miR-335-3p通过靶向FOXD1发挥对骨肉瘤细胞肿瘤生物学行为的抑制作用

目的 探讨miR-335-3p通过靶向调控FOXD1基因抑制骨肉瘤(osteosarcoma, OS)细胞的增殖和迁移的作用及机制。方法 使用RT-PCR法评估miR-335-3p在OS组织和临近组织，正常人成骨细胞系(hFOB1.19f)和OS细胞系(SAOS2、U2OS、MG63)中的表达；使用细胞增殖实验测定研究miR-335-3p过表达对U2OS、MG63的活力的影响；EDU染色和DAPI染色评估miR-335-3p过表达对U2OS、MG63迁移和侵袭的影响；荧光素酶报告基因测定法确定miR-335-3p靶向调控FOXD1编码基因发挥作用；蛋白质免疫印迹法检测OS细胞中FOXD1蛋白表达；pcDNA-FOXD1转染OS细胞，并评估细胞增殖、迁移和侵袭的水平。结果 miR-335-3p在OS癌组织和细胞中低表达；利用miR-335-33p mimic转染细胞后，可在体外抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭；miR-335-3p通过直接结合FOXD1 mRNA的3′-UTR发挥抑制作用，从而负面调节FOXD1的表达；miR-335-3p通过靶向调节FOXD1的表达，进而抑制OS癌细胞的增殖...     

人成骨细胞胰岛素受体底物的表达

目的 观察人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞(human osteoblast-like cells HOB)胰岛素受体底物(insulin reoeptor substrate IRS)的表达。方法 半定量RT-PCR检测IRS mRNA表达，免疫共沉淀检测IRS蛋白表达。结果 人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞均有IRS-1、-2、-3、-4mRNA和蛋白质的表达，以IRS-1的表达丰度最高，IRS-4表达丰度最低。其中IRSmRNA和蛋白质在MG-63细胞中的表达丰度较在正常人戍骨细胞中的表达丰度稍高。结论 人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞均可表达IRS mRNA和蛋白质。且IRS不同成员在同一细胞中的表达丰度不同。     

牛蒡子苷元对人骨肉瘤MG-63细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的探讨牛蒡子苷元对人骨肉瘤MG-63细胞系增殖及凋亡的影响。方法以人骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,采用不同浓度(1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL)的牛蒡子苷元处理细胞。采用CCK-8法测定细胞体外增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax和VEGFR-2基因的表达水平变化。结果牛蒡子苷元能够抑制骨肿瘤细胞MG-63的增殖,促进细胞凋亡,随着药物浓度的增加能够降低Bcl-2基因的表达,升高Bax基因的表达,抑制VEGFR-2基因的表达。结论牛蒡子苷元可诱导人骨肉瘤MG-63细胞系发生凋亡,抑制其细胞增殖能力,并能抑制Bcl-2和VEGFR-2基因的表达水平,同时能够诱导促凋亡基因Bax表达水平的上升,这些结果阐明了其抗肿瘤作用中存在的作用机制。     

胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2基因表达的影响

目的观察胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2（IRS-2）基因mRNA表达的影响。方法用胰岛素干预人成骨肉瘤MG-63细胞，半定量RT-PCR检测细胞IRS-2基因mRNA的表达量。结果10^-10mol/L～10^-6mol/L胰岛素上调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05），且具有剂量依赖性。胰岛素的调节还存在时效依赖性，10^-8mol/L胰岛素干预12h可下调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05），干预24h～48h上调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05）。结论胰岛素可影响人成骨肉瘤MG-63细胞IRS-2基因mRNA的表达，胰岛素可能对1型糖尿病患者骨质疏松的发生和发展起着重要的作用。     

MTSS1基因对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的探讨MTSS1基因在骨肉瘤组织中的表达情况,对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法 qRT-PCR、Western blot和免疫组化染色分别检测骨肉瘤组织及其对应的癌旁组织样本中MTSS1的mRNA和蛋白表达水平。构建MTSS1表达载体在骨肉瘤细胞株MG63中过表达MTSS1,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况;通过Transwell细胞迁移和侵袭实验分别检测对细胞迁移和侵袭能力的影响;检测MMP2和MMP9的表达情况。结果骨肉瘤组织中MTSS1 mRNA和蛋白表达显著低于癌旁组织。MTSS1高表达能够抑制MG63细胞的增殖,抑制细胞凋亡。MTSS1表达上调显著降低细胞的迁移和侵袭能力。MG63细胞中过表达MTSS1可以降低MMP2和MMP9的表达。结论 MTSS1基因在骨肉瘤中低表达,MTSS1能够降低MG63细胞的增殖并促进细胞凋亡,可能通过抑制MMP2和MMP9的表达调控骨肉瘤的侵袭和转移。     

TC-1蛋白高表达对子宫内膜腺癌细胞凋亡的影响

目的 构建甲状腺癌相关基因1(TC-1)基因的高表达真核表达系统pTRE3G-TC-1,获得重组高表达TC-1蛋白的子宫癌细胞株HEC-TC1,检测TC-1蛋白高表达时对子宫内膜腺癌(HEC)细胞凋亡的抑制作用,为进一步对TC-1基因或蛋白功能及药物研究提供良好模型.方法 采用真核表达载体p3FLAG-CMV构建表达TC-1基因的质粒,脂质体法转染HEC细胞,检测高表达TC-1蛋白,然后用同样的基因,构建pTRE3G-TC-1表达载体,转染HEC细胞,经数周筛选,获得稳定高表达TC-1蛋白的单克隆细胞株HEC-TC1,采用流式细胞术检测该蛋白对HEC细胞的凋亡影响.结果 获得了稳定高表达TC-1蛋白的单克隆细胞株HEC-TC1.免疫组化结果显示在子宫内膜癌组织中癌细胞上具有C8ORF4蛋白高表达现象.C8ORF4蛋白在子宫内膜癌细胞中,胞内与核内均有表达,但转染激活后该基因在胞内与核内有更高表达并具有生物活性;检测转染后激活的高表达C8ORF4基因的细胞株HEC-TC1分别在0h、24h、48h与对照组未转染的HEC细胞比较,转染后C8orf4高表达细胞凋亡数显著少于未高表达组,C8orf4基因表达的蛋白对肿瘤细胞凋亡有显著抑制作用.结论 获得高表达TC-1基因的细胞株,检测该基因对HEC细胞的凋亡具有显著抑制作用,C8ORF4基因可能参与调控HEC细胞凋亡过程.     

“卡宁”抗骨肿瘤的机理初探

目的体外观察抗癌中药“卡宁”对人成骨肉瘤细胞株MG-63的凋亡诱导基因fas影响,探讨其抗肿瘤治疗的作用机制。方法采用MTT比色法观察含药血清对体外培养的人骨肿瘤细胞株的抑制能力,PCR检测对凋亡诱导基因fas的影响。结果体外实验显示中药组fas的活性明显高于对照组(p=0.038),MTT结果显示细胞生长抑制率与含药血清作用时间及浓度呈正相关,p<0.05,在15%含药血清72h时作用最强。体外实验表明,“卡宁”对MG-63细胞的fas活性有促进作用。结论对肿瘤细胞fas的促进可能是抗癌中药“卡宁”诱导肿瘤细胞凋亡作用机制的一部分。     

Notch1基因沉默对滋养细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch1基因沉默后对滋养细胞增殖与凋亡生物学功能的影响。方法:构建Notch1蛋白基因干扰质粒,体外培养人早孕期胎盘绒毛膜外滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞进行转染。应用实时荧光PCR计数检测转染后Notch1 mRNA相对表达水平,CCK-8检测细胞转染后活性情况,Western blotting检测Bcl-2凋亡蛋白家族表达情况。结果:同未转染组相比,空白质粒转染组与基因沉默组mRNA相对表达水平分别为0.97±0.03、0.31±0.10,基因沉默组mRNA表达与其它两组差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1基因沉默组同空白质粒转染组相比细胞活性明显下降(P<0.05),同时Notch1基因沉默组抗凋亡蛋白Bcl-2表达较空白质粒转染组明显降低(P<0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显增加(P<0.05)。结论:Notch1基因可通过调节Bcl-2凋亡蛋白家族参与滋养细胞增殖与凋亡过程,是胎盘形成发展过程中的正向调节因子。     

CXCR7在骨肉瘤组织、细胞的表达及其意义

目的 研究CXCR7在骨肉瘤组织和骨肉瘤周围正常组织的表达差异,并构建CXCR7腺病毒表达载体,转染骨肉瘤细胞株MG63,观察CXCR7对MG63细胞增殖、炎症因子PGE2分泌的影响.方法 RT-qPCR检测CXCR7在骨肉瘤组织、细胞和骨肉瘤周围正常组织的表达差异;构建CXCR7腺病毒表达载体,感染MG63细胞后,采用RT-qPCR、MTT、ELISA分别检测其对MG63细胞CXCR7 mRNA表达、细胞增殖和PGE2分泌的影响.结果 （1）RT-qPCR结果显示,在骨肉瘤组织CXCR7 mRNA表达率93.80%和表达量（2.221±0.112）均显著高于骨肉瘤周围正常组织45.71%、（0.3448±0.098）;MG63细胞低表达CXCR7 mRNA.（2）CXCR7腺病毒表达载体转染MG63细胞48、72、96 h后,显著促进MG63细胞增殖（P〈0.05）和PGE2分泌（P〈0.05）.结论 骨肉瘤组织CX-CR7mRNA和蛋白表达显著高于骨肉瘤周围正常组织;CXCR7表达增高可以促进骨肉瘤细胞增值,促进炎症因子PGE2分泌,对骨肉瘤的进展将产生不利的影响.     

siRNA干扰△Np63基因表达对人宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡影响研究

目的 通过抑制宫颈癌细胞株Siha中△Np63的表达,探讨△Np63对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 将宫颈癌细胞株Siha分为实验组和对照组,实验组转染△Np63的特异性siRNA,对照组转染阴性对照siRNA.实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及蛋白质印迹法检测Siha细胞转染前后△Np63基因在mRNA及蛋白水平的变化;CCK8法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的mRNA表达为0.32±0.06,低于阴性对照组0.95±0.08(t=10.92,P＜0.05).实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的蛋白表达为0.32±0.09,低于阴性对照组1.00±0.06(t=9.78,P＜0.05).实验组Siha细胞生长速度明显低于阴性对照组,实验组Siha细胞凋亡率为2.13±0.75,低于阴性对照组14.19±1.36(t=15.36,P＜0.05).结论 人宫颈癌细胞株中存在△Np63的表达,特异性siRNA可下调宫颈癌细胞株Siha中△Np63基因的表达,对细胞的增殖具有负性调节作用,并能诱导细胞凋亡.