不同浓度美罗培南对临床分离的鲍氏不动杆菌生物膜形成能力的影响

目的 探究不同浓度美罗培南对临床分离的鲍氏不动杆菌生物膜形成能力的影响。方法 收集2017年9月-2020年9月海南省老年病医院肺部感染患者临床样本分离的鲍氏不动杆菌25株，采用琼脂倍比稀释法检测美罗培南最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),分别以不添加美罗培南(空白)及美罗培南1/4 MIC、1/2 MIC、MIC和MBC绘制鲍氏不动杆菌生长曲线，采用结晶紫半染法和激光扫描共聚焦显微技术检测鲍氏不动杆菌生物膜形成的能力，实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测生物膜形成相关调控基因的表达。结果 鲍氏不动杆菌对美罗培南的MIC为2μg/ml, MBC为32μg/ml。24 h的生长周期中，随着给药浓度的增加，对鲍氏不动杆菌生长的抑制作用增强。与空白组比较，1/2 MIC、MIC及MBC组各孔OD_(570nm)值降低，且随药物浓度的增加呈降低趋势(P<0.05)。各组绿色荧光均呈先增强、后减弱的变化趋势，空白组和MBC组分别在24 h和48 h时绿色荧光最强。与空白组比较，1/2 MIC、MIC及MBC组鲍氏不动杆菌bap、filA及pbp-1a基因相对表达量均降低，且随药物浓度的增加呈降低趋势(P<0.05)。结论 美罗培南对鲍氏不动杆菌的生长和生物膜的形成有明显的抑制作用，可能与下调bap、filA及pbp-1a基因表达有关。     

复方溶菌酶对口腔病原菌抗菌效果的评价

目的测定复方溶菌酶对变形链球菌、血链球菌、金黄色葡萄球菌的抗菌效果,评价其对口腔病原菌的防治能力。方法用微量液基稀释法测定复方溶菌酶对变形链球菌、血链球菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度。结果复方溶菌酶对变异链球菌、血链球菌、金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度分别为1.25、0.625和0.312mg/ml,对变异链球菌、血链球菌、金黄色葡萄球菌最小杀菌浓度分别为2.5、2.5和0.625mg/ml。结论复方溶菌酶可有效抑制并杀灭变形链球菌、血链球菌和金黄色葡萄球菌。     

不同防治方法对龋病患儿口腔链球菌数量的影响

目的探讨不同防治方法对龋病患儿口腔链球菌细胞数量的影响。方法随机抽样法选取400名学龄前儿童为研究对象,根据不同防治方法将其分为对照组(健康宣教,222名)与观察组(氟防龋,178名),跟踪随访1年,间隔6个月行口腔检查1次,比较2组龋病新增率,并于防治前、防治后6个月、12个月、24个月通过实时荧光定量PCR法测定各组无龋病儿童链球菌细菌数量。结果观察组末次随访龋病新增率显著高于对照组(P0.05);与防治前比较,2组无龋病儿童防治后6个月、12个月总链球菌、口腔链球菌数量均显著减少(P0.05);与对照组比较,观察组防治后6个月总链球菌、口腔链球菌、唾液链球菌、变异链球菌数量显著少,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,观察组防治后24个月变异链球菌数量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论健康宣教、氟化物使用均能有效预防龋病发生,减少口腔链球菌细菌数量,其中氟防龋效果更明显。     

抗变异链球菌免疫球蛋白对学龄前儿童乳牙龋的预防效果及对口腔链球菌菌群的影响

目的分析抗变异链球菌免疫球蛋白对学龄前儿童乳牙龋的预防效果及对口腔链球菌菌群的影响。方法选取2018年1-12月台州市一幼儿园的180名儿童,分为3组。A组(58名)应用抗变异链球菌免疫球蛋白喷剂防龋,B组(59名)全口涂多乐氟防龋,C组(63名)不给予任何处理。比较3组儿童防龋治疗前后的患龋率、龋均、龋面均。应用PCR法测定防龋治疗前后儿童唾液标本中唾液链球菌、戈登链球菌、血链球菌、口腔链球菌、变异链球菌菌群,观察链球菌菌群数量变化。结果防龋治疗后,3组儿童患龋率比较差异有统计学意义(P0.05)。与防龋治疗前相比,C组儿童防龋治疗后患龋率提高(P0.05)。防龋治疗后,3组儿童龋均和龋面均比较差异均有统计学意义(均P0.05)。与防龋治疗前相比,3组儿童防龋治疗后龋均和龋面均提高(均P0.05)。防龋治疗后,3组儿童口腔链球菌菌群数量比较差异均有统计学意义(均P0.05)。与防龋治疗前相比,A组儿童防龋治疗后唾液链球菌、血链球菌、变异链球菌水平显著降低,口腔链球菌、戈登链球菌水平显著升高(均P0.05),B组和C组儿童防龋治疗后变异链球菌显著升高(均P0.05)。防龋治疗后,A组儿童唾液链球菌、血链球菌、变异链球菌水平显著低于B组和C组(均P0.05),口腔链球菌、戈登链球菌水平均显著高于B组和C组(均P0.05)。结论抗变异链球菌免疫球蛋白和氟防龋均有助于预防学龄前儿童乳牙龋的发生,但抗变异链球菌免疫球蛋白可有效抑制致龋菌,调节口腔链球菌菌群,远期防龋效果更好。同时,抗变异链球菌免疫球蛋白防龋操作简单、方便,易为广大儿童家长所接受,更适宜大范围的普及应用。     

肺炎链球菌毒力基因表达差异性及对大环内酯类耐药性分析

目的探讨临床分离各表型肺炎链球菌毒力基因表达的差异性并分析其对青霉素和大环内酯类抗菌药物的耐药性。方法收集2012年12月-2016年12月不同来源的肺炎链球菌111株,分为侵袭性组和非侵袭性组,采用荚膜肿胀实验进行血清学分型,聚合酶链反应(PCR)和荧光定量PCR检测psaA、ply、lytA、cbpA、nanA毒力基因,最低抑菌浓度(MIC)法检测药物敏感性并用PCR检测相关耐药基因(PBP1A、PBP2B、PBP2X,ermB、mefA)。结果 111株肺炎链球菌共检出24个血清型/群,流行血清型为:19F、19A、14、23F、6A、6B。所有菌株5个毒力基因的携带率基本均接近100%;侵袭性菌株nanA、lytA、psaA、ply 4个毒力基因在转录水平高于非侵袭性菌株,此外19F和6A/B血清型中侵袭性菌株这4个毒力基因转录水平也高于非侵袭性组;nanA、psaA、cbpA和ply在3型中的转录水平高于其他血清型。血液与痰液标本来源的肺炎链球菌毒力基因转录水平有一定差异但无统计学意义,脑脊液来源与血液,痰液比较,转录水平增高;脑膜炎肺炎链球菌青霉素非敏感率为70.00%(7/10),非脑膜炎肺炎链球菌青霉素非敏感率为18.81%(19/101),90.09%(100/111)菌株同时对红霉素和克林霉素耐药,主要携带ermB基因。结论常见5种毒力基因在肺炎链球菌中普遍存在,但不同致病类型、不同血清型和不同来源菌株基因表达水平存在差异,侵袭性3型和脑脊液来源的菌株毒力较强,且该地区肺炎链球菌对青霉素、红霉素和克林霉素耐药率较高,尤其是脑膜炎肺炎链球菌,应引起临床重视。     

脱氧核糖核酸酶deoC对变形链球菌生物膜形成的影响

目的研究分析deo C蛋白对变形链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)生物膜形成的影响。方法建立变形链球菌成熟生物膜模型,将变形链球菌UA159分别接种于两种不同的BHI培养液中厌氧培养,实验组加入含有deo C蛋白的BHI+1%蔗糖培养基,对照组加入等体积的BHI+1%蔗糖培养基。运用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察各组生物膜中活菌数及其厚度。结果实验组生物膜菌量明显减少,呈条状散在分布;对照组可见生物膜细菌致密,且大部分为活菌。实验组的变形链球菌生物膜厚度及内层、中间层与外层的活菌百分比均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 deo C蛋白可能通过分解变形链球菌生物膜形成的胞外基质e DNA而抑制变形链球菌的生物膜形成;通过过表达deo C蛋白,减少变形链球菌在口腔软硬组织或修复体表面的附着,降低其对抗菌药物的耐受性可能成为龋病治疗的新方法。     

荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染方法的建立

目的 建立Taqman探针法荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染的实验室诊断方法.方法 针对肺炎链球菌自溶素基因设计引物及探针,建立荧光定量PCR Taqman探针法检测肺炎链球菌感染.采用肺炎链球菌标准株,构建质粒,用质粒构建标准品,扩增标准品,绘制标准曲线并检验新建荧光定量PCR的敏感性,采用本实验冻存其他菌DNA样本,检测其特异性;采集2015年9月至2015年12月份北京地区家5家医院儿童门诊或病房,诊断为呼吸道感染患儿的咽拭子标本133例,对新建荧光定量PCR法进行临床样本的验证.结果 绘制了荧光定量PCR Taqman探针法检测肺炎链菌感染的标准曲线;新建荧光定量PCR可检测的肺炎链球菌最低拷贝数为10copies/μL;新建荧光定量PCR可成功区分几种病原体DNA,具有较好特异性;采用新建荧光定量PCR检测临床样本132例,其中肺炎链球菌阳性25例,阳性率为18.94%.结论 新建立的荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染的实验室诊断方法具有较高的敏感性和特异性,可用于临床样本的检验.     

蔗糖对儿童变异链球菌临床分离株黏附能力的影响

目的 分析蔗糖对不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离株不同基因型菌株黏附能力的影响.方法 从不同龋敏感的3～5岁学龄前儿童口腔变异链球菌中选取56株变异链球菌临床分离株,采用Hamada的分光光度比浊法分析不同浓度蔗糖对变异链球菌临床分离株不同基因型菌株的黏附能力的影响.结果 在无蔗糖存在的情况下,不同龋敏感儿童口腔中变异链球菌临床分离株黏附比存在差异,高龋组＞中龋组＞无龋组,且差异有统计学意义(P＜0.05).同一龋敏感儿童口腔中不同基因型变异链球菌临床分离株黏附比也存在差异,基因型越多,黏附比越大,差异有统计学意义(P＜0.05).在不同蔗糖浓度下,不同龋敏感儿童口腔中变异链球菌临床分离株黏附比存在差异,4％组＞1％组＞0.5％组,即黏附比随蔗糖浓度升高而增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型菌株黏附能力存在差异,龋敏感性越高,基因型越多,黏附能力越强.蔗糖对其黏附能力具有明显的影响,蔗糖浓度越高,黏附能力越强,且明显大于无蔗糖组.     

生物膜形成促进临床耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA-23和AdeABC外排泵基因的表达

目的通过生物膜对苯唑西林酶(OXA)和AdeABC外排泵基因表达的影响研究,揭示生物膜的形成对OXA和AdeABC外排泵相关耐药机制的影响,探讨生物膜在鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药方面的作用机制及作用方式。方法微量滴定板法制备生物膜模型及定量实验;多重PCR技术对OXA及AdeABC外排泵基因进行检测;实时荧光定量PCR技术对不同状态下OXA-23、AdeB基因表达量进行检测;E-test方法对产膜与非产膜菌株亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC)进行测定。结果106株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中产生物膜和不产生物膜菌株分别占67.9%和32.1%;各耐药基因检出率分别为OXA-23:99.1%;OXA-24:0.1%;OXA-51:100%;OXA-58:0;AdeA、AdeB和AdeC均为98.1%;生物膜状态下的OXA-23、AdeB基因的相对表达量明显高于普通肉汤培养和浮游状态下基因的相对表达量(P0.05);产膜比非产膜菌株亚胺培南MIC更高,P0.05。结论鲍曼不动杆菌的生物膜形成能够促进OXA-23和AdeABC外排泵基因的表达,从而增强鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性。     

一起群体发热事件的病因研究

目的查找一起群体发热事件的病原体。方法采集到的咽拭子直接接种到血琼脂平板做细菌培养,然后挑取可疑菌落进行生化反应鉴定和荧光定量PCR检测。结果从13份咽拭子中8份检出乙型溶血性链球菌。结论乙型溶血性链球菌是此次引起群体发热事件的病原体     

Assessment of eugenol inhibitory effect on biofilm formation and biofilm gene expression in methicillin resistant Staphylococcus aureus clinical isolates in Egypt

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) biofilm infection is a major threat in Healthcare facilities. The search for biofilm inhibitors is essential to overcome the antibiotic resistance. Eugenol is a phyto-compound that possesses many biological properties. In this study, the aim was to estimate the effect of eugenol on biofilms of MRSA through quantifying the level of gene expression of three genes (IcaA, IcaD and SarA) involved in biofilm development.. Fifty MRSA biofilm producers collected from the microbiology lab at Theodor Bilharz Research Institute were incubated with different concentrations of eugenol for 24 h. The minimum inhibitory concentration of eugenol (MIC) that eradicates the biofilms growth was detected. mRNA was extracted from all isolates before and after the application of eugenol at 0.5 x MIC, and then subjected to quantitative real-time PCR (qPCR). Results showed that fourteen isolates out of 50 (28%) exhibited intermediate biofilm formation ability, and 36 out of 50 (72%) were strong biofilm producers. The MIC values of eugenol for MRSA ranged from 3.125% to 0.01%. The mean values of MIC in both strong and intermediate biofilm forming MRSA isolates were statistically comparable (p = 0.202). qPCR results revealed that the levels of expression of the studied genes IcaA, IcaD, and SarA were decreased after eugenol treatment when compared with their corresponding values before treatment (p = 0.001). Eugenol inhibited the formation of biofilm of MRSA isolates, indicating it could be used to control infections associated with MRSA biofilms.     

利用PCR方法检测感染性心内膜炎患者血液中的变异链球菌

目的检测感染性心内膜炎患者血液中的变异链球菌，探讨两者之间的关系。方法提取26名感染性心内膜炎患者和14名正常人血液样本中的细菌DNA，进行变异链球菌特异性及细菌通用引物pCR扩增。结果26份感染性心内膜炎患者血液中变异链球菌检出率为34．6％，大于正常组患者中的检出率（p〈O．05）；其他细菌检出率为92．3％，与正常人群无差别（p〉0．05）。结论感染性心内膜炎患者血液中存在着大量的细菌，其发病与变异链球菌有关。     

Effects of 3-(4'-geranyloxy-3'-methoxyphenyl)-2-trans propenoic acid and its ester derivatives on biofilm formation by two oral pathogens, Porphyromonas gingivalis and Streptococcus mutans

The aim of this study was to investigate the effect of 3-(4'-geranyloxy-3'-methoxyphenyl)-2-trans propenoic acid, active principle isolated from Acronychia baueri Schott, and its ester derivatives on biofilm formation by two important oral pathogens, Porphyromonas gingivalis and Streptococcus mutans. The parent acid and conjugates with vanillic acid, 2-hydroxynaphthoquinone and guaiacol caused a significant and reproducible inhibition of P. gingivalis biofilm formation. This effect could be related to the ability of the compounds to inhibit bacterial growth. These compounds also efficiently caused a reduction of biofilm formation by S. mutans, a phenomenon not related to growth inhibition. These data suggest that 3-(4'-geranyloxy-3'-methoxyphenyl)-2-trans propenoic acid and some of its ester derivatives may have a therapeutic/preventive potential for oral infections.     

茶树精油对铜绿假单胞杆菌生物膜的抑制作用

目的 观察茶树精油对铜绿假单胞杆菌生物膜(BF)的抑制作用.方法 采用二倍稀释法测定茶树精油对铜绿假单胞杆菌的最小抑菌浓度(MIC),以一次性输液管和微孔滤膜作为生物膜吸附载体,用改良后的Brown平板连续培养法制备铜绿假单胞杆菌生物膜体外模型,采用光学高倍显微镜连续观察生物膜的形成,采用扫描电子显微镜进行生物膜结构观察和鉴定,以琼脂平板菌落计数法测定茶树精油对受试菌生物膜的抑制效果.结果 茶树精油对铜绿假单胞杆菌的MIC(孟乙烯4-ol浓度含量)为9.6μg/ml; 0.5倍MIC (4.8 μg/ml)、1倍MIC(9.6 μg/ml)虽能使成熟铜绿假单胞杆菌生物膜菌落数呈梯度性减少,但不能完全清除生物膜细菌,而2倍MIC(19.2 μg/ml)对细菌生物膜作用20 h后可完全清除生物膜细菌,3倍MIC(28.8μg/ml)则可在4h内完全清除生物膜.结论 茶树精油对铜绿假单胞菌生物膜有清除效应,可抑制生物膜形成,但需进一步研究验证.     

变形链球菌中釉原蛋白序列在龋病预防中的矿化机理初探

目的 探讨变形链球菌中的釉原蛋白序列在龋病脱矿、矿化过程中作用及分子机理。方法 体外重组、纯化变形链球菌和正常人釉基质中的釉原蛋白功能片段,比较其结构和功能的异同,从蛋白质量、自组装形态、体外成核能力和结晶形态等方面逐一分析区别。结果 二者单体形态和大小类似（3～5 nm）,都能初级组装为纳米小球,在变形链球菌中纳米球相互重叠形成网状的纳米链,而人类样本中纳米球端端相接组合成规律的纳米链。结论 分子水平的结构差异令二者引导形成羟基磷灰石晶体质地和形态大相径庭:在变形链球菌组中杂乱无章、表面粗糙;人釉原蛋白组中规则平行排列、表面致密。此发现对龋病的病因学探讨和预防及釉质再生提出了新的切入点和思路。     

肺炎链球菌感染研究进展

肺炎链球菌（S.pn）作为细菌性肺炎、中耳炎、脑膜炎和败血症的主要病原体，其感染一直以来是全球不可忽视的健康问题。近年来，肺炎链球菌毒力和耐药性的不断增强，对公共健康的威胁越来越大。PCR和基因测序等基因组领域新的实验室诊断方法逐渐受到重视，本文旨在通过对肺炎链球菌的病原学、黏附和侵袭方式、毒力因子以及现有实验室诊断方法和防治手段进行分析，从而为深入理解肺炎链球菌以及寻找有效的防治措施提供参考。     

The MiiA motif is a common marker present in polytopic surface proteins of oral and urinary tract invasive bacteria

Many surface virulence factors of bacterial pathogens show mosaicism and confounding phylogenetic origin. The Streptococcus gordonii platelet-binding GspB protein, the Streptococcus sanguinis SrpA adhesin and the Streptococcus pneumoniae DiiA protein, share an imperfect 27-residue motif. Given the disparate domain architectures of these proteins and its association to invasive disease, this motif was named MiiA from Multiarchitecture invasion-involved motif A. MiiA is predicted to adopt a beta-sheet folding, probably related to the Ig-like fold, with a symmetrical positioning of two conserved aspartic residues. A specific hidden Markov model profiling MiiA was built, which specifically detected the motif in proteins from 58 species, mainly in cell-wall proteins from Gram-positive bacteria. These proteins contained one to ten MiiA motifs, which were embedded within larger repeat units of 70–82 residues. MiiA motifs combined to other domains and elements such as coiled-coils and low-complexity regions. The species carrying MiiA-proteins included commensals from the urogenital tract and the oral cavity, which can cause opportunistic endocarditis and sepsis. Intra-protein MiiA repeats showed a complex mixture of orthologal, paralogal and inter-species relationships, suggestive of a multistep origin. Presence of these repeats in proteins involved in oligosaccharide recognition and lifestyle of species suggest a putative function for MiiA repeats in sugars binding, probably those present in receptors of epithelial and blood cells. MiiA modules appear to have been transferred horizontally between species co-habiting in the same niche to create their own MiiA-containing determinants. The present work provides a global study and a catalog of potential MiiA virulence factors that should be analyzed experimentally.     

贵州省死亡病例1型猪链球菌的分离及分子生物学特征分析

目的 对来自贵州省1例疑似人感染猪链球菌患者的血液标本进行细菌分离鉴定,了解该菌株的分子生物学特征,为病例的快速确诊提供病原学依据。方法 采用血培养法对疑似感染猪链球菌患者的血液进行细菌分离培养,对分离菌株采用细菌16S rRNA 基因通用引物进行PCR扩增和DNA序列测定,将测序结果通过GenBank数据库的BLAST程序进行在线比对,再用猪链球菌种特异的16S rRNA 基因进行猪链球菌种的鉴定,进一步分别采用PCR检测常见强致病性血清型1、2、7和9型特异的cps 1j、cps 2j、cps 7h和cps9h基因以鉴定其血清型,并对菌株毒力基因gapdh、mrp、sly和ef进行检测。结果 血培养分离出1株链球菌可疑菌株,序列比对结果显示该分离菌株16S rRNA基因与猪链球菌的同源性最高,进一步的猪链球菌特异性PCR检测显示分离菌株16S rRNA基因为阳性,血清型特异PCR检测结果显示cps 1j基因为阳性,而cps 2j、cps 7h和cps 9h基因为阴性,毒力基因检测结果显示分离菌株gapdh,sly和ef毒力基因为阳性,而mrp为阴性。结论 本次从疑似感染猪链球菌死亡病例分离的菌株为猪链球菌1型,其毒力特征为gapdh、sly和ef基因阳性,mrp基因阴性,该病例为1型猪链球菌感染所致,且菌株毒力较强。