瓜蒌皮提取物对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨瓜蒌皮提取物(extractive pericarpium trichosanthes,EPT)对体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),观察不同浓度瓜蒌皮提取物干预高糖处理的HUVECs凋亡的变化。MTT法检测HUVECs的存活率、采用Hoechst染色法检测细胞凋亡、采用比色法测定细胞内Caspase-3的活性、Western blot法以及免疫荧光染色法检测核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的蛋白表达和p65核移位情况。结果 30 mmol·L-1葡萄糖处理内皮细胞48h能引起细胞活性明显降低,细胞凋亡率及caspase-3的活性明显增加,细胞中NF-κB蛋白表达升高及p65核移位增加。用瓜蒌皮提取物(12.5、25、50 mg·L-1)预处理细胞1 h,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率、caspase-3的活性及NF-κB蛋白表达,呈浓度依赖性,且对高糖诱导的p65核移位有抑制作用。结论瓜蒌皮提取物对体外高糖诱导的HUVECs凋亡有抑制作用,其作用机制与下调NF-κB表达和降低caspase-3活性有关。     

维生素D对过氧化氢诱导MIN6细胞凋亡的保护作用

目的探讨维生素D(vitamin D,VitD)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2O 2)诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡的保护作用及机制。方法VitD预处理后,用H 2O 2处理MIN6细胞,分别运用CCK-8法、Hoechst 33258荧光染色法、流式细胞术检测MIN6细胞增殖、形态及凋亡百分率。Western blot检测增殖与凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3以及Cleaved caspase-3的表达。结果H 2O 2呈时间和剂量依赖性抑制MIN6细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低Bcl-2表达、增加Bax及Cleaved caspase-3表达,Bcl-2/Bax比值降低,Cleaved caspase-3/caspase-3比值增加;当用VitD预处理后,Bcl-2表达增加,Bax、Cleaved caspase-3表达降低,Bcl-2/Bax比值增加,Cleaved caspase-3/caspase-3比值降低,MIN6细胞活力增加。结论VitD预处理后,通过增加抗凋亡Bcl-2表达,降低促凋亡Bax和Cleaved caspase-3表达,减少由H 2O 2诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡。     

枸杞多糖对小鼠海马神经元细胞系缺糖缺氧损伤保护作用及机制研究

目的探讨枸杞多糖(LBP)对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞缺糖缺氧损伤保护作用的机制。方法采用含1 mmol/L连二亚硫酸钠的无糖DMEM培养基建立HT22细胞缺糖缺氧损伤模型,设对照组、模型组和LBP高、中、低剂量(100、50、25 mg/L)组,以CCK8法检测细胞活性,流式细胞术检测检测细胞凋亡情况;Western blotting检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TNF-α、NF-κB、I-κBα、Caspase-9基因转录活性。结果与对照组比较,模型组HT22细胞存活率显著降低、凋亡率显著增加(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著上调,I-κBα基因转录活性显著下调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,LBP各剂量组细胞存活率显著上升、凋亡率显著下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著下调,I-κBα基因转录活性显著上调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著降低,Bcl-2的蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。结论 LBP可能是通过下调TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性以及Bax蛋白表达,增强I-κBα基因转录活性及Bcl-2的蛋白表达,抑制缺糖缺氧损伤诱导神经细胞凋亡的发生。     

银杏内酯B抑制高糖诱导内皮细胞凋亡及机制研究

目的探讨银杏内酯B对高糖诱导的内皮细胞凋亡的影响及相关的分子机制。方法使用脐静脉血管内皮细胞作为细胞模型,分为对照组、高糖组、银杏内酯B处理组。用Transwell实验检测内皮细胞迁移,AnnexinⅤ试剂盒检测细胞凋亡,荧光试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测Bax,Bcl-2,caspase-3的表达以及p53的磷酸化。结果高糖(30 mmol·L~(-1))处理组内皮细胞迁移数量明显降低,迁移率为(66.6±15.6)%,而银杏内酯B(0.6 g·L~(-1))处理增加了内皮细胞的迁移数量,迁移率为(94.8±11.4)%。高糖处理导致内皮细胞ROS水平增高2.75倍,与高糖处理组比较,0.6 g·L~(-1)银杏内酯B完全抑制了高糖诱导的ROS产生。流式细胞仪分析表明,高糖刺激内皮细胞凋亡率为(53.8±2.6)%,银杏内酯B处理组内皮细胞凋亡率为(44.0±3.1)%。对凋亡相关蛋白的分析表明,高糖组Bax、caspase-3表达增加,Bcl-2表达降低,银杏内酯B处理抑制了Bax、caspase-3表达,并增加了Bcl-2表达。此外,高糖处理增加了内皮细胞p53表达及磷酸化,而银杏内酯B抑制高糖刺激的p53活化。结论银杏内酯B能抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,改善内皮细胞迁移功能,对高糖引起的内皮细胞损伤具有保护作用。     

SRT1720对高糖诱导的小鼠系膜细胞凋亡的影响

目的观察Sirt1激活剂SRT1720对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的作用。方法体外培养小鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SRT1720组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测活性氧簇(ROS)产生;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK、Sirt1、p53、乙酰化p53及细胞色素C的表达;实时定量PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达。结果与正常糖对照组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleaved caspase-3、p-p38 MAPK和乙酰化p53表达增高、Bax/Bcl-2比率明显升高、Sirt1表达下降以及细胞色素C易位。SRT1720干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生;下调cleaved caspase-3、乙酰化p53和p-p38 MAPK的表达;上调Sirt1的表达;减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C易位。结论SRT1720能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡,可能是通过减少ROS产生、保护线粒体功能、抑制p53乙酰化以及p38MAPK信号通路激活而实现的。     

黄芪多糖通过抑制NF-κB和JNK信号通路减轻LPS诱导的小鼠心肌细胞凋亡

目的研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外实验采用H9c2细胞预先给予APS,30 min后加入LPS(1 mg·L^-1)共孵育24 h,建立心肌细胞凋亡模型。体内实验采用SPF级昆明小鼠预防性给予APS 14 d后,腹腔注射LPS(10 mg·kg^-1)建立心肌细胞凋亡模型。8 h后采用超声心动测定小鼠心脏射血分数(EF)、左心室缩短分数(FS)等;TUNEL测心肌细胞凋亡;ELISA检测血清中IL^-1β、TNF-α含量;Western blot检测组织和体外心肌细胞中JNK、NF-κB信号通路及Bcl-2家族、caspase-3相关蛋白表达。结果 LPS能明显抑制小鼠的左心室收缩功能;促使心肌细胞凋亡;增加血清中IL^-1β、TNF-α,心肌细胞中JNK、p-JNK、Bax、caspase-3,胞核中NF-κB蛋白浓度;降低Bcl-2和胞质中NF-κB、IκB-α蛋白浓度。APS能明显保护LPS诱导的小鼠心肌收缩功能,减少心肌细胞凋亡;减少血清中IL^-1β、TNF-α,心肌组织细胞中p-JNK、Bax、caspase-3和胞核NF-κB蛋白含量;相对增加Bcl-2和胞质中NF-κB、IκB-α蛋白含量。而JNK蛋白表达无明显变化。结论 APS通过抑制NF-κB和JNK信号通路,减轻LPS诱导的小鼠心肌细胞凋亡。     

抗氧化肽SS-31对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的观察抗氧化肽SS-31对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法将体外培养小鼠肾小球系膜细胞分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SS-31组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞ROS水平;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK及细胞色素C的表达。结果与正常糖组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleavedcaspase-3和p-p38 MAPK表达增高,Bax/Bcl-2比率明显升高以及细胞色素C易位。SS-31干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3和p-p38 MAPK的表达,减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C易位。结论 SS-31能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡可能是通过减少ROS产生,保护线粒体功能,抑制p38MAPK信号通路激活而实现的。     

柚皮素对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的影响

本研究探究柚皮素对肺炎链球菌(SP)诱导的肺泡上皮细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的影响。培养肺泡上皮细胞HPAEpiC,使用CCK-8检测柚皮素对HPAEpiC细胞的毒性。再次培养HPAEpiC细胞,分为对照组、模型组、阳性对照组、柚皮素组和抑制剂组,ELISA法检测炎症因子的表达水平;TUNEL检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡及MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果显示,柚皮素浓度≤60μmol/L时,对HPAEpiC细胞无毒性(P>0.05)。SP诱导可上调细胞上清液中炎症因子(TNF-α和IL-1β)的释放量、细胞凋亡率和细胞中凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-8、Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3)与MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白(p-JNK、p-p38、p-ERK、p-p65和p-IκBα)的表达水平。柚皮素干预后可改善SP对肺泡上皮细胞的影响,且添加MAPK/NF-κB信号通路抑制剂干预与柚皮素干预对SP诱导的肺泡上皮细胞的作用效果具有相似性。以上结果提示柚皮素可能通过抑制MA...     

蓝萼乙素通过NF-κB信号通路调控舌鳞状细胞癌细胞的增殖与凋亡

摘要：目的:探讨蓝萼乙素调控舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞增殖、凋亡的分子机制。方法:体外培养人TSCC细胞SCC15,使用不同浓度的(3,6,12μmol·L-1)蓝萼乙素处理24 h。甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蓝萼乙素对核因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白[磷酸化核因子κB抑制蛋白α（p-IκBα）、磷酸化p65（p-p65）、p65、核因子κB抑制蛋白α（IκBα）]表达的影响; NF-κB信号通路的激活剂脂多糖（LPS）预处理SCC15细胞后,MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖能力及细胞凋亡率; Western blot法检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3总蛋白（T-caspase-3）的蛋白水平。结果:与空白组相比,蓝萼乙素不同浓度组细胞增殖率显著降低,CyclinD1、PCNA、Bcl-2、p-IκBα、p-p65蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高（P<0.05）;与蓝萼乙素高浓度+PBS组相比,蓝萼乙素高浓度+LPS组细胞增殖率显著升高,CyclinD1、PCNA、Bcl-2蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:蓝萼乙素能够抑制TSCC细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的活化而发挥作用。     

熊果酸对妊娠期糖尿病期间高糖诱导的滋养层细胞损伤的改善作用及其机制探讨

目的 研究熊果酸对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响,并初步探讨可能的潜在机制。方法 将人HTR-8/SVneo滋养层细胞系分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、模型组(25 mmol/L葡萄糖)、低剂量组(25 mmol/L葡萄糖+1μmol/L熊果酸)、中剂量组(25 mmol/L葡萄糖+3μmol/L熊果酸)、高剂量组(25 mmol/L葡萄糖+5μmol/L熊果酸)。分别采用细胞计数试剂盒-8、乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测和流式细胞术检测细胞活力、细胞毒性和凋亡。采用酶联免疫吸附试验和相应试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、IL-1β、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平。蛋白免疫印迹用于分析Toll-样受体4(TLR4)/髓系分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达。结果 与对照组相比,模型组细胞活力、Bcl-2蛋白表达,以及IL-10、SOD和CAT水平均显著降低,而LDH释放量、细胞凋亡率、Bax、TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达及TNF-α、IL-1β和M...     

小檗碱通过破坏线粒体功能选择性诱导淋巴瘤细胞的凋亡

目的研究小檗碱(BBR)对T淋巴瘤细胞凋亡的影响及机制。方法正常T淋巴细胞、T淋巴瘤细胞、Jurkat细胞用BBR 0,10,20和40μmol·L^-1处理24 h,多柔比星(Dox)40μmol·L^-1为阳性对照;Jurkat p0细胞用BBR 0和40μmol·L^-1处理24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率,Seahorse XF24细胞代谢分析仪和H2DCFDA活性氧探针检测细胞氧消耗率(OCR)和活性氧(ROS)水平。CellTiter-Glo发光法细胞活力检测试剂盒检测细胞ATP水平,试剂盒测线粒体呼吸链复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅳ和Ⅴ的活性。Western印迹法检测细胞内胱天蛋白酶3、Bcl-2、Bax、NF-κB抑制蛋白激酶α/β(IKKα/β)、磷酸化IKKα/β(p-IKKα/β)、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα和P65蛋白表达水平。结果BBR 40 mmol·L^-1明显增加T淋巴瘤细胞和Jurkat细胞凋亡率(P<0.01),胱天蛋白酶3和Bax蛋白表达水平显著上调(P<0.01),Bcl-2表达显著下调(P<0.01),但对正常T淋巴细胞的凋亡并无影响;BBR 40 mmol·L^-1明显降低Jurkat细胞的OCR及线粒体呼吸链复合物Ⅰ活性(P<0.01),增加ROS水平(P<0.01),降低ATP水平(P<0.01),但不影响线粒体缺陷型淋巴瘤Jurkat p0细胞呼吸链和凋亡;BBR 40μmol·L-1明显下调Jurkat细胞中NF-κB通路相关蛋白p-IKKα/β/IKKα/β、p-IκBα/IκBβ和核内P65表达(P<0.01)。结论BBR通过破坏线粒体功能选择性诱导淋巴瘤T细胞的凋亡,可能与抑制NF-κB通路有关。     

槲皮苷通过Nrf2/HO-1通路抑制H_2O_2诱导人肝细胞L-02凋亡和损伤

目的探讨槲皮苷对H_2O_2处理的人肝细胞L-02增殖、氧化应激、凋亡及炎性因子表达的影响及其作用机制。方法将L-02细胞分为空白组、H_2O_2组、槲皮苷(25、50、100、200、400、800、1600、3200 μmol·L-~1)处理组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,酶联免疫(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、核转录因子E2相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果与空白组比较,H_2O_2诱导的L-02细胞存活率降低;与H_2O_2组比较,50～1600 μmol·L-~1槲皮苷细胞存活率升高;与空白组比较,H_2O_2诱导的L-02细胞凋亡率,Bax、Cleaved caspase-3、Nrf2、HO-1蛋白表达量,ROS、MDA、TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量、SOD活性显著减少(P<0.05)。与H_2O_2组比较,100、200、400 μmol·L-~1槲皮苷明显减少细胞凋亡,Nrf2、HO-1、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达量,ROS、MDA、TNF-α、IL-6水平,显著提高Bcl-2蛋白水平和SOD活性,均呈浓度依赖性(P<0.05)。结论槲皮苷提高H_2O_2处理的人肝细胞L-02存活率,并抑制其凋亡,机制可能与其抑制Nrf2/HO-1通路和降低氧化应激炎症反应有关。     

飞燕草素葡萄糖苷通过上调SOX2OT减轻高糖诱导的心肌细胞损伤

摘要：目的:探讨飞燕草素葡萄糖苷（DPg）对高糖（HG）诱导的心肌细胞H9C2损伤的影响及可能机制。方法:体外培养H9C2细胞,不同剂量(1,10,100μmol·L-1)的DPg作用于33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导的H9C2细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中兔抗鼠B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关蛋白（Bax）的蛋白表达,试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平,RT-qPCR检测SRY盒转录因子2重叠转录本（SOX2OT）表达。转染SOX2OT过表达载体、小干扰RNA至H9C2细胞,经33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导24 h后,检测细胞增殖、凋亡、Bax和Bcl-2蛋白表达及MDA和SOD水平。结果:DPg可提高高糖诱导的H9C2细胞吸光度（A）值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）,且呈剂量依赖性。DPg可剂量依赖性促进高糖诱导的H9C2细胞中SOX2OT的表达,过表达SOX2OT可提高高糖诱导的H9C2细胞A值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。与未敲减SOX2OT的H9C2细胞比较,敲减SOX2OT的H9C2细胞经100μmol·L-1DPg和高糖处理后A值、Bcl-2蛋白表达和SOD活性降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量升高（P<0.05）,并抑制Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。结论:DPg可能通过上调SOX2OT表达抑制HG诱导的H9C2细胞凋亡和氧化应激。     

盐酸小檗碱对人黑色素瘤A375-S2细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

摘要：目的:探讨盐酸小檗碱对人黑色素瘤A375-S2细胞增殖、凋亡以及核因子κB（NF-κB）通路相关蛋白表达的影响。方法:体外培养A375-S2细胞,实验分为对照组（不添加任何药物处理）、盐酸小檗碱高、中、低剂量组(25,50,100μmol·L-1)、阳性对照组(顺铂,0.01 mmol·L-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;免疫印迹法（WB）检测细胞中NF-κB的抑制蛋白α（IκB-α）、p-NF-κB、NF-κB、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase3）蛋白表达情况。结果:与对照组相比,盐酸小檗碱不同剂量组A375-S2细胞增殖抑制率、凋亡率、G1期DNA量、IκB-α、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达均显著升高,p-NF-κB、Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.05）,且盐酸小檗碱高剂量组、阳性对照组与盐酸小檗碱中、低剂量组比较,差异有统计学意义（P<0.05）,高剂量组与阳性对照组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:盐酸小檗碱可明显抑制人黑色素瘤A375-S2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其可能与引起细胞周期G1期阻滞及抑制NF-κB信号通路激活有关。     

促肾上腺皮质激素释放激素受体1拮抗剂CP154526对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)受体1拮抗剂CP154526对海马神经元凋亡的影响。方法原代培养大鼠海马神经元,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,然后分为4组:正常对照组(Con)、CRH刺激组(CRH)、CRH和CP154526共同刺激组(CRH+CP)、CP154526刺激组(CP)。TUNEL、流式细胞术AnnexinⅤ-PI法检测神经元凋亡率;Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3表达水平。结果 10-8mol·L-1的CRH作用于海马神经元后,细胞存活率下降(P<0.05);50 mmol·L-1的CP154526可明显提升神经元存活率(P<0.05)。与正常对照组相比,CRH刺激后神经元凋亡率增加,Bax/Bcl-2比值增高,caspase-3表达增加;加用CP154526可明显降低神经元凋亡率、Bax/Bcl-2比值及caspase-3表达水平;而单独应用CP154526对凋亡没有明显影响。结论一定浓度的CRH可诱导海马神经元细胞凋亡,其受体1拮抗剂CP154526可有效减轻细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

NF-κB和MAPK信号通路参与金雀异黄酮诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

目的探讨金雀异黄酮(genistein)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的可能机制。方法采用MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;集落形成法观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞集落形成能力的影响;金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3及NF-κB、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白的表达。结果 MTT结果显示,金雀异黄酮呈时间、浓度依赖性抑制乳腺癌MDAMB-231细胞增殖;集落形成实验结果显示,金雀异黄酮能明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的集落形成(P<0.05);Western blot结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组相比,Bcl-2、NF-κB、p-ERK蛋白表达水平明显下调(P<0.05),Bax、caspase-3、p-JNK蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论金雀异黄酮能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制NF-κB、ERK,激活JNK信号转导通路有关。     

NF-κB/IκB在二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导内皮细胞凋亡中的表达变化

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制因子(IκB)基因表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、H2O2组、TSG组,采用Ho-echst 33258染色观察细胞凋亡形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB与IκB mR-NA表达,Western blot检测NF-κB p65、IκB蛋白表达。结果与对照组比较,H2O2组凋亡细胞数增多,细胞凋亡率增加,细胞增殖降低;NF-κB mRNA和蛋白表达增加,IκB mRNA和蛋白表达降低,差异均有显著性(P<0.01)。经TSG预处理后,细胞的增殖率较H2O2组增加,细胞凋亡率减少;NF-κBmRNA和蛋白表达减少,IκB mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。结论二苯乙烯苷能抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调节NF-κB/IκB表达有关。     

PDTC对重症急性胰腺炎大鼠腺胞细胞凋亡的影响

目的观察胰腺腺胞细胞凋亡在大鼠重症急性胰腺炎中的表达。方法大鼠60只随机分为对照组、模型组、干预组。造模开始第3、6、12 h麻醉后左心室采血处死,取胰腺组织;TUNEL法进行细胞凋亡检测,双抗体夹心ABC-ELISA法测定NF-κB及Bcl-2的含量。结果与对照组比较,模型组大鼠血清淀粉酶、胰腺组织病理学评分、血浆NF-κB、Bcl-2含量显著增高(P<0.01),NF-κB与Bcl-2呈正相关关系(r=0.435,P<0.05);与模型组比较,干预组血淀粉酶升高幅度和NF-κB、Bcl-2含量明显降低,细胞凋亡指数增加(P<0.01)。结论 NF-κB激活介导上调Bcl-2参与L-精氨酸诱导的SAP发生、发展过程;PDTC干预NF-κB激活使大鼠胰腺腺胞细胞凋亡增加,改善胰腺病理损伤。     

环维黄杨星D调控Ca2+/CaMKⅡ信号改善醛固酮诱导心肌细胞损伤的实验研究

目的探讨环维黄杨星D(cyclovirobuxine D,CVB-D)对醛固酮(aldosterone,ALD)诱导原代大鼠心肌细胞(PNRCMs)损伤的保护作用及其机制。方法通过胰酶消化法提取PNRCMs,以ALD(10μmol·L^-1)制备PNRCMs损伤模型,给予不同剂量的CVB-D处理后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Giemsa染色观察细胞形态变化,Flou-4AM荧光探针检测胞内Ca²⁺浓度,Western blot检测钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ、p-CaMKⅡ)和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-9的表达水平。进一步采用钙离子螯合剂(BAPTA-AM),钙离子载体(A23187)及CaMKⅡ抑制剂(KN93)进行干预处理,分析Bcl-2,Bax,Cleaved caspase-9蛋白的表达变化。结果与ALD组比较,CVB-D可显著恢复细胞活力,改善细胞的病理形态变化,上调Bcl-2/Bax的比值,下调Cleaved caspase-9和p-CaMKⅡ的表达并抑制胞内钙离子累积。进一步研究表明,BAPTA-AM和KN93能促进CVB-D上调Bcl-2/Bax的比值,下调Cleaved caspase-9的表达;而A23187可抑制CVB-D上调Bcl-2/Bax的比值,下调Cleaved caspase-9表达。结论CVB-D可改善ALD诱导的原代心肌细胞损伤,其作用机制与Ca²⁺/CaMKⅡ信号通路相关。     

丹酚酸B通过调控SIRT1/NF-κB/p53通路减轻缺氧/复氧诱导的大鼠肝细胞损伤

目的探究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)减轻缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤及潜在的分子机制。方法体外培养BRL-3A大鼠肝细胞株,制备BRL-3A的H/R模型,予以Sal B干预。CCK-8检测细胞活力;微板法测转氨酶含量;ELISA测炎性因子的含量;流式细胞术测细胞凋亡水平;Western blot和实时荧光定量PCR(q PCR)检测SIRT1、NF-κB p65、p53、Bax、Bcl-2蛋白及mRNA表达水平。结果 H/R诱导的大鼠肝细胞活力下降;细胞上清液中ALT、AST、TNF-α、IL-1β含量明显增多;细胞凋亡率明显升高;SIRT1和Bcl-2在蛋白及mRNA水平的表达下调,而NF-κB p65、p53和Bax在蛋白及mRNA水平的表达上调。在Sal B预处理后,细胞活力升高;细胞液中ALT、AST、TNF-α及IL-β的含量下降;细胞凋亡率降低;SIRT1和Bcl-2在蛋白水平及mRNA水平的表达升高,NF-κB p65、p53和Bax在蛋白水平及mRNA水平的表达降低。结论丹酚酸B可有效减轻H/R诱导的大鼠肝细胞损伤,其机制可能与SIRT1/NF-κB/p53通路有关系。