原发性肝癌组织中肝素酶表达与肝癌侵袭转移关系的研究

目的探讨乙酰肝素酶（Heparanase Hpa）在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征的关系。方法分别采用RT—PCR和免疫组织化学法检测Hpa mRNA及Hpa蛋白在肝细胞肝癌、癌旁肝组织及肝癌细胞株中的表达。结果肝癌Hpa mRNA和蛋白的表达显著高于癌旁及正常肝组织（P〈0．05），肝癌组织中Hpa mRNA的表达与TNM分期、Edmondson分级和复发有关（P〈0．05）。结论Hpa mRNA及蛋白在肝癌中高表达，并与肝癌的侵袭转移、复发、预后有关.     

差异显示基因EEG1在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究和克隆原发性肝细胞癌（HCC）相关基因,探索其在肝癌发病中的临床意义。方法采用mRNA差异显示技术,分析肝细胞癌和癌旁正常肝组织间基因的差异表达,获得差异表达基因片段,对其进行克隆,测序,并用RTPCR方法,检测所获得的基因在44对肝细胞癌及相应癌旁正常肝组织中差异表达的情况,分析该基因表达与HCC临床病理特征的关系。结果克隆了一个肝癌相关基因EEG1,其在肝癌组织中的表达水平明显低于癌旁正常肝组织,仅为正常组织表达量的0．586±0．346倍（P〈0．05）。EEG1基因在肝癌组织中的表达下调与肝癌的早期分化程度密切相关（P〈0．05）。结论差异表达基因EEG1可能在HCC的早期发病中起着重要作用,有望成为肝癌的早期诊断指标。     

乙酰肝素酶蛋白表达与肝癌侵袭转移关系的研究

乙酰肝素酶（heparanase，HPSE）是一种葡糖苷酸内切酶，能特异性降解硫酸肝素多糖的硫酸肝素侧链，破坏细胞外基质和基底膜，乙酰肝素酶与肿瘤血管形成、侵袭转移密切相关。我们采用免疫组织化学法检测 HPSE 蛋白在肝细胞肝癌、癌旁肝组织及正常肝组织中的表达，探讨 HPSE 蛋白与肝癌临床病理特征的关系。     

肝癌组织中肠道病毒表达的初步研究

目的 研究肠道病毒在肝癌及非肝癌组织中的表达。方法：采用增强免疫组化方法检测11例肝细胞性肝癌和6例非肝细胞性肝癌病人的肝脏组织中肠道病毒的表达情况。并比较了肝癌与癌周组织中肠道病毒表达的差异。结果：肝细胞性肝癌组阳性率54．54％，非肝细胞肝癌组阳性率0％，两者之间有显著差异(P=0．043)。11例肝细胞肝癌中，6例癌组织肠道病毒表达阳性，癌周围组织中肠道病毒表达3例阳性，两者之间无显著差异(P=0．387)结论：肝癌病人存在肠道病毒感染。EV感染是以整个肝脏组织为靶器官，与肝癌组织无特殊亲和力。EV与肝硬化无关。     

人乙酰肝素酶全长编码cDNA的克隆

目的 克隆乙酰肝素酶(HPA)全长编码cDNA并构建其真核表达载体.方法 培养HepG2细胞后,收集细胞,提取HepG2细胞总mRNA,反转录合成cDNA.以cDNA作为模板通过PCR法扩增HPA蛋白全长编码cDNA;构建真核表达载体.结果 所获得的乙酰肝素酶cDNA序列共1632 bp,与已报道的人乙酰肝素酶编码基因全长cDNA序列一致,并构建了以pcDNA3.1(+)为载体的真核表达质粒.结论 本实验克隆出了人乙酰肝素酶编码cDNA序列,并成功构建了真核表达载体.     

人脑星形细胞瘤组织HPA的表达及对肿瘤细胞侵袭的影响

目的研究人脑星形细胞瘤组织HPA(乙酰肝素酶)的表达及对肿瘤细胞侵袭的影响。方法选取2013年3月-2017年3月期间在我院行手术切除的67例脑星形细胞瘤患者的病理切片标本,并选择同时期39例因脑外伤在我院行颅内减压术的患者的正常脑组织。采用免疫组化法和PCR技术检测脑组织中HPA蛋白的表达和HPA mRNA相对表达情况。采用siRNA干扰技术沉默星形细胞瘤U87细胞HPA基因表达,然后使用Transwell试验检测肿瘤细胞的侵袭和迁移能力的变化。结果正常对照组患者脑组织中未出现HPA表达,肿瘤组中有53例患者阳性表达,且HPA mRNA表达量高于正常对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。随着肿瘤组织恶性程度的升高,HPA阳性表达率和HPA mRNA表达量也明显升高,其中Ⅲ、Ⅳ级肿瘤组织中HPA阳性表达率和HPA mRNA表达量高于Ⅱ级,Ⅳ级肿瘤组织中HPA mRNA表达量高于Ⅲ级,差异具有统计学意义(P0.05)。发生转移的肿瘤细胞中HPA阳性率为94.17%高于未转移的55.17%,差异具有统计学意义(P0.05)。Transwell试验显示:转染组侵袭和迁移细胞数显著低于空白对照组与阴性对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论HPA在人脑星形细胞瘤高度表达,随着恶性程度的升高,HPA表达也相应升高,通过siRNA沉默HPA基因表达,可以使肿瘤细胞的侵袭迁移能力显著降低。     

1号染色体扩增区MEF2D基因在肝细胞癌组织中的表达

目的探讨1号染色体扩增区基因MEF2D mRNA在正常肝组织、肝癌细胞系及肝细胞癌（HCC）与癌旁组织中的表达并探讨其意义。方法利用逆转录聚合酶链反应方法对正常肝组织、13个肝癌细胞系及40例HCC癌组织与癌旁组织中MEF2DmRNA的表达情况进行初步分析。结果MEF2D mRNA在正常肝组织、13个肝癌细胞系及40例HCC癌组织与癌旁组织中均为高表达,其表达阳性率分别为100．0％（2／2）、92．3％（12／13）、95．O％（38／40）和97．5％（39／40）。MEF2D在各组的表达阳性率与pactin相类似,差异无统计意义,均为P〉0．05。结论染色体扩增区域常常存潜在的癌基因,由于染色体具有不稳定性,1号染色体扩增区MEF2D基因非HCC发生的癌基因,MEF2D mRNA高表达与HCC发生、发展无相关性。     

HBsAg阳性甲胎蛋白mRNA在肝癌组织中临床意义

目的：探讨甲胎蛋白mRNA在HBsAg阳性肝癌组织中表达的临床意义。方法：用巢式逆转录聚合酶链反应检测38例HBsAg阳性肝细胞癌患者癌组织甲胎蛋白mRNA。结果：32例（84．2％）患者癌组织甲胎蛋白mRNA呈阳性表达，其外周血甲胎蛋白mRNA亦为阳性；而阴性表达的6例（15．8％）其外周血甲胎蛋白mRHA和血清甲胎蛋白亦为阴性。HBsAg阳性癌组织甲胎蛋白mRNA阳性率在合并肝硬化组为100％，合并血清甲胎蛋白〉25ug／L组为100％、无合并肝硬化组为57．1％，〈25ug／L组为57．1％，P〈0．05。相关分析显示外周血甲胎蛋白mRNA阳性率和血清甲胎蛋白水平均于癌组织甲胎蛋白mRNA阳性表达呈正相关。癌组织甲胎蛋白RNA阳性表达与合并肝硬化呈正相关，而与有无门静脉癌栓或肝外转移及癌灶大小无相关性。结论：大多数HBsAg阳性肝细胞癌的甲胎蛋白基因处于活化状态，其外周血甲胎蛋白mRNA阳性表达和血清甲胎蛋白水平均与癌组织甲胎蛋白mRNA阳性表达有关。     

乙酰肝素酶mRNA在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC临床病理特征的关系.方法 采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)方法检测HPA mRNA在48例NSCLC癌组织、10例癌旁正常肺组织以及10例肺良性疾病肺组织中的表达水平.结果 HPA mRNA在NSCLC组织平均表达水平(8.244±5.314)明显高于癌旁(1.043±0.478)及良性疾病肺组织(1.025±0.465)(P<0.01);在NSCLC组织中HPA的高表达与肿瘤病理类型(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)和临床分期(P<0.01)有关,而与患者的年龄、性别、吸烟情况以及分化程度无关.结论 HPA在人肺癌组织中的表达量较正常肺组织明显上调并与非小细胞肺癌的侵袭、浸润以及转移有关.     

肝细胞癌变过程中VEGF动态表达及其临床价值研究

目的观察肝细胞癌癌变过程中血管内皮生长因子（VEGF）动态表达及其在肝癌诊断中的临床意义。方法以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲雄性SD大鼠诱发肝细胞癌变,分别观察肝细胞形态学（HE染色）及血VEGF动态变化;按自身配对原则收集肝癌和远癌组织,以免疫组化法分析肝癌VEGF表达与病理学特征;以酶联免疫吸附法分析癌组织及良恶性肝病患者血中VEGF水平和临床价值。结果诱癌后肝细胞从发生颗粒样变性、不典型增生到肝癌形成过程中,VEGF表达呈梯度增加。肝组织中VEGF呈棕黄色或棕褐色,分布于癌细胞胞浆中,VEGF阳性率在肝癌组织为63．9％、无包膜组为78．3％、伴远处转移组为90．9％;癌组织VEGF比浓度（pg／mg肝）明显高于远癌组织（P〈0．01）。肝癌患者血VEGF水平明显高于慢性肝炎组、肝硬化组及正常对照组。结论肝细胞癌变过程中VEGF异常表达,对其分析有助于肝癌诊断及转移监测。     

原发性肝癌组织线粒体DNA含量检测及意义

目的 检测原发性肝癌及其癌旁组织中线粒体DNA含量,探讨线粒体DNA含量变化与肝癌发生的关系.方法 荧光实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)法扩增22例肝癌及相应癌旁组织中线粒体DNA编码基因细胞色素C氧化酶Ⅱ(COⅡ),以核编码基因磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,比较两种组织中线粒体DNA含量的差异.结果 肝癌组织中线粒体DNA相对含量为156.54±107.54,癌旁组织线粒体DNA相对含量为290.24±187.37,差异有统计学意义(P<0.01).结论 肝癌组织线粒体DNA的含量与肝癌发生有密切关系,有望成为一种新的肝癌标志物.