肉鸡及其鸡胚中CAV和ALV的PCR检测

应用PCR技术对山东省3个中小型AA肉种鸡场的鸡胚、1日龄雏鸡和子代肉鸡CAV和ALV的感染情况进行了检测。用相同的方法直接采集样品的不同组织提取2种病毒DNA,进行PCR扩增及PCR产物的克隆和序列测定。结果表明:被检的3个肉种鸡场均有这2种病毒的感染,其中CAV的阳性率24.22%,ALV的阳性率17.56%,二者共感染的阳性率8.89%。感染鸡各组织中病毒含量也有差异,CAV以脾脏最多,ALV以肾脏最多。对肝脏进行细菌分离培养,并对40日龄商品肉鸡进行ND血凝抑制(HI)抗体效价检测,发现大肠杆菌等细菌感染阳性率较高,ND-HI抗体效价显著偏低。说明该地区肉种鸡场和商品鸡场均存在严重的CAV和ALV感染以及与细菌性疾病的共感染,并导致鸡只的机体免疫力下降。     

应用PCR对来源于AA肉种鸡的鸡胚、雏鸡进行CAV和ALV检测

应用PCR方法,对来源于山东省3个不同AA肉种鸡场的鸡胚、1日龄雏鸡中的CAV和ALV进行检测,从而了解CAV和ALV在此阶段对肉鸡的感染情况。试验直接采集样品的肝脏、胸腺、骨髓、脾脏、肾脏、法氏囊等组织提取DNA,进行PCR扩增及PCR产物的克隆和序列测定。结果显示,被检的3个肉种鸡场均有这两种病毒的阳性检出,其中CAV的阳性率是20.18%;ALV的阳性率13.49%,二者共感染的阳性率是6.24%。而且感染鸡各组织含量也有所差异,其中CAV以脾脏的最多,ALV以肾脏最多。同时对肝脏进行细菌分离培养时发现存在大肠杆菌、沙门氏菌和霉形体的混合感染。由此可见,在鸡胚和雏鸡体内存在CAV、ALV的感染以及与细菌性疾病的共感染。     

病毒 REV 与 ALV-J 经鸡胚垂直传播共感染对雏鸡的协同致病性

【目的】J 亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J，ALV-J）和禽网状内皮组织增殖病毒（Reticuloendotheliosis virus，REV）均可通过鸡胚垂直传播，且两者在鸡胚中的自然共感染已有报道，但两者经鸡胚共感染的致病性未有研究。建立 ALV-J 与 REV 垂直传播共感染的实验动物模型，研究 ALV-J 与 REV垂直传播共感染的致病作用及其对禽白血病净化检测的影响，以期为推动多病原协同净化提供参考。【方法】通过鸡胚接种方式构建分别携带 ALV-J、REV 及两者共感染的雏鸡感染模型，通过孵化率、死亡率、体重、胎粪 ALV-p27 抗原检出率、病毒血症阳性率等指标分析 REV 与 ALV-J 在垂直传播中共感染的致病性。【结果】ALV-J+REV 共感染组鸡胚孵化率为 65.71%，低于单感染组和空白组（CK）；共感染组死亡率高于单感染组和CK。7 日龄时 CK、ALV-J 组、REV 组、ALV-J+REV 组雏鸡平均体重分别为 59.25、50.83、49.67、43.78 g，共感染加重了对雏鸡生长的抑制。ALV 血浆病毒分离结果显示，ALV-J 组、ALV-J+REV 组阳性率在各日龄均为100%，CK 均为 0%。采集肛拭子检测 ALV-p27 抗原结果显示，ALV-J+REV 组雏鸡阳性率在 1、3、7、14 日龄分别为 91.30%、94.12%、90.90% 和 100%，肛拭子的 ALV-J p27 阳性检出率低于血浆病毒分离。比较免疫器官发育指数结果显示，ALV-J 和 REV 单感染均导致雏鸡免疫器官萎缩，共感染加重免疫器官萎缩程度。免疫器官病毒载量显示，REV 与 ALV-J 共感染促进了 ALV-J 在免疫器官中的增殖，同时 ALV-J 也促进了 REV 在免疫器官中的增殖。【结论】相对于 ALV-J 和 REV 单感染，两者共感染降低了鸡胚孵化率、增加了雏鸡死亡率、增强了对雏鸡生长的抑制作用，对诱导胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官萎缩的影响更加显著，且两者在共感染过程中对彼此复制均有促进作用。     

我国部分地方鸡种禽白血病流行病学调查

[目的]了解我国地方鸡种禽白血病的自然感染状态,为今后该病的净化提供依据。[方法]采用ELISA法和病毒分离方法,对国内10个地方鸡种开展了ALV-AB和ALV-J主要外源性禽白血病流行病学调查,并进一步对其中4个品系的F_2代鸡群进行ALV跟踪监测,同时对饲养过程中使用的弱毒活疫苗也进行了ALV抽样检测。[结果]ALV-P27抗原阳性率为0~62.1%,ALV-AB抗体阳性率为0~25.0%,ALV-J抗体阳性率为0~59.0%,病毒分离阳性率为0~22.0%。4个品系的F_2代鸡群1日龄胎粪ALV-P27抗原阳性率为6.0%~67.0%,6周龄病毒分离检测阳性率为2.0%~34.3%;国内有1个厂家2个种类2个批次的疫苗分离有ALV。[结论]我国地方鸡种普遍存在ALV感染,不同地方鸡种间差异较大,可能与不同地方鸡种对ALV的遗传抗性有关;某些品系种群的F_2代雏鸡ALV阳性率甚至略有提高,可能与疫苗接种污染有关。     

3种鸡免疫抑制性疫病对禽流感疫苗免疫效果的影响

以H5N1亚型高致病性禽流感灭活疫苗,对16个规模肉鸡养殖场、11个种禽场、6个放养鸡场,按7日龄首免0.3 mL,40日龄二免0.5 mL进行注射免疫,同时开展禽网状内皮增生症病毒(REV)、白血病病毒(ALV)J亚型和传染性贫血病毒(CAV)3种免疫抑制病血清学调查。结果发现肉鸡场禽流感平均抗体滴度为5.90 log2,REV、ALV-J、CAV血清学阳性率分别为69.8%,20.1%和83.6%;种禽场禽流感平均抗体滴度为6.05 log2,REV、ALV-J、CAV血清学阳性率分别为54.3%,5.7%和82.8%;放养鸡场禽流感平均抗体滴度为6.86 log2,REV、ALV-J、CAV血清学阳性率分别为35.7%,3.6%和83.9%,表明3种免疫抑制病对禽流感抗体水平有协同抑制作用。     

CAV和ALV混合感染病例的诊断

本实验从10羽130日龄发病海兰白蛋鸡中分离组织病料,并进行药敏试验及PCR诊断。根据CAV、ALV已有引物,通过PCR方法检测,结果显示:样本均能扩增出584bp和1260bp的片段,即CAV和ALV均为阳性,确诊为CAV与ALV混合感染。测序结果显示,同源率分别可达97.3%～99.1%和98.3%～99.4%。     

雏鸡感染鸡传染性贫血病病毒分布情况研究

将鸡传染性贫血病毒强毒株C364和弱毒株C545分别接种1日龄鸡传染性贫血病毒抗体阴性的健康雏鸡,于接种后第7天和14天每组抽查3只测定血球压积值,并在接种后第1、3、5、7、10和14天各组分别宰杀3只雏鸡,取胸腺、肝脏和骨髓组织,用竞争性PCR测定其病毒含量.结果表明,雏鸡感染CAV,后表现为血球压积值下降,其中强毒感染鸡较弱毒感染鸡的红细胞压积值下降幅度大;病毒能够在雏鸡胸腺、肝脏和骨髓内繁殖,其中胸腺内病毒增殖最快,病毒滴度最高,肝脏其次,骨髓最低.     

鸡新城疫和传染性支气管炎母源抗体消长动态监测

逐日采集１－２５日龄雏鸡的血清和１－２０日胚龄鸡胚的卵黄提取液、胚体浸液，应用血凝抑制试验测定鸡新城疫和传染性支气管炎（气管炎、肾型）母源抗体消长动态。结果表明，雏鸡的鸡新城疫和传染性支气管炎的毒 源抗体的高峰期是随着日龄的增加而降低。鸡胚中卵黄内的新城疫抗体效价１－１５日胚龄持续在１：６４０：１６日龄抗体水平开始下降；传染性支气管炎的抗体效价１－１２日胚龄持续在１：８０以上，１３日胚龄抗体水平开     

感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后免疫保护效应及其机理研究

 雏鸡 1日龄人工感染鸡贫血病毒 (CAV) ,于 8日龄接种 L asota疫苗 ,免疫后 2 8d进行新城疫强毒 (v NDV)攻击 ,以同龄未感染 CAV和用 L asota疫苗免疫并经 v NDV攻毒雏鸡为对照 ,检测其免疫保护效应 ,胸腺和脾脏 T细胞数量及 T细胞增殖反应 ,法氏囊和脾脏 Ig G+、Ig M+、Ig A+抗体生成细胞数量 ,血清免疫球蛋白 Ig G、Ig M、Ig A含量 ,血凝抑制抗体 (HI)滴度等。结果表明 ,CAV人工感染并用新城疫 (ND)疫苗免疫雏鸡经 v NDV攻击后的免疫保护率为 6 0 % ,对照组雏鸡 v NDV攻击后免疫保护率为 10 0 % ,胸腺和脾脏 T细胞数量和 T细胞增殖反应、法氏囊和脾脏Ig G+ 、Ig M+ 、Ig A+ 抗体生成细胞数量、血清 Ig G、Ig M、Ig A含量及 HI抗体滴度 ,均较对照组雏鸡显著降低。说明感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后的免疫保护效应及免疫功能明显降低。     

三种常见鸡胚胎性疫病病原人工共感染的试验检测

近几年,家禽发生多种病原共感染的现象非常普遍,多种病原共感染常常引起非典型的病变,并进而导致重大的经济损失.细菌性胚胎性疫病病原种类较多,且大多是条件性致病菌,由不同的细菌多重感染诱发的疾病越来越常见,鸡毒性支原体(Mycoplasma gallisepricum, MG)、鸡沙门氏菌(Salmonella Avium)、禽波氏杆菌(Bordetella Avium)为三种常见鸡胚胎细菌性疫病的病原.因此,本研究针对这三种常见鸡胚胎细菌性疫病的病原进行了共感染的分析与检测.目的在于研究这三种微生物的共感染的发病情况、病理变化、病原微生物的分布及其消长规律,以及与单独感染的差别.通过本研究为鸡场中此类疾病提供理论依据.方法:分别对1日龄SPF雏鸡(10只/组)和11日龄SPF鸡胚(10枚/组)进行3种病原、2种病原、1种病原的感染.随时进行生长情况的观察,对死亡雏鸡、鸡胚进行剖检.结果,无论通过肉眼观察和还是病理学观察,3种病原共感染的雏鸡和鸡胚病变最严重,出现死亡时间最早,并且死亡率最高,两种病原共感染次之,但是多种病原共感染情况都比一种病原单独感染严重.为了进一步研究发生共感染之后,病原的分布及其随时间的消长规律,分别对剖检雏鸡与鸡胚取样,进行IFA与PCR的检测,结果表明,支原体的侵袭,气囊感染最严重,肾脏次之,其后是肝脏.波氏杆菌与沙门氏菌在肝脏和法氏囊感染最严重,肾脏和肺脏次之,另外,对于波氏杆菌感染鸡,从皮下也有大量病原菌存在.雏鸡在感染24 h内各病原含量呈快速增长趋势,36 h之后达到高峰,然后下降,在三种病原共感染的雏鸡的组织中,每种病原的含量与单独感染、双重感染的含量相差不大.鸡胚在感染24 h内各病原含量呈增长趋势,24 h之后下降,多种病原共感染的鸡胚分离得到的单独一种病原的含量略低于单独感染的鸡胚.本研究通过较为系统的分析与检测,为进一步认识与防治多重感染在禽类胚胎细菌性疫病的发生提供了依据,对控制多种微生物引起的胚胎细菌性疫病所造成的经济损失具有一定意义.     

Influence of REV and ALV-J Co-Infection on Immunologic Function of T Lymphocytes and Histopathology in Broiler Chickens

The aim of present investigation is to study the effect of single- and co-infection with REV and ALV-J on T lymphocytes bioactivities and histopathology in broiler chickens. The bioactivities of blood and spleen T lymphocytes including lymphoproliferation responses, cytotoxicitic responses, and histopathology of spleen were detected in broiler chickens singly- or co-infected with REV and ALV-J at different days post inoculation and the virus expressions in spleen of infected broiler chickens were detected with immunofluorescence assay （IFA）. The results indicated that blood and spleen T lymphocytes proliferation responses and cytotoxicity in broilers infected with REV or/and ALV-J were inhibited in the whole observed period compared with controls. In the co-infected chickens they were highly inhibited than in the single-infected. The histopathology of spleen in infected chickens at 17 and 37 d post inoculation （dpi） indicated that cell interium increased, the numbers of lymphocytes decreased, and the regrowth were destroyed or decreased, especially more significantly at 17 than at 37 dpi. The different numbers of virus were detected in spleen lymphocytes in REV- infected and/or ALV-J-infected chickens. In the spleen of co-infected chicken, both REV and ALV-J were detected and the total numbers of viruses were more than in chickens singly-infected with REV or ALV-J. Thus, the co-effect of REV and ALV-J caused more immunosuppression on T lymphocytes bioactivities in broiler chickens than single-effect of ALV-J or REV, which contributed to the sever histopathology and the product of tumor cells. This study will be helpful for understanding the effect of co-infection with many viruses and control them in poultry.     

地方品种皖南黄肉种鸡ALV-J与REV的共感染 及其分子变异分析

 【目的】探讨地方品种皖南黄肉种鸡群中禽白血病病毒（ALV）与禽网状内皮增生病病毒（REV）的感染状态,同时对J亚型ALV（ALV-J）分离株的囊膜糖蛋白基因（env）和非编码区3′UTR序列进行分子变异分析,并对近十年的分离株非保守序列区段进行统计比较,探讨ALV-J分子变异趋势。【方法】取7只300日龄皖南黄肿瘤病鸡分别进行病理组织学观察、IFA检测肝脏组织切片后激光共聚焦观察、细胞培养后的IFA以及PCR方法检测。【结果】7只皖南黄肉种鸡有6只同时感染ALV-J与REV,而且ALV-J和REV已经共感染同一个肝细胞。取2个ALV-J分离株进行env基因与非编码区3′UTR扩增与序列分析,两分离株的env全长均为1 704 bp,3′UTR全长均为400 bp,3′UTR区段rTM和E元件同发生双缺失;3′UTR-E元件与近十年国内来自白羽肉鸡的ALV-J分离株比较,基因缺失表现为共性,但3′UTR-rTM基因缺失呈现多样性;5′LTR作为保守序列较之前所有国内外毒株有11 bp缺失。【结论】研究发现,地方品种皖南黄肉种鸡群存在ALV-J与REV的共感染,且呈现普遍性（6/7）,表明地方品种鸡高肿瘤发生率与ALV-J、REV共感染密切相关;ALV-J的基因缺失主要集中于3′UTR-E与3′UTR-rTM, 3′UTR-E元件基因缺失显示,皖南黄肉种鸡群ALV-J分离株与近十年国内来自白羽肉鸡的ALV-J分离株有共同的来源。     

地方鸡禽白血病病毒感染调查及主要流行亚群分析

为了解湖北省地方鸡禽白血病病毒的感染状态及主要流行亚群,从麻城绿壳蛋鸡、江汉鸡、景阳鸡3个地方品种核心群采集了7 477份样品,进行蛋清p27抗原检测、公鸡病毒分离鉴定及分离株gp85基因序列分析。结果显示:3个地方鸡种蛋清p27抗原阳性率分别为1.32%、6.54%和2.82%,公鸡病毒分离率为6.11%、30.14%和8.64%,表明湖北省地方鸡禽白血病病毒感染比较严重,不同品种的感染率不同,公鸡的排毒率高于母鸡。利用PCR方法将分离的15株禽白血病病毒分为两大亚群,分离株gp85基因遗传进化分析结果显示,3个地方鸡品种主要流行J、K亚群禽白血病病毒,均存在J、K亚群禽白血病病毒的共感染,表明湖北省地方鸡禽白血病病毒感染情况较为复杂。     

鸡贫血病毒安徽分离株感染性克隆的构建及其感染特性

鸡贫血病毒（chicken anemia virus,CAV）是诱导雏鸡发生免疫抑制的重要病原之一。应用PCR方法从安徽某鸡场送检病鸡肝组织中检测并鉴定CAV,扩增病毒全基因组序列插入pcDNA3.1(+)载体,并引入含Kpn I （GGTACCCAG）酶切位点的9 bp外源性标签,获得顺次连接的双拷贝CAV基因组的重组质粒,通过脂质体介导转染鸡MDCC-MSB1淋巴细胞并拯救出CAV感染性克隆毒株。经动物试验,感染性克隆毒株在接种1日龄健康雏鸡后15 d,对胸腺等免疫器官指数影响较小,胸腺病变不明显,表明其感染能力减弱,为进一步分析CAV致病机制和筛选疫苗候选株奠定基础。     

草鸡J亚群禽白血病病毒的PCR检测

通过对GenBank发表的ALV的基因序列的分析,针对J型ALV保守区设计并合成1对特异性引物。通过对反应条件的优化,确定了检测ALV的PCR检测方法,对来源于江苏地区不同草鸡养殖基地的10份病料组织样本提取DNA进行PCR扩增。结果对疑似J亚群ALV病料和正常鸡肝脏组织的病原核酸检出率分别为90%和0,同时将扩增的目的基因进行克隆测序,并与GenBank中的参考毒株进行比较,结果表明目的基因片段序列长300 bp左右,与参考毒株核苷酸序列同源性为97%以上。试验表明,江苏地区草鸡群中确实存在J亚群鸡白血病病毒感染的情况。     

姜黄素对肉鸡部分内脏器官和肠道生长发育的影响

目的：研究在基础日粮中添加不同剂量的姜黄素对肉鸡部分内脏器官和肠道生长发育的影响。方法：选择体重况相近的1日龄AA肉鸡240只随机分成4处理组（A、B、C、D）,每个处理组3个重复,每个重复组20只鸡。A为对照组饲喂基础日粮,B、C、D分别在基础日粮中添加姜黄素150mg/kg、200mg/kg、250mg/kg。结果：在21日龄时,以添加200mg/kg作用最为显著,与对照组相比,肌胃的平均质量提高26.3%（P＜0.05）,十二指肠的平均质量提高18.8%（P＜0.05）,空肠的平均质量提高26.3%（P＜0.05）,与对照组相比回肠、十二指肠的平均质量呈提高趋势,当剂量达到250mg/kg时起相反作用。空肠的平均长度也明显提高,但差异不显著（P＞0.05）,而回肠的平均长度对照组都低于试验组;在42日龄时,姜黄素对部分内脏器官和肠道的平均质量起下降作用,影响无规律性,而对十二指肠、空肠、回肠的平均长度也起降低的作用,但差异不显著（P＞0.05）。结论：姜黄素作为添加剂在肉鸡生长的前期可以有效促进肉鸡消化器官的生长发育。     

Effect of Using Garlic on the Economical and Physiological Characteristics of Broiler Chickens

This investigation aimed to evaluate the beneficial effects of garlic powder as a phytogenic supplement on broilers chickens' performance. The assumption that garlic could improve some economic and performance characteristics of broiler chickens (i.e., body weight, feed intake, water intake, feed conversion ratio, feeding cost, carcass yield, and mortality rate) was tested. A total of 400 one-day-old chicks of mixed sex (Hybrid) were weighed and randomly assigned to four treatment groups, each with four replicate pens of 25 chicks. The dietary treatments included the basal diet (control), control + 2.5 kg/ton garlic, or control + 5 kg/ton garlic or 7.5 kg/ton garlic as powder. The results of the study revealed that incorporation of garlic powder in broiler diets as feed additive significantly enhanced growth, economic and productive performance of these chickens. Physiological measurements (body weight, weight gains, feed intake, feed conversion ratio, carcass weight and internal organs) showed better performance of garlic treated chickens compared with control group under same rearing system. The results similarly showed lower susceptibility to diseases and medicament treatment consequently; lower mortality rate compared to control groups. Furthermore, blood and meat analysis showed lower cholesterol, Triglyceride, LDL, and, HDL levels compared with control group. The study concluded that garlic could be effectively used in broilers feeding to replace antibiotic as a growth promoter.