Bax蛋白在小鼠睾丸发育过程中的表达

以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,在其石蜡组织切片上采用免疫组化技术探讨Bax蛋白在小鼠睾丸生后发育全过程中的表达规律.结果发现：Bax蛋白在生后1d直至57d的小鼠睾丸组织中均有广泛性的表达,其表达涉及睾丸曲细精管中各类型生精细胞.上述结果表明：小鼠睾丸生后发育过程中各级生精细胞内均有Bax蛋白的存在,但生精细胞中Bax蛋白的表达可能并不意味着这些细胞最终走向凋亡.     

p53基因在小鼠睾丸发育过程中的表达规律

以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,利用地高辛标记的p53基因探针在其石蜡组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,探讨p53基因在小鼠睾丸生后发育全过程中的表达规律.结果发现：p53基因的首次表达出现在生后第15 d的初级精母细胞中,在睾丸后续发育至57 d的全过程中,初级精母细胞中均有表达信号;次级精母细胞和圆形精子细胞至生后27 d时也开始出现表达;而精原细胞和精子中始终均无阳性表达信号.p53基因的表达活跃期分别出现在生后20 d、33 d和50 d.上述结果表明：p53基因在小鼠睾丸生后发育过程中发挥着重要的作用;其表达活跃期和凋亡高峰期基本同步.     

茶多酚对UVB照射雄性小鼠生殖系统的保护作用

研究了茶多酚对中波紫外线(UVB)辐射致雄性生殖系统损伤的保护作用及其可能的机理.将60只雄性小鼠随机分为6组,分别为Ⅰ空白对照组、Ⅱ辐射对照组、Ⅲ~Ⅵ茶多酚实验组.其中Ⅲ~Ⅵ茶多酚实验组上午分别给予5mg kg1d1、10 mg kg1d1、20 mg kg1d1、40 mg kg1d1的茶多酚灌胃1次,Ⅰ空白对照组与Ⅱ辐射对照组分别给予10 ml kg1d1的生理盐水灌胃.Ⅱ~Ⅵ组实验动物均在下午接受3 h的UVB照射.小鼠处理14d后,处死并分别测各组生殖腺重量,睾丸组织SOD活性和MDA含量,睾丸组织切片观察曲细精管变化.结果:与Ⅰ空白对照组相比,Ⅱ辐射对照组小鼠体重和生殖腺重量明显降低(P<0.05),睾丸组织SOD活性明显降低(P<0.01),MDA含量明显升高(P<0.01),睾丸生精上皮排列疏松,生精细胞脱落至管腔.与辐射对照组相比,随着茶多酚剂量的增加,Ⅲ~Ⅵ茶多酚实验组小鼠体重和生殖腺重量明显增加(P<0.05),睾丸组织中SOD活性明显增加(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05),睾丸生精细胞排列越来越致密.UVB辐射能够造成雄性小鼠生殖系统的损伤,而茶多酚是一种高效的辐射防护剂,能够清除自由基,对受UVB辐射雄性小鼠的生殖系统各脏器和生精细胞具有保护作用.     

打印室PM2.5导致的体内外损伤与机制探究

为研究打印室PM2.5造成的体内外损伤及其机制,建立了细胞和小鼠模型来评估打印室PM2.5对细胞和肺损伤的影响及其可能的机制。结果表明:打印室PM2.5明显上调了细胞和小鼠体内磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)蛋白表达量,而磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的激活,促进基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达量上调,MMP-2表达量上调加剧了细胞以及小鼠肺部纤维化的形成,同时,血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达量被下调,导致了血管生成的抑制作用(P<0.05)。打印室PM2.5还下调了小鼠体内B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量,同时,上调了Bcl-2同源水溶性蛋白(BAX)的表达量。当这2个蛋白表达比例变化时,可以激活凋亡启动子Caspase-8和执行子Caspase-3,所以Caspase-8和Caspase-3蛋白的表达量在打印室PM2.5处理组中上调(P<0.05),预示了凋亡的开始。综上所述,打印室PM2.5的暴露明显加剧了细胞和小鼠体内纤维化、小鼠体内凋亡的发生,对长时间待在打印室的人员构成潜在威胁。     

BI-1通过抑制内质网应激诱导的细胞凋亡减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤

探讨慢病毒介导BI-1过表达对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)过程中细胞凋亡的影响.BI-1过表达慢病毒溶液侧脑注射后,采用血管内穿刺法建立SAH后EBI大鼠模型.于造模后不同时间点对大鼠进行神经行为学评估.于造模后24h,检测大鼠脑含水量,HE染色观察海马神经元组织形态学变化,TUNEL染色观察海马组织神经元细胞凋亡情况,Western blot检测BI-1蛋白以及内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78和Caspase-12的表达情况.实验结果表明,BI-1过表达可减轻SAH后大鼠神经功能障碍、脑水肿程度和神经元细胞的损伤;TUNEL染色结果显示,BI-1过表达可抑制SAH后大鼠神经元细胞的凋亡;Western blot结果表明,SAH可激活内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78和Caspase-12的表达,而BI-1过表达却又抑制了SAH后内质网应激相关蛋白的激活.因此,BI-1过表达可通过抑制内质网应激诱导的神经元细胞凋亡,从而减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤.     

结直肠癌中原癌基因DEK与IMP3/Ezrin通路的相关性

前期研究表明:IMP3/Ezrin基因是上皮细胞-间质细胞转换(EMT)中的主要构成基因,DEK可以影响结直肠癌细胞的迁移、粘附和侵犯等生物学行为。为了进一步研究DEK与IMP3/Ezrin在结直肠癌中的相关性,首先分析检测了255例结直肠癌和120例癌旁组织蜡块中DEK与IMP3/Ezrin的蛋白水平表达及15例结直肠癌及其癌旁新鲜组织中DEK与IMP3/Ezrin的mRNA水平表达,继而检测结直肠癌细胞中DEK基因敲除前后DEK/IMP3/Ezrin蛋白和mRNA水平变化。结果显示:DEK、IMP3/Ezrin蛋白在255例结直肠癌组织与120例癌旁良性组织中的阳性表达率有明显差异,而15例结直肠癌及癌旁新鲜组织中三种基因mRNA水平以及结直肠癌细胞系中三种基因的蛋白水平也呈现相近的趋势。利用RNAi将DEK进行敲除结果显示:DEK敲除后4种结直肠癌细胞系中的IMP3 mRNA均明显下调,而Ezrin mRNA均明显上调。由此推测,DEK可能通过调节IMP3/Ezrin信号通路相关蛋白促进结直肠癌的演进。     

去泛素化酶25在非洲爪蛙早期胚胎中的时空表达

去泛素化酶25(Ubiquitin-specific protease25,USP25)作为蛋白泛素化降解过程的负性调节因子,广泛参与病毒免疫、肿瘤发生、转移、蛋白修饰折叠等一系列的病理和生理过程,在小鼠胚胎中,该基因主要表达于增殖的神经上皮细胞和有丝分裂后的神经元,但是其在整个胚胎发育早期时空的细致表达尚未详尽刻画.作者克隆了模式动物非洲爪蛙(Xenopus laevis)去泛素化酶25,通过胚胎原位杂交和半定量RT-PCR方法研究了其在早期胚胎中的时空表达情况.USP25蛋白序列在进化上,从斑马鱼、鸡胚、爪蛙、小鼠到人具有高度的保守性,提示该蛋白在各物种间具有相似的功能.数据表明,USP25在非洲爪蛙中母源性表达于动物极区域,在整个早期胚胎发育过程中其mRNA表达量比较恒定,神经板时期(第14期)USP25主要在胚胎神经板外侧、前部基板和表皮表达;发育后期该基因主要表达于中枢神经系统、心脏、胰腺以及胃和十二指肠原基,提示该基因在这些器官和组织发育中发挥作用.     

空气污染物TDI的雄性生殖毒性及作用机制

为评价甲苯二异氰酸酯的雄性生殖毒性,观察了吸入染毒TD I后,睾丸组织的形态学上和酶水平的变化,以及对生殖细胞RNA/DNA含量的影响.结果表明:在本实验染毒时间和染毒剂量范围内,TD I对雄性的生殖毒性主要表现为对各级生精细胞均有一定的毒性作用,作用的靶点是细胞内的线粒体;TD I通过影响各种酶的活性,干扰了睾丸组织的有氧代谢和无氧供能,抑制了细胞对能量的利用,损伤了各级生精细胞,导致生精上皮不可逆的损害,从而造成了其对雄性生殖系统的损伤;TD I对雄性生殖细胞的核酸代谢以及DNA合成有一定影响.充分说明TD I在形态学、酶和基因水平上对雄性生殖系统均具有一定的毒性作用.     

镧对仔鼠皮质神经细胞BAX表达的影响

通过对染镧仔鼠皮质组织BAX mRNA和BAX蛋白表达的检测,探讨镧暴露对仔鼠皮质神经细胞BAX表达的影响。取Wistar雌性大鼠32只,随机分成对照组及低、中、高剂量LaCl_3组,各LaCl_3组饮水中镧(用LaCl_3配制)浓度分别为0.25%、0.5%和1.0%,每组8只动物。实验动物以自由饮水的方式进行镧暴露。子代大鼠在断乳前经由母体血循环和吸吮母乳染镧,断乳后则通过自行饮水摄入。在整个实验过程中记录孕鼠及仔鼠体重,在仔鼠出生后49 d麻醉处死。取仔鼠皮质组织,应用实时定量PCR检测BAX mRNA、用Western-blot检测BAX蛋白表达水平变化。结果显示仔鼠皮质重量逐渐下降,高、中剂量LaCl_3组仔鼠皮质重量低于对照组,皮质系数逐渐增加,差异有统计学意义(P0.05),这提示仔鼠脑发育已经受损。仔鼠皮质组织BAX mRNA和BAX蛋白表达在各剂量LaCl_3组之间出现差异,与对照组相比,高、中剂量LaCl_3组仔鼠皮质组织中BAX mRNA和BAX蛋白表达量明显增高,差异有统计学意义(P0.05);且随着LaCl_3暴露剂量的增加,仔鼠皮质BAX mRNA和BAX蛋白表达水平逐渐上升,差异有统计学意义(P 0.05)。提示镧暴露导致的仔鼠大脑皮质发育损伤,可能与皮质BAX mRNA和BAX蛋白表达水平升高有关系。     

大气混合污染物对大鼠肺脏中血红素氧合酶1表达的影响

通过观察大气污染物引起大鼠肺损伤的病理组织学变化,分析肺组织内血红素氧合酶1（HO-1）的表达量的变化,为大气污染所致肺损伤的生物学标记物的研究提供科学依据。实验方法如下：将30只Wistar大鼠,随机分为3个实验组（3d、7d、30d组）和3个对照组（3d、7d、30d组）,对实验组大鼠染尘染毒后提取所有大鼠肺组织,观察其病理组织学变化;RT-PCR技术检测各组肺组织中HO-1的mRNA表达;Western-blot技术检测各组肺组织中HO-1蛋白的表达。结果显示：实验组（7d及30d）的肺组织病理形态学评分显著高于对照组（7d及30d）,实验组（7d及30d）大鼠肺组织HO-1mRNA表达与对照组相比,具有显著性差异（P均〈0.05）。随着吸入大气混合污染物的时间延长,肺组织内的HO-1蛋白表达水平逐渐增高,实验组（7d及30d）与对照组（7d及30d）相比,差异有显著性意义（P〈0.05）。在吸入大气混合污染物后早期（7d）,HO-1转录水平升高。持续吸入混合大气污染物（30d）,大鼠肺组织出现明显的病理组织学变化,HO-1转录水平、蛋白表达水平均比对照组明显升高。得出结论：可将HO-1作为大气混合污染物所致的肺损伤的早期生物学标记物;采取某些手段增加肺组织HO-1的表达,可能会减少混合大气污染物对肺组织造成的损伤。     

低频电磁场对大鼠肺组织红外谱影响研究

通过光镜下的组织病理学观察,采用高分辨率的傅里叶变换红外光谱仪,对长期暴露在高场强低频电磁场环境中的大鼠肺组织和对照组大鼠肺组织进行了对比研究,力求从分子水平上揭示暴露组大鼠肺组织和对照组大鼠肺组织的红外吸收光谱存在差别的原因,为进一步探讨高场强低频电磁场造成生物体组织损伤的作用机制提供实验依据。     

脂肪肝及其恶变的过食高脂诱发

根据肝脏脂质蓄积的细胞模型,采用高脂饲料构建小鼠脂肪肝模型,观察小鼠行为学变化,检测肝脏组织中病理情况、以及炎症（环氧化酶-2;cyclooxygenase-2/COX-2）、衰老（p16、p21）以及缺氧（缺氧诱导因子-1α;Hypoxia inducible factor-1α/HIF-1α）等相关蛋白的表达水平,探讨高脂饮食对脂肪肝向肝癌恶化过程的影响。结果表明长期高脂喂养小鼠,会导致小鼠精神状态不佳,肝脏组织脂肪过度沉积,导致肥胖。同时还会破坏正常肝组织结构,恶性细胞增殖,肝脏出现病变。此外,肝损相关蛋白表达水平随着肝脏组织的病理损伤加重也同样显示脂肪肝发生恶变。研究结果表明:过量摄入高脂食物可导致脂肪肝逐步恶化为肝癌。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合ZD55-TRAIL溶瘤腺病毒对肝癌细胞杀伤作用的研究

研究组蛋白去乙酰化抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合ZD55-TRAIL对人肝癌细胞株的体外杀伤效果,实验采用MTT法检测SAHA、ZD55-TRAIL以及二者联合对肝癌细胞株Huh-7、Bel-7404、Hep3B以及人正常肝细胞株QSG-7701增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色对联合处理的细胞进行凋亡形态学观察;通过结晶紫实验进一步检测联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况;通过Western blot实验在蛋白水平上检测一些凋亡相关蛋白表达情况的变化.实验结果表明:SAHA联合ZD55-TRAIL处理3d后对肝癌细胞株Huh-7的增殖抑制率达到50％,对Hep3B、Bel-7404也达到近40％的杀伤效率,并且联合治疗后对人正常细胞株QSG-7701未见明显的毒副作用.同时结晶紫实验也证明联合治疗对肿瘤细胞的杀伤力强于用SAHA或ZD55-TRAIL单独使用.Western blot实验证明了药物和病毒的联合作用使促凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-xL的表达量明显减少,caspase-8和caspase-9蛋白也有相应剪切现象的发生.流式细胞仪同样检测出SAHA和ZD55-TRAIL联合作用对肝癌细胞有很好的杀伤作用.     

氯化镧对仔鼠海马BDNF表达的影响

为了探讨氯化镧对仔鼠海马组织BDNF表达的影响。将健康成年雌性Wistar大鼠32只,随机分为对照组（饮用蒸馏水）;低剂量染镧组（饮用含0.25%LaCl3的蒸馏水溶液）、中剂量染镧组（饮用含0.5%LaCl3的蒸馏水溶液）和高剂量染镧组（饮用含1.0%LaCl3的蒸馏水溶液）,每组8只动物。然后将雌雄大鼠按1∶1同笼进行交配,发现阴栓或阴道分泌物镜检有精子者记为妊娠第0 d,孕鼠单笼饲养并自由摄水。子代大鼠在断乳前经由母体血循环和吸吮母乳染镧,断乳后则通过自行饮水摄入镧,至断乳后1个月结束。染毒结束后取海马组织,利用实时定量PCR的方法检测仔鼠海马组织内BDNF mRNA表达,利用western blot的方法测量仔鼠海马组织内BDNF蛋白的表达。研究发现高剂量组仔鼠海马BDNF mRNA表达显著低于中剂量、低剂量染镧组及对照组（P〈0.05）,中剂量组仔鼠海马BDNF mRNA表达显著低于低剂量染镧组及对照组（P〈0.05）,低剂量染镧组仔鼠海马BDNF mRNA表达显著低于对照组（P〈0.05）;对照组仔鼠BDNF蛋白表达的灰度值为（0.81±0.09）、低剂量染镧组BDNF蛋白表达的灰度值为（0.68±0.07）、中剂量染镧组BDNF蛋白表达的灰度值为（0.54±0.09）、高剂量染镧组BDNF蛋白表达的灰度值为（0.38±0.05）,仔鼠海马BDNF蛋白表达与染镧剂量负相关（P〈0.05）。结果表明亚慢性氯化镧暴露大鼠海马组织中BDNF表达降低,可能是氯化镧对神经系统毒性损伤的机制之一。     

家蚕表达重组人乳铁蛋白及产物对溃疡性结肠炎的治疗作用

乳铁蛋白（LF）在抗炎和参与机体免疫调节方面具有重要作用。利用家蚕杆状病毒表达系统构建含人乳铁蛋白（hLF）基因的重组病毒Bm-hLF,接种蚕蛹表达重组人乳铁蛋白（rhLF）,ELISA法检测rhLF的表达量,体外抑菌试验检测其抑菌活性,并建立小鼠溃疡性结肠炎（UC）模型,探究口服rhLF蚕蛹粉对UC的治疗效果。结果表明：rhLF在蚕蛹感染重组病毒120h后表达量最高达0.38mg/mL蚕蛹匀浆上清液;rhLF蚕蛹粉能抑制E.coli TG1的生长;口服rhLF蚕蛹粉可明显降低UC小鼠的疾病活动指数（DAI）、髓过氧化物酶（MPO）含量,减轻结肠组织炎症损伤,为今后开发一种新型、廉价的UC口服药物提供药效学实验参考。     

芦笋对人胃癌细胞MKN45裸鼠模型抑制肿瘤生长的初探

目的：观察芦笋对人胃癌细胞MKN45裸鼠模型抑制肿瘤生长的初探。方法：采用人胃癌细胞MKN45实体瘤和瘤细胞两种不同接种方法建立胃癌裸鼠模型,用鲜芦笋混悬液灌胃0.4ml/只,每日1次,连续32天。每周连续测量体重及肿瘤大小2次,观察芦笋混悬液对荷瘤的抑制作用。结果l芦笋对采用不同两种接种方式建立的人胃癌细胞MKN45裸鼠模型均有明显抑制肿瘤生长作用。结论芦笋有抑制人胃癌细胞MKN45肿瘤生长的功效。