肝毒清颗粒对细胞因子的调节的实验研究

目的 :观察肝毒清颗粒对急性肝损伤的保护作用。方法 :选用雄性Wistar大鼠 60只 ,随机分为 6组 ,即空白对照组、模型组、肝毒清颗粒大、中、小剂量组 ,乙肝宁阳性对照组。用硫代乙酰胺复制急性肝损伤模型。检测血清TNF α、IL 6水平。结果 :硫代乙酰胺急性肝损伤时 ,肝毒清颗粒能使血清TNF α、IL 6水平明显降低 ,与模型组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :肝毒清颗粒能减少致炎细胞因子的生成 ,减轻致炎细胞因子的肝损害 ,对肝脏起到保护作用     

姜黄素和γ-干扰素对肝纤维化大鼠肝组织病理变化及TIMP-1表达的作用

目的:观察肝纤维化大鼠肝组织病理学变化及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达水平,探讨姜黄素和γ-干扰素及两者联合治疗抗肝纤维化的作用。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组,治疗组中又分为姜黄素治疗、γ-干扰素治疗及联合治疗3个亚组,采用CCl4腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型。各治疗组采取相应药物和剂量平行治疗4周,第10周末将各组大鼠处死,取肝组织切片HE染色观察组织病理学变化(包括肝纤维化程度);用半定量RT-PCR方法检测各组肝组织TIMP-1mRNA相对表达量。结果:肝组织病理学观察显示,模型组大鼠肝索排列紊乱,肝细胞变性坏死,汇管区和小叶内出现局限性纤维化,部分区域出现纤维纵隔,甚至假小叶形成,纤维化分级为Ⅳ～Ⅴ级(Ⅴ级为主),TIMP-1mRNA相对表达量较正常对照组明显升高(P<0.01);各治疗组肝组织病理变化明显改善,肝细胞变性坏死减少,肝纤维化程度明显减轻(以Ⅲ级为主),TIMP-1mRNA表达量明显低于模型组(P<0.01)。结论:姜黄素和γ-干扰素及两者联合治疗均能减轻肝纤维化大鼠组织病理学变化并下调肝组织TIMP-1mRNA表达,改善和逆转肝纤维化进程。     

重组人肝再生增强因子可逆转免疫损伤性肝纤维化

目的:了解重组人肝再生增强因子(hALR)抗免疫损伤性肝纤维化的活性。方法:建立人血白蛋白免疫损伤性大鼠肝纤维化模型。模型完成后予hALR 腹腔注射。观察肝纤维化大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,肝组织胶原蛋白含量及肝脏病理学改变。结果:重组人肝再生增强因子(hALR)可降低肝纤维化大鼠的ALT、AST、LDH水平;肝组织胶原蛋白含量的测定表明hALR治疗组大鼠肝组织胶原含量明显低于模型组及阴性对照组;病理组织切片也发现hALR治疗组大鼠肝纤维化程度较模型组及阴性对照组明显减轻。结论:重组人肝再生增强因子(hALR)可逆转免疫损伤性大鼠肝纤维化。     

抗肝纤冲剂抑制免疫型肝纤维化小鼠Ⅳ型胶原蛋白的表达

目的:以猪血清所致的免疫损伤肝纤维化小鼠模型探讨抗肝纤冲剂对肝组织Ⅳ型胶原蛋白表达的影响及其对纤维化小鼠的治疗作用.方法:雌性Balb/c小鼠分为5组:正常对照组、肝纤维化模型组、秋水仙碱组、抗肝纤冲剂低剂量组、抗肝纤冲剂高剂量组.除正常组外,其余各组均采用腹腔注射猪血清的方法制备肝纤维化小鼠模型.造模的同时分别用药物对小鼠进行干预治疗7周.7周末处死小鼠,取肝组织,经固定、切片、Masson特殊胶原染色,光镜观察.其他肝组织用于实时荧光定量PCR检测.结果:胶原特殊染色显示,抗肝纤冲剂治疗组与模型组相比,胶原纤维增生程度减轻;实时荧光定量PCR检测显示,各实验组小鼠的肝组织中col4α2基因的表达量,模型组是正常对照组的9.44±2.81倍,抗纤冲剂低剂量组是正常对照组的2.04±0.27倍;模型组是抗纤冲剂低剂量组的4.63±0.45倍,抗肝纤冲剂低剂量组与肝纤维化模型组之间差异具有统计学意义,肝组织中的Ⅳα2型胶原蛋白在mRNA表达水平降低.结论:抗肝纤冲剂可以抑制免疫损伤肝纤维化小鼠肝组织的胶原蛋白增生,减少Ⅳα2型胶原蛋白的表达,提示抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠具有较明显的治疗作用.     

肝纤维化大鼠肝脏中组蛋白修饰水平的变化

目的:观察肝纤维化大鼠肝脏中组蛋白修饰的变化,并探讨其在肝纤维化发生发展过程中可能的作用。方法:雄性Wistar大鼠20只,随机分为正常对照组和肝纤维化组,其中肝纤维化组采用CCl_4皮下注射以制备大鼠肝纤维化模型,正常组注射等量植物油溶液。实验第8周末,股动脉放血处死大鼠,取2组血清,采用生化和放射免疫法测定血清肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST),以及肝纤维化标志物血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的水平;取2组大鼠肝脏,测定肝脏指数;取肝组织常规固定,HE染色和Masson染色观察组织病理改变及胶原纤维沉积情况;Western blot检测2组大鼠肝脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原(ColⅠ)表达情况,以及acH4K12、acH3K9、H3K4me2和H3K9me2修饰水平的变化。结果:与对照组相比,模型组大鼠肝脏指数及ALT、AST、HA、LN、ColⅣ和PCⅢ水平明显增高(P0.05);Western blot检测发现,与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝组织的acH4K12修饰水平减少(P0.05),acH3K9和H3K9me2修饰水平及α-SMA和ColⅠ表达明显增加(P0.05),H3K4me2修饰水平的差异无统计学显著性。结论:肝纤维化大鼠肝脏中acH4K12、acH3K9和H3K9me2修饰水平改变可能与某些细胞外基质代谢相关基因转录调控有关,从而参与了大鼠肝纤维化发生。     

复方鳖甲软肝方药理血清对离体肝星形细胞增殖的影响

目的：复方鳖甲软肝方在临床上对肝纤维化的疗效已得到确认，但其作用机理尚未完全阐明。本实验从离体的角度观察复方鳖甲软肝方药理血清对SD大鼠离体肝星形细胞(HSC)增殖的影响，以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：将60只健康SD雄性大鼠(体重250g左右)分成正常组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组12只；无菌条件下腹主动脉取血，     

中药肝复康对实验性肝纤维化大鼠肝功能及血清标志物的影响

目的 :研究肝复康对实验性肝纤维化大鼠肝功能及血清标志物的影响。方法 :采用四氯化碳致大鼠肝纤维化模型 ,经肝复康干预后分别以赖氏法、溴甲酚绿比色法测定血清转氨酶及白蛋白、球蛋白活性 ,放免法测定血清透明质酸 (HA)、层粘连蛋白 (LN)、Ⅳ型胶原 (C -Ⅳ )、Ⅲ型前胶原 (PC -Ⅲ )。结果 :肝复康治疗后血清转氨酶、球蛋白活性降低 ,白蛋白活性升高 ,血清HA、LN、C -Ⅳ、PC -Ⅲ均有明显降低 ,与模型组比较有显著差异 (P <0 .0 1 )。结论 :肝复康对实验性肝纤维化有明确的治疗作用 ,降低肝纤维化程度 ,同时有效减轻肝细胞损伤 ,改善肝功能。     

混合物脑肽干预对肝纤维化大鼠模型的影响

背景：混合物脑肽是从动物脑中提取的多肽混合物,含有神经生长因子成分。近年研究发现,神经生长因子与肝损伤密切相关。 目的：使用自拟混合物脑肽观察对大鼠肝纤维化的影响。 方法：利用四氯化碳诱导形成SD大鼠肝纤维化模型。将大鼠随机分成纤维化模型组、脑肽干预组和对照组。4,8周采集标本。通过活体解剖取门静脉血清采用全自动生化分析仪检测肝功能丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、白蛋白;采用放射免疫法检测血清肝纤维化指标透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原;常规苏木精-伊红和网状纤维染色检测肝组织标本。 结果与结论：大鼠肝纤维化模型成功建立。脑肽干预组纤维化程度较纤维化模型组显著减轻,但肝组织炎症和肝细胞脂肪变性反而较纤维化模型组更显著。初步判断脑肽能够阻断四氯化碳诱导的肝纤维化,可能与神经生长因子有关。     

苦瓜对实验性大鼠肝纤维化的干预作用及可能机制

目的: 探讨苦瓜(BM)对四氯化碳(CCl₄)诱导大鼠肝纤维化的干预作用及相关机制。方法: 随机将32只雄性健康Wistar大鼠分为4组:对照组(C组);模型组(CCl₄,M组);BM低剂量组(BM 100g/kg饲料+CCl₄,BM-L组)、BM高剂量组(BM 200g/kg饲料+CCl₄,BM-H组)。饲养中除C组外的各组大鼠均皮下注射50%CCl₄-橄榄油溶液2 mL/kg,2次/周,共8周,诱导肝纤维化动物模型。8周后处死大鼠,留取大鼠肝脏和血清。计算肝体指数;测定血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;测定肝匀浆总蛋白(TP)和白蛋白(Alb)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、羟脯氨酸(HYP)含量和单胺氧化酶(MAO)活性;胶原纤维染色观察大鼠肝组织变性与胶原沉积病理改变。结果: 与M组比较,摄入BM后的各剂量组大鼠肝体指数显著降低(P<0.01);血清MDA含量及肝匀浆HYP含量和MAO活性均明显降低(P<0.01),而血清SOD活性、肝组织TP和Alb含量、GSH-Px活性明显增强(P<0.01)。与正常大鼠相比,模型大鼠肝脏有明显胶原沉积与肝纤维化,伴有不同程度的肝细胞炎性损伤坏死;BM组明显减轻模型大鼠肝组织损伤坏死与胶原沉积等病理变化,以高剂量组更明显。结论: BM具有抗CCl₄诱导大鼠肝纤维化作用,其机制可能与其抗脂质过氧化、降低肝HYP含量及MAO活性的作用有关。     

肝纤维化模型大鼠肝功能变化与萱草活性成分黄酮苷的干预

背景：萱草活性成分黄酮苷被认为具有调整人体代谢,清除超氧阴离子自由基,清除体内代谢废物,护肝抗衰老,有很强的扶正固本之功效。 目的：观察萱草活性成分黄酮苷对肝纤维化模型大鼠的肝功能的影响。 方法：建造四氯化碳大鼠肝纤维化模型,建模的同时给予萱草活性成分黄酮苷干预。实验4周后采血,检测血清清蛋白、丙氨酸氨基转移酶、清球蛋白比值、高密度脂蛋白值,观察大鼠的进食、活动和生长状况。 结果与结论：实验4周后,四氯化碳模型组大鼠死亡率为37.5%,黄酮苷组为12.5%。2周后,模型组大鼠体质量明显下降(P < 0.05),黄酮苷组与阴性对照组比较未见显著性下降(P > 0.05)。黄酮苷组大鼠肝/体比值较模型组有所下降。黄酮苷较模型组血清清蛋白、丙氨酸氨基转移酶及清球蛋白比值显著降低,与阴性对照组差异无显著性意义。提示,在肝纤维化的病理进程中,采取萱草活性成分黄酮苷进行干预,可有效缓解大鼠肝损害改善肝功能。     

Antifibrotic potential of a selective COX-2 inhibitor (celecoxib) on liver fibrosis in rats

Hepatic stellate cells (HSCs) play a critical role in the fibrogenesis of the liver, so they are the target cells of antifibrotic therapy. Activated HSCs, but not quiescent HSCs, express cyclooxygenase-2 (COX-2). The present study was designed to investigate the possible prophylactic and therapeutic effects of a selective COX-2 inhibitor (celecoxib) on liver fibrosis induced by thioacetamide (TAA) in rats. Forty-two male albino rats were divided into five groups: group I, negative control; group II, model of fibrosis; group III, preventive model before induction of fibrosis where celecoxib was given for 4 weeks before TAA; group IV, preventive model at the time of induction of fibrosis where celecoxib was given concomitantly with TAA for 6 weeks; group V, therapeutic model treated after induction of fibrosis. Liver function tests, serum TGF-β1 (ELISA), and histopathological examination of liver sections were performed. Both Metavir and Ishak fibrosis scoring systems were used for the evaluation of fibrosis. Groups III, IV, and V showed significant amelioration of liver function tests and a decrease in serum TGF-β1 as compared to the fibrosis model group (II). Histopathological examination showed the mildest degree of fibrosis in group III. Celecoxib had a hepatoprotective and therapeutic effect against liver damage produced by TAA but with different degrees. The highest efficacy of celecoxib was in the preventive group (III) before time of induction of liver fibrosis, followed by the therapeutic group (V) and then the preventive group (IV) at time of induction of liver fibrosis.     

重组腺病毒Ad-HGF-hIL10基因治疗大鼠肝纤维化

目的 探讨人IL-10和HGF双表达的重组腺病毒hIL10-HGF对大鼠肝纤维化的治疗效果,以期为肝纤维化的基因治疗提供实验基础.方法 建立SD大鼠肝纤维化模型后,将1.5×108 PFU的Ad-HGF、Ad-hIL10和Ad-HGF-hIL10经尾静脉注射入大鼠体内,模型组和对照组注射同剂量的0.9％氯化钠注射液.第15天心脏采血,检测血清的肝功能指标,并取肝组织做HE染色,观察各组大鼠肝脏的病理形态.结果 与模型组大鼠相比,治疗组大鼠的肝组织损伤程度减轻,汇管区看不到明显的纤维增生.各治疗组的TBIL、ALT、AST显著低于模型组(P＜0.01),而ALB显著升高(P＜0.01),肝功能得到了明显的改善,而Ad-HGF-hIL10双基因治疗组与Ad-HGF、Ad-hIL-10单基因治疗组相比,ALT、AST显著降低(P＜0.05),白球比(0.83±0.11)与其他两个单基因治疗组Ad-HGF (0.74±0.05)和Ad-hIL-10(0.73±0.05)相比显著上升(P＜0.01).结论 用HGF和hIL-10双基因的腺病毒载体治疗大鼠肝纤维化,肝功能的改善效果明显优于单基因治疗组.     

人羊膜间充质干细胞移植修复肝脏缺血-再灌注损伤

BACKGROUND:Studies have shown that human amniotic mesenchymal stem cells can differentiate into hepatocyte-like cells, suggesting that human amniotic mesenchymal stem cell transplantation provides a new potential for the clinical treatment of liver diseases. OBJECTIVE:To observe the effect of human amniotic mesenchymal stem cell transplantation on the repair of liver ischemia-reperfusion injury repair. METHODS:Sixty Sprague-Dawley rats were randomized into stem cell transplantation, model and control groups. Animal models of liver ischemia-reperfusion injury were made in the rats in the stem cell transplantation and model groups. One hour after modeling, rats in the stem cell transplantation were given injection of human amniotic mesenchymal stem cells (0.5 mL, 106 cells) via the tail vein, while rats in the model and control group were given L-DMEM (0.5 mL) or normal saline (0.5 mL), respectively. Liver function and liver morphology were detected at 1, 2, 3 weeks after transplantation. Meanwhile, RT-PCR detection and western blot assay were also conducted. RESULTS AND CONCLUSION:(1) Liver function: Compared with the control group, levels of aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase and malondialdehyde were significantly increased in the model group at different time points after transplantation (P < 0.05), while a significant reduction in the levels of these three indicators was found after cell transplantation as compared with the model group (P < 0.05). (2) Liver morphology: 2 weeks after transplantation, rats in the model group exhibited hepatocyte degeneration and necrosis, and severe fibrosis, but these changes were remarkably alleviated in the stem cell transplantation group. (3) PT-PCR and western blot detection: 2 weeks after transplantation, a significantly higher level of hepatocyte growth factor in the liver tissue and a lower level of α-smooth muscle protein were found in the stem cell transplantation group compared with the model group (P < 0.05). All these experimental findings indicate that human amniotic mesenchymal stem cell transplantation can improve impaired liver function in rats, possibly through regulating hepatocyte growth factor and α-smooth muscle protein expression levels in the liver, and thereby promotes the repair of liver ischemia-reperfusion injury.     

脐带源间充质干细胞移植治疗肝纤维化及肝硬化的相关机制

背景：肝硬化是多种原因引起的肝脏慢性病变,目前尚没有有效的治疗方法,很多研究表明,间充质干细胞对肝纤维化及肝硬化有一定的治疗作用。 目的：研究人脐带源间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化及肝硬化的治疗作用及其作用机制。 方法：应用CCl4诱导制备肝纤维化及肝硬化模型,造模后经尾静脉注射人脐带间充质干细胞。细胞移植后采用Beckman Coulter analyzer检测人脐带源间充质干细胞移植对大鼠肝功能的影响;采用天狼猩红染色检测肝组织病理改变;应用免疫组织化学染色、Western blot和real-time Q-PCR方法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶抑制剂2蛋白与mRNA在大鼠肝组织中的表达。 结果与结论：人脐带源间充质干细胞移植可以改善肝纤维化及肝硬化大鼠的肝功能。人脐带源间充质干细胞移植后,除肝纤维化细胞移植1周组与对应模型组相比差异无显著性意义外,其余各细胞移植组肝脏组织中基质金属蛋白酶2 mRNA及蛋白表达水平明显升高,而Ⅰ、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶抑制剂2表达水平明显降低。人脐带源间充质干细胞通过上调基质金属蛋白酶2表达,下调基质金属蛋白酶抑制剂2表达,对肝纤维化及肝硬化起到治疗作用;在致病因素持续存在的情况下,人脐带源间充质干细胞移植并不能逆转肝纤维化或者肝硬化,只能延缓肝纤维化或肝硬化的进程。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

钙中性蛋白酶2及Bax在肝纤维化大鼠肝组织中的表达变化及意义

 目的：探讨钙中性蛋白酶2（calpain 2）及Bcl-2相关X蛋白(Bax)在肝纤维化过程中的表达变化及其在肝纤维化过程中的可能作用。方法:  雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照4周、8周组和肝纤维化模型4周、8周组,每组各10只。肝纤维化组按3 mL/kg体重的剂量皮下注射40% CCl4植物油溶液,每隔3 d注射1次,造模时间分别为4周和8周;对照组大鼠皮下注射等量植物油溶液。采用TUNEL法检测肝组织中肝细胞凋亡情况;real-time PCR检测肝组织中calpain 2及bax mRNA的表达变化。免疫组织化学法及Western blotting检测肝组织中calpain 2及Bax蛋白的表达情况。 结果:  Real-time PCR检测发现肝纤维化4周和8周组大鼠肝组织中calpain 2及bax mRNA表达较相应的正常对照组显著增加。免疫组化及Western blotting检测显示肝纤维化4周组大鼠肝组织中calpain 2蛋白的表达与正常4周组比较无显著差异;随着肝纤维化程度的加重,肝纤维化8周时大鼠肝组织中calpain 2的表达显著增加;而肝组织中Bax的表达从肝纤维化4周时就显著增加,肝纤维化8周时达到高峰。此外,通过TUNEL法检测发现肝纤维化4周和8周组大鼠肝组织中肝细胞凋亡的数目较正常组大鼠显著增加。结论:  Calpain 2与Bax可能参与了肝纤维化的发生发展过程。     

肝纤维化病理过程中ZEB1和ZEB2的动态表达变化及意义

目的:观察慢性肝损伤致肝纤维化过程中上皮-间质转化(EMT)调节蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白(ZEB)1和ZEB2的动态表达变化并探讨其调节机制。方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、2周、4周、6周和8周模型组,每组各8只,模型组按3 mL/kg体重的剂量皮下注射60%CCl₄,每隔3 d注射1次,处死大鼠后测定肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,观察肝组织病理改变;免疫组织化学法检测肝组织中ZEB1、ZEB2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;real-time RT-PCR方法检测肝脏组织中ZEB1及ZEB2 mRNA的表达变化。结果:模型各组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性显著高于正常对照组(P＜0.01),8周模型组肝纤维化明显;随着肝脏损伤逐渐加重,纤维化程度加深,E-cadherin蛋白的表达显著降低,α-SMA蛋白表达显著升高,ZEB1和ZEB2蛋白和mRNA表达量也逐渐增加,8周模型组肝组织中ZEB1和ZEB2蛋白(46.42±14.36和57.71±13.32)与mRNA(189.00±47.39和277.28±48.55)表达较正常组显著增加(P＜0.01)。结论:ZEB1和ZEB2蛋白及mRNA表达量随纤维化程度的加重而增加,提示EMT可能通过ZEB1和ZEB2参与肝纤维化的发生发展。     

脂肪间充质干细胞经肝动脉移植治疗晚期肝病

BACKGROUND: Stem cell transplantation is a promising treatment for advanced liver diseases, and adipose-derived mesenchymal stem cells are a hot topic following bone marrow mesenchymal stem cells. OBJECTIVE: To explore the therapeutic effect of adipose-derived mesenchymal stem cells transplantation via the hepatic artery on advanced liver diseases in rats. METHODS: Forty-five rats were randomized into three groups, 15 rats in each group: control group, model group and transplantation group. Rat models of liver cirrhosis were made in the latter two groups through subcutaneous injection of carbon tetrachloride. Then, 1 mL of CFSE-labeled adipose-derived mesenchymal stem cells was infused via the hepatic artery in the transplantation group, and the same volume of normal saline was infused in the model group. Control group had no treatment. Pathological changes, liver function and degree of hepatic fibrosis were observed in the three groups at 4 weeks after treatment. RESULTS AND CONCLUSION: After transplantation, green fluorescence-labeled adipose-derived mesenchymal stem cells were seen in the liver of rats. Hematoxylin-eosin staining and Masson staining showed unclear hepatic lobule structure in the model group with the formation of false lobules, cell cloudy swelling and loose, some degeneration and necrosis, and inflammatory cell infiltration; in the control group, there was nothing abnormal in the liver tissues of rats in the control group; in the transplantation group, the pathological changes of the rat liver were better than those in the model group, but worse than those in the control group. Compared with the model group, the level of serum albumin was higher in the control and transplantation group (P < 0.05), and the levels of bilirubin, aminotransferase and type IV collagen were lower in the control and transplantation group (P < 0.05). Thus, it can be seen that adipose-derived mesenchymal stem cell transplantation can improve liver function and reduce liver fibrosis in cirrhotic rats.