微小隐孢子虫18SrRNA部分基因克隆和序列分析

分别从长春小白鼠、徐州人和南京黄牛的粪便中分离纯化了 3株微小隐孢子虫 (C .parvum)卵囊 ,根据C .parvum 18SrRNA基因序列设计合成引物 ,用PCR扩增卵囊基因组DNA ,其大小为 5 86bp的片段 ,PCR产物用试剂盒回收纯化后直接测序。将测得的序列用DNASTAR软件分析并与国外已发表的相应序列进行同源性比较 ,并绘制系统发育进化树。结果表明 ,徐州人源株与长春鼠源株及徐州人源株与南京黄牛源株同源性均为 97 6 % ;长春鼠源株与南京黄牛源株相应序列同源性为 99 6 %。此 3株C .parvum与国外株相应序列同源性为 81 4 %～ 10 0 0 %。限制性内切酶酶切位点分析仅发现徐州株有 1个特殊的DdeⅠ位点。本研究为人源及动物源微小隐孢子虫病诊断及人隐孢子虫感染来源和该病分子流行病学研究提供重要依据     

五株隐孢子虫18S rRNA部分基因克隆和序列分析

设计Nested PCR引物扩增牛源微小隐孢子虫Cryptospordium parvum、羊源微小隐孢子虫C. parvum、牛源安氏隐孢子虫C. andersoni、鸡源贝氏隐孢子虫C. baileyi及猪源隐孢子虫C. suis 18S rRNA基因突变区,PCR产物经克隆测序,其片段大小分别为212、213、213、213和210 bp.将测得的序列用DNAStar软件分析并与NCBI数据库中相同与相近种株序列进行相似性比较, 进行相似性分析并用TREECON软件绘制系统发育进化树.结果表明测得的5株隐孢子虫与各自相同种相似性为98.1%～100%,与其他种相似性为90.1%～98.6%.分析显示在此突变区设置特异酶切位点能区分开C. parvum, C. andersoni, C. baileyi与C. suis,位点分别是TaqI、BstUI、MseI.本研究为我国隐孢子虫分类、分子流行病学研究提供了新的方法.     

应用巢式PCR方法诊断微小隐孢子虫感染的实验研究

目的应用巢式PCR扩增方法诊断微小隐孢子虫感染。方法用昆明种小鼠通过免疫抑制方法建立动物模型，通过不连续蔗糖密度梯度离心法分离、纯化隐孢子虫卵囊。抽提DNA后，用巢式PCR扩增隐孢子虫的18S核糖体DNA，电泳、割胶回收后测序。结果成功建立隐孢子虫的小鼠免疫抑制动物模型，纯化后的隐孢子虫卵囊形状均一，呈圆形或椭圆形，大小在3-6um左右。经巢式PCR扩增，在840bp左右有一条特异性条带。通过测序和生物信息学分析，证实该基因序列与微小隐孢子虫18S具有高度同源性。结论巢式PCR方法扩增18S基因是诊断微小隐孢子虫感染的敏感方法。     

基于PNO基因序列分析隐孢子虫种系发育关系

本文以核基因组的功能蛋白丙酮酸∶NADP^＋氧化还原酶（pyruvate∶NADP^＋ oxidoreductase,PNO）编码基因作为研究对象,对本实验室分离保存的隐孢子虫虫株进行扩增测序,用ClustalX 1.81对扩增序列与GenBank相关参考序列进行比对,用Paup4.0程序中邻接法（Neighbor-joining method,NJ）、最大简约法（Parsimony,MP）和最大似然法（Maximum Likelihood,ML）进行聚类分析,以确定不同隐孢子虫分离株之间的遗传进化关系,并以18S rRNA和HSP70基因构僵的基因树作参照,进而评价PNO这一基因座是否适合作为隐孢子虫基因分型和进化关系分析的基因座。结果表明通过PNO构建的进化树将隐孢子虫分为2大类：Cryptosporidium bailey和C.meleagridis处于一个分枝,C.hominis、C.parvum牛基因型和C.parvum鼠基因型处于另一个分枝上。不同隐孢子虫之间的同源性介于95.0%-100%,能有效区分隐孢子虫不同基因型。因此,PNO基因序列也适合作为隐孢子虫分离株种系发育的遗传标记。     

人兽共患隐孢子虫种类及基因型

隐孢子虫(Cryptosporidium)目前已经成为一种重要的肠道病原体,备受关注。该病原具有广泛的宿主类型,可寄生于人和禽类、哺乳类、爬行类和两栖类等240多种动物。目前,人兽共患隐孢子虫共有8个种和1个基因型,即,人隐孢子虫(C.hominis)、微小隐孢子虫(C.parvum)、犬隐孢子虫(C.canis)、猫隐孢子虫(C.felis)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、小鼠隐孢子虫(C.muris)、猪隐孢子虫(C.suis)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)和微小隐孢子虫(C.parvum)鹿基因型。隐孢子虫的传播主要是粪-口途经或间接通过污染的环境、食物和水传播。发展中国家和发达国家腹泻病人的隐孢子虫感染率分别为4%～20%和0.6%～20%,我国腹泻病人的隐孢子虫感染率为1.4%～13.3%,儿童的感染率显著高于成年人。本文分别叙述了人兽共患隐孢子虫的各个种类和基因型的生物学特征和分子学特征,为进一步研究虫株的分布、进化特性以及隐孢子虫在人兽之间的传播途径提供了坚实的理论基础。     

微小隐孢子虫子孢子表面蛋白质粒DNA接种诱导Balb/c小鼠的免疫应答

目的　探讨微小隐孢子虫子孢子表面蛋白CP2 3重组质粒pCR3.1～ 2 3DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。方法　用重组的DNA疫苗于Balb/c小鼠后腿胫骨前肌注射免疫 ,于 0、3、6周共免疫 3次 ,10 0 μg/次。免疫后不同时间检测体液和细胞免疫应答指标。并用 1× 10 6卵囊进行攻虫试验。结果　pCR3.1～ 2 3可诱导机体产生相应的特异性抗体 ,对C .parvum卵囊攻击具有保护作用。结论　微小隐孢子虫子孢子表面蛋白CP2 3重组质粒pCR3.1～ 2 3有可能作为侯选的隐孢子虫DNA疫苗 ,值得进一步深入研究。     

两株人源隐孢子虫分离株的鉴定和种系发育分析

从郑州市某医院腹泻婴幼儿粪便中分离获得2个隐孢子虫分离株,应用巢式PCR扩增分离株SSU rRNA(18S rRNA)基因的特定片段,扩增产物分别用限制性内切酶SspⅠ和VspⅠ单酶切进行限制性片段多态性(RFLP)分析确定分离株种类或基因型.同时对扩增产物进行克隆和测序,并与GeBank上发表的相关参考序列进行同源性比较和种系发育分析.根据RFLP分析,2个分离株可初步确定为人隐孢子虫(Cryptosporidium hominis);种系发育分析表明2个分离株与C.hominis协的相应序列位于同一进化枝,序列同源性为100%.因此,本试验中获得的2个分离株应为C.hominis.     

人源肺孢子虫纯培养株的建立及基因鉴定

目的建立人源肺孢子虫（PneUmOCySaSj／rovec／，Pj）纯培养株。方法从肺孢子虫肺炎（PCP）患者的支气管肺泡灌洗液（BALF）中分离巧，用改良IMDM培养基做原代、传代和冻存复苏培养；以四胺银染色计数法观察虫体增殖情况；以线粒体rRNA大亚基特异引物扩增培养物中的目的基因，与基因库中的鼠源和人源肺孢子虫基因做序列比较。结果用添加S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等辅助剂的IMDM培养基从2例PCP患者的BALF中分离出2个巧纯培养株。分离培养的巧可进行冷冻保存和复苏培养。培养120h的巧包囊可增殖3．2倍。基因序列分析证实分离出的巧株与鼠源性肺孢子虫的线粒体rRNA大亚基同源性为67．8％，与GenBank中巧的同源性为93．2％。结论用本法建立了2个Pj纯培养株。     

数字图像处理技术对人源隐孢子虫卵囊形态学参数的测定

目的建立并分析人源隐孢子虫卵囊的形态学参数,明确其形态学变化特点。方法收集一名严重腹泻儿童的粪便,涂片经改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊。应用奥林巴斯（Olympus）BX50万能生物显微镜（日本）摄像系统采集1439个隐孢子虫卵囊的图像,利用计算机数字图像分析系统测定其长径（L）、短径（w）、周长、面积,用SPSS数据处理软件（12．0版本）分析,计算其卵形指数（L／W）等一系列形态学参数。结果计算机数字图像分析技术测定人源1439个隐孢子虫卵囊长径均值为4．78μm,95％可信区间为4．73～4．82;卵囊短径均值为4．35μm,95％可信区间为4．33—4．37;卵囊周长、面积和卯形指数均值分别为15．63μm、15．22μm：和1．10。计算机数字图像分析技术测定的人、狗和小鼠源隐孢子虫卵囊的形态学参数,经方差分析F值在10．7374．68．8776,P〈0．01。结论利用计算机数字图像分析系统和SPSS数据处理软件,获得人源隐孢子虫卵囊长径、短径、周长、面积、卵形指数的累加和、均值、中值、最大值、最小值、标准差及95％可信区间等一系列形态学参数。获得的资料是精确的,为鉴别人源隐孢子虫提供了科学信息。     

广州市哨点医院腹泻儿童隐孢子虫感染的分子

目的了解广州某哨点医院门诊腹泻儿童隐孢子虫感染现状和分子流行病学特征。方法收集2012年6月至2013年5月广州市某哨点医院门诊腹泻儿童的人口资料学和粪便标本。采用巢氏聚合酶链反应（NestedPCR）方法检测粪便标本中的隐孢子虫卵囊。结果348份粪便标本中隐孢子虫的检出率为3．45％（12／348）,发病年龄以3岁以内为主（n=10）,检出率在患者的性别、年龄、月份间差异均无统计学意义,时间分布有2个高峰,分别为3—4月和11—12月。检出的12株隐孢子虫经测序分型,8株为C．hominis,4株为C．parvum,其中Ia亚型6株,Ib亚型2株,lIa亚型3株,IId亚型1株。结论广州某哨点医院腹泻儿童存在隐孢子虫感染,高发于春季和冬季,以3岁以内婴幼儿为主,主要流行C．hominis。     

足背短肌的应用解剖

本文用手术显微镜及测微器在50侧(男30、女20)成人尸体的标本上对伸(足母)短肌和伸趾短肌的形态.血供和神经支配进行解剖与测量.伸(足母)短肌的长54.8±0.90mm,宽15.90±0.44mm厚3.46±0.18mm;伸趾短肌的长65.65±1.58mm,宽19,46±0.51mm,厚3.43±0.19mm.血供主要来自跗外侧动脉,其起点处的外径1.72±0.09mm,入肌处的外径0.82±0.06mm,可游离的长度24.85±1.41mm;肌肉由腓深神经分支支配.本文还讨论了该肌瓣的临床应用及作为供体时应注意的问题.     

EFFECTS OF GLUCOCORTICOIDS ON DIFFERENTIATION OF ZONA GLOMERULOSA OF FETAL ADRENAL CORTEX OF RATS

The tissue differentiation of the zona glomerulosa of the fetal adrenal cortex of rats was studied by giving experimental treatments to the fetus in vivo. A low-glucocorticoid-condition was given to the fetus by bilateral adrenalectomy of pregnant rats for removing exogenous glucocorticoids from the fetus, and by brain aspiration of the fetuses for removing the fetal pituitary gland (ACTH) and endogenous glucocorticoids. When the fetus was placed under a low-glucocorticoid-condition for the last couple of days of gestation, poor differentiation of the zona glomerulosa occurred speciflcally in the fetal adrenal cortex. The degree of the poor differentiation seemed to be proportional to the duration of the low-glucocorticoid-condition. Supplemental administration of glucocorticoids could prevent this poor differentiation of the zona glomerulosa. These results indicate that the tissue differentiation of the zona glomerulosa of the fetal adrenal cortex depends much on glucocorticoids.     

大鼠角膜中央区SP样、CGRP样免疫阳性纤维的起源

向角膜中央区注射ＨＲＰ后，用抗ＳＰ和抗ＣＧＲＰ抗体对三叉神经节、颈上神经节和迷走神经节进行免疫组织化学处理。结果证明：双重阳性细胞出现于三叉神经节的内侧区且集中分布于背内侧部．ＣＧＲＰ样双重阳性细胞主要分布在节的背内侧部的周边区；ＳＰ样双重阳性细胞散在于节的背内侧部的深部。两者均为圆形或椭圆形。在颈上神经节和迷走神经节内未见双重阳性细胞。     

卫氏并殖吸虫成虫和囊蚴抗原分析

本文报道了应用等电点聚焦电泳(IEF)、聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳(Dise-PAGE)和免疫电泳(IE)对卫氏并殖吸虫成虫和囊蚴抗原进行理化性质和免疫学性质分析的结果。成虫和囊蚴在理化性质方面存在许多相似组分和少数特征组分;成虫和囊蚴存在共同抗原和期特异抗原;期特异抗原大多数含糖脂蛋白,部分期特异抗原为主要血清学抗原。     

川楝素对家蝇生长发育的影响

本文通过实验室饲养研究了川楝素对家蝇(Musca     

云南正常人角膜前曲率半径的测量

测定统计了云南正常人515例(1030)眼的角膜前曲率半径,结果如下:水平经线前曲率半径为7.728±0.301mm((?)±s);垂直经线前曲率半径为7.627±0.307mm.水平经线与垂直经线间以及男女性别间的测定值存在显著差异,而同性别中左右眼间无显著差异,随年龄增大,角膜前曲率半径值呈增大趋势.     

我国恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP-2的抗原表位分析

根据我国恶性疟原虫株MSP-2基因序列,检索我国虫株MSP-2是否具有国外已鉴定的MSP-2抗原表位。结果显示,我国虫株MSP-2具有已鉴定的FC-27等位基因型可变区抗原表位STNS和DTPTATE。同时应用计算机辅助抗原表位分析技术对MSP-2进行抗原表位分析预测,并以合成肽技术鉴定了预测表位的免疫原性。抗原指数分析表明,MSP-2分子亲水性指数和侧链易曲性指数最高的区域分别位于aa153～166和aa65～72,而aa53～60可能是我国虫株特异的抗原表位。用4个合成肽进行免疫学鉴定,证实预测的表位可以诱导抗肽抗体反应,免疫血清可识别重组MSP-2和恶性疟原虫全抗原中MSP-2抗原区带,且合成肽可与我国流行区高度免疫人群免疫血清反应。由于这些表位存在于我国海南、云南、安徽株MSP-2序列中,可以作为研制我国恶性疟重组多价表位疫苗的候选抗原表位。     

神经氨酸酶对红细胞微观流变特性的影响

用生物化学方法,即用不同剂量的神氨酸酶（唾液酸酶）作用相同的时间,和用相同剂量的神经氨酸酶作用不同的时间分别对红细胞进行处理,以达到以不同程度地去掉其表面电荷,测量处理过的血液的粘度,血沉、红细胞聚集及各样本红细胞的DI、（DI）or、（DI）d在不同切变率下的变形曲线,即DI-γ、（DI）or-γ和（DI）d-r曲线及电泳率,并与正常对照组红细胞的相应参数及曲线作比较,发现两者之间的粘度、血沉、红细胞聚集及各种曲线及电泳率,并与正常对照组红细胞的相应参数及曲线作比较,发现两者之间的粘度、血沉、红细胞聚集及各种曲线存在明显差异。由此表明,红细胞表面电荷的多少直接影响血粘度、血沉及红细胞聚集与红细胞变形性等流变特性,有力地证明了在低切变率下血液粘度与血沉主要反映红细胞的聚集行为,而在高切变率下的血液粘度则主要反映红细胞的变形行为。