溴氰菊酯人工抗原及多克隆抗体制备

以二溴菊酸和4-[(4-硝基苯)氧基[苯甲醛为原料经4步反应合成了溴氰菊酯半抗原1-氰基[4-(4-氨基苯)苯基]甲基-2,2-二甲基3-(2',2'-二溴乙烯基)环丙烷羧酸酯;用重氮化法将溴氰菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)相偶联制备免疫抗原和包被抗原,紫外吸收法估算偶联比分别为11:l和8:1;以BSA偶联物作免疫抗原免疫日本大耳白兔制备溴氰菊酯多克隆抗体,间接非竞争ELISA法测定两个抗血清效价分别为100000和80000,间接竞争ELISA法测定抗体特异性结果表明所制备的抗体测定溴氰菊酯的IC50值为0.16 mg/L,与其他供试农药的交叉反应率均≤1%.制备的溴氰菊酯人工抗原和多克隆抗体为研究建立溴氰菊酯农残免疫快速测定方法奠定了基础.     

甲磺隆人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

为了建立测定磺酰脲除草剂甲磺隆残留的酶联免疫吸附检测方法(ELISA),以邻甲酸甲酯苯磺酰胺与琥珀酸酐反应合成半抗原1-[(2-甲酸甲酯)苯磺酰]单胺琥珀酸.用活性酯化法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原.通过免疫抗原免疫新西兰大白兔获得甲磺隆的多克隆抗体,抗体效价达800 000.以此抗体建立的间接竞争ELISA法,检测甲磺隆的线性范围在0.7~40 mg/L,最低检测限为0.16mg/L.与甲磺隆结构相似的磺酰脲类除草剂的交叉反应结果表明,氯嘧磺隆的交叉反应率为38.2%,其他4种除草剂的交叉反应率都小于1%.     

凉茶中对乙酰氨基酚酶联免疫检测方法的研究

目的:制备并鉴定对乙酰氨基酚多克隆抗体。方法:以对乙酰氨基酚的特征部分为基础设计合成半抗原丁酸酰氨基酚(PCTM-H),并通过活泼酯法将其与载体蛋白BSA、OVA分别偶联制备免疫抗原PCTM-H-BSA和包被抗原PCTM-H-OVA,再经过动物免疫获得多克隆抗体。结果采用间接竞争ELISA法建立标准曲线,测得其IC50为36.0 ng/m L,定量检测线性范围为2.62~320.54 ng/m L,与其它结构类似物的无交叉反应,添加回收实验其回收率在70.0%~90%之间。结论:成功获得抗对乙酰氨基酚多克隆抗体,该抗体可实现凉茶中非法添加对乙酰氨基酚的快速检测。     

氰戊菊酯免疫分析关键试剂人工抗原的合成与应用效果

以氰戊菊酸、间苯氧基苯甲醛为原料,利用酰氯与伯胺的活泼反应,合成了一种含有3个碳原子长度连接臂的氰戊菊酯半抗原,并通过核磁共振鉴定;用活泼酯法将合成的氰戊菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和检测抗原,紫外-可见连续光谱扫描结果显示,所制备的人工抗原的图谱具有载体蛋白和半抗原的特征峰叠加现象,表明偶联成功;人工抗原的免疫结果显示,以BSA偶联物免疫小鼠后获得抗血清效价分别为160 000、140 000和110 000,间接竞争ELISA(酶联免疫吸附分析)测定抗体IC50(半数抑制浓度)值为35.1 μg/L,与其他供试农药的交叉反应率均＜1%,为氰戊菊酯抗体研制及免疫分析检测技术研究提供了关键试剂.     

三聚氰胺完全抗原的制备与表征

采用戊二醛法将三聚氰胺(Melamine,MEL)偶联到牛血清白蛋白(BSA)上制备完全抗原MEL-BSA,并用紫外扫描、红外扫描及SDS-PAGE电泳试验进行了鉴定。结果表明,半抗原MEL和BSA偶联成功,紫外光谱分析法计算得其偶联比为7.9∶1。通过免疫动物获得效价为1∶25 600的抗体,间接竞争ELISA测定抗体IC50值为39 ng/mL,与三聚氰酸及其他几种常用抗菌素的交叉反应率均0.2%,为下一步研制三聚氰氨单克隆抗体,建立三聚氰氨免疫速测技术奠定了基础。     

镉离子多克隆抗体ELISA竞争法的初步建立

目的制备抗镉离子螯合物的多克隆抗体,初步建立检测镉离子的ELISA竞争法。方法用双功能螯合剂iEDTA螯合Cd2+后,再与匙血蓝蛋白(KLH)偶联,合成完全抗原(Cd-iEDTA-KLH),免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗体。ELISA法检测其抗血清效价、特异性和灵敏度。结果多克隆抗体效价均大于1∶80000;特异性检测结果显示均产生了抗Cd-iEDTA抗体,与OVA、BSA无交叉反应。抗体除与Hg2+有较强的交叉反应外,同等抑制情况下,Mg2+、Ca2+、Fe3+、Cu2+、Ni2+、Zn2+与Cd2+浓度相差约1000倍,交叉反应率很低;ELISA竞争法对镉离子的检测限约为50ng/ml。结论初步建立了镉离子的ELISA竞争法,检测限达到无公害的国家卫生限量标准(100ng/g)。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫分析核心试剂特异性单克隆抗体的研制与特性研究

采用1,1’-羰基二咪唑(CDI)活化法成功将脱氧雪腐镰刀菌烯醇分子上C-3和C-15位羟基与载体蛋白赖氨酸的氨基共价偶联得到免疫原DON-BSA和包被原DON-OVA,并用三硝基苯磺酸法对合成结果进行鉴定。以人工抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/O鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和多次亚克隆,得到了1株能稳定分泌脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体的单克隆细胞株1D5,并制备单克隆抗体腹水。经检测该抗体亚型为IgG1,亲和力常数Ka为8.33×107L/mol,交叉反应的试验结果显示该抗体与其他真菌毒素无交叉反应率,稳定性良好,为粮油食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫快速检测技术建立及产品研发提供了关键试剂材料。     

有机磷农药通用抗原的合成及鉴定

以二乙基膦酸乙酸作为通用结构半抗原,经活化酯法(NHS-DCC)、碳化二亚胺法(EDC)和混合酸酐法(MAH)合成了3种免疫原,用MAH法合成了1种包被原.人工抗原用紫外分光光度法初步鉴定偶联结果并计算克分子浓度分别为2.846×10-3、2.133×10-3、3.574×10-3、2.584×10-3.后用核磁共振P谱进一步确定偶联情况.偶联成功后免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,动物实验检测人工抗原的免疫原性,结果表明:NHS-DCC、EDC和MAH法所制得抗血清的最高滴度分别为24000、10000和32000,均获得免疫应答,以半抗原为研究对象建立的间接竞争ELISA法对半抗原的最低检测质量浓度IC10值为1.115×10-5 g/L,抑制中浓度IC50值为7.176×10-4 g/L.     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及鉴定

采用玉米赤霉烯酮(ZEN)与羧甲基羟胺半盐酸盐在吡啶中反应,生成玉米赤霉烯酮肟(ZENO),用活性酯法将ZENO与牛血清白蛋白(BSA)的氨基相连合成ZEN人工抗原;并进行了紫外吸收鉴定;以合成的BSA偶联物(ZEN-BSA)为免疫抗原,免疫Balb/c小鼠,经细胞融合,采用非竞争/竞争ELISA两步筛选法获得能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株1C7.抗体1C7灵敏度(IC50)达0.61μg/L,与T-2毒素、呕吐毒素(DON)、黄曲霉毒素(AFT)的交叉反应率均＜0.1％.本研究为研发粮油产品中玉米赤霉烯酮特异性免疫分析技术及产品奠定了重要基础.     

双酶偶联生物合成L-酪氨酸

多酶偶联催化是酶法制备手性药物中间体的重要方法之一。该文采用双酶偶联体系,利用天冬氨酸转氨酶全细胞催化L-天冬氨酸转氨至苯丙酮酸,生成L-苯丙氨酸,同时得到中间产物丙酮酸;反应体系中的酪氨酸酚裂解酶全细胞催化丙酮酸、苯酚和氨酶法合成L-酪氨酸。经考察确定了双酶偶联反应的最佳条件为:温度40℃,pH=8.5,底物苯丙酮酸质量浓度为25 g/L,苯丙酮酸与L-天冬氨酸摩尔比1∶1.2,天冬氨酸转氨酶与酪氨酸酚裂解酶细胞质量比1∶1,4 mmol/L PLP,0.1 g/L吐温80。30 g/L的氯化铵对双酶偶联反应有促进作用。双菌双酶偶联生物法合成L-酪氨酸,充分利用了反应副产物丙酮酸得到附加值较高的产品,对资源合理利用及绿色合成工艺具有参考意义。     

20％甲氰菊酯水乳剂的研制

[目的]配制甲氰菊酯环保剂型水乳剂,以得到更广泛的应用.[结果]通过对乳化剂、共乳化剂的筛选,确定了20％甲氰菊酯水乳剂的最佳配方:甲氰菊酯20％,二甲苯6％,602# 2％,乳化剂A 3％,乙二醇4％,共乳化剂A1％,黄原胶0.1％,有机硅消泡剂0.03％,水余量.[结论]各项指标均符合水乳剂的要求.     

甲氰菊酯农药废水处理的实验

[目的]通过实验探讨甲氰菊酯农药废水处理的新方法.[方法]采用正交试验及单因素试验确定粉煤灰基混凝剂制备及处理甲氰菊酯农药废水的最佳条件.[结果]粉煤灰基混凝剂制备的最佳条件:粉煤灰/酸比为1∶4(m/V),粉煤灰/碱比为1∶3(m/V),熟化温度为40℃;处理废水的最佳条件:投加量5 L/100L,温度为30℃,pH值为4,反应时间为3h,CODCr去除率为50.91％.[结论]粉煤灰基混凝剂处理甲氰菊酯农药废水效果良好,值得进一步探讨.     

甲氰菊酯和辛硫磷混合剂在苹果及土壤中的残留分析

报道了甲氰菊酯、辛硫磷及其混合剂在苹果及土壤中快速、简单残留分析方法。农药用溶剂提取,经液－－液分配和柱层析后,分别用气相色谱电子捕获检测器（ＥＣＤ）或火焰光度检测器（ＦＰＤ）检测。两农药在苹果和土壤中三个浓度的添加回收弦均达到农药残留分析的要求。     

毒死蜱和甲氰菊酯对赤眼蜂毒性与安全评价

通过指形管药膜法测定了毒死蜱和甲氰菊酯对赤眼蜂的毒性.结果表明,毒死蜱和甲氰菊酯对欧洲玉米螟赤眼蜂(Trichogramma nubilale)预蛹期的LC50(24h)分别为7.38、25.0 mg/L,毒死蜱对欧洲玉米螟赤眼蜂和玉米螟赤眼蜂(T.ostriniae)成蜂的LC50(24 h)分别为0.477、1.87 mg/L,甲氰菊酯对欧洲玉米螟赤眼蜂和玉米螟赤眼蜂成蜂的LC50(24 h)分别为98.8、448 mg/L.根据风险性等级划分标准,毒死蜱和甲氰菊酯对欧洲玉米螟赤眼蜂的预蛹期都为极高风险性,毒死蜱对欧洲玉米螟赤眼蜂和玉米螟赤眼蜂的成蜂都为极高风险性,甲氰菊酯对欧洲玉米螟赤眼蜂和玉米螟赤眼蜂的成蜂为中等风险性.     

柑桔木虱有效防治药剂田间筛选试验

控制柑桔木虱是黄龙病综合防治最重要的措施。田间药效试验结果表明，敌敌畏、乐果、辛硫磷、马拉硫磷、乙酰甲胺磷、阿维菌素、丁醚脲等对木虱成虫的防效低于80％，吡虫啉为86．6％；甲氰菊酯及与三唑磷、丙溴磷、水胺硫磷的混剂，高效氯氰菊酯及与毒死蜱的混剂的防效都在90．0％以上；啶虫脒对成、若虫的防效都较差，与柴油、吡虫啉混用有增效作用。     

毒死蜱·甲氰复配乳油气相色谱分析

采用ＯＶ－１０１／Ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂ ＷＡＷ／ＤＭＣＳ（１５０μｍ￣１８０μｍ）为色谱柱内标定量法。该方法标准偏差０．２４,变异系数为０．９８％,回收率毒死蜱为９９．２％,甲氰菊酯为９８．７％。     

苹果黄蚜抗甲氰菊酯种群对13种杀虫剂的交互抗性研究

本文采用毛细管微量点滴法,测定了苹果黄蚜抗甲氰菊酯种群对１３种杀虫剂的交互抗性。结果表明：甲氰菊酯对氟氯氰菊酯、联苯菊酯、顺式氰戊菊酯、溴氰菊酯都具有较强的交互抗性,其倍数分别为１０３．６、４８．１、４７．８和３２．７倍;对氧乐果、水胺硫磷、喹硫磷也有一定的交互抗性,其倍数分别为１０３．６、４８．１、４７．８和３２．７倍;对氧乐果、水胺硫磷、喹硫磷也有一定的交互抗性,其倍数分别为６．０、５．０和４．２倍;与氰久合剂、增效氰马、久效磷、氧乐菊酯和抗蚜威无交互抗性。     

Inducible Expression of Mu-Class Glutathione S-Transferases Is Associated with Fenpropathrin Resistance in Tetranychus cinnabarinus

The carmine spider mite, Tetranychus cinnabarinus (Boisduval), is a serious pest on a variety of economically important crops widely distributed in China, and its resistance to acaricides has quickly developed. In this study, we fully sequenced 13 GST genes of T. cinnabarinus (TcGSTs). The phylogenetic tree showed that five of them belonged to the delta class and the other eight belonged to the mu class. The alignment of gene sequences and comparison of gene expressions between a fenpropathrin-resistant strain (FR) and a susceptible strain (SS) showed that neither point mutation nor overexpression was detected in TcGSTs. However, when challenged by a sublethal dose of fenpropathrin, the mRNA levels of three GSTs from the mu class (TCGSTM2, TCGSTM3, and TCGSTM8) highly increased in FR, while in SS, the expression of these genes was still at the same level under the treatment. In conclusion, specific TcGSTs were identified that were inducible to stimulation by fenpropathrin, and proved that TcGSTs in FR were not constantly expressed at a high level, but could react much more quickly under the stress of fenpropathrin than SS.