单克隆抗体在酶联免疫吸附试验检测单纯疱疹病毒抗原中的实用性

单纯疱疹病毒(HSV)可以引起人类的龈口炎、角膜结膜炎、坏死性脑炎等疾病,并且与宫颈癌、唇癌等有关。HSV感染的临床表现多样,给诊断和治疗造成一定困难。需要敏感、快速的实验室诊断方法。酶联免疫吸附试验(ELISA)已公认是检测HSV抗原一种敏感、特异、快速的方法。我们在实验研究中发现,使用免疫动物多价血清(PolyAb)     

长沙地区1986-2000年钩端螺旋体病监测结果分析

目的探讨钩端螺旋体病的流行因素与防治措施.方法用公认的方法进行鼠情调查和对病人、动物进行病原学、血清学研究.结果①疫情在监测的15年中湖南全省年均发病率为9.86/10万,此期间有2个发病高峰年;长沙地区则年均发病率为19.06/10万,近全省发病率的2倍.1992年-2000年9年中有7年发病率高于全省发病率.②鼠情监测共布鼠夹11803只,捕鼠747只,鼠密度为6.33%,流行前期、后期鼠密度差异无显著.③病原学监测对717例钩体病人采血作钩体培养,阳性124份,阳性率17.29%,至少分属8个血清群,以流感伤寒和秋季热群为主;从416只鼠的肾中分离出49株钩体菌株,阳性率为11.78%,至少分属5个血清群,以黑线鼠携带黄疸群为主,其次为黄毛鼠携带爪哇群,占14.29%;从40只家犬肾中分离钩体菌9株,带菌率为22.50%,鼠与犬带菌率差异无显著.对72头猪117只蛙取肾培养,未获阳性结果.④血清学监测检测钩体病人双份血清抗体,黄疸出血群、犬群、澳洲群、波摩那群、流感伤寒群、七日热群6个群抗体均数差异有非常显著;爪哇群其抗体差异显著;在对动物血清抗体调查中,检测了犬、猪、牛分别为40、30、25头.具有某一抗体阳性的分别为60%、53.33%和84%,其差异有显著.犬抗体分属6个血清型,以澳洲为主;猪则分属5个血清型,以巴达维亚为主;牛分属11个血清型,以巴达维亚为主.结论①长沙地区在15年监测中平均发病率为全省的2倍左右,除个别年度外几乎每年发病率都较高,是湖南省的典型代表.②鼠类尤其是优势鼠种黑线姬鼠、犬、猪和牛是主要传染源.③病人血培养结果显示,感染菌群非常复杂,至少有8个钩体菌群.④用现行的四价菌苗接种易感人群其作用有限.     

环介导等温扩增技术在寄生虫分子诊断、检测中的应用

环介导等温扩增技术应用4条不同的引物特异地识别目标基因上的6段区域,在一个恒温的环境中进行链置换反应,是一种简单、快速、特异、敏感并且低成本的对已知基因的检测方法。本文就环介导等温扩增技术的原理及其在寄生虫分子诊断和检测中的应用作一综述。     

中国钩端螺旋体 rRNA 基因酶切片段长度多态性(RFLP)分析

用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ对５６株国内外钩体参考株和２８株野生株进行ｒＲＮＡ基因ＲＦＬＰ分析时发现：８４个菌株中共有６６个不同的核糖核酸型（ＲＴ），除Ｂａｌｕｍ和Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ型相同；赛尔东尼群的Ｈａｉｎａｎ和Ｗｈｉｔｃｏｍｂｉ型相同；赛罗群的Ｗｏｌｆｉ和Ｓａｘｋｏｅｂｉｎｇ型相同、爪哇群中的Ｍｅｎｇｒｕｎ和Ｍｅｎｇｍａ型相同外，其它的血清型都有互不相同ＲＴ。该方法和ＤＮＡ同源性研究相吻合，同一个基因型往往拥有共同的核心片段。在所检测的中国菌株中致病性钩体至少有５个基因种，腐生菌一个基因种，细丝体一个基因种。研究中发现在我国部分新的血清型菌株以及野生株中可能存在新的基因种，尤其在流感伤寒、黄疸出血、爪哇以及七日热等血清群中可能性更大。     

PCR配合Dig－AMPPD探针检测和分析钩端螺旋体基因

作者以１４份早期钩体病人血清进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），并以地高辛－硷性磷酸酶发光体（Ｄｉｇ－ＡＭＰＰＤ）同源探针行分子杂交，全部血清样品均获得阳性结果。此法敏感、特异、易行，可明显提高钩体病诊断水平。以扩增的基因片段与１６株Ｙａｓｕｄａ基因组钩体ＤＮＡ限制性谱行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，与其中６株存在同源单拷贝序列，它们皆为我国主要流行和致病的优势菌型。用电脑核苷酸测定仪分析该基因的核苷酸序列、限制性位点和ＯＲＦ等并取得了重要资料。     

钩端旋体单克隆抗体的研制及其应用

自淋巴细胞杂交瘤技术创建以来,已有10余年历史,但钩端螺旋体(以下简称钩体)单克隆抗体(以下简称单抗)的研究及其应用,为时仅有五年左右。目前抗钩体单抗的研究已涉及5个钩体血清群的不同型株及5种不同类型的钩体抗原成分,因而获得了不少以前用常规抗血清或因子血清难以获得的结果,并有新的发现。现将近年来国内、外抗钩体单抗的研究动态列于表1,并就5种抗不同类型钩体抗原单抗的研究及其初步应用综述如下。     

问号钩端螺旋体血清群LipL32基因型分析及其重组蛋白的免疫学鉴定

目的　探讨 15群 15型问号钩端螺旋体 (简称钩体 )中国参考标准株及 2群 2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在主要外膜蛋白 (MOMP)基因 (LipL32 ) ,克隆并构建该基因的原核表达系统 ,鉴定表达产物的免疫性。方法　常规酚 氯仿法提取上述钩体株基因组DNA ,高保真PCR扩增全长LipL32基因片段 ,T A克隆后测定核苷酸序列并构建表达系统 ,不同浓度IPTG诱导后用SDS PAGE检测rMOMP表达情况。分别用兔抗TR patocⅠ钩体全菌抗血清、rMOMPs免疫兔血清的Westernblot鉴定其免疫反应性和免疫原性 ,显微镜凝集试验 (MAT)检测rMOMPs免疫兔血清的交叉凝集效价 ,钩体细胞黏附模型检测抗体阻断效果。结果　上述 17株钩体均有LipL32基因 ,但可分LipL32 1和LipL32 2两种基因型。 13个LipL32 1和 4个Li pL32 2基因型之间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 95 .12 %～ 96 .6 0 %和 97.79%～ 98.16 %。IPTG诱导后rMOMP1和rMOMP2表达量分别占细菌总蛋白的 4 0 %和 10 %。rMOMP1和rMOMP2均能与兔抗钩体TR patocⅠ血清发生结合反应 ,免疫家兔可对上述 17株钩体产生 1∶2～ 1∶6 4MAT效价的凝集抗体。 1∶2～ 1∶16稀释的兔抗rMOMP1和rMOMP2血清均能有效地阻断钩体的黏附。结论　所有检测的钩体具有LipL32 1或LipL32 2基因。所     

问号钩端螺旋体铁离子调节蛋白A的免疫原性及保守性研究

目的克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体（L．interrogans，简称钩体）黄疸出血群赖型赖株中铁离子调节蛋白A（IRPA），研究IRPA的免疫原性和在不同钩体菌种中的保守性，探讨其在致病和疫苗研究中的意义。方法生物信息学软件分析预测IRPA的特征。构建原核表达质粒pQE31-IRPA，经IPTC诱导后用SDS-PAGE及Western blot鉴定表达情况。用表达的重组蛋白免疫BALB／c小鼠，Western blot检测其免疫原性和在不同血清型钩体中的保守性。ELISA和Western blot检测钩体全菌兔抗血清中的IRPA抗体。结果生物信息学预测结果显示，IRPA是可能位于外膜的脂蛋白，在钩体内有多个蛋白可能与之相互作用。成功克隆表达了重组质粒pQE31-IRPA，重组蛋白能刺激BALB／c小鼠产生抗体（效价为1：32000），并能与相应抗体反应，具有良好的免疫原性。在15株不同血清型的问号钩体及1株双曲钩体（L．biflex）中均可检测到重组蛋白的表达，并在钩体全菌兔抗血清中检测到其抗体。结论IRPA具有良好的免疫原性和保守性，为进一步研究其在钩体病中的作用机制及其作为候选基因疫苗的研究奠定了基础。     

骨碱性磷酸酶对婴幼儿佝偻病早期诊断的临床研究

目的探讨骨碱性磷酸酶（BALP）在婴幼儿佝偻病早期诊断中的临床意义。方法对123例维生素D（VitD）缺乏性佝偻病患儿进行BALP检测并设立正常对照组，对BALP≥250u／L者，结合临床进行血清钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（AKP）和X线比较分析。结果BALP检测具有敏感、特异、简单、快速、经济等优点。结论BALP是目前佝偻病早期诊断有价值实验方法，值得普及和推广。     

钩端螺旋体病患者血清透明质酸含量的变化及临床意义

为了观察钩端螺旋体病(下称钩体病)患者血清透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的变化,我们对82例患者的血清HA作了动态观察,并探讨其变化机制和临床意义,现报道如下。材料和方法一、检测对象:根据血清学检查和临床综合诊断诊断(显凝抗体检测)为钩体病患者82例(男56例、女26例)年龄13～72岁,平均34岁,入院时间为发病后1～8天,平均3.3天。血清学诊断标准:单份血清的显凝抗体滴度≥1:400者或双份血清之第二份血清显凝抗体滴度增高4倍以上者为阳性。38例体检健康者为对照组。     

血清CEA、CA125、CA199联合检测在肺癌诊断中的应用价值

目的 研究CEA、CA125、CA199联合检测在肺癌诊断中的应用价值,旨在为临床肺癌的早期发现及诊断提供一种快捷而又简单的方法.方法 收集2013年1月至2014年10月邢台市人民医院呼吸内科、肿瘤内科和肿瘤外科收治的住院患者338例,其中肺癌患者236例,肺部良性疾病患者102例,50例门诊健康体检者作为健康对照,检测其血清中CEA、CA125、CA199的水平.结果 血清CEA、CA199和CA125水平,肺癌组显著高于肺部良性疾病组和健康体检组.CA125诊断肺癌的灵敏度最高,特异度最低,三项联检的灵敏度显著高于任何各单项.结论 CEA,CA125和CA199可作为肺部良、恶性疾病的鉴别指标.单项肿瘤标志物诊断肺癌的灵敏度较低,三项联合检查能有效提高肺癌诊断的灵敏度,但特异度会相应降低.     

问号钩端螺旋体病人血清中LipL21抗体检测

寻找钩体属特异性保护抗原,对于研制通用型钩体疫苗及实验室诊断试剂盒均有重要价值。Cullen等首先报告了致病性问号钩体均具有属特异性lipL21脂蛋白基因。我们也曾证实我国15群15型问号钩体参考标准株均含有序列保守的lipL21基因。已知钩体病免疫保护作用主要依赖血清抗体为主的体液免疫。我们采用显微镜凝集试验(MAT)检测了156份钩体病人血清的凝集效价,并建立rLipL21-IgM/IgG-ELISAs对血清标本中LipL21的IgG和IgM型抗体进行了检测。     

一种特异、敏感、快速的ELISA检测微量IgG水平

IgG是人血清中一种主要且含量最多的免疫球蛋白,占血清免疫球蛋白总量的75%。正常人血清中IgG的平均含量约为10mg/ml。因此,在测定方法上不需要非常敏感的方法,一般用环状免疫单扩散法即可测出。但在某些情况或某些分泌液中的IgG含量很少,例如脑脊液中的IgG仅为血清中的1/500,又如支气管灌洗液、眼泪等分泌液中,IgG的含量也很少。此外,在科研中有时也需要检测极微量的IgG水平。为此,本文介绍一种特异、敏感、快速、简便、价廉、安全的酶联免疫吸附试验     

14株钩端螺旋体混生株的发现

云南省孟连县是钩体血清群(型)较为复杂的地区之一,至今已检出14个血清群、22个血清型。作者在复核分离自该县的75株钩体菌株群别时,发现14株钩体的菌群与新分离时的鉴定发生了变更。14株钩体中,12株分离自病人血液、2株分离自鼠肾。第一次初定与第二次复定的时间相隔一年以后,菌群发生了变更,时隔半年后,又做了第三次复检工作,结果与第二次相同。从14株钩体三次定群结果发现:14株钩体均为混生株,混生率为18.7％,其中:黄疸出血群1株变为赛罗群;爪哇群6株变为波摩那群1株、赛罗群4株、巴达维亚群1株;致热群3株变为赛罗群2株、七日热与赛罗群交叉1株;赛罗群3株变为爪哇群2株、巴达维亚群1株;塔拉索夫群1株变为巴达维亚群巴叶赞型     

蛋白芯片检测结核分枝杆菌对肺结核病的临床诊断价值

肺结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病,是我国重点控制的重大疾病之一。目前结核病的诊断方法有：痰涂片、结核菌培养、结核菌基因检测、胸部X线和CT等,但这些方法存在特异性差或需要时间长、敏感性低等缺点。因此,敏感、特异、快速的检测方法对肺结核病的诊断与鉴别十分重要。     

环媒恒温扩增(LAMP)技术在寄生虫检测中的应用

环媒恒温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种快速、简单、敏感、特异的核酸扩增方法.作为一种新的核酸扩增方法,LAMP法被逐渐应用于寄生虫、病毒、微生物的检测,是最有发展前景的快速诊断方法之一,本文就LAMP技术在寄生虫检测方面的应用发展情况进行综述.     

问号赖型钩体017株与七日热型钩体56610株内鞭毛蛋白基因的克隆及序列分析

目的通过不同型钩体DNA序列分析筛选钩体基因疫苗的候选株,并从基因水平解释钩体血清型的特异性.方法(1)酚、氯仿抽提法提取017株与56610株钩体基因组DNA.(2)分别以017株与56610株钩体基因组DNA为模板,PCR法扩增内鞭毛蛋白(flaB)基因.(3)T/A快速克隆法将两个flaB基因的PCR产物连接与Teasy-vector载体.(4)α-互补、PCR法初步筛选重组质粒.(5)碱裂解法小量提取质粒、酚切分析进一步鉴定重组质粒,确定外源基因插入方向.(6)双脱氧终止法对重组质粒的克隆化flaB基因进行测序.(7)应用软件对所测序列进行酶切位分析及编码蛋白的预测.(8)与已发表的钩体内鞭毛基因进行比较.结果经鉴定获得了两个重组质粒pDHTF017与pDHTF610.pDHTF017中flaB基因为反向插入,pDHTF610中的flaB基因为正向插入.两个重组外源flaB基因长度均为852bp,编码蛋白含283个氨基酸,预测分子量为31.5kD左右.两个基因的限制性内切酶位点相似,含多个常见酶切位点.几个血清型钩体的flaB基因比较发现型间同源性很高(90%-99%),变异通常发生在固定位点,各型选择不同的固定位点.结论(1)重组质粒pDHTF017与pDHTF610中的外源基因均为钩体的一种flaB基因;(2)flaB基因保守性强,可作为基因疫苗的靶基因;(3)七日热型钩体56610株的flaB基因有望成为核心抗原基因,可进行钩体疫苗的研究开发.     

EHFV微量细胞病变中和试验方法的建立及其在中和抗体检测中的应用

本文报道了一种新的流行性出血热病毒中和抗体检测方法即微量细胞病变中和试验。该法利用流行性出血热病毒在Vero细胞上繁殖时可引起细胞病变的特性，将32－100CCID50病毒液与等量待检出血清混合，37℃中和1．5小时后种入微量培养板孔中的细胞悬液中，培养6－8天后即可判定结果，用该法检测流行性出血热病人血清和灭活疫苗免疫机体后和中和抗体，获得了与空斑减少中和试验法基本一致或者更加敏感的结果。该法简单，特异、准确、敏感、快速、它的推广应用对加我国流行必出血热的血清分型和流行病学调查及疫苗制备毒株的筛选等基础研究工作均有较大的意义。     

基因芯片技术在常见呼吸道病毒感染早期诊断上的应用

目的为了证实基因芯片呼吸道套组诊断试剂在常见呼吸道病毒感染早期诊断上的应用价值。方法采用基因芯片呼吸道套组诊断试剂对180例发病初期的呼吸道感染病人的咽拭子标本进行检测,同时对上述病人进行急性期和恢复期血清标本的采集并进行血清抗体的检测,并以此作为金标准对基因芯片法和传统的组织培养法进行比较分析。结果基因芯片呼吸道套组诊断试剂特异度良好,灵敏度高于传统实验方法。结论采用基因芯片技术可以在短时间内直接从病人的咽拭子标本中同时检测8种呼吸道病原体的感染,实验周期短,灵敏性、特异性高于其他实验方法,特别适合呼吸道疫情处理和临床检测,是一种简便、快捷、灵敏、特异的检测方法。     

基因芯片技术在常见呼吸道病毒感染早期诊断上的应用

目的为了证实基因芯片呼吸道套组诊断试剂在常见呼吸道病毒感染早期诊断上的应用价值。方法采用基因芯片呼吸道套组诊断试剂对180例发病初期的呼吸道感染病人的咽拭子标本进行检测,同时对上述病人进行急性期和恢复期血清标本的采集并进行血清抗体的检测,并以此作为金标准对基因芯片法和传统的组织培养法进行比较分析。结果基因芯片呼吸道套组诊断试剂特异度良好,灵敏度高于传统实验方法。结论采用基因芯片技术可以在短时间内直接从病人的咽拭子标本中同时检测8种呼吸道病原体的感染,实验周期短,灵敏性、特异性高于其他实验方法,特别适合呼吸道疫情处理和临床检测,是一种简便、快捷、灵敏、特异的检测方法。