碱性成纤维细胞生长因子对AD细胞模型ERK1/2活性的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对阿尔茨海默病(AD)细胞模型中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)表达影响。方法经体外培养的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)分正常对照组(常规培养液)、Aβ损伤组(即AD细胞模型,加入Aβ)、bFGF组(加入bFGF及Aβ)和抑制剂组(加25-3525-35入MEK抑制剂PD98059、bFGF和老化Aβ)。MTT法检测不同处理组PC12细胞存活率,WesternBlot免疫印迹25-35法分析p-ERK1/2蛋白表达变化。结果 Aβ损伤组PC12细胞存活率低于正常对照组(P<0.05),bFGF组细胞存活率高于Aβ损伤组(P<0.01)。WesternBlot结果显示,Aβ损伤组p-ERK1/2相对表达值较对照组显著下降,Aβ损伤组在加入不同浓度的bFGF后p-ERK1/2的相对表达值较Aβ损伤组显著增强,抑制剂组在加入不同浓度的PD98059后p-ERK1/2的相对表达值较bFGF组p-ERK1/2显著下降。结论 bFGF对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有一定保护作用,可能与增强PC12细胞ERK1/2活性有关。     

大豆肽减轻β-淀粉样蛋白肽诱导的小鼠原代海马神经元损伤

目的：研究大豆肽对β- 淀粉样蛋白肽（ Aβ）诱导的海马神经元损伤是否具有保护作用。方法： 分离胚胎 18.5 d C57BL/6 小鼠海马原代神经元,培养7 d 后用10 μmol/L 的Aβ25-35 处理,制作神经元损伤模型;随后分别在 神经元培养基中加入0.1%、0.5% 和1.0% 的大豆肽,处理48 h 后,利用MTT法检测大豆肽对海马神经细胞活力的 影响,DAPI 染色检测神经细胞凋亡形态变化;免疫印迹检测神经细胞凋亡蛋白表达的变化;免疫荧光染色法检测 原代神经元中微管蛋白β-Ⅲ-tubulin 及微管相关蛋白MAP2的变化。结果：大豆肽提高了Aβ25-35 所致神经损伤模型 中海马神经元的细胞活力,大豆肽降低了Aβ25-35 所致神经损伤模型中海马神经元的凋亡,减轻了细胞骨架的损伤。 结论：大豆肽对Aβ 诱导的神经细胞凋亡及细胞骨架损伤具有明显的抑制作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对AD细胞模型ERK1/2活性的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对阿尔茨海默病(AD)细胞模型中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)表达影响.方法 经体外培养的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)分正常对照组(常规培养液)、Aβ损伤组(即AD细胞模型,加入Aβ25-35)、bFGF组(加入bFGF及Aβ25-35)和抑制剂组(加入MEK抑制剂PD98059、bFGF和老化Aβ25-35).MTT怯检测不同处理组PC12细胞存活率,Western Blot免疫印迹法分析P-ERK1/2蛋白表达变化.结果 Aβ损伤组PC12细胞存活率低于正常对照组(P＜0.05),bFGF组细胞存活率高于A β损伤组(P＜0.01).Western Blot结果显示,Aβ损伤组p-ERK1/2相对表达值较对照组显著下降,A β损伤组在加入不同浓度的bFGF后p-ERK1/2的相对表达值较A β损伤组显著增强,抑制剂组在加入不同浓度的PD98059后p-ERK1/2的相对表达值较bFGF组p-ERK1/2显著下降.结论 bFGF对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有一定保护作用,可能与增强PC12细胞ERK1/2活性有关.     

β-淀粉样蛋白(1-42)对PC12细胞的氧化损伤

目的：探讨Aβ（1-42）对PC12细胞的氧化损伤作用。 方法: 利用不同浓度的Aβ(1-42)处理PC12细胞，采用MTT法、抗氧化酶活性测定以及RT-PCR分析观察Aβ(1-42)对PC12细胞的影响，分析Aβ(1-42)与SeGPx、MnSOD基因表达的关系。 结果: 随着Aβ(1-42)浓度的增加，SeGPx的表达不断下降；0.1 μmol/L Aβ(1-42)能诱导MnSOD的活性增加，Aβ(1-42) 对PC12的损伤作用能被acetovanilon（一种抑制内源性自由基产生的化合物）所抑制。 结论: Aβ(1-42)能介导PC12细胞内源性自由基的产生增多。     

β-分泌酶与阿尔茨海默病

β-分泌酶(β-site APP cleaving enzyme,BACE)在β位点裂解β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)并产生β淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ),Aβ的聚集是形成阿尔茨海默病(Alzhemier’s disease,AD)患者脑中老年斑的主要原因,引起神经元损伤和认知功能减退,在AD的发病过程中起到中心和共同通道的作用。BACE的抑制剂部分抑制BACE,可使Aβ水平下降,取得明显疗效。进一步研究BACE抑制剂的作用机制,对AD治疗具有良好的前景。     

阿尔茨海默病人外周血中抗淀粉样蛋白抗体的特性

目的比较AD病人和健康老年人外周血中的抗Aβ抗体特性。方法随机选择AD患者45例和健康老年人51例,①用间接ELISA法测定血清中的抗Aβ抗体滴度,②免疫组织化学ABC法观察AD病人和健康老人血清中的抗Aβ抗体与Tg2576鼠脑内老年斑的结合情况;③不同抗体水平的AD病人和健康老人的血清分别与PC12细胞培养,用MTT法检测PC12细胞的存活率。结果①AD病人和健康老人血清中的抗Aβ抗体分别为(119.78±84.50)μg/ml和(200.44±216.78)μg/ml,差异有显著性意义(P<0.05);②免疫组化发现用AD病人血清作一抗,抗Aβ抗体不能很好地显示已经形成的老年斑;③虽然AD病人血清中抗Aβ抗体较高,对PC12细胞的保护作用反而下降,且与Aβ42的剂量无相关性;而健康老人的血清仍能表现出较强的PC12细胞保护作用。结论AD病人血清中抗Aβ抗体滴度下降,与老年斑结合能力和对细胞的保护能力也下降。     

接种Aβ42全肽疫苗恒河猴的特异性体液免疫应答

目的 观察恒河猴接种Aβ42肽疫苗后的特异性抗体的产生. 方法 将5只雄性恒河猴分别在0、 2、 6、 10、 14、 18、 22 wk肌内注射Aβ42肽疫苗; 用ELISA法检测恒河猴血清抗Aβ42抗体水平及IgG亚类; 用Western blot检测血清抗Aβ42抗体的特异性; 免疫组化染色法观察抗血清对Tg2576转基因小鼠脑组织中Aβ斑的识别. 结果 疫苗接种后第8周, 恒河猴血清中出现明显的抗Aβ42抗体, 抗体水平随着接种次数的增加而升高, 第24周达1∶ 4 320, 以后抗体水平开始下降.产生的抗Aβ42抗体以IgG1和IgG2为主(IgG2/IgG1>1).血清抗Aβ42抗体具有高度特异性, 可识别Tg2576转基因小鼠脑组织中的Aβ斑. 结论 Aβ42肽疫苗可有效地诱导恒河猴产生特异性体液免疫应答.     

二十二碳六烯酸降低β淀粉样蛋白25-35致大鼠皮质神经元损伤

目的观察二十二碳六烯酸(DHA)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)致原代培养大鼠皮质神经元损伤的保护作用。方法原代培养Wistar大鼠皮质神经元,先后给予不同剂量的DHA(20、50和100μmol/L)及Aβ25-35(25μmol/L),用CCK-8比色法观察神经元存活率,用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度。结果 1)与对照组相比,Aβ25-35使细胞存活率明显下降(31%±6%,P<0.05);使细胞内游离钙离子浓度明显升高(249%±12%,P<0.05);2)孵育DHA可降低Aβ25-35引起的神经元存活率明显下降及细胞内游离钙离子浓度升高。结论 Aβ致细胞内钙超载是Aβ产生神经毒作用的一个方面,而DHA可部分拮抗Aβ25-35的神经毒作用。     

不同Aβ多肽与佐剂组合免疫小鼠对Th1/Th2平衡的调节作用

目的 观察野生型和突变型Aβ40及Aβ42与不同佐剂组合对T淋巴细胞亚型的不同刺激和调节作用,以探讨降低Aβ免疫毒性反应的可能途径。方法 BALB/c小鼠随机分组：铝（Al）佐剂对照组、Aβ42+福氏佐剂（CFA）组、Aβ42+Al组、Aβ40+Al组、Aβ40（E22A）+Al组,每组8只。经初次免疫和3次加强免疫,检测抗体效价,培养脾淋巴细胞,分别用各自抗原刺激,48h后用双抗夹心ELISA试剂盒检测培养液中IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-4的含量。72h后用CCK-8法检测脾淋巴细胞特异性增殖反应。结果 经Aβ免疫的4个试验组血清中均有特异性抗Aβ的抗体产生。脾淋巴细胞经各自抗原刺激后,均出现脾淋巴细胞特异性增殖反应。细胞培养上清中细胞因子检测结果显示,Aβ42+CFA组分泌的代表Th1型的细胞因子含量最高,Aβ40（E22A）+Al组则有显著降低（P <0.01）。其中Aβ40及突变型+Al组与Aβ42+Al组相比,分泌的Th1型细胞因子也有明显降低（P<0.05）。结论 Aβ40（E22A）+Al组对T细胞的毒性作用最低,在机体的免疫反应中可能具有更好的安全性。     

Aβ1-42对大鼠脑组织SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响

目的 探究Aβ1-42寡聚体对大鼠大脑的氧化应激损伤的影响.方法 经过Morris水迷宫实验,挑选出逃避潜伏期少于60s的60只实验大鼠随机等分为4组,设为正常组、PBS对照组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组.将Aβ1-42纤维或Aβ1-42寡聚体注射于大鼠右侧脑室制成实验动物模型;PBS对照组采用同样的方法给予注射等量的PBS;正常组不作任何处理.使用可见分光光度计检测大鼠脑组织的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性变化及丙二醛(MDA)的含量水平变化情况.借助于光学显微镜观察苏木精-伊红(HE)染色的各组大鼠海马组织的形态学变化.结果 与正常组及PBS组比较,Aβ1-42纤维组和Aβ1-42寡聚体组大鼠皮质MDA含量(分别为7.826±1.696、11.247±1.948)及海马MDA(分别为9.818±1.900、15.090±2.425)含量增加(P<0.05),皮质SOD(分别为29.829±6.340、18.649±6.070)和海马SOD(分别为51.097±8.381、31.634±8.680)活性下降(P<0.05),皮质GSH-Px(分别为133.113±17.506、79.503±19.936)和海马GSH-Px(分别为154.819±23.688、102.800±28.332)活性下降(P<0.05),其中,以Aβ1-42寡聚体组的变化更明显.HE染色可知,Aβ1-42纤维体及Aβ1-42寡聚体可使大鼠大脑海马区的神经元损伤,其中,Aβ1-42寡聚体对神经元的毒性损伤作用更严重.结论 Aβ1-42纤维、Aβ1-42寡聚体都可通过氧化应激损伤引起大鼠脑组织神经元的损伤,以Aβ1-42寡聚体氧化损伤作用更大.     

二十二碳六烯酸降低β淀粉样蛋白25-35致大鼠皮层神经元损伤

 摘要：目的 观察二十二碳六烯酸（DHA）对β淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）致原代培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用。方法 原代培养Wistar大鼠皮层神经元,先后给予不同剂量的DHA（20、50、100μmol/L）及Aβ25-35（25μmol/L）,用CCK-8比色法观察神经元存活率,用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度。结果：1）与对照组相比,Aβ25-35使细胞存活率明显下降（31± 6 ％,n=8,　p＜0.05）;使细胞内游离钙离子浓度明显升高（249±12 ％,n=8, p＜0.05）;2）孵育DHA可降低Aβ25-35引起的神经元存活率明显下降及细胞内游离钙离子浓度升高。结论：Aβ致细胞内钙超载是Aβ产生神经毒作用的一个方面而DHA可部分拮抗Aβ25-35的神经毒作用。     

Genistin对Aβ1-42诱发的PC12细胞损伤的神经保护作用

目的探讨Genistin对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将培养的PC12细胞分为:正常对照组、Aβ1-42处理组和Genistin预处理组。Aβ1-42处理组用Aβ1-42处理细胞,Genistin预处理组在用Aβ1-42处理前2h加入Genistin。使用细胞形态学方法、LDH法和MTT法观察Genistin的神经保护作用。结果单纯Aβ1-4210滋mol/L处理细胞24h,MTT吸光值减小,LDH释放量明显增加,与正常对组比较差异有显著性(P<0.01);细胞形态发生明显改变。用25mmol/LGenistin预处理PC12细胞2h,MTT吸光值与Aβ1-42处理相比明显增加,LDH释放量显著降低,与Aβ1-42处理组相比差异有显著性意义(P<0.01)。结论Genistin在体外抑制Aβ1鄄42对细胞的毒性作用。     

Iduna在Aβ诱导大鼠星型胶质细胞损伤中的作用

目的:脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积是阿尔茨海默病重要的病理特征。传统认为Aβ沉积能够诱导神经元凋亡。最近发现Aβ沉积同样能够诱导星型胶质细胞凋亡。Iduna是新近发现的内源性神经保护基因。本文的研究目的是探索Iduna在Aβ所致星型胶质细胞损伤机制中的作用。方法:采用大鼠神经胶质瘤细胞株C6进行细胞培养,细胞密度达到80%时传代培养。细胞随机分为对照组和Aβ组,经MTT法、比色法、Western Blot等实验方法,检测Aβ所致C6细胞损伤时细胞培养上清中的超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和C6细胞中聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP1)通路内的Iduna蛋白的表达。结果:与对照组比较,Aβ组中Aβ能够增加C6细胞培养上清液中MDA含量,降低SOD活性;同时,Aβ可下调C6细胞中PARP1通路内的Iduna蛋白的表达。结论:Aβ引起星型胶质细胞损伤可能与神经保护因子Iduna下调从而引起PARP1死亡通路激活有关。     

人参皂苷Rg1对视网膜氧化应激损伤的保护作用

目的:研究人参皂苷Rg1对视网膜氧化应激损伤的保护作用及可能机制。方法:在大鼠玻璃体腔内注射5μl氯化铁溶液制成视网膜氧化应激模型,连续14 d每日尾静脉注射人参皂苷溶液,单纯模型组不予处理,给药溶媒对照组等量注射生理盐水。处死取材后对大鼠视网膜采用Western Blot检测BACE1以及β-CTF含量,ELISA检测Aβ1-40的含量,通过吸光光度法检测丙二醛(MDA)含量。结果:给药处理组与单纯模型组及给药溶媒对照组相比,BACE1表达量明显降低,Aβ1-40和β-CTF产生量明显减少,丙二醛含量下降(P0.05)。结论:人参皂苷Rg1对视网膜氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制大鼠视网膜BACE1表达上调并相应减少Aβ1-40、β-CTF的产生有关。     

姜黄素胶束对Aβ1-42诱导HT22细胞损伤的保护作用

目的通过β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导HT22细胞损伤,建立氧化应激损伤的体外模型,探讨姜黄素胶束对细胞损伤的保护作用。方法合成姜黄素胶束并评价其体外生物相容性。分别用姜黄素胶束与游离姜黄素预处理细胞后用Aβ_(1-42)诱导HT22细胞损伤,观察对比对照组、模型组、姜黄素胶束组与游离姜黄素组的细胞形态、细胞存活率、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)以及乳酸脱氢酶(LDH)释放率和三磷酸腺苷(ATP)酶活力。进一步比较HT22细胞对姜黄素胶束和游离姜黄素摄取能力的差异。结果体外溶血实验显示姜黄素胶束的相对溶血率均低于5%,MTT结果显示姜黄素胶束对HT22细胞存活率基本无影响(P>0.05)。与游离姜黄素相比,姜黄素胶束更能显著改善Aβ_(1-42)诱导的HT22细胞损伤的形态,提高细胞存活率,减少ROS生成、抑制MMP降低、降低LDH释放率并升高ATP酶活力(P<0.05)。在相同条件下HT22细胞更易摄取姜黄素胶束。结论与游离姜黄素相比,姜黄素胶束具有更好的生物相容性,同时更能有效对抗Aβ_(1-42)诱导的氧化应激损伤,这可能与姜黄素胶束能促进细胞摄取有关。姜黄素胶束在临床治疗中具有良好的药用前景。     

原花青素对Aβ_(25-35)作用下PC12细胞的保护作用

目的:探讨原花青素对Aβ_(25-35)作用下PC12细胞的保护作用及机制。方法:25μmol/L的Aβ_(25-35)作用于PC12细胞48 h,预先加入25、50和100 mg/L的原花青素干预24 h。采用MTT法检测细胞存活率,DCFH-DA单染法检测细胞活性氧簇(ROS)的含量,JC-10单染法检测细胞线粒体膜电位,AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3的蛋白水平。结果:原花青素可提高Aβ_(25-35)作用下PC12细胞的存活率,降低胞内ROS含量,阻止线粒体膜电位下降,抑制caspase-3的活化(P0.05或P0.01),从而抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡。结论:原花青素对Aβ_(25-35)作用下的PC12细胞具有明显的保护作用,其作用机制可能是通过清除Aβ_(25-35)诱导产生的ROS而减轻对线粒体膜的损伤作用,从而抑制细胞凋亡的发生。     

甘草次酸对胶原诱导性关节炎滑膜成纤维样细胞炎症细胞因子表达和分泌的影响

目的:观察甘草次酸(GA)对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜成纤维样细胞(CIA-FLS)TNF-α、IL-1β表达分泌的影响,并观测与传统治疗药物MTX联合应用后的效果。方法:组织块培养法体外分离纯化CIA大鼠膝关节滑膜组织中CIA-FLS细胞。实验分为空白组、MTX组、GA组和GA+MTX组4组,分别对CIA-FLS细胞进行体外药物干预实验。每组分别干预1、3、5 d。Real time qPCR法检测各组CIA-FLS细胞TNF-α、IL-1β mRNA表达水平,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β水平。结果:药物干预1 d,CIA-FLS TNF-α、IL-1β表达均降低,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预3 d,CIA-FLS TNF-α、IL-1β表达均降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),3组组间差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预5 d,CIA-FLS MTX、GA、GA+MTX均可明显抑制TNF-α、IL-1β表达(P<0.05),处理组间差异有统计学意义,按照强弱依次是GA+MTX>MTX>GA(P<0.05)。MTX、GA、GA+MTX抑制TNF-α、IL-1β表达均呈时效依赖性,作用时间延长,抑制作用越明显(P<0.05)。结论:GA、MTX、GA+MTX对CIA-FLS炎症因子TNF-α、IL-1β表达和分泌的抑制作用依次递增,并呈时间依赖性。     

β-淀粉样蛋白在Alzheimer病中的神经毒性

文综述了β淀粉样蛋白多肽(βamyloid peptide,Aβ)在老年性痴呆症(Alzheimer's disease,AD)中的毒性作用。Aβ是老年斑形成的始动因子,也是老年斑核中的核心成分;Aβ沉积所形成的神经炎性斑,即老年斑是AD脑内特征性病理变化之一;Aβ本身也可形成自由基损伤神经元;Aβ引起的细胞凋亡在AD病神经元丢失中起着重要作用;Aβ可作用于胆碱能神经元末梢,通过抑制胆碱的摄取而减少乙酰胆碱合成,减少海马和皮质脑片释放乙酰胆碱。总之,Aβ是通过多个环节引发神经毒性作用的。     

慢性酒精中毒引起的脑神经损害与Aβ蛋白变化的相关性

慢性酒精中毒会对脑神经造成损伤,并且这种损伤与Aβ蛋白变化有着密切的关系。慢性酒精中毒会促进Aβ蛋白的产生,而Aβ蛋白可以激活星形胶质细胞和小神经胶质细胞,产生过多的炎症细胞因子间接损害神经,亦可通过影响线粒体的功能而损害神经元。Aβ蛋白对脑神经的损伤可表现为认知、记忆功能障碍,引发阿尔兹海默病(AD)。     

Aβ1-15疫苗免疫接种成年恒河猴的体液免疫效应

目的：观察Aβ1-15疫苗免疫接种成年恒河猴的特异性体液免疫应答。方法： 5只雄性成年恒河猴分别在0、2、6、10、14、18、22周肌肉注射法接种Aβ1-15疫苗；ELISA法检测恒河猴血清抗Aβ1-42抗体及其IgG亚型的水平；Western blot法检测血清Aβ1-42抗体的特异性；免疫组化方法观察抗血清与Tg2576转基因鼠脑Aβ斑的识别。结果： 疫苗接种后第8周，恒河猴血清中出现明显的抗Aβ1-42抗体，抗体滴度随接种次数的增加而升高，第24周达1∶3 840，疫苗停止接种后抗体水平开始下降；血清抗Aβ1-42IgG以IgG1为主；血清Aβ1-42抗体具有高度特异性；抗血清可识别结合Tg2576转基因鼠脑组织的Aβ斑。结论： Aβ1-15疫苗可有效诱导成年恒河猴产生特异性体液免疫应答。