黄芪甲苷对高血压脑出血模型大鼠神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

【摘要】 目的 探讨LncRNA ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法 选取人胃癌细胞株,随机分为胃癌组（GC组）、ANCR siRNA组（siRNA组）、LncRNA ANCR组（ANCR组）3组,同时选取正常胃粘膜上皮细胞设为正常胃细胞组。GC组：单纯胃癌细胞株;siRNA组：将ANCR siRNA转染到胃癌细胞中;ANCR组：将LncRNA ANCR转染到胃癌细胞中。通过TUNEL法、Transwell、cck 8法、Westernblot法、RT PCR法分析3组胃癌细胞增殖情况,PI3K、AKT蛋白表达量,细胞凋亡情况,细胞侵袭能力,PI3K、AKT mRNA的表达量的差异性来探究LncRNA ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖迁移的作用机制。结果 GC组LncRNA ANCR蛋白含量最高,正常胃细胞组LncRNA ANCR蛋白含量最低(P＜0.05);ANCR组胃癌细胞侵袭能力强,显微镜下细胞数量多,siRNA组胃癌细胞显微镜下细胞数量少,侵袭能力弱（P＜0.05）,GC组与siRNA组相比较胃癌细胞数量明显增多,整体侵袭能力明显增强（P＜0.05）;GC组和siRNA组、ANCR组OD值相比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;ANCR组胃癌细胞的增殖情况明显高于GC组,而GC组明显高于siRNA组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。经TUNEL染色,siRNA组胃癌细胞凋亡数量最多,ANCR组胃癌细胞凋亡较少(P＜005),ANCR组和GC组与siRNA组相比较凋亡率明显下降(P＜0.05)。蛋白免疫印迹法分析显示,siRNA组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最低,ANCR组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最高,3组相比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 LncRNA ANCR能激活PI3K及AKT蛋白的表达,升高细胞的侵袭和增殖能力,促进胃癌细胞生长,加快病情的发展。     

非对称RNA干扰抑制CDCA5基因表达对结直肠癌细胞增殖的影响

【摘要】 目的 探讨非对称抑制CDCA5基因的表达对人结直肠癌细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 收集2016年～2017年南充市中心医院行根治性手术的20例结直肠癌患者的癌组织标本及匹配的癌旁正常组织, Western blot检测结直肠癌组织和癌旁正常组织中CDCA5蛋白的表达。同时,Western blot检测结直肠癌细胞系HT29、HCT116及SW480细胞中CDCA5蛋白的表达,选择表达水平最高的细胞系进行后续研究。设计针对CDCA5基因的siRNA,阴性对照siRNA NC及三条长短不同的非对称小干扰RNA,即aiRNA（15/21）、aiRNA（16/21）和aiRNA（17/21）。PCR检测各组对CDCA5基因的沉默效果。MTT检测siRNA、siRNA NC和aiRNA（15/21）组的细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞周期的变化。结果 CDCA5在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织（P＜005）。人结直肠癌细胞系HCT116中CDCA5蛋白的表达明显高于HT29和SW480细胞系（P＜005）。aiRNA（15/21）在各组中有最强的基因沉默效果（P＜005）。与siRNA和siRNA NC组相比,aiRNA（15/21）组细胞增殖能力低于其他两组,处于细胞周期G2/M期的细胞数量显著多于其他两组（均P＜005）。结论 CDCA5可能是治疗结直肠癌的一个重要靶点,基于CDCA5基因的特异性非对称aiRNA（15/21）干扰在沉默效率上优于传统siRNA。     

RNAi沉默FAK基因表达对人舌鳞癌细胞CAL-27凋亡和侵袭的影响

目的 应用RNA干扰技术将FAK基因表达沉默后,观察人舌鳞癌细胞株CAL-27凋亡和侵袭能力的变化.方法 使用RNAi技术构建3对FAK siRNA后,瞬时转染细胞.运用实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测FAK mRNA的表达情况,筛选出沉默效率最佳的siRNA用于后续实验.运用蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测细胞FAK蛋白的表达情况,流式细胞仪观察细胞的凋亡情况,Transwell侵袭实验观察细胞体外侵袭能力的变化.结果 qPCR实验结果显示转染siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组FAK mR-NA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01),其中以siRNA-3沉默效率最高;Western blot结果显示转染组细胞FAK蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示转染组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01);Transwell法实验结果显示转染组细胞穿膜的数量明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论 沉默FAK基因表达可诱导舌鳞癌细胞CAL-27的凋亡,有效抑制其侵袭能力.     

利多卡因调控miR 15a 5p对肝癌细胞生物学功能的影响及其机制

【摘要】目的 探讨利多卡因对肝癌细胞凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制。 方法 使用不同浓度利多卡因作用于肝癌细胞HepG2,正常培养的HepG2细胞为对照组。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法（Western blot）检测B细胞淋巴瘤/白血病 2（Bcl 2）、Bcl 2相关X蛋白（Bax）、E 钙黏蛋白（E cadherin）、基质金属蛋白酶 2（MMP 2）蛋白表〖JP2〗达,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,qPCR检测细胞中miR 15a 5p表达。在细胞中转染miR 15a 5p、anti miR 15a 5p〖JP〗及各自阴性对照的转染并使用01 mmol/L利多卡因处理细胞,观察其对HepG2细胞凋亡、迁移、侵袭的影响。 结果 与对照组相比,001、01和1 mmol/L利多卡因增加细胞凋亡率和Bax蛋白表达量（P＜005）,降低Bcl 2蛋白水平（P＜005）。01 mmol/L利多卡因明显降低迁移细胞数、侵袭细胞数和MMP 2蛋白表达量（P＜005）,升高E cadherin蛋白水平和miR 15a 5p表达量（P＜005）。过表达miR 15a 5p增加细胞凋亡率、Bax和E cadherin蛋白表达量（P＜005）,减少迁移细胞数、侵袭细胞数、Bcl 2和MMP 2蛋白表达量（P＜005）。 结论 利多卡因通过调控miR 15a 5p表达抑制肝癌细胞迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

SOX21在胃癌中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用

【摘要】 目的 探讨性别决定区Y-BOX21(SOX21)在胃癌（GC）中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用。 方法 收集2016年4月~2017年5月于东莞市人民医院行胃癌根治术患者的癌组织及对应的癌旁组织各44例,以胃癌细胞株AGS和人胃粘膜上皮细胞株GES-1为进一步研究对象,将培养后的细胞分为空白对照组、NC组和SOX21组,甲基化特异性PCR检测SOX21甲基化状态;qRT-PCR、免疫组化（IHC）和Western blot检测SOX21和Wnt/β-catenin通路相关基因表达;CCK-8试剂盒和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。 结果 与癌旁组织相比,GC组织SOX21甲基化率明显升高（P＜0.001）,SOX21 IHC评分、mRNA表达和蛋白表达均明显降低（P＜0.05）。SOX21在GES-1细胞中呈去甲基化状态,而在AGS中呈完全甲基化状态。与GES 1细胞相比,AGS细胞中SOX21 mRNA和蛋白表达均显著降低（P＜0.05）。与NC组相比,SOX21组中SOX21 mRNA表达、蛋白表达和细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数明显降低（P＜0.05）,β-catenin、c-myc、cyclinD1和MMP7蛋白表达明显降低（P＜0.05）。 结论 SOX21在胃癌组织中呈高 甲基化状态且表达降低,过表达SOX21可能通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。     

MicroRNA-129-2靶向调控SOX4抑制食管癌细胞增殖与侵袭转移的研究

目的探讨 MicroRNA-129-2（miR-129-2）在体内外抑制食管癌细胞增殖和侵袭转移的作用及可能机制,为食管癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路。方法将 miR-129-2 mimics 及 miR-129-2 mimics NC 基因序列分别转染到食管癌 NMC109细胞中,并设为 miR-129-2 mimics 高表达组和 miR-129-2 mimics 阴性对照组（miR-129-2 mimics NC 组）,将非转染的 NMC109细胞设为空白对照组。体外实验：运用 MTT 法检测3组细胞的增殖能力、Transwell 法检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测 SOX4蛋白表达。采用裸鼠体内移植瘤形成实验检测3组细胞在体内环境下的增殖能力。结果 miR-129-2 mimics 组的食管癌细胞增殖活性及侵袭能力较 miR-129-2 mimics NC 组及空白对照组明显减弱（P ＜0.001）,而空白对照组与 miR-129-2 mimics NC 组食管癌细胞增殖性及侵袭性无明显差异（P ＞0.05）;miR-129-2 mimics 组的食管癌细胞中,SOX4的表达下调（P ＜0.001）;miR-129-2 mimics 组裸鼠移植瘤体积及重量明显减小（P ＜0.001）,而 miR-129-2mimics NC 组及空白对照组无明显差异（P ＞0.05）。结论 miR-129-2具有抑制食管癌细胞 NMC109增殖和侵袭转移的作用,其作用机制可能与靶向下调 SOX4基因表达有关。     

右美托咪定调控miR 126对高糖诱导的心肌细胞氧化应激及凋亡的影响

【摘要】目的 探讨右美托咪定（DEX）对高糖诱导的心肌细胞氧化应激及凋亡的影响及作用机制。方法 体外培养心肌细胞H9C2,分别用葡萄糖浓度为55、35 mmol/L的DMEM培养基培养,分别作为对照组和高糖损伤模型组。分别使用不同浓度（5、10、20 μg/L）DEX处理心肌细胞记为实验1组、实验2组、实验3组。检测各组乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT PCR）检测微小RNA 126（miR 126）的表达量。分别将miR NC、miR 126 mimicis转染至心肌细胞,使用含有葡萄糖浓度为35 mmol/L的DMEM培养基培养24 h,分别记为miR NC组、miR 126组。分别将miR NC、miR 126 mimcis、anti miR NC、anti miR 126转染至心肌细胞,采用含有葡萄糖浓度为35 mmol/L与DEX浓度为20 μg/L的 DMEM培养基培养,分别记为实验3+miR NC组、实验3+miR 126组、实验3+anti miR NC组、实验3+anti miR 126组。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3的前体蛋白（pro caspase 3）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cl caspase 3）水平。结果 与对照组比较,高糖损伤模型组LDH、MDA含量显著升高（P＜005）,SOD含量显著降低（P＜005）,miR 126的表达水平显著降低（P＜005）,细胞凋亡率显著升高（P＜005）,cl caspase 3蛋白水平显著升高（P＜005）,pro caspase 3蛋白水平显著降低（P＜005）。与高糖损伤模型组比较,实验1组、实验2组、实验3组LDH、MDA含量显著降低（P＜005）,SOD含量显著升高（P＜005）,miR 126的表达水平升高（P＜005）,细胞凋亡率显著降低（P＜005）,cl caspase 3蛋白水平显著降低（P＜005）,pro caspase 3蛋白水平显著升高（P＜005）,实验1组、实验2组、实验3组间各指标比较差异有统计学意义（P＜005）。与miR NC组比较,miR 126组LDH、MDA含量显著降低（P＜005）,SOD含量显著升高（P＜005）,细胞凋亡率显著降低（P＜005）,cl caspase 3蛋白水平显著降低（P＜005）,pro caspase 3蛋白水平显著升高（P＜005）。miR 126过表达能增强DEX对高糖诱导心肌细胞氧化应激及凋亡,抑制miR 126表达能逆减弱DEX对高糖诱导心肌细胞氧化应激及凋亡。结论 DEX可通过上调miR 126的表达从而抑制高糖诱导的心肌细胞氧化应激及细胞凋亡。      

UCH37在鼻咽鳞状细胞癌中的表达及其与细胞增殖及侵袭的关系

【摘要】 目的 探讨泛素羧基水解酶37（UCH37）在鼻咽鳞状细胞癌组织及细胞中的表达,分析沉默UCH37对鼻咽鳞状细胞癌5-8F细胞恶性表型的影响及其机制。 方法 将转染UCH37NC的细胞设为UCH37NC组,转染UCH37siRNA的细胞设为UCH37siRNA组。采用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）及免疫组织化学染色（IHC）检测正常鼻咽上皮（NPE）和鼻咽鳞状细胞癌（NPC）组织及细胞中UCH37mRNA及蛋白的表达;应用小干扰RNA（siRNA）沉默5-8F细胞中UCH37的表达;应用5 乙炔基 2′ 脱氧尿苷（5 Ethynyl 2′ deoxyuridine,EdU）检测沉默UCH37对5 8F细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测沉默UCH37对5-8F细胞凋亡的影响;应用细Transwell实验检测沉默UCH37对5-8F细胞迁移及侵袭能力的影响;应用免疫印迹（WB）和qRT PCR检测UCH37度基质金属蛋白酶 2（MMP-2）表达的影响。 结果 UCH37在鼻咽鳞状细胞癌组织及细胞中表达水平高于正常鼻咽上皮组织及细胞（P＜0.05）。UCH37表达与鼻咽鳞状细胞癌世界卫生组织（WHO）分型及TNM分期呈正相关（P＜0.05）。应用siRNA沉默5-8F细胞中UCH37 表达后,细胞增殖、迁移、侵袭及MMP-2表达均降低、细胞凋亡水平增加（P＜0.05）。 结论 UCH37在鼻咽鳞状细胞癌组织和细胞中表达显著升高,是鼻咽鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的潜在驱动因子。     

慢病毒介导的siRNA沉默hTERT基因对宫颈癌Caski细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨利用慢病毒介导小干扰核糖核酸（ siRNA）沉默人体端粒酶反转录酶（ hTERT）的可行性及其对宫颈癌Caski细胞增殖和凋亡的影响。方法用前期构建的慢病毒表达载体anti-hTERT-LV 和 NC-LV转染宫颈癌 Caski细胞。实验共分3组,分别为空白对照组（ NC组）、阴性对照组（ NC-LV组）及干扰组（ anti-hTERT-LV组）。采用实时荧光定量PCR检测hTERT mRNA表达量,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果 anti-hTERT-LV组hTERT mRNA相对表达量为（0．28±0．02）明显低于NC组（1．0）及NC-LV组（0．87±0．05）（ P均＜0．05）。 anti-hTERT-LV组G1期细胞比例（71．52±0．79）％明显高于NC组（54．69±2．84）％和NC-LV组（55．70±1．31）％（P均＜0．05）;anti-hTERT-LV组S期细胞比例（18．69±1．95）％明显低于NC组（36．06±1．56）％和NC-LV组（34．16±1．09）％（P均＜0．05）。 anti-hTERT-LV组细胞凋亡率（36．45±5．39）％明显高于NC-LV组（8．75±3．75）％和NC组（9．55±2．57）％（P均＜0．05）。结论慢病毒介导siRNA可以沉默hTERT基因,高效特异地抑制宫颈癌Caski细胞hTERT基因的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的生长和增殖。     

SOX15基因对Caco2结肠癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响

目的 检测SOX15在结肠癌细胞株中表达水平以及对细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的影响.方法 应用RT-PCR检测SOX15在Cac02、SW480、HT29、HCT116结肠癌细胞以及正常结肠组织中的表达水平.通过脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒pEGFP-N1-SOX15及空质粒pEGFP-N1转染进Caco2细胞,应用RT-PCR及Western blot分别检测SOX15在Caco2细胞中的mRNA以及蛋白表达水平;CCK-8检测SOX15对Caco2细胞活力的影响,克隆形成实验观察细胞增殖变化,Transwell检测SOX15对细胞迁移及侵袭能力的调控,流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 SOX15在Caco2、SW480、HT29、HCT116结肠癌细胞中mRNA及蛋白质表达明显低于其在正常组织中的表达水平(P ＜0.01).pEGFP-N1-SOX15转染组细胞mRNA(1.23 ±0.10)和蛋白(1.13±0.08)表达显著高于pEGFP-N1对照组[(0.54±0.06)、(0.19±0.03),P＜0.01]及空白对照组[(0.51±0.03)、(0.14±0.02),P＜0.01];与空白对照组及pEGFP-N1对照组相比,pEGFP-N1-SOX15转染组可明显抑制细胞增殖及迁移侵袭能力(P＜0.01),并诱导细胞发生凋亡(P＜0.01).结论 SOX15在结肠癌细胞中低表达,过表达SOX15可明显抑制结肠癌细胞Caco2的增殖及迁移、侵袭能力,并促进细胞凋亡.     

siRNA沉默livin基因对食管癌细胞生长与凋亡的影响

目的观察小分子干扰RNA（siRNA）沉默livin基因在食管癌细胞中的表达情况,探讨livin基因对食管癌细胞生长、凋亡的影响。方法自行设计两条针对livin基因的siRNA：livin—sh-1,livin—sh-2,构建相应的表达载体分别转染至对数生长期的食管癌,经G418筛选后采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、MTT、TUNEL分别比较检测转染前后食管癌细胞livin基因的表达。结果siRNA对照组与空siRNA载体组的livinw／β mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）;但转染siRNA组Livinl／2mRNA表达显著降低,明显低于siRNA对照组和空siRNA载体组（P〈0．05）。细胞生长曲线测定经F检验三组间差异无统计学意义。转染siRNA载体沉默livina／β表达,细胞凋亡率显著增加。结论siRNA沉默livin基因能抑制食管癌细胞的生长,促进食管癌细胞的凋亡,livin基因有可能成为食管癌治疗的新靶点。     

Akt2-Bad信号通路参与NSCLC凋亡

【摘要】目的 探讨Akt2/Bad信号通路在非小细胞肺癌（NSCLC）凋亡中的作用机制。方法 构建稳定过表达Bad同时稳定干扰Akt2的双病毒载体,将未感染慢病毒载体的H1299、H292、SPC A1、H460及SK MES 1细胞为NSCLC组,阴性对照病毒转染NSCLC细胞为NC组;稳定干扰Akt2的NSCLC细胞为shAkt2组;稳定过表达Bad的NSCLC细胞为Bad组;稳定干扰Akt2表达的同时稳定过表达Bad基因的NSCLC细胞为shAkt2+Bad组。通过体外实验,观察共感染组细胞凋亡及侵袭能力的变化。应用Western blot技术检测各组NSCLC细胞株Bad、Akt2以及凋亡相关信号蛋白BCL 2、BCL XL、caspase 9、Cyto c蛋白的表达水平。体内构建H1299及SPC A1荷瘤裸鼠模型,观测瘤体重量,利用TUNEL染色比较Akt2/Bad信号通路对肺癌细胞凋亡的作用。 结果 与NSCLC组比较,shAkt2+Bad组细胞和移植瘤体中Akt2蛋白水平明显减少(P＜005),Bad蛋白水平显著增加(P＜005)。shAkt2+Bad组细胞凋亡率明显高于shAkt2组及Bad组(P＜005), H1299/SPC A1体内荷瘤实验表明, shAkt2+Bad组瘤体重量明显低于Bad组、NSCLC组及NC组(均P＜005),细胞凋亡率均高于其他3组(均P＜005)。shAkt2和shAkt2+Bad组caspase 9表达显著降低;Bad组、shAkt2组和shAkt2+Bad组cyto C表达显著增加,而BCL 2、BCL XL在各组细胞中表达比较差异无统计学意义（P＞005）。结论 Akt2 Bad信号通路参与NSCLC的凋亡。     

SPARCL1基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白类似物1(secreted protein acidic and rich in cysteines like 1,SPARCL1)基因对肝癌SMMC 7721细胞增殖与凋亡的影响。方法: 将肝癌SMMC 7721细胞随机分为5组,即空白对照组,pIRES2 ZsGreen组,pIRES2 ZsGreen SPARCL1组,阴性 siRNA组和SPARCL1 siRNA组,空白对照组不转染,其余4组分别转染pIRES2 ZsGreen空质粒、pIRES2 ZsGreen SPARCL1、阴性 siRNA及SPARCL1 siRNA;蛋白质印迹法检测SPARCL1蛋白表达,同时联合荧光显微镜检测转染效果;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。 结果： 蛋白质印迹和荧光镜结果同时证实转染效果良好。MTT结果显示5组细胞抑制率差异有统计学意义(F=55.45,P＜0.01),pIRES2 ZsGreen SPARCL1组增殖抑制率明显高于其余4组(P＜0.05);SPARCL1 siRNA组细胞增殖抑制率低于其余4组(P＜0.05)。流式细胞结果显示pIRES2 ZsGreen SPARCL1组凋亡率明显高于其余4组 (P<0.05);SPARCL1 siRNA组凋亡率明显低于其余4组(P＜0.05)。结论： 过表达SPARCL1抑制肝癌细胞SMMC 7721生长和促进凋亡,沉默SPARCL1则反之。     

SiRNA靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅对胶质瘤细胞U87增殖的影响

目的：探讨小分子干扰RNA（siRNA）靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅（FAP-α）表达对神经胶质瘤细胞株U87增殖的影响。方法：实验分为空白对照组（Blank组）、阴性对照组（NC组）和siRNA组,通过脂质体将siRNA转染至胶质瘤细胞株U87,使用Westernblot法检测FAP-α基因的蛋白水平,同时检测NC组和siRNA组Bcl-2、caspase-3的表达变化,使用Real-timePCR法检测FAP-α和增殖核抗原（PCNA）的mRNA水平,CCK-8法评价转染后NC组和siRNA组细胞的增殖能力。结果：①转染48h后,siRNA组细胞FAP-α mRNA、蛋白的表达明显低于NC组和Blank组,差异有统计学意义（P〈0．01）,siRNA组较Nc组caspase-3蛋白表达增加（P〈0．05）;Bcl-2蛋白表达明显降低（P〈0．01）,siRNA组较NC组PCNAmRNA表达明显下降（P〈0．01）。②转染后48、72和96hsiRNA组U87细胞吸光度值低于NC组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：应用siRNA沉默FAP-α基因的表达,可以抑制胶质瘤细胞U87的增殖,诱导胶质瘤细胞的凋亡。     

舒芬太尼调控LINC00668对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响

【摘要】 目的 研究舒芬太尼调控LINC00668对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。 方法 分别给予终浓度为25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的舒芬太尼处理A2780细胞,记为实验1、2、3组,正常培养的细胞作为对照组;将si NC、si LINC00668分别转染至A2780细胞中,记为si NC组、si LINC00668组;将pcDNA3.1、pcDNA31 LINC00668转染至A2780细胞中,同时用100 ng/mL的舒芬太尼处理,记为实验3组+pcDNA3.1组、实验3组+pcDNA31 LINC00668组。流式细胞仪检测细胞周期;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞存活率;蛋白质印迹（Western blot）法检测Ki67、pro caspase 3、clv caspase 3蛋白表达;实时荧光定量PCR（RT qPCR）检测LINC00668表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡。 结果 50 ng/mL、100 ng/mL舒芬太尼处理的A2780细胞中G0期细胞所占比例显著升高,S期细胞所占比例显著降低（P＜005）,G1期细胞所占比例无显著变化（P＞005）;细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ki67、pro caspase 3表达水平显著降低,clv caspase 3表达水平显著升高,LINC00668表达水平显著降低（P＜005）。抑制LINC00668表达,G0期细胞所占比例显著升高,S期细胞所占比例显著降低（P＜005）,G2期细胞所占比例无显著变化（P＞005）;细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ki67、pro caspase 3表达水平显著降低,clv caspase 3表达水平显著升高（P＜005）。过表达LINC00668逆转了舒芬太尼对A2780增殖、凋亡的影响。 结论 舒芬太尼可能通过下调LINC00668的表达抑制卵巢癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响。方法培养人骨肉瘤Saos-2细胞,将细胞随机分为siRNA-PIK3CA组、siRNA对照组和空白对照组,siRNA-PIK3CA组细胞转染siRNA-PIK3CA序列,siRNA对照组细胞转染siRNA对照序列,空白对照组细胞正常培养,不作任何干预。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中PIK3CA mRNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中PIK3CA、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化-PI3K (p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化-Akt(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)和磷酸化-m TOR(p-mTOR)蛋白表达。结果 siRNA-PIK3CA组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组细胞转染后24、48、72、96 h增殖能力均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组细胞凋亡率高于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组迁移细胞数和侵袭细胞数均少于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNAPIK3CA组细胞中PI3K、Akt、m TOR蛋白相对表达量均高于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05),而p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05)。siRNA对照组与空白对照组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量、细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数及PI3K、Akt、m TORp-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论下调PIK3CA基因可减少人骨肉瘤细胞增殖,抑制细胞迁移及侵袭能力,增加细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路有关。     

Effects of UbcH10 gene silencing combined with paclitaxel treatment on proliferation and apoptosis of NCI-H226 cells

目的 观察小干扰RNA(siRNA)介导的UbcH10基因沉默联合紫杉醇处理对人肺鳞癌细胞株NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响.方法 化学合成针对UbcH10基因的siRNA-UbcH10序列,脂质体转染siRNA至NCI-H226细胞(siRNA转染组),转染后24 h,采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测UbcH10 mRNA和蛋白的表达水平,以未予任何转染细胞作为空白对照,以阴性序列转染细胞作为阴性对照.以紫杉醇(1μmol/L)处理siRNA转染及未转染NCI-H226细胞(siRNA+紫杉醇组和紫杉醇组),分别于转染后24、48 h收集细胞,MTT比色法检测细胞增殖;转染后24 h收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡;以未经紫杉醇处理的siRNA转染、阴性序列转染和未予转染的NCI-H226细胞作为siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组.结果 Real-Time PCR和Western blotting检测结果显示:转染后24 h,siRNA转染组UbcH10 mRNA和蛋白的表达较空白对照组和阴性对照组显著下调(P＜0.01).MTT比色法检测结果显示,siRNA转染组细胞增殖抑制率显著高于紫杉醇组和对照组(P＜0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞增殖抑制率显著高于siRNA转染组(P＜0.05).siRNA转染组细胞凋亡率显著高于紫杉醇组和对照组(P＜0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞凋亡率显著高于siRNA转染组(P＜0.05),紫杉醇组与对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 UbcH10基因沉默可显著增强NCI-H226细胞对于化疗药物紫杉醇的敏感性.     

LncRNA UCA1通过调节miR-206/PTP1B轴影响宫颈癌细胞增殖迁移及侵袭

【摘要】 目的 探讨LncRNA UCA1通过miR-206 / PTP1B轴对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 将细胞培养后随机分为对照组、si-NC组（转染si-NC）、si-UCA1组（转染si-UCA1）、si-PTP1B组（转染si-PTP1B）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-206组（转染miR-206）、anti-miR-206组（转染anti-miR-206）、miR-NC+si-NC组（转染miR-NC 和si-NC）、miR-206+si-NC组（转染miR-206和si-NC）、anti-miR-206+si-NC组（转染anti-miR-206和si-NC）、anti-miR-206+si-UCA1组（转染anti-miR-206和si-UCA1）、miR-NC+si-PTP1B组（转染miR-NC和si-PTP1B）、anti-miR-206+si-PTP1B组（转染anti-miR-206和si-PTP1B）。qRT-PCR检测宫颈癌细胞UCA1和miR-206的表达;Western blot检测宫颈癌细胞PTP1B的表达;荧光素酶报告基因实验验证UCA1与miR-206、miR-206与PTP1B的靶向关系;CCK-8检测宫颈癌细胞活力;流式细胞术检测宫颈癌细胞凋亡;Transwell实验检测宫颈癌细胞迁移和侵袭能力。 结果 与人正常宫颈上皮细胞相比,宫颈癌细胞中UCA1表达显著升高（P＜0.01）,miR-206表达显著降低（P＜0.05）。与si-NC组相比,si-UCA1组细胞UCA1表达、细胞活力、迁移和侵袭能力均显著降低（P＜0.01）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）。UCA1和miR-206间存在相互调控作用;与miR-NC+si-NC组相比,miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）,anti-miR-206+si-NC组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-UCA1组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.01）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）。miR-206靶向调控PTP1B;与miR-NC+si-NC组相比,anti-miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜005）,miR-NC+si-PTP1B组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-PTP1B组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。 结论 LncRNA UCA1通过调节miR-206 / PTP1B轴促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

RNA干扰HO-1表达对肺腺癌A549细胞生物学行为的影响研究

目的应用RNA干扰技术特异性抑制血红蛋白加氧酶-1（HO-1）的表达,观察HO-1对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法将体外构建的HO-1小分子RNA（siRNA）转染入肺腺癌A549细胞,分为空白对照组（blank组）、脂质体组（mock组）、阴性对照组（NC组）、HO-1siRNA组;应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测HO-1mRNA和蛋白表达水平;分别以CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖能力和凋亡率,用Transwell试验检测细胞迁移能力。结果细胞培养48、72h后,与blank组、mock组、NC组比较,HO-1siRNA组细胞存活率均降低（均P＜0.05）,细胞凋亡率均增高（均P＜0.05）,G0期/G1期细胞比例均增高（均P＜0.05）,Transwell试验中穿膜细胞数均减少（均P＜0.05）。结论RNA干扰HO-1基因表达后能有效调控肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为,抑制肺腺癌A549细胞的增殖,促进凋亡,降低细胞的侵袭能力。     

丙泊酚激活线粒体凋亡通路诱导乳头状甲状腺癌TPC 1细胞凋亡和生长阻滞

【摘要】目的 探讨丙泊酚（PPF）通过线粒体凋亡通路对乳头状甲状腺癌TPC 1细胞凋亡和生长的影响。方法 分别采用0、12.5、25、50 μM丙泊酚处理TPC 1细胞,将细胞随机分为PPF 0 μM组、PPF 12.5 μM组、PPF 25 μM组和PPF 50 μM组进行后续实验。BrdU染色检测细胞增殖;克隆形成法检测细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡;流式分选检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹检测Ki67、PCNA、Bcl 2、Bax、Caspase 3、Caspase 9、c Myc蛋白表达水平;试剂盒检测SOD、MDA、GSH含量。结果 与PPF 0μM组相比较,PPF 25 μM组和PDF 50 μM组BrdU阳性细胞数显著降低（P＜005）,克隆形成率显著降低（P＜005）,Ki67、PCNA蛋白水平显著降低（P＜005）,细胞凋亡率显著升高（P＜005）,细胞线粒体膜电位明显降低,Bax/Bcl 2、cleaved caspase 3/Caspase 3、cleaved caspase 9/Caspase 9比值显著升高（P＜005）,c Myc蛋白水平显著降低（P＜005）,SOD含量显著降低（P＜005）,MDA、GSH含量显著升高（P＜005）。结论 丙泊酚激活线粒体凋亡通路诱导乳头状甲状腺癌TPC 1细胞凋亡和生长阻滞。