急性HIV 感染者γδT 细胞及其细胞亚群的表型分析

目的:分析急性HIV 感染者外周血γδT 细胞的表型,诠释γδT 细胞在急性HIV 感染中的作用。方法:流式细胞术检测γδT 细胞表面CD38、程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)、CD160、CD95 和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-死亡受体5(TRAIL-DR5)的表达。结果:与健康对照组相比,急性HIV 感染者Vδ1 T 细胞的比例显著增加,Vδ2 T 细胞的比例显著降低,但总γδT 细胞的比例无显著变化。CD38+ γδT 细胞、CD38+ Vδ1 T 细胞和CD38+ Vδ2 T 细胞的比例较健康对照显著增加。此外,PD-1+ γδT 细胞和DR5+ γδT 细胞的比例较健康对照组显著增加,而Vδ1、Vδ2 T 细胞亚群PD-1 和DR5 的表达与健康对照相比差异无显著性。但在急性HIV 感染者中,CD38+ Vδ1 T 细胞、CD160+ Vδ1 T 细胞、PD-1+ Vδ1 T 细胞、CD95+ Vδ1 T 细胞和DR5+ Vδ1 T 细胞的比例均较Vδ2 T 细胞显著增加。结论:急性HIV 感染者γδT 细胞,尤其是Vδ1 T 细胞表面活化、抑制和凋亡分子的表达显著增加,提示Vδ1 T 细胞在急性HIV 感染及疾病进展中发挥更重要的作用。     

γδT 细胞亚群在慢性HCV 感染中的特征

目的:探讨γδT 细胞及其亚群γδ和γδT 细胞在慢性HCV 感染中的作用。方法:采用流式细胞术检测人外周血γδT 细胞及其亚群γδ和γδT 细胞比例变化。结果:慢性HCV 感染病人外周血中酌啄T 细胞及其亚群γδ和γδT细胞比例与健康对照者相比无显著差异。相关性分析显示HCV 感染患者γδT 细胞数目与肝脏损伤成正相关而与病毒滴度不相关。慢性HCV 感染病人γδT 细胞处于活化状态,CD107a 表达高于对照组。结论: γδT 细胞亚群参与慢性HCV 感染所致肝损伤。     

IL-17+γδT细胞在相关疾病中的免疫作用

IL-17是一类重要的促炎症因子,近年来大量研究发现,除了Th17细胞外,γδT细胞也是IL-17的重要来源。IL-17+γδT细胞可以参与多种疾病的诱发和发展,在感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等的发生发展中发挥重要作用。     

通过抑制STAT3磷酸化促进γδT细胞CCR5的表达

目的： 研究糖原合酶激酶-3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶(TWS119)促进γδT细胞趋化因子受体CCR5表达的分子机制。方法：用TWS119诱导从健康人外周血中分离培养获得γδT细胞48 h后,用流式细胞仪检测γδT细胞CCR5的表达;Western blot检测GAPDH和pSTAT3的表达。结果：培养10 d后的γδT细胞纯度达到85.79%±5.01%。TWS119浓度在0~8.0 μmol/L范围内能显著促进趋化因子受体CCR5的表达,且剂量依赖性抑制STAT3的磷酸化。同时,用STAT3磷酸化抑制剂Stattic (0.5 μmol/L)预处理γδT细胞也可以促进CCR5的表达,并能协同增强TWS119促进趋化因子受体CCR5的表达。结论： TWS119通过抑制STAT3磷酸化促进γδT细胞CCR5的表达。     

康莱特注射液对胃癌患者细胞凋亡、增殖及T细胞亚群的影响

目的：探讨康莱特对胃癌细胞凋亡对增殖及胃癌患者T细胞亚群的影响。方法：进展期胃癌患者30例，随机分为3组（每组各10例）：A组（对照组）：手术前后常规给予全胃肠外营养（total parenteral nutrition,TPN)治疗；B组（康莱特治疗组）：术前5d及术后9d，给予康莱特注射液200mL/d静脉滴入加常规TPN治疗；C组（化疗组）：术前给予5d化疗，甲酰四氢叶酸钙（calcium folinatefor,CF)200mg及5氟脲嘧啶（5－FU）750mg/d静脉滴注加常规TPN治疗。分别于治疗前及术后1d,5d及10d，采集外周静脉血，应用免疫荧光法检测CD3^ 、CD4^ 、CD8^ T细胞亚群。手术中取胃癌病理组织，用末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法和免疫组织化学染色法检测胃癌细胞的凋亡（AI）与增殖（PI）及二者之比（AI／PI）。结果：B组与C组相比较，胃癌细胞的AI、PI及AI／PI，无显著差异（P＞0．05）；B组与A组相比较，上 3种指标则具有显著差异（P＜0．01）。治疗前3组CD3^ 、CD4^ 、CD8^ T细胞亚群的百分率无显著差异（P＞0．05）；术后1d,5d3组CD3^ 、CD4^ 、CD8^ T细胞亚群的百分率差异显著（P＜0．01）；术后10d,CD3^ 、CD4^ 、CD8^ T细胞亚群的百分率，B组与A组以及B组与C组相比较，差异性分别为显著（P＜0．05）及非常显著（P＜0．01）。结论：康莱特可明显促进胃癌细胞凋亡和抑制其增殖，有助于提高围手术期患者的免疫功能。     

鼠γδT 细胞亚群在不同组织器官的分布特性及在感染后的变化

目的:关注不同γδT 细胞亚群在各组织器官的分布特点及在鼠伤寒沙门氏菌肠道感染中的变化,为探讨γδT 细胞组织学分布的生理学意义和在感染性疾病中的作用提供依据和新的思路。方法:采用流式细胞术与PCR 技术检测胸腺、脾脏、淋巴结、肝脏、皮肤以及小肠上皮内淋巴细胞中γδT 细胞及其不同亚群的比例;通过PMA 与离子霉素体外刺激,流式细胞术检测不同组织酌啄T 细胞分泌细胞因子IFN鄄酌与IL-17a 的差异;通过灌胃建立鼠伤寒沙门氏菌肠道感染模型,流式细胞术检测肝脏与小肠上皮内淋巴细胞中不同酌啄T 细胞亚群比例的变化。结果: γδT 细胞富含于小肠上皮内、皮肤与肝脏中,而在胸腺、脾脏与淋巴结中比例较低。不同亚群在各组织器官中的分布存在较大差异,皮肤主要存在V 5+ γδT 细胞亚群,小肠中主要存在V 1+ 、V 4+与V 7+ γδT 细胞亚群。肝脏γδT 细胞主要分泌IL-17a,而小肠上皮内γδT 细胞主要分泌IFN。在鼠伤寒沙门氏菌肠道感染时,小肠上皮内酌啄T 细胞的比例明显升高,其中V酌1+ 酌啄T 细胞比例升高更为显著;肝脏总γδT细胞比例无显著变化,但V 1+ T 细胞比例降低,V酌4+ 酌啄T 细胞比例明显升高。结论: γδT 细胞富含于小肠、皮肤与肝脏中,且其不同亚群具有组织分布特异性。不同组织的酌啄T 细胞产生细胞因子的能力存在较大差异。鼠伤寒沙门氏菌感染时,小肠与肝脏γδT 细胞亚群的分布变化也存在较大差异。     

青蒿素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

目的探讨青蒿素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响及可能机制。方法将人膀胱癌T24细胞分为空白对照组与青蒿素组(50、100、200μmol/L)。不同浓度青蒿素干预48h后,MTT方法检测T24细胞的增殖活力,流式细胞术检测T24细胞的凋亡率。200μmol/L青蒿素干预48 h后,划痕实验与Transwell侵袭实验检测青蒿素对T24细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blot实验检测T24细胞中PI3K、p-Akt与pmTOR的表达。结果不同浓度青蒿素均能显著抑制T24细胞增殖,并促进细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P0.01)。200μmol/L青蒿素干预48 h后,T24细胞迁移与侵袭能力显著降低,T24细胞中PI3K的表达以及Akt和mTOR的磷酸化水平降低(P0.01)。结论青蒿素能够通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

紫草素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

目的探讨紫草素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响及可能机制。方法将人膀胱癌T24细胞分为空白对照组与紫草素组(10、20、40μmol/L)。不同浓度紫草素干预48h后,MTT方法检测T24细胞的增殖活力,流式细胞术检测T24细胞的凋亡率。40μmol/L紫草素干预48 h后,Transwell实验检测紫草素对T24细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blot实验检测T24细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3/9(Caspase-3/Caspase-9)与基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/MMP-9)的表达。结果不同浓度紫草素均能显著抑制T24细胞增殖,并促进细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P0.01)。40μmol/L紫草素干预48 h后,T24细胞迁移与侵袭能力显著降低,T24细胞中Caspase-3、Caspase-9、MMP-2与MMP-9的蛋白表达水平均显著升高(P0.01)。结论紫草素能够抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

小胶质细胞表达OX40L对T细胞增殖与凋亡的影响

目的鉴定免疫共刺激分子OX40配体（OX40 ligand，OX40L）在小胶质细胞上的表达，并探讨OX40L信号在小胶质细胞对中枢神经系统内T细胞增殖与凋亡中的作用。方法通过RT-PCR、免疫印迹和流式细胞术检测小胶质细胞株N9活化前后OX40L在mRNA和蛋白水平的表达变化，细胞免疫化学法鉴定原代小胶质细胞上OX40L表达情况。体外将小胶质细胞株N9与活化后T细胞共培养并阻断OX40L信号后，^3H-TdR掺入实验和FITC-annexin-Ⅴ／PI荧光染色方法分别检测T细胞的增殖和凋亡情况，ELISA检测T细胞分泌IL-2的水平。结果小胶质细胞株N9活化前后均有OX40L表达，其蛋白表达率由23％增加为94％；原代小胶质细胞活化后表达OX40L。小胶质细胞表达OX40L后显著增强了T细胞增殖和IL-2分泌，抑制了T细胞凋亡。结论小胶质细胞活化后表达OX40L分子，OX40L-OX40信号可促进活化后T细胞增殖，抑制其凋亡，从而可能在维持中枢神经系统内T细胞免疫应答效应中发挥重要作用。有助于了解中枢神经系统内固有细胞和T细胞的相互作用机制，进一步认识OX40L的表达及功能。     

TGF-β对RAW264.7细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨TGF-β对RAW264.7细胞增殖、凋亡的影响。方法采用RANKL和M-CSF诱导RAW264.7细胞培养24 h后,用不同浓度TGF-β分别作用RAW264.7细胞24、48、72 h。使用CCK-8试剂盒、流式细胞术及RT-PCR检测破骨前体细胞增殖、凋亡和特征性基因的表达差异。结果不同浓度(1、2、5 ng/mL)的TGF-β均能抑制RAW264.7细胞增殖,且与时间、浓度有关。TGF-β(5 ng/mL)处理组培养72 h后与其他浓度处理组相比,细胞增殖明显降低,细胞总凋亡率及线粒体凋亡通道相关基因Caspase-3、Caspase-8表达升高,差异具有显著性(P0.05)。结论 TGF-β抑制RAW264.7细胞增殖,促进其凋亡,表明TGF-β在骨改建中发挥重要作用。     

免疫杀伤细胞治疗对恶性肿瘤患者T淋巴细胞免疫功能的影响

目的 探讨链式激活和诱导的免疫杀伤细胞(CAPRI细胞)治疗对肿瘤患者T淋巴细胞免疫功能的影响.方法 接受CAPRI细胞治疗的滨州医学院附属医院肿瘤内科收治的50例恶性肿瘤患者为研究对象(肿瘤组),同时选择体检健康者30例为对照组,用流式细胞术检测所有患者治疗前后外周血T淋巴细胞CD3+及CD4+、CD8+的百分率,计算CD4+/CD8+比值并进行比较.结果 肿瘤患者治疗前外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+[ (56.40±7.14)％、(30.69±8.01)％、(29.10±7.13)％、1.05 ±0.28]与健康对照组[(66.78±6.05)％、(41.35±5.71)％、(26.08±5.36)％、1.59±0.31]及治疗后13 d[ (59.35±6.31)％、(34.95±7.21)％、(27.95±6.03)％、1.25±0.22]和治疗后25d[(62.36±6.41)％、(37.03±7.62)％、( 25.04±4.53)％、1.46±0.48]比较,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显降低、CD8+均明显升高(均P＜0.05);治疗后25d与治疗后13d比较,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显升高、CD8+均明显降低(均P＜0.05).结论 CAPRI细胞治疗肿瘤,能够纠正CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+失衡状态,能够调节机体T淋巴细胞的免疫功能.     

白藜芦醇对小鼠T细胞活化、增殖及细胞因子分泌的影响

目的：研究白藜芦醇（RSV）对小鼠T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响，为阐明其免疫抑制作用提供实验依据。方法：无菌分离小鼠淋巴结细胞．加入不同浓度的RSV预先孵育1h，用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化增殖。采用^3H—TdR掺入法检测RSV对T细胞增殖的影响；用RT-PCR检测IL-2及IFN-γ mRNA的表达；用胞内细胞因子染色法分析IL-2和IFN-γ的分泌。结果：RSV能抑制T细胞增殖，也能在mRNA水平及蛋向水平上抑制IL-2及IFN-γ的分泌。结论：RSV对T细胞的免疫抑制作用，可能与其抑制T细胞的活化、增殖和细胞因子的分泌有关。     

调节性T细胞对NK细胞体外杀伤乳腺癌细胞的影响

目的探讨调节性T细胞(Regulatory T cells,T-reg细胞)对NK细胞的影响及可能机制。方法流式细胞术(Flowcytometry,FCM)检测乳腺癌患者外周血中T-reg细胞、NK细胞以及T细胞亚群比例。乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法检测NK细胞对四种乳腺癌细胞株杀伤活性。ELISA检测上清液中IFN-γ和TGF-β1含量。结果乳腺癌和健康人外周血T-reg细胞分别占CD4~+T细胞的(7.5±3.0)%和(5.1±1.5)%(P<0.01=。T-reg细胞能抑制NK细胞杀伤乳腺癌细胞,同时下调NK细胞分泌IFN-γ,上清液中TGF-β1含量随着T-reg细胞比例的增高而增加。结论T-reg细胞抑制NK细胞杀伤乳腺癌的作用,其机制与T-reg细胞分泌细胞因子TGF-β1有一定关系。     

黄芪多糖在人血γδT 细胞体外抑制人肺癌A549 细胞增殖作用的研究

目的:探讨黄芪多糖在人外周血γδT细胞体外对人肺癌A549细胞增殖的作用。方法:用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单核细胞(PBMC)后,体外培养3 d,用流式细胞仪分选纯化γδT细胞,并检测纯度,用白细胞介素2及唑来膦酸刺激γδT细胞扩增;不同浓度黄芪多糖(终浓度分别为40、80、160 mg/L)作用于γδT细胞,用ELISA法测定γδT细胞分泌的IL-12、IFN-γ、TNF-α含量,获得最佳黄芪多糖浓度;黄芪多糖(80 mg/L)、γδT细胞及黄芪多糖(80 mg/L)+γδT细胞分别与人肺癌A549细胞联合培养;采用MTT法测定人肺癌A549细胞抑制率。结果:黄芪多糖浓度为80 mg/L时,γδT细胞分泌的IL-12、IFN-γ、TNF-α量较高;黄芪多糖、γδT细胞及黄芪多糖+γδT细胞对肺癌A549细胞增殖抑制率分别为28.13%、13.35%及45.67%,各组与空白对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论:黄芪多糖与γδT细胞分泌IL-12、IFN-γ及TNF-α呈量效关系;黄芪多糖及γδT细胞均有抑制A549细胞增殖的作用,但黄芪多糖可增强γδT细胞对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用。     

纳米雄黄对肺癌A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响

BACKGROUND: Studies have found that realgar has anti-tumor effect, but its effect on proliferation, apoptosis and migration of A549 lung cancer cells is rarely reported. OBJECTIVE: To study the effect of nano-realgar on A549 lung cancer cell proliferation, apoptosis and migration. METHODS: Cultured A549 lung cancer cells were seeded onto 6-well culture plates containing 100 mg/L nano-realgar (experimental group) or normal saline (control group). Cell growth was observed under microscope for 48 hours. Cell proliferation and apoptosis were detected using MTT assay (24, 48, 72 hours of culture) and flow cytometry (24 and 48 hours of culture), respectively. Integrin β1 and cadherin expression was detected using immunohistochemical method at 24 hours of culture. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Cell growth. In the experimental group, shrunk cells that were round or oval-shaped were scattered, and cell number was reduced. In the control group, adherent cells characterized by big size, abundant cytoplasm and fusiform shape grew vigorously. Moreover, some cells were fused into pieces. (2) Cell proliferation. The absorbance values of cells were significantly lower in the experimental group than the control group at different time (P < 0.05), while the cell growth inhibition ratio was higher in the experimental group than the control group (P < 0.05). (3) Cell apoptosis. The end-stage apoptotic rate and total apoptotic rate of cells were both higher in the experimental group than the control group (P < 0.05). (4) Immunohistochemical detection. The A549 cell surface integrin β1 and cadherin positive densities were significantly lower in the experimental group than the control group (P < 0.05). Taken together, the nano-realgar can inhibit the proliferation, invasion and metastasis, and induce apoptosis in A549 cells.     

胰岛素对LAK细胞的增殖和杀伤活性的影响

LAK细胞调节因素的研究对揭示LAK细胞的内在规律以及免疫过继疗法的开展与完善均具有重要意义。实验发现胰岛素能促进LAK细胞的增殖,提高细胞的产率,但是胰岛素不能替代IL-2使经短期IL-2刺激的淋巴细胞继续增殖。胰岛素还能促进LAK细胞表面IL-2R的表达。这可能是胰岛素促进LAK细胞增殖的重要机制。     

EMP1对喉癌hep2细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的研究EMP1在喉癌中的作用。方法选取51例喉癌标本及其癌旁组织,构建EMP1过表达载体,转染人喉癌Hep-2细胞系,应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术及Transwell法分别检测细胞的增殖、凋亡及迁移情况,明确EMP1过表达后对喉癌细胞产生的生物学效应。结果 EMP1过表达后,Hep2细胞的增殖能力明显减弱,细胞克隆形成数目平均值明显减少,细胞的凋亡率平均值明显上调,穿过小室滤膜的细胞数平均值明显下调。即喉癌细胞的增殖能力及迁移能力减弱,凋亡增强。结论 EMP1基因在喉癌的发生发展中发挥抑癌基因的作用。