核神经胶质原纤维酸性蛋白表达的变化

目的：观察急性心肌损伤后大鼠延髓孤束核(Nucleus Tractus Solitarii, NTS)神经元和星形胶质细胞的反应。方法：向心肌内注射福尔马林造成急性心肌损伤，免疫荧光染色观察NTS中Fos阳性和GFAP阳性细胞的反应情况。结果：急性心肌损伤后2 h，大鼠NTS中Fos阳性神经元显著升高，4 h达到峰值，然后开始下降。急性心肌损伤后4 h GFAP阳性星形胶质细胞荧光强度明显增强，24 h达到高峰然后下降。结论：急性心肌损伤后，大鼠延髓NTS中神经元和星形胶质细胞被心肌伤害性刺激激活，参与心肌损伤后疼痛的中枢调控。     

曲马多对坐骨神经痛大鼠脊髓c-jun、c-fos表达及星形胶质细胞活化的影响

目的 探究曲马多对坐骨神经痛大鼠脊髓组织中Jun原癌基因蛋白(c-jun)、fos原癌基因蛋白(c-fos)表达及对星形胶质细胞活化的影响。方法 采用腰椎间孔外口植入髓核法建立SD大鼠坐骨神经痛模型，随机分为模型组、曲马多低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(30 mg/kg)剂量组、阳性对照组(吲哚美辛，7.5 mg/kg),每组10只，另设置假手术组10只(自体髓核不植入神经部位),于造模后3 d开始给药，1次/d。给药14 d后，观察大鼠一般行为活动；检测机械缩足痛敏阈值(PWT)及热辐射刺激缩爪反应潜伏期(PWL);酶联免疫吸附法(ELISA)检测疼痛标志物前列腺素(PG)E2、P物质(SP)水平；苏木素-伊红(HE)染色检测脊髓病理形态变化；免疫组化法检测脊髓星形胶质细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达；Western印迹法检测脊髓c-fos、c-jun、活化蛋白(AP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶(COX)-2表达。结果 与假手术组相比，模型组大鼠活动量降低并出现易激惹行为，神经纤维紊...     

电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃电活动与延髓神经元和星状胶质细胞可塑性的影响

[目的]观察电针对糖尿病胃轻瘫（DGP）大鼠胃电活动与延髓迷走孤束复合体（VSC）内神经元和星状胶质细胞可塑性变化的影响。[方法]实验大鼠分为空白对照（空白）组、DGP模型（模型）组、模型加电针足三里穴（足三里）组和模型加电针三阴交穴（三阴交）组。模型制备采用腹腔注射5％四氧嘧啶和熟地灌胃诱导的方法。实验3周后记录大鼠的胃电活动,取延髓进行抗Fos蛋白和抗胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的免疫组化染色。[结果]与空白组比较,模型组的胃电平均频率和振幅明显降低。而足三里组和三阴交组的平均频率和振幅较模型组明显升高（P〈O．01,〈0．05）;以足三里组升高更明显,与三阴交组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。除空白组外,Fos阳性神经元、GFAP阳性星状胶质细胞集中表达于VSC。以模型组的Fos和GFAP表达最高,而足三里组与三阴交组的表达较模型组明显减少,且它们之间差异有统计学意义（P〈0．01）。[结论]针刺可改善糖尿病胃运动功能障碍,延髓VSC内免疫阳性神经元和胶质细胞可能参与了此调节作用。     

按部选穴针刺治疗对糖尿病胃轻瘫大鼠延髓内c-fos和神经胶质酸性蛋白表达的影响

目的:观察按部选穴针刺治疗对糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis,DGP)模型大鼠延髓内c-fos和神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响,探讨按部选穴是腧穴配伍效应的影响因素.方法:60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、针刺足三里+中脘组、针刺足三里+内关组、针刺足三里+非经非穴组,每组12只.采用单次腹腔注射2%链脲佐菌素配合普通饲料饮食建立DGP模型大鼠,造模成功后,连续治疗4 wk.治疗结束后,用黑墨水灌胃测小肠推进率,用免疫组织化学法检测大鼠延髓内c-fos和GFAP的灰度值.结果:与空白对照组比较,模型组小肠推进率显著降低,c-fos和GFAP的灰度值降低,有统计学意义(P0.05).与模型组比较,针刺足三里+中脘组、针刺足三里+内关组、针刺足三里+非经非穴组小肠推进率显著升高,针刺足三里+中脘组c-fos和GFAP的灰度值显著升高,有统计学意义(P0.05).与针刺足三里+中脘组比较,针刺足三里+内关组、针刺足三里+非经非穴组c-fos和GFAP的灰度值显著降低,有统计学意义(P0.05).结论:针刺可改善DGP模型大鼠胃排空迟缓症状,调节延髓内c-fos和GFAP的表达,配伍局部腧穴显著优于配伍远端腧穴及非经非穴点,表明不同按部选穴是影响腧穴配伍效应的关键因素.     

慢性弓形虫感染对大鼠海马神经细胞凋亡周期及caspase-3与细胞色素C蛋白表达的影响

目的观察弓形虫慢性感染对大鼠海马神经细胞周期、细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和细胞色素C(Cytc)表达的影响。方法将20只成年雄性SD大鼠随机分成2组:弓形虫感染组和正常对照组。弓形虫感染组每只大鼠腹腔注射纯化弓形虫速殖子2×107/ml悬液2ml;正常对照组大鼠每只腹腔注射2ml灭菌生理盐水。感染10周后应用流式细胞术检测大鼠海马神经细胞周期和细胞凋亡,罗丹明123染色检测其线粒体膜电位;应用免疫组化法检测海马caspase-3和Cytc蛋白表达。结果弓形虫感染10周后,大鼠海马神经细胞凋亡率为(49.3±13.6)%,与正常对照组(40.1±11.2)%相比较,差异有统计学意义(P0.05),G0/G1期细胞百分率增高(P0.05),出现G0/G1期阻滞,S期细胞减少(P0.05);感染组线粒体膜电位为(22.1±6.8)%,比对照组的(25.4±9.4)%低(P0.05);caspase-3和Cytc蛋白表达则均显著增高(P0.05)。结论弓形虫慢性感染可能导致大鼠海马神经细胞凋亡,进而引起一定的认知功能障碍。     

短波胃电刺激对大鼠孤束核及下丘脑c-fos表达的影响及其机制

目的 探讨肠肌间神经丛及中枢神经系统相关核团(孤束核及下丘脑)是否参与介导外源性短波胃电刺激调控中枢感觉功能.方法 雄性Wistar大鼠15只,分为对照组、胃电刺激组、去肠肌间神经丛组,均于胃底、胃体交界处植入一对电极,去肠肌间神经丛组大鼠同时胃浆膜面予苯扎氯胺处理,后两组均予短波胃电刺激,持续30 min.SP免疫组化法观察延髓孤柬核及下丘脑c-fos表达.结果 胃电刺激组和去肠肌间神经丛组大鼠每高倍视野下孤束核处c-fos阳性神经元数量分别为(71.6±7.4)和(63.4±10.8)个,下丘脑处则分别为(224.2±47.3)和(249.1±44.0)个,两组间差异无统计学意义(P＞0.05),但均显著高于对照组[(36.4±8.6)和(90.2±47.3)个,P值均＜0.05].结论 孤束核及下丘脑可能是介导短波胃电刺激治疗作用的中枢核团,而肠神经系统不参与介导此作用.     

Effect of down-regulation of voltage-gated sodium channel Nav1.7 on activation of astrocytes and microglia in DRG in rats with cancer pain

Objective:To evaluate the effect of down-regulation of Nav1.7 on the activation of astrocytes and microglia in DRG of rats with cancer pain,and explore the transmission of the nociceptive information.Methods:Lentiviral vector harboring RNAi sequence targeting the Navl.7 gene was constructed,and Walker 256 breast cancer cell and morphine was injected to build the bone cancer pain model and morphine tolerance model in rats.Lentiviral vector was injected.Rats in each model were divided into 4 groups:model group,PBS group,vehicle group and LV-Nav1.7 group.The expression levels of GFAP and OX42 in dorsal root ganglia(DRG) were measured.Results:After the animal model was built,the level of Navl.7,GFAP and OX42 was improved obviously with the time prolonged,which was statistically significant(P0.05).The expression level of GFAP and OX42 in the DRG in the LV-Navl.7 group declined obviously compared to the model group,PBS group and vehicle group(P0.05).Conclusions:Intrathecal injection of Navl.7 shRNA lentiviral vector can reduce the expression of Nav1.7and inhibit the activation of astrocytes and microglia in DRG.The effort is also effective in morphine tolerance bone cancer pain model rats.     

内脏高敏感大鼠肠道5-羟色胺转运体的变化以及中药肠吉安治疗的研究

目前认为肠易激综合征（IBS）的主要病理机制之一是内脏高敏感，5-羟色胺（5-HT）在内脏高敏感的发生中起重要作用，而5-HT主要通过5-HT转运体（SERT）调节。目的：研究内脏高敏感大鼠结肠黏膜5-HT和SERT的表达，并评估中药肠吉安对内脏高敏感的疗效。方法：18只Sprague-Dawley新生大鼠随机分为对照组、模型组、肠吉安治疗组，后两组制备内脏高敏感模型。对照组和模型组予0．9％NaCl溶液，肠吉安治疗组予0．9％NaCl溶液和中药肠吉安。比较各组腹壁回撤反射（AWR）评分，并取结肠组织行5．HT、SERT免疫组化染色。结果：与对照组相比，在10、20和40mmHg（1mm Hg=0．133kPa）压力结直肠扩张时，模型组大鼠AWR评分显著升高（P〈0.05），结肠黏膜5-HT表达显著增高（P〈0．05），SERT表达则降低（P〈0．05）。肠吉安治疗后，在较低压力下，AWR评分较模型组显著降低（P〈0．05），5-HT表达显著降低（P〈0．05），SERT表达则显著升高（P〈0．05）。结论：肠道SERT表达降低导致5-HT表达增高，可能是IBS大鼠内脏高敏感的重要机制之一，中药肠吉安可使两者在肠道的表达趋向正常，从而改善大鼠内脏高敏感。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究

目的观察人骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）体外扩增和定向诱导分化为神经元样细胞的变化,为其临床应用奠定基础。方法采用密度梯度离心法分离BM-MSCs细胞,用MesencultTM培养基和贴壁培养法培养、纯化和扩增细胞,流式细胞术检测细胞表面CD29和CD90分子表达率。采用20 ng/ml重组碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、20 ng/ml新型人表皮生长因子（hEGF）和20 g/L二甲基亚砜（DMSO）、5 mmol/Lβ-巯基乙醇（BME）分别诱导BM-MSCs;采用免疫组化法检测细胞的神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）、波形蛋白（VIM）表达情况。结果BM-MSCs细胞增殖迅速,3周可传代培养;BM-MSCs传十代扩增1－2×10^3倍。分离和扩增BM-MSCs CD29、CD90强表达率分别为95.02%、93.81%。药物诱导后的BM-MSCs发生轴突等神经元样细胞变化,阳性表达NSE、GFAP、VIM分子。结论人BM-MSCs能体外培养和扩增,并能定向诱导分化为神经元样细胞。     

Irritable bowel syndrome: can the patient's response to colonoscopy help with diagnosis?

The irritable bowel syndrome (IBS) is a common disorder estimated to affect up to 20% of adult Caucasians, with only a small percentage requiring investigation. This prospective study was performed to substantiate the impression that patients with IBS experience more pain during endoscopic examination of the colon than do patients with other conditions. Patients with IBS were observed to experience significantly more pain during colonoscopy than did patients without IBS (median observed pain scores 46 and 9, respectively), p < 0.001. The intensity of the pain perceived during examination was significantly higher for patients with IBS than for those without IBS (median 52.5 and 23.5, respectively), p < 0.001. Within the groups, there was no significant difference between flexible sigmoidoscopy and colonoscopy in observed or perceived pain. 64% of the patients with IBS said that the pain experienced at colonoscopy was identical to their presenting pain. This study supports the hypothesis of a lower colonic pain threshold with colonic hyperalgesia in patients with IBS. We have found that hypersensitivity to the endoscopic examination of the colon is a useful clinical adjunct in the diagnosis of the IBS in those selected to undergo colonoscopy.