磷酸氨基酶的研究 Ⅰ.磷酸氨基酶对于磷酰胺类化合物的活力

(一)磷酰胺类化合物在酸性及碱性溶液中都不稳定。在所试过的化合物中,以磷酰对氯苯胺最稳定,但它的溶解度较小。磷酰参羧基苯胺和磷酰苯甲胺的自行分解速度甚大,不过宜用为底物。 (二)牛脾部分提纯制剂在 pH5.0对于磷酰胺类化合物的活力比在 pH9.0的高。而对于不同底物的水解速度与亲和力都不相同,显示磷酸氨基酶活力与底物的结构有密切关系。在分解产物中,胺类对于该酶的活力无大影响,而磷酸根离子则有较为显著的抑制作用。(三)大鼠组织提取液对于结构相似的底物的活力之比也相似,而对于结构不同的底物,则活力之比也不相同,显示有不同磷酸氨基酶存在的可能。(四)各组织中磷酸氨基酶的含量不同,以脾脏的含量最高。(五)肌肉组织中合有磷酸氨基酶的活力,它的研究可能对于肌肉中磷酸肌酸代谢的了解有所帮助。     

人参多肽基因的化学合成和克隆

 本文报道了具有降血糖作用的人参多肽基因的设计及用固相亚磷酰胺法的合成。再以质粒pUC19作为克隆载体,以大肠杆菌JM101为受体菌,克隆了人参多肽基因,并成功地获得了克隆菌株。     

N—磷酰氨基酸和二肽的自身活化成肽

磷酰基的参与作用导致N-磷酰氨基酸和二肽自身活化,在无活化试剂的情况下能成肽和肽链延长。14种磷酸小肽或游离肽被分离并经各谱图证实,该研究对蛋白质前生物合成的探讨提供了重要线索。     

环磷酰苷葡胺注射液治疗心功能不全121 例分析

目的：观察环磷酰苷葡胺注射液治疗充血性心力衰竭的疗效。方法：将243例充血性心力衰竭患者随机分为两组：观察组121例,对照组122例。对照组患者给予地高辛0．125-0．25mg或西地兰0．2mg加入注射用水20ml,每日1—2次静推,利尿剂给予速尿20—40mg。隔日口服或静推,同时补钾3次／日,疗程4—8周。观察组在应用上述药物的基础上,给予5％葡萄糖200—500ml加入环磷酰苷葡胺注射液60-80mg,1次／日静点,或25％葡萄糖加入环磷酰苷胺注射液90mg 1次／日静推,疗程4—8周。结果：两组心功能较治疗前明显改善。结论：环磷酰苷胺治疗充血性心力衰竭疗效确切,安全可靠,值得临床推广应用。     

人恶性疟杂合多肽抗原基因化学合成及克隆

本文报道用固相亚磷酰胺法合成人恶性疟杂合多肽抗原基因。基因全长为216bp,分为10个寡聚核苷酸片段分别合成,然后经T4 DNA连接酶按设计顺序连接成完整的杂合抗原基因,重组到噬茵体M13 mp 18 RF DNA内,转染大肠杆菌JM109。用分子杂交和酶切分析筛选出重组克隆体。经序列分析,证明所合成的人恶性疟杂合多肽抗原基因与所设计完全一致。     

噻嘧胺三磷酸之辅羧酶作用

緒言自Karrer氏等刊出關於噻嘧胺磷酸衍化物及輔羧酶(cocarboxylase)之合成法後,繼續又發表噻嘧胺三磷酸(thiamin triphosphate)之製備,並證明其有羧酶輔酶的作用。此物容易合成,經稀鹽酸適當水解後可得噻嘧胺二磷酸(thiamin pyrophosphate)。Velluz氏等亦作更深一步的研究,將製備所得的噻嘧胺三磷酸,測探其水解情况,發現第二與第三位磷酸根水解於酸性溶液中,所剩之噻嘧胺     

人溶菌酶基因的合成和克隆

用固相亚磷酰胺法合成了人溶菌酶的全基因,全长为409bp,它包括了编码人溶菌酶的结梅基因,起始密码于ATG,终止密码子TAA、TGA,以及两端的BamHI和SphI的识别顺序。整个基因分成24个寡聚核苷酸片段进行合成,每个片段长度分别为26至38个核苷酸．然后用两种方法酶促连接成完整的人溶菌酶基因。基因克隆到M13载体上。用点杂交和限制酶酶切分析确定阳性克隆株。用双脱氧链终止法进行序列分析,证实所合成的人溶菌酶基因序列与设计的完全一致。     

基于自噬与凋亡机制研究左归丸对化疗损伤颗粒细胞及膜细胞的影响

目的 探讨左归丸含药血清对化疗损伤性颗粒细胞和膜细胞的影响及作用机制。方法 制备左归丸含药血清,培养大鼠卵巢颗粒细胞和膜细胞,使用磷酰胺氮芥造模分组后给药。CCK-8法测定颗粒细胞和膜细胞存活率,实时荧光定量PCR法（RT-PCR）及蛋白质免疫印迹法（Western blot）分别检测卵巢自噬启动因子Beclin-1、微管结合蛋白轻链3（LC3B）、自噬受体蛋白p62、凋亡蛋白Bax、Caspase3在转录水平和翻译水平上的表达。结果 10%左归丸含药血清对于细胞存活的挽救率最高。Beclin-1、LC3B、Bax、Caspase3在磷酰胺氮芥作用的颗粒细胞和膜细胞中,相对于空白对照组有高表达（P<0.05）,10%左归丸含药血清可下调上述蛋白质在模型组中的表达（P<0.05）;然而受体蛋白p62较空白对照组升高（P<0.05）,10%左归丸含药血清可上调模型组p62的表达（P<0.05）。此外,在颗粒细胞实验组中,激活或抑制自噬途径后,自噬相关蛋白的表达在发生相应改变的同时,凋亡相关蛋白的表达也会发生相应改变。结论 磷酰胺氮芥可通过促进凋亡、激活自噬/溶酶体降解途径的机制损伤颗粒细胞和膜细胞。10%左归丸含药血清能缓解由此带来的损伤,同时影响了颗粒细胞和膜细胞自噬和凋亡过程。在磷酰胺氮芥损伤颗粒细胞的过程和10%左归丸含药血清缓解其损伤过程中均存在自噬与凋亡串流（cross-talk）。     

人α-心钠素全基因的化学合成

用固相亚磷酰胺法(solid-phase phosphoramidite method)合成了人α-心钠素(简称α-hANP)的全基因。合成的α-hANP基因全长为96bp,包括编码α-hANP的结构基因、基因5＇端的谷氨酸(作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位点)密码子GAA、基因3＇端的终止信号TGA及基因两端的接头部分。基因分7个寡聚核苷酸片段在DNA合成仪上合成,然后一次性酶促连接成为完整的α—hANP双链基因。化学合成的基因克隆到M13载体上,经分子杂交鉴定筛选出的α-hANP基因克隆株,用双脱氧链终止法进行序列分析,证明核苷酸顺序正确。     

酶促合成高比放射性γ-~(32)P-ATP 采用一种简便的管道装置

ATP具有高能磷酸键,在生物体能量的交换中占着中心地位。蛋白质生物合成、肌肉收缩和磷酰基的转移等重要生理过程,都必须有它参加。同位素标记的ATP对研究代谢过程提供了一项有效的方法,对某些可利用它来测     

人表皮生长因子基因的化学合成和克隆及其在酵母中的表达

用固相亚磷酰胺法合成了人表皮生长因子基因,全长为173个核苷酸,它被分成8个寡核苷酸,分别在DNA合成仪上合成。经分离纯化后的寡聚核苷酸进行酶促连接,然后被克隆到噬菌体M13mpl8中,克隆经分子杂交、限制酶酶切以及DNA序列分析检测,证明合成的人表皮生长因子基因和设计的完全一致。将人表皮生长因子基因的DNA片段插入酵母分泌型表达载休YFD59 HindⅢ位点中,建成表达人表皮生长因子基因的质粒YFDl04,再将此质粒转化酿酒酵母,所得转化子经摇瓶发酵,发酵上清液用受体结合试验表明有人表皮生长因子表达。     

环状核苷酸在大、小白鼠着床中的作用

在延缓着床的大、小白鼠证明了环-磷酸腺苷(cAMP)可以代替雌激素引起胚泡着床。本工作还第一次观察到另一种环状核苷酸——环-磷酸尿苷(cUMP)也具有类似的作用,而环-磷酸鸟苷(cGMP)和环-磷酸胞苷(cCMP)的作用很弱。在注射 cAMP 和 cUMP 24小时后多数动物出现阳性的滂胺蓝反应,在注射18小时后有部分动物的滂胺蓝反应是阳性的。这表明注射环状核苷酸到引起着床所需的时间大致与雌激素相近。     

乐果对四尾栅藻碳、氮、磷营养缺乏的替补效应

有机磷农药属于有机磷化合物的范畴,一般是指磷(膦)酸酯、硫代磷酸酯、磷酰胺酯类有机磷化合物。因其具有杀虫力强、使用范围广、残留期较短等特点,从20世纪80年代开始,有机磷农药很快就取代了有机氯农药成为我国农药市场份额最大,使用最多最广的一代新生     

全自动DNA合成机

日本Zeon公司已宣布出售全自动DNA合成机。该公司继去年11月出售非全自动型DNA合成机之后,又成功地开发了全自动型,并已出售。全自动型与其他公司产品相比,价格便宜8万日元,不但体积小且轻便,而且操作简单。其特征是综合了磷酸酞胺法和     

测定氢酶吸氢活性的光谱分析法

固氮酶催化放氢是影响生物固氮效率的重要因素之一。经过吸氢酶吸收固氮酶释放的氢,一方面可以增加还原力来源,同时经氧化后可以消除系统内的氧,保护固氮酶免受氧伤害,从而提高固氮效率。测定氢酶吸氢的方法有多种,例如:同位素氚与水的交换法、检压法、电极法、气相层析法和光谱分析法。由于前三种方法操作较繁琐,目前国内较多的是使用气相层析法。而用光谱分析法定量地测定氢酶的吸氢活性是一种比气相法更为快速和灵敏的     

羊角椒辣味物质成份分析

用紫外光谱法、红外光谱法和高效液相色谱法分析羊角椒中辣味物质纯度与组成,表明辣味物质由辣椒素、二氢辣椒素和降二氢辣椒素组成。     

磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的制备和纯化

以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为免疫原免疫兔获得抗血清。自抗血清中分离获得抗体。自酪胺合成磷酸酪胺,并偶联到溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ上。抗体经磷酸酪胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和柱纯化,所得抗体专一性强,Ｄｏｔ ｂｌｏｔ显示：抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白,溶菌酶,卵清蛋白起抗原抗体反应,而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶,卵清蛋白,也不识别作为免疫     

不同方法测定聚乙二醇化天花粉蛋白的修饰度

目的:建立测定PEG化天花粉蛋白修饰度的方法.方法:利用电泳法初步确定PEG-TCS的分子量、用质谱法进行验证;通过TNBS法和荧光胺法测定其修饰度.结果:从质谱法和电泳法可知PEG-TCS的理论修饰度为9.0909%,TNBS法测得的修饰度为9.8613%%,荧光胺法所测得值为8.5955%.TNBS法测定结果尽管偏大,但是操作简单,不需要专门的仪器;荧光胺法需要荧光分光光度计,且丙酮易挥发.结论:TNBS法可作为测定PEG-TCS修饰度的方法.     

肾功能与内环境恒定（二）

肾功能与内环境恒定（二）陈淑凤（北京师范大学生物学系１００８７５）（续１９９５年２９（１）：１８）３．２．１血液的缓冲系统血浆中的缓冲对为：碳酸（ＨＺＣＯ３）”蛋白质磷酸氢Ｍ钠（Ｎａ。ＨＰＯ。）磷酸Ｍ氢钠（ＮａＨｚＰＯ。）红细胞中的主要缓冲对为：一碳...     

寡聚脱氧核苷酸d(G-C)_3的激光喇曼谱及其分析

用改进的固相磷酰三酯法合成了oligo-d(G-C)_3。以氩离子激光为激发光源,波长488nm.,在室温条件下,分别测定了纯化后的oligo-d(G-C)_3和其组分单体5’-dGMP和5’-dCMP的激光喇曼谱。观察到被测定的物质在300-2500cm~(-1)频率区间,各自都有其特征的谱形和喇曼峰。5’-dGMP和5’-dCMP谱中大多数特征峰在寡聚体的谱中消失,而在oligo-d(G-C)_3谱中出现了几处新的喇曼峰。经查证,峰832,851和899cm~(-1)系糖-磷酸主链的特征喇曼峰,另外几处峰与DNA的构象有关。实验结果表明oligo-d(G-C)_3在水溶液中(室温)主要以B-构象存在。