文昌鱼酸性磷酸酶在变性剂变性时的构象及活力变化的研究

十二烷基硫酸锂(LDS),脲(Urea)等变性剂作用于ACPase,以荧光法跟踪该酶的构象变化,随着LDS浓度提高荧光强度下降但发射峰没有位移,而在Urea中,荧光强度随着变性剂浓度上升而下降,发射峰明星红移,由330～350nm,分别测定其变性及失活的动力学常数,比较酶构象及催化活力的关系,结果表明:变性与失活为快相和慢相的一级反应,在LDS作用下,失活速度大于变性速度,属于快活力慢构象变化的模式,Urea的作用为变性速度大于失活速度,属于快构象慢活力变化的另一种模式,Urea作用后的变性酶,在测定其活力的10min内,没有观察到底物对变性酶的修复作用,以及稀释对变性酶的复活效应。     

猕猴桃蛋白酶在胍中“慢构象快活力变化”现象

比较了猕猴桃蛋白酶(Actinidin)在盐酸胍中变性时的荧光变化与活力变化的关系。当胍浓度为0.1 mol/l时,酶的最大荧光发射波长λ_(max)不变,荧光强度上升。此时酶被激活,活力提高25％,激活速度比变性速度快5.0倍。胍浓度逐渐增大,酶λ_(max)略红移,4.0 mol/l时达336 nm。但荧光强度降低,酶表现为快相和慢相失活的二个一级反应,失活速度常数比变性速度常数快 1～3个数量级。Actinidin 的激活与失活现象显示这可能与活性部位相关的 Trp 微环境的构象变化有关。胍变性结果指出 Actinidin 构象变化速度小于活力变化速度,这代表酶变性反应时慢构象变化快活力变化的一种模式。     

锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在甲醛溶液中的失活动力学研究

研究甲醛对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAGase EC 3．2．1．52）活力的影响．结果表明：随着甲醛浓度的增大．酶活力呈指数下降．导致酶活力下降50％的甲醛浓度（失活半衰期，IC50）为0．60mol／L。酶在低浓度甲醛溶液中的失活过程显示为可逆失活．用底物反应动力学方法考察酶在甲醛溶液中的失活动力学．测定游离酶（E）和酶-底物络合物（ES）在甲醛溶液中失活的微观速度常数。并比较游离酶（E）和酶-底物络合物（ES）的正向反应的微观失活速度常数k＋0〉k’＋0．表明底物对酶被甲醛的失活作用有一定的保护作用．正向的失活速度常数k＋0和k’＋0随着甲醛浓度的增大而增大．而逆向的速度常数k-0随着甲醛浓度的增大而减小．表明随着甲醛浓度的增大。酶变性越来越快。而活力恢复越来越难．     

文昌鱼碱性磷酸酶的脲变性作用的动力学研究

本文对文昌鱼碱性磷酸酶(ALPase)的脲变性作用进行研究,结果表明:浓度低于5M的脲对酶的失活是可逆的,而高浓度脲的失活作用是不可逆的,8M脲对酶的失活过程可以分为二个阶段,快速反应及慢速反应,其一级失活速度常数分别为0.242(min~(-1))和0.039(min~(-1)),酶在8M脲中的半寿期为8min.低浓度脲对酶活力的影响表现为混合型的抑制机理.在含6M脲的反应体系中,文昌鱼ALPase的表观失活速度常数为0.057(min~(-1))而牛肠ALPase的表观失活速度常数为0.747(min~(-1)),即前者对脲的作用较稳定.     

脲对果菠萝蛋白酶的变性与失活动力学

以脲为变性剂,以荧光光谱为监测手段,对果菠萝蛋白酶(Fruit bromelain)的分子构象变化进行研究,酶的荧光强度随脲浓度增大而递增,发射峰出现红移。荧光偏振在 230～240 nm及 260～290 nm 出现二个负峰,后者较为显著,并随脲浓度增大而加剧。脲对酶水解N-苄氧羰酰 L-赖氨酸对硝基酚酯(CBZ-Lys·pNP)活力的影响,表现为非竞争性抑制类型;比较脲对游离酶(E)及结合酶(ES)的失活速度常数。结果二者相等,底物不表现保护作用。测定酶在不同浓度脲中的变性速度常数和失活速度常数,比较了酶的构象变化及催化活力的关系,酶的失活速度常数比变性速度约大6～16倍。说明酶活性中心对脲的敏感性,酶活力的表现很大程度上依赖于酶构象的稳定性和完整性。     

反应介质对脂肪酶稳定性的影响

脂肪酶ＬｉｐｏｚｙｍｅＩＭ在有机溶剂中的热稳定性显著提高．在水溶液中，热处理温度高于５０℃后，其催化甘油三酯水解的活力迅速下降．温度升至６０℃时，水解活力仅残存１３．６％，温度高于７０℃该酶完全失活。而在有机溶剂正庚烷中，温度高达８５℃仍表现出较高的活性。在有机溶剂中，ＬｉｐｏｚｙｍｅＩＭ能抵抗超声辐射的变性作用。经同样的超声辐射处理后，正己烷中ＬｉｐｏｚｙｍｅＩＭ的酯水解活力仅损失１１．８％，而在水溶液中其活力却损失了９５．９％。     

文昌鱼酸性磷酸酶在变性剂变性时的构象及活力变…

十二烷基硫酸锂（ＬＤＳ），脲（Ｕｒｅａ）等变性剂作用于ＡＣＰａｓｅ，以荧光法跟踪该酶的构象变化，随着ＬＤＳ浓度提高荧光强度下降但发射峰没有位移，而在Ｕｒｅａ中，荧光强度随着变性剂浓度上升而下降，发射峰明显红移，由３３０－３５０ｎｍ。分别测定其变性及失活的动力学常数，比较酶构象及催化活力的关系，结果表明：变性与失活为快相和慢相的一级反应，在ＬＤＳ作用下，失活速度大于变性速度，属于快活力慢构象变化的…     

乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明．酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降，乙醇浓度40％可使酶活力完全丧失．说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用，JG50为13％．含较低浓度乙醇(30％)的失活过程是可逆的反应．测定乙醇对酶的失活作用机理．结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制，说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用．应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化，发现乙醇对酶分子构象有显的影响，酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强．荧光发射峰逐渐发生红移．紫外吸收光谱在276nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强．这些结果表明．酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化．     

十二烷基硫酸钠对猕猴桃蛋白酶的变性作用

应用光谱法观测酶的结构变化,紫外差光谱显示在233nm有一较明显的差吸收负峰,在286nm、300nm左右有不大的负峰和在265nm的正峰;荧光谱显示327nm的相对荧光强度随SDS浓度的增高而递减;发射峰位置红移,酶受SDS>4.1mmol/1作用1h,可引起310nm新荧光发射肩。动力学资料表明,SDS对酶的变性过程为一级反应;酶的失活分快慢相,呈现二个一级反应,同时测定在SDS作用下actinidin的变性与失活速度,表明酶的失活速度大于变性速度,似可认为低浓度SDS能使结构域相错开,从而敏感地改变活性部位的微区结构,导致酶快速失活,提高SDS浓度则使酶的结构域发生构象变化,引起光谱法所显示的特征。     

α－淀粉酶在脲变性过程中构象与活性的变化

本文利用蛋白质内源荧光和紫外吸收变化，研究了细菌α－淀粉酶在脲变性过程中的构象变化，并且与失活过程进行了比较．α－淀粉酶脲变性与失活的动力学数据表明，变性是单相过程过程，而失活是一个双相过程，快相失活的速度常数比变性速度常数至少大一个数量级．     

文昌鱼酸性磷酸酶在甲醇溶液中的构象与活力变化

文昌鱼酸性磷酸酶（ＡＣＰａｓｅ，Ｅ．Ｃ３．１．３．２）是一种含有铁离子的金属酶，其可见光谱中５００ｎｍ的吸收峰以及荧光５１５ｎｍ的发射峰为该酶分子含铁的特征峰，与酶活力关系密切．通过荧光发射光谱和紫外可见光谱对该酶在不同浓度甲醇溶液中的构象与活力变化进行研究．不同浓度（Ｖ／Ｖ）的甲醇对酶活力有明显的抑制作用，动力学分析表明甲醇对酶的抑制为非竞争性抑制，其抑制常数为２０％．还研究了在甲醇存在下ＡＣＰａｓｅ活力中心的构象与活力变化，结果表明其构象变化快于活力变化．     

有机溶剂对直接黄液体染料溶解度的影响

通过加入去离子水和单独使用乙二醇、丙三醇配制成液体染料,在室温下测试它们的吸光度和最大吸收波长,从而了解这两种有机溶剂单独使用时对染料溶解度的影响,并尝试把乙二醇、丙三醇和乙醇混合使用,找出一个使染料溶解度达到最大的配方.实验结果表明混合使用乙二醇、丙三醇和乙醇对提高染料溶解度的效果最好.配方:黄色染料1 g.去离子水30 mL.乙二醇6 mL,丙三醇3 mL,乙醇6 mL.     

汾酒大曲根霉糖化酶的研究——Ⅳ在有机溶剂中的动力学与热力学特征

我们用一株根霉(Rhizopus sp.)所产的葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase,EC3.2.1.3)经本实验室所创的分离纯化法进行纯化,达到电泳纯。用该酶研究其在有机溶剂乙二醇,甲醇,1,4-二氧六环和四氢呋喃等存在下的热力学和动力学特征,并与相应的溶液酶作比较,讨论了溶剂酶(有机溶剂存在下的酶)和溶液酶在催化活性及分子构象方面的特征。     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活力变化的关系

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位构象变化与活力变化的关系，酶于０．６ｍｏｌ／ＬＧｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２～２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系     

Comparison of Inactivation and Unfolding of Calf Intestinal Alkaline Phosphatase in Guanidinium Chloride Solution

IntroductionCalf intestinal alkaline phosphatase(CIP,EC3 .1 .3 .1 ) is a metalloenzyme which catalyzes thenonspecific hydrolysis of phosphate monoesters[1 ] .The X-ray crystal structure of bacterial alkalinephosphatase has been reported to0 .2 nm resolutionin the presence of inorganic phosphate[2 ] . Theactive site is a pocket containing a tight cluster oftwo zinc ions (0 .3 9nm separation) and onemagnesium ion (0 . 5 and 0 .7nm from two zincions) .CIP also contains zinc and magnesium ions…     

间歇萃取精馏分离乙醇-水萃取剂的评选研究

在间歇萃取精馏装置中,分别进行了以乙二醇、乙二醇+醋酸钾、乙二醇+氢氧化钠、乙二醇+氢氧化钾4种溶液为萃取剂,间歇萃取精馏分离乙醇-水的精馏操作。研究了原料浓度、溶剂和原料比、不同的溶剂对分离效果的影响,从而确定了间歇萃取精馏分离乙醇-水的最佳萃取剂。     

水-有机溶剂混合体系中辣根过氧化物酶的催化反应

运用分光光度法和傅立叶变换红外光谱研究了辣根过氧化物酶（HRP）在甲醇、乙腈和二氧六环与水互溶溶剂体系中的性质变化,研究结果显示不同种类和含量的有机溶剂都使HRP有不同程度的失活,HRP在有机溶剂中的米氏常数（Km）增大了,但HRP的活性点结构没有遭到破坏,只是将活性部位从一个包埋于酶分子内部的、疏水的环境暴露于极性的有机溶剂中．傅立叶变换红外光谱研究结果显示在有机溶剂中酶分子的二级结构发生了变化,推测可能是酶在有机溶剂中的活性降低的原因．     

Kinetics of Inhibition of Polyphenol Oxidase Obtained from Tobacco Nicotiana Tobacum

In this study, the kinetics of inhibition of polyphenol oxidase by L-cysteine has been investigated. The inhibition of tobacco polyphenol oxidase was studied using the progress-of-substrate-reaction method proposed by Tsou, following the substrate reaction during irreversible inhibition of the enzyme activity. Analysis of the inhibition kinetics shows that inhibition occurs by an irreversible and non-complexation reaction. The microscopic rate constants were determined for reaction of the inhibitor both with the free enzyme and with the enzyme-substrate complex. The results show that the presence of the substrate has a significant protective effect of the enzyme against inactivation by L-cysteine.     

砂仁提取物对蘑菇酪氨酸酶活力的抑制效应

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1)是生物体合成色素的主要酶.以地道阳春砂仁(Amomum)果实为材料,经过超声提取、萃取、树脂AB-8分离纯化,得到对蘑菇酪氨酸酶活力有显著抑制作用的砂仁30％(体积分数)乙醇提取物.研究该提取物对蘑菇酪氨酸酶的效应,结果表明,砂仁果实乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶活力和二酚酶活力都有明显的抑制作用.对单酚酶的作用,当质量浓度达到10.5 μg/mL时,可使单酚酶的稳定态活性酶活力下降40％,迟滞时间延长了3.12倍;对二酚酶活力的抑制作用也呈现浓度依赖性关系,其半抑制率浓度(IC50)为64 μg/mL,抑制作用属于可逆效应,抑制类型为混合型,抑制常数KI和KIS分别为41.85和98.51 μg/mL.这些数据为新型的酪氨酸酶的开发和寻找新型的食品保鲜剂和杀虫剂提供基础.