肝组织病理检查对隐匿性慢性乙型肝病的诊断价值

目的 探讨肝组织病理检查对隐匿性慢性乙型肝病的诊断价值.方法 对98例血清HBsAg阴性、肝功能不明原因反复异常患者采用免疫组化Envision法和肝组织HBV DNA的原位杂交法检测肝组织中HBsAg、HBcAg水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测血清HBV DNA水平,并在光学显微镜下观察肝组织病理改变的情况.结果 肝组织病理检查示:98例患者中,隐匿性慢性乙型肝炎73例,隐匿性乙型肝炎后肝硬化20例,早期肝细胞癌5例;98例患者肝组织HBV DNA原位杂交法检测阳性率为74.49%(73/98),明显高于血清HBV DNA检测的阳性率7.14%(7/98)(P＜0.01)和免疫组化Envision法检测HBsAg、HBcAg的阳性率50.02%(50/98)、30.73%(36/98)(P＜0.05).结论 肝组织病理检查对隐匿性慢性乙型肝病有重要的诊断价值.     

DHBV肝内原位复制与致病性的关系研究

目的　建立DHBsAg免疫细胞化学检测方法 ,研究DHBV肝内原位复制与致病性的关系。方法　采集不同感染状态肝组织标本共 2 2份 ,分别进行DHBsAg免疫组化、Southernblot及组织病理学观察。结果　DHBsAg主要表达于肝细胞胞浆内 ,多呈弥漫性分布 ,无明显胞浆内包涵体形成。急性感染组病毒复制高峰期阳性细胞仅为 2 4 %～ 5 8% ,慢性感染组可 >95 % ;Southern杂交检测急性感染组DHBVDNA为 8.0 5± 2 .72 ,慢性感染组为 18.88± 3.86 (P <0 .0 5 )。不同感染组肝细胞变性坏死、炎症细胞浸润均不明显 ,血清ALT、AST无显著变化。结论　DHBsAg免疫细胞化学方法的建立在细胞水平实现了对病毒表达抗原的定位观察。此外 ,嗜肝病毒的复制不是引起肝细胞损伤的直接原因。     

血清CA125,CA19-9联合检测在慢性乙型肝炎肝硬化早期诊断中的意义

目的检测慢性乙型肝炎患者血清CA125,CA19-9表达水平,探讨对早期肝硬化的诊断意义.方法慢性乙型肝炎患者94例,肝活检病理诊断显示53例合并早期肝硬化,41例无肝硬化改变.健康体检者30例作为对照组.采用微粒子酶免分析法(MEIA)分别检测受试者血清CA125,CA19-9水平.结果慢性乙肝患者血清CA125与CA19-9水平显著高于正常对照组,其中伴有肝硬化病理改变组显著高于无肝硬化病理改变组.伴有肝硬化病理改变的慢性乙肝患者血清CA125与CA19-9阳性率分别为49.1%,35.6%,显著高于无肝硬化病理改变组及正常对照组.伴有肝硬化病变组血清CA125与CA19-9水平有任一项增高阳性率为67.7%,显著高于单纯血清CA125和CA19-9的阳性率.结论血清CA125,A19-9检测有助于慢性乙肝患者早期肝硬化发现,血清CA125,A19-9联合检测较单纯CA125和CA19-9检测更为敏感.     

婴儿肝炎综合征肝脏巨细胞病毒低基质磷酸化蛋白的检测意义

目的：观察人巨细胞病毒（HCMV）低基质磷酸化蛋白（pp65）在婴儿肝炎综合征肝脏组织中的表达,为诊断婴儿巨细胞病毒性肝炎提供科学依据.方法：选择30例婴儿肝炎综合征患儿,在B超介导下进行肝组织活检,免疫组化法检测肝组织中HCMV pp65抗原,观察婴儿巨细胞病毒性肝炎特异性病理改变,同时用ELISA方法检测血清HCMV IgM水平,计算并比较两指标的阳性率.结果：30例婴儿肝炎综合征患儿肝组织HCMVpp65抗原阳性18例,血清IgM阳性6例,阳性率分别为60％、20％.两者阳性率比较差异有显著性（P＜0.01）.结论：通过免疫组织化学检测婴儿肝组织中HCMV pp65抗原表达,可用于诊断婴儿巨细胞病毒性肝炎.     

慢性丙型肝炎患者血清中HCV核心抗原的定性检测

目的:应用酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)定性检测血清中丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)核心抗原,分析和评价HCV核心抗原检测的临床价值。方法:应用ELISA方法定性检测慢性丙型肝炎患者149份血清中的HCV核心抗原,以健康人血清20份,慢性乙型肝炎患者血清20份作为对照,以证明方法的特异性;并同时应用RT-PCR和ELISA方法分别检测血清中的HCVRNA和抗HCV。结果:健康人血清和慢性乙型肝炎患者血清HCV核心抗原定性检测均呈阴性反应,检测值(OD值)分别为0.022±0.017,0.001±0.012;149份慢性丙型肝炎患者血清HCV核心抗原阳性者74例,阳性率49.66%,阳性检测值(OD值)为0.534±0.457,与阴性检测值比较其差异有统计学意义。HCVRNA和HCV核心抗原检测有54.36%的符合率,两种检测方法之间检测的差异性无统计学意义(P>0.05)。149份抗HCV阳性血清中HCVRNA阳性率为55.03%(82/149),HCV核心抗原阳性率为49.66%(74/149),两者比较无统计学意义(P>0.05)。结论:HCV核心抗原定性检测特异性强,慢性丙型肝炎患者血清中阳性率为49.66%,与HCVRNA有一定的相关性,可能也是反映HCV病毒血症的血清学标志。与HCVRNA同时检测,可提高对慢性丙型肝炎患者的病毒血症和病毒复制诊断率,但其检测的灵敏性还有待进一步提高。     

AKR1B10蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨醛糖还原酶（AKR1B10蛋白）在肝癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化技术检测89例肝细胞癌组织及26例肝良性病变组织的AKR1B10蛋白表达,并检测89例肝癌患者的术前AFP、AFU水平．分析AKR1B10蛋白在肝细胞癌组织中的表达及与患者术前血清AFP、AFU水平的关系。结果AKR1B10蛋白在肝细胞癌组织中的阳性表达率显著高于肝良性病变组织中的阳性表达率（P〈0．05）。在肝细胞癌组织中．AKR1B10蛋白阳性表达率为843％,显著高于患者术前血清AFP的阳性率（68．5％）和血清AFU的阳性率（70．8％）。结论AKR1B10蛋白在肝细胞癌组织中的表达率显著高于肝良性病变组织,在肝细胞癌组织中的阳性率显著高于患者术前血清AFP、AFU的阳性率,为肝细胞癌的早期诊断提供了一个好的指标。     

慢性乙型肝炎的临床、血清HBV-DNA与病理分度的关系

目的探讨慢性乙型肝炎临床与病理分度的关系及血清HBV-DNA对病理分度的影响.方法对行肝穿的慢性乙肝228例患者的HBV-DNA及HBV-M进行检测分析.结果HBV-DNA定量与大三阳符合率达91.49%,有较好特异性;临床诊断慢乙肝(中度)HBV-DNA阳性率最高达76.06%,与肝硬化阳性率有显著性差异(P＜0.01);而HBV-DNA定量与肝组织炎症活动度(G)及纤维化程度(S)无相关性.结论判断肝炎病毒活动、复制,应结合HBV-DNA定量及肝穿病理活检.     

132例慢性HBV携带者肝组织病理分析

目的分析慢性HBV携带者肝组织病理变化,为慢性HBV携带者的诊治提供依据。方法对132例慢性HBV携带者进行肝组织病理检查和免疫组织化学检测,并检测肝功能、血清乙肝二对半定性（HBVM）和HBV DNA。结果（1）132例慢性HBV携带者中肝组织有明显病理改变者占90.2%（119/132）,其中G1占48.5%（64/132）,G2占34.8%（46/132）,G3占6.1%（8/132）,G4占0.8%（1/132）,S0占15.2%（20/132）,S1占56.1%（74/132）,S2占19.7%（26/132）,S3占9.1%（12/132）。（2）免疫组化肝组织均有HBsAg表达。HBcAg检出率达74.3%。肝组织中HbsAg和HBcAg表达强度与肝组织病变程度无显著性差异（P〈0.05）。结论慢性HBV携带者90.2%有一定的肝组织病理改变,肝组织病变程度与HbsAg和HBcAg表达强度无相关性。判断慢性HBV携带者肝组织病变程度和是否抗病毒治疗的主要依据仍为肝穿刺活检。肝穿刺活检操作简便安全,无明显不良反应。     

肝癌相关抗原MRP-L28血清学特异性研究及其临床意义

目的 检测肝癌相关抗原MRP-L28的肝癌血清学特异性.方法 应用SEREX技术检测MRP-L28在肝癌、胃癌、肺癌、直肠癌、肝炎、肝硬化病人及正常人血清中的抗体阳性率.结果 相应抗体主要见于HCC患者血清,肝癌病人血清阳性反应率为48.4%;肝炎、肝硬化病人血清阳性反应率均为6.5%;肺癌、直肠癌、胃癌的病人血清阳性反应率分别是6.5%、9.7%和3.2%;正常人血清阳性反应率为3.1%.经比较,MRP-L28抗体在肝癌血清中的阳性率最高(P<0.05);其余各组之间MRP-L28抗体阳性率无统计学意义.同时,本文还比较了MRP-L28抗体阳性率与AFP阳性率及含量、病理分级、年龄和γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的关系,结果显示无统计学意义.使用MRPL-28诊断肝癌的灵敏度、特异性和准确度分别为48.4%、94.1%和87.6%.结论 MKP-L28在HCC检测中有一定的特异性,在肝癌血清学诊断方面具有一定的临床意义,可以考虑作为新的HCC血清学诊断标记物.     

阿的福韦在鸭乙型肝炎模型及2.2.15细胞中抗乙型肝炎病毒的药效研究

目的:观察阿的福韦体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用及体外抗乙型肝炎病毒(HBV)效果.方法:采用鸭乙型肝炎动物模型,用阿的福韦口服治疗10天,检测用药前后血清中的DHBV DNA、DHBsAg,并取肝脏样本提取总DNA,作Southern Blot分析.此外,以2.2.15细胞为靶细胞,给药后通过检测细胞培养液中HBsAg、HBeAg和HBV DNA观察阿的福韦抗HBV效果.结果:阿的福韦各剂量组用药后均能使血清中的DHBVDNA显著降低或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),但停药后有DHBV DNA回升现象;用药前后DHBsAg无明显改变.肝组织Southern Blot分析亦显示用药后肝脏中DHBV DNA有明显降低,停药后DHBV DNA反跳明显.大剂量阿的福韦加入细胞培养12天,对HBsAg抑制率为17.01%,对HBeAg抑制率为26.80%,对HBV DNA抑制率为26.92%.结论:阿的福韦在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用,但停药后DHBVDNA有"反跳"现象;体外实验无明显抗HBV病毒作用.     

用PCR法筛选先天感染鸭乙肝模型及与后天感染模型的比较

[目的]采用聚合酶链反应法（PCR法）检测1日龄雏鸭血清中的局肝病毒DNA,以确立先天感染鸭乙肝模型,并探讨这种方法及其所建模型的优越性。[方法]1日龄雏鸭取血后,用PCR法检测其血清中的乙肝病毒DNA,并与Dot-blot法检测比较其相对敏感性与特异性。PCR检测为阴性的雏鸭,一胫静脉接种阳性血清,制成后天感染模型,将模型进行比较,探讨先天感染模型的优越性。[结果]PCR检测的敏感性较Dot-blot法高,京有较高的特异性。先天感染鸭乙肝模型较后天感染模型血清病毒滴度高,带毒时间长,其肝脏病理改变也较符合慢性乙型肝炎的特点。[结论]PCR检测筛选出的先天感染鸭乙肝模型更适合于慢性肝炎的药理和药效学研究。     

茅莓提取物体内抗乙型肝炎病毒的实验研究

目的：观察茅莓提取物（乙酸乙酯部位）体内抗乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）的作用。方法：采用聚合酶链反应（polymerasechain—reaction,PCR）法筛选3日龄鸭乙型肝炎病毒（duck hepatitisBvirus,DHBV）阳性麻鸭50只,将麻鸭随机分为盐水对照组、茅莓提取物高、中、低剂量组和拉米夫定组,于用药前、用药第7、14、21天及停药后第3、7天,取各组麻鸭静脉血,作鸭血清DNA斑点杂交,计算鸭血清DHBV—DNA密度,最后一次取血后取肝脏组织进行病理组织学观察。结果：体内实验显示,盐水对照组动物血清DHBV—DNA水平与用药前比较未见变化（P〉0．05）,拉米夫定组血清DHBV—DNA于用药第14天和第21天与用药前比较明显减低（P〈0．01）,与盐水对照组用药第7天、第14天和第21天血清DHBV-DNA比较明显降低（P〈0．05和0．01）。与盐水对照组比较,茅莓提取物各剂量组21d疗程各时点血清DHBV—DNA未见变化（P〉0．05）。肝脏病理检查示各组差异无显著性。结论：茅莓提取物抗HBV作用主要是通过其原形发挥作用,该原形在麻鸭体内经过代谢后,失去抗HBV的作用。     

外周血中鸭肝炎病毒动态与肝病理变化关系的研究

从山东地区产的成年鸭中分离出鸭乙肝病毒,人工感染当地1日龄雏麻鸭。用斑点酶法、斑点杂交法及用电子显微镜观察外周血中被感染鸭乙肝病毒不同时期的动态,并对不同感染阶段的肝组织病理变化进行了分析。结果表明,感染3周时鸭体内病毒复制较为活跃,此时肝组织病理损害也较严重。本实验为研究人类乙肝病毒的早期感染尤其是母婴传播过程外周血中乙肝病毒的动态与肝组织病理变化的关系提供了动物模型,为防治乙肝病毒早期感染提供了实验基础。     

α-2b干扰素对乙型肝炎模型鸭肝组织炎症和肝纤维化的治疗作用

目的：通过鸭乙型肝炎病毒（DHBV）阳性血清注射建立鸭乙型肝炎模型,探讨α-2b干扰素治疗DHBV所致鸭肝炎症及肝纤维化的作用,为干扰素的临床应用提供依据。方法：10日龄北京麻鸭40只随机分为对照组（6只）和感染组（34只）,感染组使用DHBV阳性血清1周内3次注射的方法,制备鸭乙型肝炎模型。2周后,采用斑点杂交法检测DHBV-DNA水平确认感染鸭共32只,随机将感染动物分为模型对照组（10只）、低剂量及高剂量α-2b干扰素组（各11只）,α-2b干扰素组鸭分别肌肉注射低剂量（1×10⁵ U·100 g^-1）和高剂量（5×10⁵ U·100 g^-1）α-2b干扰素治疗。30 d治疗结束后,采用斑点杂交法检测各组鸭血清DHBV-DNA水平,检测天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酸氨基转移酶（ALT）和肝纤维化指标层黏蛋白（LN）及Ⅲ型前胶原肽（PCⅢ）水平,取肝组织检测白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素12（IL-12）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,观察组织病理形态表现。结果：与造模前比较,造模后鸭血清DHBV-DNA水平明显升高,表明造模成功。α-2b干扰素治疗结束后,与模型组比较,低和高剂量α-2b干扰素组鸭血清DHBV-DNA水平明显下降（P<0.05）,血清中AST和ALT水平降低（P<0.05）,其中高剂量α-2b干扰素组LN及PCⅢ型水平明显降低（P<0.05）,肝组织中IL-6和TNF-α水平明显降低（P<0.05）,IL-12水平无明显变化（P>0.05）。组织病理形态表现,与模型组比较,低和高剂量α-2b干扰素组鸭肝组织中纤维化明显减轻。结论：α-2b干扰素可以减轻DHBV所致的鸭肝组织炎症和肝纤维化,本研究为干扰素的进一步开发和临床应用提供了理论依据。     

结合肽抑制鸭乙型肝炎病毒复制作用的研究

目的:探讨与鸭乙型肝炎病毒多聚酶(DHBVP)特异结合的结合肽,对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染的原代鸭肝细胞中DHBV复制的抑制作用.方法:应用噬菌体表面展示技术(PDT)筛选出与DHBVP特异结合的结合肽,经测序得知其核苷酸序列,推论出其氨基酸序列,据此合成结合肽,将其作用于体外感染DHBV的鸭肝原代培养细胞,分时段检测细胞核、细胞浆及培养上清中的DHBV-DNA.结果:应用噬菌体展示技术筛选3轮后共筛到7条结合肽,根据推论出的氨基酸序列合成结合肽,作用于体外感染DHBV的鸭肝原代培养细胞,其中3号肽、6号肽的培养上清及胞浆中的DHBV-DNA含量低于对照组(P<0.05).结论:与DHBVP特异结合的结合肽对DHBV的复制有抑制作用.     

电镜观察鸭乙型肝炎病毒在北京鸭肝内的形态发生和繁殖动态

鸭乙型肝炎病毒(DHBV)静脉感染1日龄北京鸭,9h后鸭肝提取物DHBV-DNA阳性,54h后肝细胞内质网池内可见到病毒颗粒,第4日外周血DHBV-DNA阳性。电镜负染色检查鸭阳性血清,可见DHBV直径40～50nm球形完整病毒和直径40～80nm大小不等类球形表面抗原两种形态,未见丝状和管状体。感染3月后鸭血清持续DHBV-DNA阳性,肝组织超薄切片可见到类似人乙型肝炎病毒(HBV)三种形态:核心颗粒、空心表面抗原和完整病毒颗粒。与人不同的是核心颗粒仅少量存在于核内,大量存在于鸭肝细胞浆内。电镜结果提示DHBV在细胞内增殖可能存在二种途径:(1)病毒的合成和装配似在细胞浆内质网内进行。(2)核心颗粒在核内复制,通过细胞核膜到胞浆,芽生进入内质网,并获得来源于内质网膜的外衣而成熟,类似HBV的繁殖方式。     

Duck hepatitis B virus infection and duck hepatocellular carcinoma.

To study the relationship between duck hepatitis B virus (DHBV) infection and duck hepatocellular carcinoma (DHCC), histological examination and DHBV DNA hybridization were performed in 875 ducks from three flocks in Qidong County. Among them, 34 suffered from hepatoma, including 23 hepatocellular carcinoma, 8 cholangiocarcinoma and 3 hepatocellular-cholangiocarcinoma. Of the 34 ducks with hepatoma 27 were positive for DHBV DNA in the liver and/or serum. DHBV DNA was demonstrated in neoplastic nodules of 22 ducks. Southern blot analysis showed that 13 cases were of the integrated pattern of DHBV DNA in neoplastic nodules. The paratumor tissues of 14 ducks with massive tumor were analysed at the same time. Five cases showed integrated pattern, 4 cases free pattern and the other 4 cases both integration and free pattern of DHBV DNA. The hybridization pattern of DHBV DNA in tumor nodule was different from that in paratumor regions in 11 cases and identical in 3 cases. DHBV antigen was positive in 13 tumor nodules and 21 paratumor tissues in the 34 ducks with hepatic tumor by both victoria blue and orcein stain methods. Advanced liver diseases were found in 30 out of the 34 ducks with hepatoma, including 12 cirrhosis and 18 chronic active hepatitis. In southern blot analysis of 122 DHBV DNA positive Qidong ducks without hepatoma, only free pattern of DHBV was seen, while 44 control ducks from Changchun were negative for DHBV DNA. Neither hepatic tumor nor liver diseases were seen in the control ducks. The results suggest that hepatocellular carcinoma in ducks is similar to that in human HCC. They have a high frequency of viral DNA integrated into the host genome and a liver disease background.

     

乙型肝炎病毒在宿主内不受核苷类药物影响的机理探讨

目的 探讨乙型肝炎病毒在宿主中不受药物影响而得以长期与宿主共存的机理。方法 以核苷类药物拉米夫定（3TC）和无环鸟苷（ACV）对鸭乙肝病毒（DHBV）感染一日龄广州麻鸭模型进行治疗，以斑点杂交法检测治疗前后和停药后鸭血清中鸭乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（DHBV－DNA）的变化，并取提鸭的肝，肾，脾，肺，心组织中的DNA，用聚合酶链反应（PCR）方法检测DHBV－DNA在各脏器组织中存在的情况。结果 以斑点杂交法检测鸭血清DHBV－DNA，3TC和ACV两个治疗组在治疗后5－10d内血清DHBV－DNA含量持续下降（与模型组比较均P＜0．05），但停药后有回升倾向；用PCR方法检测各组的肝，肾，脾，肺，心组织，显示治疗后DHBV－DNA在各脏器组织中存在的情况与模型组比无显著性差异（P＞0．05）。进一步比较了斑点杂交法和PCR法检测的结果，显示斑点杂交法检测组织中病毒远不如PCR法敏感，并提示可能组织中病毒复制量很低，以致用斑点杂交法检测出现很多假阴性。结论 乙型肝炎病毒感染宿主后，药物治疗只对宿主血清DHBV－DNA含量有影响，但未发现对肝和肝外脏器组织中DHBV－DNA有影响，乙肝病毒不受药物影响而长期在宿主中存在并低水平持续复制，可导致宿主机体对其无法识别和清除而形成慢性感染。建议使用较敏感的PCR法监控组织中DHBV－DNA含量，作为评价药物长期疗效的指标之一。     

Ultrastructural study of hepatitis B virus in biliary epithelial cells of duck liver.

Liver specimens from the Shanghai Ma ducks congenitally infected with duck hepatitis B virus (DHBV) were examined by immunohistochemical technique and electron microscopy. All the 12 serum DHBV positive ducks showed varying degrees of positive straining in hepatocytes. In 8 of the 12 ducks, DHBV antigen was discovered in the cytoplasm of biliary epithelial cells. Conventional electron microscopy revealed two kinds of virus particles in the biliary epithelial cells: 1. the incomplete virus, 40-50 nm in diameter and spherical in shape with an outer membrane, located mainly in the dilated cisternae of rough endoplasmic reticulum of the cells in large amounts; 2. the complete virions, 55-60 nm in diameter, were spherical with an outer membrane and located mainly in the cytoplasmic vesicles in small amount. We believe the particles found in the biliary epithelial cells in this study were DHBV particles. It is most likely that the infection and replication of DHBV not only take place in the liver cells but also in the biliary epithelial cells.

     

广西麻鸭乙型肝炎感染病毒动物模型的实验研究

目的 探讨广西麻鸭作为乙型肝炎病毒感染动物模型的可能性.方法 应用广西1 d龄雏麻鸭经腹腔感染鸭乙型肝炎病毒（DHBV）,13 d后采用实时荧光定量PCR法检测麻鸭血清DHBV含量,筛选出DHBV强阳性鸭.结果 共检测148份麻鸭血清标本,其中DHBV阳性标本136份,阳性率为91.9%.结论 广西麻鸭可作为乙型肝炎病毒感染动物模型.实时荧光定量PCR法检测DHBV敏感性较高,重复性好,可用于DHBV检测.