“嗅三针”对阿尔茨海默病小鼠空间记忆能力和海马APP、Aβ蛋白表达的影响

目的:观察"嗅三针"对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习和海马APP、Aβ蛋白表达的干预效应,以阐明其基于嗅觉通路治疗AD的作用机制。方法:将40只AD小鼠随机分为AD模型组、嗅三针组、嗅三针加嗅神经切断组、盐酸多奈哌齐组,每组10只,另取10只同窝的阴性小鼠作为正常对照组。通过"嗅三针"对印堂穴和双侧迎香穴行电针刺激,以3mg/(kg·d)的剂量对盐酸多奈哌齐组AD小鼠进行灌胃,每周干预5次,间歇2d,共干预4周。小鼠空间记忆能力采用Morris水迷宫进行检测,海马APP、Aβ蛋白表达采用western blot法进行检测。结果:嗅三针刺激和盐酸多奈哌齐灌胃均能显著增加AD小鼠穿越平台次数和靶象限占总时间百分比,并能显著降低海马APP、Aβ蛋白表达(P0.05);嗅三针加嗅神经切断组对各指标表达均无明显影响(P0.05),嗅三针组与盐酸多奈哌齐组比较无显著性差异(P0.05)。结论:"嗅三针"具有改善AD小鼠空间记忆能力,降低海马APP、Aβ蛋白表达的作用,嗅觉通路的完整性是其发挥干预效应的核心机制。     

嗅三针对阿尔茨海默病小鼠海马区磷酸化P38MAPK和TNF-α表达的影响

目的:观察嗅三针对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马磷酸化P38MAPK和TNF-α表达的影响,以阐明其基于嗅觉通路治疗AD的作用机制。方法:将40只AD小鼠随机分为模型组、嗅神经切断嗅三针组、嗅三针组、盐酸多奈哌齐组,每组10只,另取10只同窝的阴性小鼠作为正常对照组。通过嗅三针对印堂穴和双侧迎香穴行电针刺激,每次10min,以3mg(kg·d)的剂量对盐酸多奈哌齐组AD小鼠进行灌胃,每周干预5次,间歇2d,共干预4周。应用Western blot技术检测海马p-p38MAPK蛋白,免疫组化法检测TNF-α表达水平。结果:嗅三针刺激和盐酸多奈哌齐灌胃能够显著降低海马p-p38MAPK蛋白和TNF-α的表达,与AD模型组比较,差异具有显著性(P<0.05)。嗅神经切断嗅三针组对AD小鼠海马p-p38MAPK蛋白和TNF-α的表达均无明显影响,与AD模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05),嗅三针组与盐酸多奈哌齐组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:嗅三针具有调控P38MAPK通路,降低AD小鼠海马炎症因子TNF-α表达的作用,嗅觉通路的完整性可能是其发挥干预效应的核心机制。     

“嗅三针”对阿尔茨海默病大鼠海马Bcl-2和Bax表达的干预效应

目的:探讨"嗅三针"通过嗅觉通路对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元细胞凋亡的影响,以阐明其治疗AD的作用机制。方法:成年SD雄性大鼠40只,随机分为正常对照组、AD模型组、嗅神经切断嗅三针组、嗅三针组,每组10只。β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40肽段注射法制作AD大鼠模型,嗅神经切断术造大鼠嗅觉通路阻断模型。"印堂"穴及两侧"迎香"穴交替电针刺激行"嗅三针"治疗,每次10 min,每周治疗5次,共治疗6周。免疫组化法检测海马Bcl-2和Bax表达。结果:AD模型组较正常对照组Bcl-2阳性细胞减少(P<0.05),Bax阳性细胞表达增多(P<0.01);嗅三针组较AD模型组Bcl-2阳性细胞明显增多(P<0.01),Bax阳性细胞显著减少(P<0.01);嗅神经切断嗅三针组与AD模型组比较Bcl-2、Bax阳性细胞变化不明显(P>0.05)。结论:"嗅三针"能够调节海马Bcl-2和Bax的表达,其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路的完整性。     

"嗅三针"对阿尔茨海默病大鼠海马毒覃碱型受体的影响

目的:探讨"嗅三针"对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马胆碱能毒覃碱型受体(M受体)表达及功能的影响,了解其对嗅觉通路完整性的依赖作用.方法:成年SD雄性大鼠40只,随机分为正常对照组、AD模型组、嗅神经切断+嗅三针组和嗅三针组,每组10只.采用Aβ1-40淀粉样肽注射法制作AD大鼠模型,嗅神经切断术造大鼠嗅觉通路阻断模...     

嗅三针对AD大鼠的治疗效应与海马细胞钙稳态的相关性研究

目的:探讨嗅三针疗法对阿尔茨海默病(AD)大鼠的疗效与海马细胞钙稳态的相关性。方法:成年SD雄性大鼠50只,随机分为正常对照组、AD模型组、AD嗅神经切断模型组、嗅三针组和嗅三针对照组,每组10只。制作AD大鼠模型和AD嗅神经切断大鼠模型,通过嗅三针治疗,测试大鼠水迷宫学习记忆能力并采用荧光分光光度法测定海马细胞内Ca2+浓度。结果:水迷宫定位航行试验结果显示:平均逃避潜伏期和平均游泳路程比较,正常对照组和嗅三针组均明显短于AD模型组(P0.01);嗅三针对照组短于AD模型组(P0.05);嗅三针组短于嗅三针对照组(P0.05);AD模型组与AD嗅神经切断模型组相比较,其差异无显著性意义(P0.05)。海马细胞内Ca2+浓度比较:正常对照组、嗅三针组和嗅三针对照组均明显低于AD模型组(P0.01);嗅三针组低于嗅三针对照组(P0.05);AD模型组与AD嗅神经切断模型组相比较,其差异无显著性意义(P0.05)。结论:嗅三针能够显著增强AD大鼠学习记忆功能,并且能够降低海马细胞内Ca2+浓度,其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路的完整性。     

黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠海马和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化表达的影响

目的:观察黑逍遥散对阿尔茨海默症(AD)小鼠海马和脑皮层钙调蛋白依赖性激酶2α(CaMKⅡα)及其磷酸化表达水平的干预效应。方法:30只APP/PS1双转基因雄性小鼠称体质量并按随机原则分为模型组、盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散组,每组10只。同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠10只为空白组。盐酸多奈哌齐组(6 g·kg~(-1))、黑逍遥散组(3. 25 mg·kg~(-1))分别连续给药90 d后,Morris水迷宫检测行为学变化,免疫组化和蛋白免疫印迹法检测小鼠海马区和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化的表达。结果:干预90 d后,与空白组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期显著延长,跨原平台和有效区域次数显著减少(P 0. 01),小鼠海马区及脑皮层Ca MKⅡα蛋白表达显著减弱或降低,而p-CaMKⅡα蛋白表达显著升高(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐和黑逍遥散组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P 0. 01),小鼠海马区及脑皮层Ca MKⅡα蛋白显著增强或升高,p-CaMKⅡα蛋白表达显著降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:黑逍遥散通过调节AD小鼠不同脑区参与细胞记忆形成机制的关键蛋白Ca MKⅡα及其磷酸化表达,进而发挥改善AD小鼠的学习记忆能力。     

黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠海马CREB1蛋白及其磷酸化表达的影响

目的探讨黑逍遥散治疗阿尔茨海默病的可能作用机制。方法 30只APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散组,每组10只。同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠10只设为空白组。黑逍遥散组给予黑逍遥散6 g/(kg·d)灌胃,盐酸多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐片3. 25 mg/(kg·d)灌胃,模型组、空白组给予双蒸水0. 2 ml/10 g灌胃,各组均每日灌胃1次,连续3个月。采用Morris水迷宫于实验结束第1～5天进行定位航行实验观察逃避潜伏期,第6天开展空间搜索实验记录跨原平台次数。采用免疫组化法检测小鼠海马CA1、CA3及DG区环腺苷酸应答元件结合蛋白1 (CREB1)及磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白1 (p-CREB1)表达。结果与空白组比较,模型组小鼠第1～5天逃避潜伏期明显延长,第6天跨原平台次数明显减少,小鼠海马CA1、CA3及DG区CREB1及p-CREB1蛋白表达显著降低(P 0. 05或P 0. 01)。与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和黑逍遥散组各时间点逃避潜伏期均缩短,第6天跨原平台次数明显增加,小鼠海马CA1、CA3及DG区CREB1、p-CREB1蛋白表达显著升高(P 0. 05或P 0. 01)。黑逍遥散组和盐酸多奈哌齐组各指标组间比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论黑逍遥散可能通过调节海马CREB1及其磷酸化表达发挥防治阿尔茨海默病的作用。     

寿尔智胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠海马PSD-95蛋白表达的作用

目的:探讨寿尔智胶囊对阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)模型大鼠海马PSD-95蛋白表达的影响。方法:经脑立体定位仪向SD大鼠海马CA1区注射Aβ25-35,建立AD大鼠模型。将40只SD大鼠随机分为假手术组、盐酸多奈哌齐组、模型组、寿尔智组,每组各10只。造模后的第3天开始使用药物进行干预,寿尔智组大鼠给药剂量:12 mg·(kg·d)-1,盐酸多奈哌齐组大鼠给药剂量0.52 mg·(kg·d)-1,模型组及假手术组灌胃液为等体积的生理盐水,每天灌胃两次,共4周。采用免疫组织化学法测定海马CA1区PSD-95的表达。结果:模型组大鼠海马CA1区PSD-95阳性细胞的平均光密度明显少于假手术组,差异具有显著性(P0.01);盐酸多奈呱齐组和寿尔智组则可见较多的阳性细胞,其平均光密度较模型组显著增加,差异具有显著性(P0.01);但盐酸多奈呱齐组和寿尔智组与假手术组比较,阳性细胞平均光密度明显减少,差异具有显著性(P0.01);且盐酸多奈呱齐组和寿尔智组之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:寿尔智胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠海马PSD-95蛋白表达具有改善作用。     

嗅三针治疗AD大鼠效应与海马腺苷酸环化酶活性的相关性研究

目的:探讨嗅三针疗法对AD大鼠的疗效与海马组织腺苷酸环化酶(AC)活性的相关性。方法:选择成年雄性SD大鼠50只,按随机方法分为5组,每组10只,即有AD模型组、AD并嗅神经切断组、嗅三针组、嗅三针对照组及正常组。首先复制AD模型和AD嗅神经切断模型,然后通过嗅三针疗法治疗8个疗程,测试大鼠水迷宫学习记忆能力和海马组织AC活性(RIA)。结果:AD模型组大鼠Morris水迷宫测试游泳路程及逃避潜伏期明显长于正常组与嗅三针组(P0.01);AD模型组略长于嗅三针对照组(P0.05);嗅三针对照组略长于嗅三针组(P0.05);AD并嗅神经切断模型组与AD模型组比较,二者没有显著差异(P0.05);AD模型组海马组织AC活性显著低于正常组、嗅三针组及嗅三针对照组(P0.01);嗅三针对照组略低于嗅三针组(P0.05);而AD并嗅神经切断模型组与AD模型组比较,二者没有显著差异(P0.05)。结论:嗅三针能够显著增强AD大鼠学习记忆功能、并且能提高海马组织AC活性,嗅三针疗法之疗效的体现有赖于嗅感觉之传导路的完整性。     

复方金思维对老年性痴呆模型大鼠海马神经元微管和Tau蛋白磷酸化相关酶类表达的影响

[目的]观察中药复方金思维对老年性痴呆(AD)模型大鼠海马CA1区神经元微管结构和Tau蛋白磷酸化相关酶类表达的影响.[方法]48只SD大鼠随机等分为假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组和金思维大、中、小剂量组.采用双侧脑室注射微量链脲佐菌素(STZ 3mg/kg)建立拟AD大鼠模型,模型成功后,治疗组分别予盐酸多奈哌齐和金思维(分为3个不同剂量)进行3个月的治疗,模型组和假手术组给予等体积的双蒸水.行灌注固定,冰冻切片,取各组大鼠海马CA1区组织进行光镜和电镜观察,并进行糖原合成激酶3β(GSK-3β)、蛋白磷酸酶-1(PP-1)、蛋白磷酸酶-2A(PP-2A)的免疫组化染色.[结果]1)AD大鼠海马神经元微管结构出现明显的断裂或溶解现象,而用金思维治疗后这种现象得到明显改善.2)AD大鼠海马内的蛋白激酶GSK-3β明显增多、PP-1、PP-2A明显减少,金思维各剂量组上述酶类表达均接近至正常水平,与盐酸多奈哌齐组比较无差异.[结论]AD大鼠模型脑组织微管结构和Tau蛋白磷酸化相关酶类的表达发生异常,金思维可修复断裂或溶解的微管,使蛋白激酶和磷酸酶的表达接近至正常水平.     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨大补元煎促进APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠海马神经发生的作用机制

目的:通过研究大补元煎对淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)小鼠海马Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的作用,探讨大补元煎促进神经发生的可能机制。方法:5月龄APP/PS1小鼠30只和野生鼠10只,分为正常组、模型组、奈哌齐组(6.5×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1))和大补元煎组(13.2 g·kg~(-1)·d~(-1)),灌胃30 d,正常组和模型组给予等体积生理盐水。应用水迷宫评价小鼠学习记忆力;应用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠海马神经元病理形态变化;应用免疫组化(IHC)检测5-溴脱氧尿苷(Brdu),肾上腺皮质激素(Dcx)和神经元核抗原(Neu N)的阳性细胞数;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马中β-catenin,糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠平台潜伏期和游泳总路程显著升高(P0.01),而穿越平台次数和目标象限时间显著降低(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠平台潜伏期和游泳总路程降低(P0.05,P0.01),而穿越平台次数和目标象限时间升高(P0.05)。与正常组比较,模型组小鼠海马齿状回(DG)区神经元层次和数量减少,可见明显坏死的神经元;与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠海马DG区神经元层次和数量增多,坏死神经元数量减少。与正常组比较,模型组小鼠海马DG区Brdu,Dcx和Neu N标记的阳性细胞数明显降低(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠海马DG区Brdu,Dcx和Neu N标记的阳性细胞数增加(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组小鼠海马中β-catenin mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.01),而GSK-3β的基因和蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠海马β-catenin mRNA和蛋白表达水平升高(P0.05,P0.01),而GSK-3βmRNA和蛋白表达水平下降(P0.05,P0.01)。结论:大补元煎通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生。     

黑逍遥散对AD模型小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE表达的影响

目的:研究黑逍遥散对阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)小鼠海马区β淀粉样多肽1-42(β-amyloid 1-42peptide,Aβ1-42),糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β),脑啡肽酶(neprilysin,NEP),胰岛素抵抗酶(insulindegrading enzyme,IDE)表达的影响。方法:42只APP/PSI双转基因小鼠称体质量后,按随机原则分为4组,分别为模型组,阳性药组(盐酸多奈哌齐,3. 25 mg·kg-1),黑逍遥散高、低剂量组(6,3 g·kg-1)。10只同月龄、同种系的野生型C57BL/6J小鼠为正常组。连续灌胃12周后,Morris水迷宫予以行为学检测,苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经元的形态改变,采用免疫组化技术分别检测小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE蛋白的表达。结果:治疗3个月后,与正常组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期均延长,跨原平台次数减少(P 0. 01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著增强,NEP与IDE蛋白阳性表达显著减弱(P 0. 01),HE染色显示AD模型小鼠海马神经细胞损伤严重;与模型组比较,用药各组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P 0. 05,P 0. 01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著减弱,NEP与IDE蛋白阳性表达显著增强(P 0. 05,P 0. 01),HE染色显示各治疗组小鼠海马神经细胞损伤减轻。结论:黑逍遥散能够显著改善AD小鼠的学习记忆能力,可能与调节Aβ在海马区的异常沉积和降解作用等方面来减轻AD小鼠认知能力损伤有关。     

补肾活血化痰方对阿尔茨海默病模型大鼠海马细胞外调节蛋白激酶1、蛋白激酶2蛋白表达的影响

目的:观察补肾活血化痰方对阿尔茨海默病模型大鼠海马细胞外调节蛋白激酶1、蛋白激酶2蛋白表达的影响。方法:建立阿尔茨海默病大鼠模型,造模后第3 d开始用药,补肾活血化痰方配置成1.5g·m L-1的浓度,按12 mg·(kg·d)-1的剂量灌胃给药,盐酸多奈哌齐按0.52mg·(kg·d)-1的剂量灌胃,模型组及假手术组灌胃液为等体积的生理盐水,均每日两次,每天分上午8点和下午4点两次灌胃,共4周,用免疫组化方法观察AD大鼠海马神经元中细胞外调节蛋白激酶的表达变化。结果:模型组大鼠海马CA1区细胞外调节蛋白激酶1、蛋白激酶2阳性细胞的平均光密度明显少于假手术组,且大多细胞的胞浆染色较淡,差异具有显著性(P0.01);而盐酸多奈哌齐组和补肾活血化痰方组平均光密度较模型组显著增加,可见较多胞浆呈稍浅棕黄色颗粒状的阳性细胞,差异具有显著性(P0.01);但盐酸多奈哌齐组和补肾活血化痰方与假手术组相比,染色要淡,阳性细胞平均光密度明显减少,具有显性差异(P0.01);盐酸多奈哌齐组和补肾活血化痰组之间比较,差异不显著(P0.05)。结论:补肾活血化痰方治疗阿尔茨海默病有效,作用机制与其减少Aβ沉积,促进神经存活的信号传导途径有关。     

酸枣仁汤通过抑制APP/PS1双转基因小鼠海马神经炎症发挥神经保护作用

目的:观察酸枣仁汤对APP/PS1小鼠海马神经炎症的影响,并探讨其神经保护的可能机制。方法:将小鼠随机分为空白组,模型组,多奈哌齐组(0. 92 mg·kg-1),酸枣仁汤低、高(12. 96,25. 92 g·kg-1)剂量组。各组连续给药30 d后,采用尼氏染色观察各组小鼠海马齿状回(DG)区病理形态的变化,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组小鼠海马中TNF-α,IL-1β的mRNA表达水平,采用免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠海马中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙结合蛋白(IBA1)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠海马DG区颗粒细胞排列不均匀,细胞丢失明显,部分神经元胞内尼氏体消失或固缩,血清中TNF-α,IL-1β含量显著升高(P 0. 01),小鼠海马中TNF-α,IL-1βmRNA表达显著升高(P 0. 01),海马DG区中GFAP,IBA1蛋白表达显著上调(P 0. 01);与模型组比较,多奈哌齐组、酸枣仁汤低、高剂量组小鼠海马DG区颗粒细胞排列稍整齐,神经元丢失减轻,且胞内尼氏体消失或固缩情况好转,小鼠血清中TNF-α,IL-1β含量明显降低(P 0. 05,P 0. 01),小鼠海马中TNF-α,IL-1βmRNA表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01),小鼠海马DG区中GFAP,IBA1蛋白表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:酸枣仁汤能改善APP/PS1双转基因小鼠神经元丢失,其机制可能与其调节小鼠海马神经炎症有关。     

Aβ1-40脑内注射对大鼠海马AchE和NOS1表达的影响及加减地黄饮子的干预作用

目的:观察加减地黄饮子对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)诱导的AD模型大鼠大脑海马组织AchE和NOS1表达的影响。方法:采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)动物模型。采用免疫组织化学染色法和计算机图像分析技术测定海马区AchE和NOS1表达。结果:模型组(6.42±0.38)AchE表达与假手术组(6.74±0.47)比较无显著性差异。与模型组比较,加减地黄饮子组(3.77±0.29)AchE表达明显减少,作用效应较盐酸多奈哌齐(2.25±0.20)弱。与假手术组(5.74±0.39)相比,模型组大鼠海马区NOS1表达下降(2.38±030),与模型组比较,地黄饮子组NOS1的表达增加(4.43±0.40),作用优于盐酸多奈哌齐(3.56±0.27)。结论:加减地黄饮子可通过抑制AD模型大鼠海马组织AchE和上调AD模型大鼠海马组织NOS1表达而发挥抗AD的作用。     

Aβ1-40脑内注射对大鼠海马超氧化物歧化酶丙二醛的影响及通络救脑口服液的干预作用

目的 观察通络救脑口服液对β-淀粉样蛋白1 - 40 (Aβ1-40 )诱导的AD模型大鼠海马SOD活性和MDA蛋白表达的影响.方法 选用140只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组、通络救脑口服液各剂量组(12,24,48 mg·kg-1·d-1)共7组,每组20只.采用海马立体定向注射凝聚态Aβ1 - 40建立老年性痴呆(Alzheimer's disease, AD)动物模型.药物干预4周,第5周应用分光光度法检测大鼠大脑海马组织SOD、MDA蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,模型组SOD活性明显降低(P<0.05),而MDA含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组SOD活性明显升高(P<0.05),而MDA含量明显降低(P<0.05).结论 通络救脑口服液通过上调SOD的活性和抑制MDA的表达而发挥其抗氧化治疗老年性痴呆的作用.     

恒清Ⅱ号方对阿尔茨海默病模型小鼠认知行为的影响

目的探讨恒清Ⅱ号方对阿尔茨海默病模型小鼠认知行为的影响。方法将72只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、恒清Ⅱ号方低剂量组、恒清Ⅱ号方中剂量组、恒清Ⅱ号方高剂量组和盐酸多奈哌齐组,每组12只。采用海马CAI区Aβ1-42寡聚体溶液注射方法造模。造模次日起,恒清Ⅱ号方低、中、高剂量组小鼠分别给予恒清Ⅱ号方20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg灌胃,盐酸多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐片5 mg/kg灌胃,假手术组和模型组小鼠给予生理盐水灌胃,均1次/d,连续8周。灌胃结束后采用水迷宫实验检测各组小鼠的认知行为。结果水迷宫实验第1-4天,模型组小鼠逃避潜伏期和定位航行路径长度均明显长于假手术组(P均0.05),恒清Ⅱ号方中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组小鼠逃避潜伏期和定位航行路径长度均明显短于模型组(P均0.05);水迷宫实验第3天和第4天,恒清Ⅱ号方中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组小鼠逃避潜伏期和定位航行路径长度均明显短于恒清Ⅱ号方低剂量组(P均0.05);水迷宫实验第4天,恒清Ⅱ号方高剂量组小鼠逃避潜伏期和定位航行路径长度均明显短于恒清Ⅱ号方中剂量组和盐酸多奈哌齐组(P均0.05)。水迷宫实验第5天,模型组小鼠穿越隐匿平台次数明显少于假手术组(P0.05),恒清Ⅱ号方中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组小鼠穿越隐匿平台次数均明显多于模型组和恒清Ⅱ号方低剂量组(P均0.05),且恒清Ⅱ号方高剂量组明显多于恒清Ⅱ号方中剂量组和盐酸多奈哌齐组(P均0.05)。结论恒清Ⅱ号方可明显改善阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆能力,且量效关系呈正相关,高剂量恒清Ⅱ号方的效果优于盐酸多奈哌齐。     

清心开窍方挥发油对AD大鼠大脑皮层及海马区GFAP及Caspase-3表达的影响

目的探讨清心开窍方及其挥发油对Aβ25-35杏仁核注射诱导痴呆（Alzheimer’s disease,AD）大鼠皮层及海马区胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、3-淀粉样蛋白（β-amy-Ioid,Aβ）、淀粉样前体蛋白（β-amyloid precursor protein,βAPP）及Caspase-3表达的影响。方法选取32只雄性SD大鼠,采用杏仁核注射Aβ25-35诱导AD大鼠模型,造模后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组[盐酸多奈哌齐片,1．67mg／kg]、清心开窍方组（中药组,清心开窍方煎液12．67mL／kg）和挥发油组（挥发油,3．33mL／kg）,另选取8只大鼠作为正常组,正常组、模型组给予等量双蒸水灌胃,各组每天干预1次,连续2周。给药结束后进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠水迷宫测试期间第1～5天逃避潜伏期及跨越平台次数。免疫组织化学法检测各组大鼠大脑皮层与海马区GFAP、Aβ、6APP及Caspase-3的表达。结果与模型组比较,各用药组大鼠第3～5天逃避潜伏期均缩短,皮层与海马区GFAP、Ap、βAPP及Caspase．3表达水平降低,跨越平台次数增加,差异均有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）。与西药组比较,中药组皮层及海马区Aβ表达水平降低、βAPP升高,挥发油组皮层及海马区GFAP、βAPP及Caspase．3均升高,挥发油组第3～5天逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论清心开窍方能明显改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能是通过降低皮层及海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达发生作用。     

加减地黄饮子对阿尔茨海默病大鼠模型的实验研究

目的:探讨大鼠海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)后血清TNF-α和IL-1β含量的变化及加减地黄饮子对其影响。方法:100只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术对照组、模型对照组、盐酸多奈哌齐对照组、加减地黄饮子组共5组,采用海马立体定向注射Aβ1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用双抗夹心酶联免疫吸附测定法检测TNF-α和IL-1β含量。结果:模型组TNF-α和IL-1β含量显著高于假手术组(p<0.05)。与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和加减地黄饮子组TNF-α和IL-1β含量显著降低(p<0.05)。结论:大鼠海马注射Aβ1-40后大鼠血清TNF-α和IL-1β含量明显增高,加减地黄饮子通过降低血清TNF-α和IL-1β的含量,从而发挥其抗老年性痴呆的作用。     

针刺“四关”穴对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马区β淀粉样蛋白42、白介素-1β和白介素-2的影响

目的:观察针刺"四关"穴对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区白介素-1β(IL-1β)、白介素-2(IL-2)及β淀粉样蛋白(Aβ)42表达的影响,探讨针刺"四关"穴对AD的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组、针刺组,每组12只。采用侧脑室注射链脲佐菌素制备AD模型。针刺组取"四关"穴(双"合谷""太冲"),留针15min,间隔5min行针1次,平补平泻,频率为120~150次/min,捻转角度为90°~180°,治疗6d休息1d为一疗程,共4个疗程;西药组进行盐酸多奈哌齐混悬液(0.45mg/kg)灌胃治疗。应用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力的变化,采用免疫组织化学方法检测大鼠海马Aβ42的表达情况,采用双抗体夹心法检测IL-1β以及IL-2在大鼠海马中的含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠平均逃避潜伏期延长(P0.05),平均穿越平台次数减少(P0.05),海马区Aβ42的阳性细胞表达和IL-1β的含量增多(P0.05),IL-2含量下降(P0.05);与模型组比较,西药组、针刺组大鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P0.05),平均穿越平台次数明显增加(P0.05),海马区Aβ42阳性表达和IL-1β含量降低(P0.05),IL-2含量升高;与西药组比较,针刺组大鼠平均逃避潜伏期和穿越平台的次数差异无统计学意义(P0.05),而海马区Aβ42的阳性细胞表达和IL-1β含量降低(P0.05),IL-2含量升高(P0.05)。结论:针刺"四关"穴能一定程度上改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与降低海马中IL-1β含量、升高IL-2含量,以及改善Aβ沉积有关,且作用效果与西药盐酸多奈哌齐相当。