IGF-I和TGF-β1对幼年及成年兔关节软骨细胞增殖和代谢的作用

目的观察IGF-I和TGF-β1对幼年及成年兔关节软骨细胞增殖和代谢的作用。方法采用体外培养兔关节软骨细胞的方法,利用3H-TdR和35S-Na2SO4掺入分别反映软骨细胞增殖和基质蛋白多糖的合成,应用TUNEL法检测软骨细胞的凋亡。结果随年龄增加,关节软骨细胞凋亡增加,同时增殖和蛋白多糖的合成能力下降,而且对IGF-I和TGF-β1的反应性亦呈年龄相关下降。但是IGF-I和TGF-β1均可能在一定程度上以剂量依赖方式促进软骨细胞3H-TdR和35S-Na2SO4掺入增加。结论外源性IGF-I和TGF-β1在体外可促进不同年龄兔关节软骨细胞增殖和基质合成,提示外源性生长因子在骨关节炎的防治上可能有一定意义。     

生长因子（IGF—Ⅰ、TGF—β1和BMP—2）对兔关节软骨细胞体外增殖的作用

目的 观察IGF－Ⅰ、TGF-β1和BMP－2对培养兔关节软骨细胞增殖的作用。方法 采用体外培养2兔关节软骨细胞的方法，利用^1H-TdR掺入反映软骨细胞增殖。结果 IGF－Ⅰ和TGF-β1均可促进软骨细胞^3H-TdR掺入增加，并有一定的协同作用。面BMP－2对软骨细胞^3H-TdR掺入无显著影响，但与TGF-β1和IGF－I合用时却有抑制^3H-TdR掺入的作用。结论 生长因子之间的不同组合可以协同或拮抗方式影响软骨细胞的增殖，提示生长因子在关节软骨退变和防治上可能有重要的意义。     

生长因子(IGF-I、TGF-β1和BMP-2)对兔关节软骨细胞体外增殖的作用

目的观察IGF-Ⅰ、TGF-β1和BMP-2对培养兔关节软骨细胞增殖的作用.方法采用体外培养兔关节软骨细胞的方法,利用3H-TdR掺入反映软骨细胞增殖.结果 IGF-Ⅰ和TGF-β1均可促进软骨细胞3H-TdR掺入增加,并有一定的协同作用.而BMP-2对软骨细胞3H-TdR掺入无显著影响,但与TGF-β1和IGF-Ⅰ合用时却有抑制3H-TdR掺入的作用.结论生长因子之间的不同组合可以协同或拮抗方式影响软骨细胞的增殖,提示生长因子在关节软骨退变和防治上可能有重要的意义.     

生长因子诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究

目的 建立一种体外分离兔骨髓间充质干细胞（MSCs)的方法，诱导其表达软骨细胞表型。方法 抽取兔骨髓，经密度梯度离心和粘附分离得到MSCs。用生长因子诱导，观察细胞的增殖情况和软骨特异性基质的表达水平。结果 ①纤维粘连蛋白促进MSCs贴壁，可提高细胞分离率；②TGF－β1，IGF－I和维生素C结合可促进MSCs增殖，表达软骨特异性的Ⅱ型前胶原mRNA和基质蛋白多糖成分。结论 ①密度梯度离心结合粘附分离可提高MSCs的分离效率。②TGF－β，IGF－I和维生素C结合诱导可促进MSCs增殖，表达软骨细胞表型。     

组织工程化关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察离心管构建的组织工程骨细胞亡及细胞增殖情况。方法 对离心管构建3周的组织工程骨进行透射电镜，流式细胞仪检测和^3H-TdR掺入测定，与3周龄兔关节软骨对照。结果 透射电镜检查组织工程软骨在5％左右的细胞凋亡，正常关节软骨未见明显的细胞凋亡；流式细胞仪显示软骨细胞有8．5％左右的亚二倍体细胞，正常关节软骨在2．4％左右的亚二倍体细胞。^3H-TdR掺入测定显示细胞增殖能力较正常关节软骨明显增强。结论 培养3周的组织工程软骨细胞凋亡与细胞增殖均较正常软骨增强。     

BMP-2和TGFβ1对培养兔关节软骨细胞代谢的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白－２（ＢＭＰ－２）和转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）对体个培养兔关节软骨细胞代谢的影响，从而了解其在关节软骨损伤修复中的作用。方法 利用荧光光度计，７２１－型分光光度计，＾３５Ｓ－Ｎａ２ＳＯ４同位素掺入法等测定兔原代及反分化关节软骨细胞羟脯氨酸和蛋白多糖（ＰＧ）的变化。结果 ＢＭＰ－２既能促进反分化关节软骨细胞ＤＮＡ合成又能增加原代、反分化关节软骨细胞羟脯氨酸的含量和＾３５Ｓ－Ｎａ２ＳＯ４掺入，而ＴＧＦβ１显著增加原代软骨细胞羟脯氨酸的合成和＾３５Ｓ－Ｎａ２ＳＯ４掺入。结论 ＴＧＦβ１不能阻止关节软骨细胞反分化，而ＢＭＰ－２能促进软骨细胞的增殖和维持其表型，还可使已丢失软骨表型的反分化软骨细胞有向恢复软骨表型方向分化的可能。     

FGF对关节软骨细胞基质及其TGFβ1表达的作用

目的:观察成纤维细胞生长因子(FGF)对培养兔关节软骨细胞基质及转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响.方法:培养1月龄新西兰兔关节软骨细胞,在每次换液时加入FGF 100 ng/ml,铺满后收集细胞,作关节软骨细胞TGFβ1检测及电镜免疫组织化学观察.采用氯胺T法和Antonopoulos法,作细胞基质的胶原和蛋白多糖含量测定.结果:FGF能明显促进胶原和蛋白多糖的合成,并且与剂量、时间呈正相关(P＜0.01).光镜下实验组细胞明显呈棕色,电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒粘附.结论:FGF能促进关节软骨细胞TGFβ1的表达及基质合成,推迟了关节软骨细胞的成熟,维持细胞的软骨表现型,这些作用有利于关节软骨损伤后的修复,可能具有一定的临床意义.     

兔实验性骨关节病髁突软骨细胞表达软骨基质分子的变化及白细胞介素1β的影响

目的 :研究外源性炎症因子白细胞介素 1β(interleukin 1β,IL 1β)对颞下颌关节骨关节病与正常髁突软骨细胞代谢活动的影响 ,探讨其在颞下颌关节骨关节病进展过程中所发挥的作用。方法 :采用 2 0 μg·L-1重组白介素1β(recombinedhumaninterleukin 1β ,rhIL 1β)刺激体外贴壁培养条件下的成兔正常成熟髁突软骨细胞与兔实验性颞下颌关节骨关节病模型髁突软骨细胞 ,RT PCR方法检测、比较细胞对软骨基质成分Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚糖体、胶原酶以及内源性生长因子胰岛素样生长因子 1(insulin likegrowthfactor 1,IGF 1)和转移生长因子 β1(trans forminggrowthfactor β1,TGF β1)的mRNA表达变化。结果 :在 2 0 μg·L-1rhIL 1β的刺激下 ,(1)正常成熟髁突软骨细胞Ⅱ型胶原和软骨蛋白多糖聚糖体的表达均明显降低 ,胶原酶表达水平变化不明显 ;(2 )在IL 1β的作用下 ,骨关节病软骨细胞对Ⅱ型胶原和胶原酶的表达水平降低 ,对软骨蛋白多糖聚糖体的表达水平无明显影响 ;(3)IL 1β对正常和骨关节病髁突软骨细胞内源性生长因子IGF 1和TGF β1的表达均无明显影响。 结论 :蛋白多糖聚糖体的合成 ,导致髁突软骨病变发生 ,而且能不断干扰骨关节病髁突软骨细胞代谢 ,导致关节软骨基质环境进一步恶化。     

TGF-β1和BMP-2对终板软骨细胞增殖和糖胺多糖合成的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)对体外培养大鼠终板软骨细胞增殖和合成糖胺多糖的影响。方法:取原代大鼠终板软骨细胞,体外培养传代至第二代,常规培养液培养组为对照组,培养液中加入TGF-β1及BMP-2作用于软骨细胞为实验组,观察细胞的生长情况,测定终板软骨细胞增殖和糖胺多糖(GAG)含量的变化,分析两种因子对软骨细胞增殖行为和合成糖胺多糖的影响。结果:单独应用TGF-β1与BMP-2刺激,终板软骨细胞增殖能力及糖胺多糖合成较对照组增高,而TGF-β1与BMP-2联合使用能够更加明显地促进终板软骨细胞增殖能力及糖胺多糖的合成。结论:一定浓度的TGF-β1与BMP-2联合使用,能有效促进体外培养的软骨细胞增殖和合成GAG基质的能力。     

两种自制支架材料对体外培养关节软骨细胞生长与代谢的影响

目的 评定两种自制支架材料DL－聚乳酸支架，聚磷酸钙纤维对体外培养关节软骨细胞生长与代谢的影响。方法 采用材料样品与体外单层培养关节软骨细胞直接接触法，并对其进行倒置显微镜观察，培养细胞计数与DAN含量及其细胞外基质^35S掺入量和羟脯氨酸含量测定。结果 两种支架材料可与培养关节软骨细胞完全相容，无关节软骨细胞毒性；对培养关节软骨细胞的DNA，蛋白多糖及胶原合成无异常影响。结论 两种支架材料具有良好的关节软骨细胞相容性，对其功能物质的合成无异常影响，经其结构与性能优化，即可满足关节软骨组织工程制备的各项要求。     

离心管技术构建的组织工程软骨细胞生物学特性的研究

目的 观察离心管技术构建的组织工程化软骨的细胞生物学特点，探讨该技术构建组织工程化软骨的可行性。方法 取3周龄兔关节软骨的表层软骨，经酶消化获得大量的软骨细胞，用离心管技术构建软骨组织，对培养3周的组织工程软骨进行组织学，免疫组织化学，透射电镜，^3H-TdR掺入量等检查。结果 组织学显示软骨细胞位于陷窝，基质异染，Ⅱ型胶原免疫组化阳性，细胞内富含高尔基体，分泌囊泡和糖原颗粒，^3H-TdR掺入量显示软骨细胞DNA较正常软骨细胞明显增强。结论 离心管内软骨细胞的增殖较正常关节软骨增强，离心管技术可用于组织工程软骨的构建。     

TGF-β1和IGF—I在兔骨关节炎模型软骨中的表达及其意义

目的：探讨TGF—β1和IGF—I在兔骨关节炎（OA）模型软骨细胞中的表达及意义。方法：新西兰兔40只，随机分成实验组和对照组各20只。实验组选用Hulth法造模，对照组行单侧膝关节切开，两组分别于术后4、8周各处死10只。取术肢股骨髁标本行HE染色镜下观察软骨细胞排列情况；免疫组化染色检测TGF—β1和IGF—I的表达情况，并应用镜下观察结合病理图像分析系统计算各组软骨细胞TGF-β1和IGF—I表达的细胞分数。结果：（1）HE染色：实验组软骨细胞排列分层混乱，细胞稀疏，有软骨缺损；部分软骨细胞集聚、肿胀，且可见大量空陷窝。（2）免疫组化染色：TGF—β1和IGF-I在两组中均有表达，而实验组细胞分数均明显高于对照组（P（0．01）；实验组的软骨缺损部位细胞分数均明显高于软骨完整部位细胞分数（P（0．01），造模后8周细胞分数较4周明显增高（P〈0．01）。结论：OA时TGF—β1和IGF—I的表达均增多，且随软骨缺损程度的加重表达增高明显，软骨无修复。其机制需进一步研究。     

TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：观察外源性TGF－β3对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）生长增殖的影响，为临床治疗提供理论依据。方法：用MTT比色法检测TGF－β3对HSFB增殖活性的影响，^3H-脯氨酸掺入法检测细胞内胶原合成，免疫组化检测I，Ⅲ型胶原及TGF－β3蛋白表达情况。结果：TGF－β3可抑制HSFB细胞增殖，下调TGF－β1蛋白及I型胶原蛋白表达。结论：TGF－β3具有抗瘢痕形成作用，有望在临床中应用。     

IGF1对体外兔关节软骨细胞的生物学效应

目的了解胰岛素样生长因子-1(IGF1)对体外生长的兔关节软骨细胞的生物学效应,为组织工程构件软骨提供理论基础. 方法取第3代兔关节软骨细胞体外单层培养,培养液DMEM中以终浓度分别为1, 10, 100 μg*L-1的IGF1各作用细胞2,4及6 d,以MTT法检测细胞的增殖情况,并在100 μg*L-1 IGF1作用下,采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析. 同时,检测基质中糖醛酸的变化反映蛋白多糖含量的变化. 结果结果显示在1～100 μg*L-1浓度下IGF1能明显促进培养软骨细胞的增殖,且以100 μg*L-1作用4 d刺激效果最明显;并能显著影响细胞外基质中糖醛酸的含量. 结论 IGF1对培养软骨细胞以剂量时间依赖性方式刺激其增殖及功能代谢.     

转化生长因子—β对骺软骨细胞增殖和PCNA表达的影响

采用１４天鸡胚股骨无血清培养、５－溴尿嘧啶核苷（ＢｒｄＵ）掺入标记和细胞核增殖抗原（ＰＣＮＡ）免疫染色方法，研究转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对骺软骨细胞增殖的作用。结果显示：ＢｒｄＵ阳性软骨细胞数目与分布都位于ＴＧＦ－β作用剂量和时间密切相关，ＴＧＦ－β可以促进骺板成熟区和肥大区软骨细胞增殖，与ＢｒｄＵ标记相比，ＰＣＮＡ阳性细胞分布区域和数目远多于前者，根据染色情况可以将ＰＣＮＡ阳性细胞分为Ｓ期和Ｓ期细胞两种。结论：ＴＧＦ－β参与和调节骺软骨各部位软骨细胞增殖活动，并能诱导非增殖软骨细胞表达ＰＣＮＡ，用ＰＣＮＡ作为细胞增殖的指标是不适宜的。     

周期性机械应力通过IGF1R调控兔关节软骨细胞增殖和细胞外基质合成实验研究

目的:探讨周期性机械应力下胰岛素样生长因子1型受体(IGF1R)对兔关节软骨细胞增殖和细胞外基质(ECM)合成的影响。方法:分离培养1只新西兰白兔的关节软骨细胞,分为对照组、加压组、加压+IGF1R阻断组,3组细胞分别在无周期性机械应力条件下、周期性机械应力场中、加入5μmol/L IGF1R特异性抑制剂OSI-906后于周期性机械应力场中培养1 h。采用CCK8法检测各组软骨细胞增殖率,采用Western blot法检测各组软骨细胞中IGF1R、Aggrecan、Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)蛋白表达量。结果:加压组软骨细胞增殖率明显高于对照组(P<0.05);加压+IGF1R阻断组软骨细胞增殖率明显低于加压组(P<0.05),但与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);软骨细胞IGF1R、Aggrecan、Col-Ⅱ、PI3K、p-AKT蛋白表达量比较,加压组和加压+IGF1R阻断组明显高于对照组(P<0.05),加压+IGF1R阻断组明显低于加压组(P<0.05)。结论:周期性机械应力通过上调兔关节软骨细胞中IGF1R,将机械信号转化为生物化学信号,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进兔关节软骨细胞增殖和ECM合成。     

IGF-1对成兔关节软骨细胞体外增殖的影响

目的研究单独应用胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成兔的关节软骨细胞体外增殖的促进作用,为成人关节软骨的体外培养扩增的理论提供新思路。方法通过细胞形态学,细胞计数、细胞计量检测成兔关节软骨细胞的存活及增殖。结果成兔关节软骨细胞增殖活跃。结论在IGF-1的单独作用下成兔关节软骨细胞在体外增殖能力明显增强。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养的兔软骨细胞合成蛋白多糖的影响

观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外培养兔关节软骨细胞合成蛋白多糖的影响 ,旨在为临床软骨损伤的修复寻找理论依据。取新西兰幼兔关节软骨组织 ,经消化后将其以细胞密度 2× 1 0 4 /mL接种 ,当细胞融合生长时 ,培养瓶随机分 2组 ,为细胞换液 ,第 1组的培养液同前 ,第 2组的培养液中含有bFGF 1 0 μg/L ,2h后 ,在培养液中加入Na2 35SO4 ,使其含量为 1 85 0MBq/L ,继续培养 1d后测量软骨细胞摄取35SO4 2 - 的量 ,并在电镜和光镜下观测蛋白多糖的形态。结果 :培养基中含有bFGF和缺乏bFGF生长的软骨细胞对35SO4 2 - 的摄取量有明显差异 (两者均P <0 .0 1 )。在光镜和电镜下均可以看到生长在含有bFGF培养液中的单层软骨细胞分泌的蛋白多糖较未加bFGF培养出单层软骨细胞分泌的蛋白多糖多。由此提示bFGF可促进软骨细胞合成蛋白多糖     

透明质酸对体外培养半月板纤维软骨细胞的影响

目的观察体外培养半月板纤维软骨细胞的生长特点及生物学特性,研究中分子量透明质酸(hyaluronic acid, HA)对体外培养半月板纤维软骨细胞的影响.方法机械分离和胰酶、胶原酶联合消化,将兔半月板纤维软骨细胞进行体外分离培养,动态观察细胞形态变化和生长情况.设立对照,观察中分子量透明质酸HA(分子量2×106)对细胞生长增殖的影响,利用同位素标记技术,测定细胞对培养基中 3H-TdR、 3H-Pro和Na35SO4的摄取量,比较细胞DNA、胶原蛋白和蛋白多糖合成的速度.结果体外培养的半月板细胞呈多角形、有突起、富含分泌颗粒.当培养基中加入HA后,细胞 3H-TdR、 3H-Pro和Na35SO4的摄取量不同程度高于对照组,统计学相差显著(P＜0.05).结论中分子量透明质酸能促进体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和细胞外基质合成.     

TGF—β诱导骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化

目的 通过研究转化生长因子－β（TGF－β）对骺板软骨细胞分化的作用,揭示TGF－β软骨内成骨的作用机制。方法 采用鸡胚股骨无血清培养、酶组化检测碱性磷酸酶（ALP）、免疫组化检测Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白（FN）等方法,观察TGF－β在不同作用时间和剂量时对骺板肥大区软骨细胞分化的作用。结果 TGF－β可使肥大区软骨细胞表达Ⅰ型胶原和FN,使ALP表达增加,并存在着量效和时效关系。结论 TGF－β可以诱导鸡胚股骨骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化,与TGF－β的作用剂量和时间密切相关。