磷酰肌醇-3激酶途径与bcr/abl基因介导的白血病细胞增殖和抗凋亡信号传导

目的探讨磷酰肌醇-3激酶途径在K562、NB4和HL60细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用。方法短期培养法直接法G显带检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的染色体核型,RQ-PCR检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因;用磷酰肌醇-3激酶特异抑制剂渥曼青霉素(WT)抑制磷酰肌醇-3激酶活性,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数。观察K562、NB4和HL60细胞增殖能力及凋亡抗性的变化。统计学采用t检验。结果K562细胞G显带检出Ph染色体,RQ-PCR检测K562细胞存在bcr/abl基因;与标准Ph染色体表达的CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因完全吻合;K562、NB4和HL60细胞在24h、48h、72h的增殖抑制率分别为41.33%、57.46%、65.85%和26.29%、5.51%、2.10%及32.14%、17.14%、13.14%。生长曲线显示WT抑制磷酰肌醇-3激酶途径可显著抑制K562细胞的增殖(P<0.05),而对NB4和HL60细胞增殖无明显影响(P>0.05)。K562、NB4和HL60细胞加和不...     

长春新碱对HL—60细胞肌醇磷脂代谢和增殖的影响

长春新碱作用于~3H—肌醇标记的人早幼粒白血病HL—60细胞.发现~3H—PI急剧减少,在检测的1～120min内.仅为对照组的38.55％～61.01％.而~3H—PIP、~3H—PIP_2含量无明显变化.表明长春新碱不影响HL—60细胞PI激酶和PIP激酶活性。却迅速且持久地促进PI的水解;同时检测到长春新碱明显抑制细胞增殖和DNA合成.提示长春新碱抑制HL—60细胞增殖与干扰肌醇磷脂代谢有关。     

柴胡皂甙d（SSd）对不同白血病细胞增殖的抑制作用

目的 研究从柴胡中提取的单体成分柴胡皂甙d对K562、HL－60细胞增殖是否有影响。方法 分别用不同浓度的SSd作用于K562、HL－60细胞株，于不同时间段分别计数其平均细胞数，并绘制相应生长曲线计算平均抑制率。药物作用后24、36、48小时，计算分裂指数。结果 在用药后K562、HL－60细胞的细胞数、分裂指数均下降，下降幅度与剂量呈正相关，且K562下降幅度较大。结论 SSd能抑制K562、HL－60细胞增殖，这种抑制作用呈时间和剂量依赖关系（P＜0.05）并且与细胞株种类相关。     

二氢青蒿素下调粒系白血病细胞转铁蛋白受体表达

通过建立常铁HL60和K562细胞以及富铁K562细胞体外模型，研究二氢青蒿素对粒系白血病细胞转铁蛋白受体(transferrin receptor，TfR)的调控作用。采用流式细胞术检测二氢青蒿素对粒系白血病细胞TfR密度的调控作用，Western blotting和RT-PCR法检测二氢青蒿素对粒系白血病细胞TfR表达的调控作用，原子吸收分光光度法检测二氢青蒿素对常铁和富铁K562细胞铁含量的影响，以及MTT法和台盼蓝拒染法分析二氢青蒿素对粒系白血病细胞增殖的作用。结果显示，二氢青蒿素能显著降低常铁HL60和K562细胞TfR的密度和下调TfR蛋白的表达，且呈浓度和时间依赖性，并能有效地抑制细胞增殖，IC₅₀值分别为1.74和11.33 μmol·L^-1。二氢青蒿素对富铁K562细胞的TfR蛋白和mRNA表达能进一步增强下调作用，与常铁培养组比较，10 μmol·L^-1二氢青蒿素对富铁K562细胞TfR蛋白和TfR mRNA表达量分别下调了28.1%(P<0.01)和26.2%(P<0.05)，并能显著下降富铁K562细胞铁的含量(P<0.05)，更有效地抑制富铁K562细胞增殖。由此可见，二氢青蒿素能下调粒系白血病细胞TfR密度以及TfR蛋白和mRNA的表达，有效抑制常铁HL60和K562细胞的增殖，对富铁K562细胞增殖的抑制作用能进一步增强。     

二甲氧雌二醇对白血病细胞K562增殖、凋亡的作用及其机制

目的：研究二甲氧雌二醇（2-ME）对人白血病细胞l（562细胞的增殖、凋亡的作用及其机制。方法：分别以不同浓度的2-ME处理白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用AnnexinV和PI双染的流式细胞术检测K562细胞凋亡率,应用凝胶蛋白电泳迁移率分析法EMSA检测K562细胞核内NF．KB蛋白的结合活性变化情况。结果：随着2-ME浓度的升高,各项指标与对照组相比较的差异均有统计学意义（P〈0．01）;K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当2·ME浓度为8μmol·L-1时,细胞凋亡率达64．3％;同时K562细胞核内NF—kappaB的DNA结合活性明显降低。结论：2-ME可显著抑制人白血病细胞K562增殖并诱导其凋亡;2-ME诱导K562细胞凋亡的机制与NF—kappaB蛋白信号通路有关。     

硝普钠抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡的实验研究

目的：观察外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠对K562细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用：方法：将不同浓度的硝普钠与K562细胞在体外培养，观察其作用时间效应和剂量效应；用活细胞计数、MTT法观察硝普钠对K562细胞增殖的抑制作用；用DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。同时设高铁氰化钾(PFC)对照组和空白对照组。结果：NO能抑制K562细胞生长，并在一定的剂量范围内呈现作用时间和剂量的量效关系．大部分细胞阻滞于G0／G1期；K562细胞与硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变，DNA片断化，亚G1峰检出并显著增加，Annexin V／PI和DNA片段原位末端标记表达增加等均证实NO能诱导K562细胞凋亡。而对照组并无此类变化。结论：NO通过阻滞G0／G1期细胞显著抑制K562细胞的增殖，并有很强的致凋亡作用。     

磷脂酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路在肺部疾病中的作用研究进展

磷脂酸肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路是细胞内与增殖、分化和凋亡相关的信号通路，是机体自我保护的重要通路。PI3K被激活后会使其下游分子Akt磷酸化，进而抑制细胞凋亡、调控细胞生存及增殖。PI3K/Akt信号通路在众多肺系疾病，如急性肺损伤、肺炎、哮喘、肺纤维化、肺癌等的发展进程中起着重要作用。该文对PI3K/Akt信号通路在肺系疾病进展中的作用机制进行了综述。     

金雀异黄素对K562细胞的生长抑制和诱导凋亡作用

目的探讨金雀异黄素对人红白血病细胞系K562细胞的生长抑制、诱导凋亡作用。方法不同浓度的金雀异黄素处理K562细胞后,用MTT比色法检测细胞生长增殖作用,Wright-Gimesa法观察细胞的形态学变化,FCM检测K562细胞凋亡峰。结果金雀异黄素对K562细胞具有与时间、浓度呈正相关的生长抑制作用。形态学显示金雀异黄素高浓度组细胞发生核固缩、核碎裂,并有凋亡小体出现。细胞周期显示对照组K562G2／M期细胞8．9％,金雀异黄素75gmol·L^-1时升高到60．6％（P〈0．05）;金雀异黄素75gmol·L^-1时K562细胞亚G1期细胞为27．3％,对照组为0．4％（P〈0．05）。结论金雀异黄素对K562细胞具有很强的生长抑制作用,K562细胞可发生明显G2／M期阻滞,金雀异黄素诱导了K562细胞发生凋亡。     

1,25-二羟基维生素D_3抑制K562细胞增殖及其机制

目的观察1,25二-羟基维生素D3〔1,25(OH)2D3〕对白血病细胞株K562增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法间接免疫荧光法鉴定维生素D受体(VDR)在K562细胞的表达;四噻唑蓝法(MTT)、AO/EB、流式细胞PI单染分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期;比色法检测凋亡信号蛋白———天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性。结果①K562细胞核阳性表达VDR;②10-8mol.L-11,25(OH)2D3可明显抑制K562细胞增殖,促进凋亡,凋亡率从4.1%(对照组)增至26.5%,P<0.01;③1,25(OH)2D3作用后K562细胞的Caspase-3活性增加,P<0.05,提示细胞凋亡伴随着Caspaes-3活性升高。结论1,25(OH)2D3可明显抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与Caspase-3活性增加相关。     

三氧化二砷诱导K562/ADM耐药细胞凋亡中活性氧的作用

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）诱导K562／ADM细胞凋亡中活性氧（ROS）的作用和其与耐药基因radr1及其编码的P-糖蛋白（P—gP）表达的关系。方法：应用噻唑蓝（MTT）比色法检测K562／ADM细胞增殖活性；Annexin V／PI染色法检测细胞凋亡；RT-P（鼠检测mdr1基因mRNA的表达；流式细胞术测定P-gP表达、ROS活性和细胞内阿霉素（ADM）含量。结果：As2O3显著抑制K562／ADM细胞的增殖，Annexin V／PI双染检测显示凋亡细胞明显增加：ROS活性明显下降；mdr1 mRNA和P-gP表达明显降低，P-gP功能受抑，细胞内ADM含量显著增高。结论：As2O3抑制K562／ADM耐药细胞的增殖活性和促进其凋亡，其机制可能为通过降低细胞ROS水平、抑制radr1/P-gp的表达和功能，进而逆转mdr1/P-gP介导的多药耐药和凋亡抑制。     

一种新二萜类化合物的体外抗肿瘤研究

目的研究一种新二萜类化合物凤厥内酯Ａ（Ｆ－Ａ）的抗肿瘤活性。方法采用体外培养的人癌细胞株——早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０和红白细胞白血病Ｋ５６２作对象，观察Ｆ－Ａ对其抑瘤活性、诱导分化、细胞周期的影响。结果Ｆ－Ａ对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞２４ｈ的半数抑制浓度ＩＣ５０分别为７．６ｍｇｇ－１和９．１ｍｇｇ－１，在４ｍｇＬ－１时即明显抑制ＨＬ－６０细胞的对数生长；对３Ｈ－ＴｄＲ参入作用在培养４８ｈ后有一定抑制作用；透视电镜显示肿瘤细胞有损伤表现；细胞周期分析显示Ｇ２＋Ｍ期细胞增多；ＮＢＴ还原反应试验阴性。结论Ｆ－Ａ明显抑制ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞生长，抗肿瘤活性强，对细胞周期的影响提示Ｍ期阻滞，研究初步提示Ｆ－Ａ不具细胞诱导分化作用。     

色胺酮对人白血病细胞株K562细胞增殖抑制、凋亡诱导的影响

目的探讨色胺酮(Tryptanthrin,Try)对人白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响。方法K562细胞进行常规培养后,利用MTT方法进行Try(1.56～50)mg.L-1的细胞增殖影响;Hoechst33258荧光染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡情况等指标;综合评价Try对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果Try在3.12～50mg.L-1浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;Hoechst33258荧光染色及流式细胞仪结果显示,不同浓度Try作用48h后,K562细胞可发生明显的凋亡;同时Try也可影响K562的细胞周期,将细胞阻滞于G0/G1期,随Try剂量增大G0/G1期细胞比例也逐渐增高,并出现明显的亚二倍体凋亡峰;同时,S期细胞比例随剂量增大而逐渐降低。结论色胺酮能明显抑制K562细胞增殖并具有诱导K562细胞发生凋亡的作用。     

MTT法对白血病细胞株化疗药物敏感性检测

本文采用MTT法，观察白血病细胞林K562、HL60细胞对临床常用的抗癌药物的敏感性反应。实验结果显示，KS62细胞数与A570值之间有很强的相关性；5种抗癌药物对NL60、K562细胞的抑制率均大于30％，提示了MTT法可以作为一种简单、准确的方法用于抗癌药物的体外敏感性检测。     

双氢青蒿素诱导人肿瘤细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:研究双氢青蒿素诱导人白血病细胞凋亡作用及其机制。方法:用双氢青蒿素处理K562细胞,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果;荧光显微镜观察细胞的凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测半胱氨酰-天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,蛋白印迹技术(Western blot)检测线粒体、胞浆细胞色素C的表达。结果:双氢青蒿素处理K562细胞48h后MTT检测,570nm波长处测定半数细胞抑制浓度为8×10-5mol.L-1;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞增殖抑制表现;RT-PCR检测到caspase-3的表达,Western-blot检测线粒体细胞色素C表达下调,胞浆中细胞色素C表达阳性。结论:双氢青蒿素能够在体外抑制人白血病细胞增殖并诱导其凋亡,而促进细胞色素C的释放,激活caspase-3可能是其作用机制之一。     

丹参酮衍生物对K562细胞的生长抑制及诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮衍生物对人红白血病细胞株K562的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法MTT比色法检测不同浓度丹参酮1、丹参酮2和丹参酮B对K562细胞的增殖抑制作用;PI单染法检测3者对K562细胞周期的影响;An-nexin V/PI双染法检测3者对K562细胞诱导凋亡的作用。结果丹参酮1和丹参酮B能够抑制K562细胞增殖,IC50分别为5.22和15.11μmol·L-1,且分别在2.5~10μmol·L-1和10~40μmol·L-1剂量范围内,G0/G1期细胞比例的增加及早期凋亡细胞百分率的提高均呈剂量相关性;丹参酮2在100μmol·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为27.8%,无诱导其凋亡作用,但可以使G0/G1期细胞增多。结论丹参酮1和丹参酮B抑制K562细胞增殖,阻滞其于G0/G1期并诱导细胞凋亡;丹参酮2对K562细胞没有明显生长抑制及诱导凋亡作用,但可将其阻滞于G0/G1期。     

Modulation of ATPase activity by cholesterol and synthetic ether lipids in leukemic cells.

Synthetic ether lipids (EL) exert their antiproliferative action on leukemic cells through localization in the plasma membrane with subsequent biochemical effects which are still being elucidated. In the present study, the modulation of membrane-linked ATPase activity was investigated in relation to changes in membrane fluidity of HL60 and K562 human leukemic cells. Incubation of HL60 and K562 cells with EL under non-cytotoxic conditions caused significant membrane fluidization which was related to the membrane cholesterol (CHOL) levels. HL60 cells, which are sensitive to the cytotoxic action of EL, had a lower basal CHOL content. When HL60 cells were loaded with CHOL, Na+, K(+)-ATPase activity was reduced significantly compared to that of untreated cells. In contrast, CHOL-deprived K562 cells had twice the Na+,K(+)-ATPase activity of unmodified K562 cells. Na+K(+)- and Mg(2+)-ATPase activities were stimulated significantly in both cell lines by EL at concentrations lower than 20 microM. This stimulation was greater in cells richer in CHOL, such as K562 cells and CHOL-enriched HL60 cells. In contrast, Na+,K(+)-ATPase in both cell lines was inhibited by EL above 20 microM regardless of the CHOL content. Mg(2+)-ATPase activity was not related to cell CHOL content and was not inhibited by EL above 20 microM.     

二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡及与G2 / M期阻滞关系研究

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用细胞计数法、形态学观察、MTT分析法、AO／EB染色、流式细胞术探讨DADS对K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果1．DADS在10-80mg-L。范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量一时间依赖效应。2．DADS浓度在10-80mg．L-1。时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义（p〈0．05或P〈0．01）。3．不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,K562细胞阻滞于G2／M期。结论DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用,其作用的可能机制与k562细胞阻滞于G2／M期有关。