miR-1229-3p抑制结直肠癌疾病进展及作为潜在生物标志物的研究

目的：探讨微小RNA(microRNA, miRNA)在结直肠癌（colorectal cancer, CRC）疾病进展中的作用及临床应用价值。方法：基于TCGA数据库,筛选分析人类结肠癌及癌旁组织的转录组差异表达miRNA,以miRNA-1229-3p作为研究对象,在GEO数据库与Starbase数据库中验证其表达水平。采用生物信息学方法对miR-1229-3p的生物功能特征进行分析,构建miR-1229-3p过表达细胞系及miR-1229-3p敲降细胞系,通过CCK-8实验、克隆形成实验、EdU实验、Transwell实验、流式细胞术实验在体外探究miR-1229-3p对CRC细胞增殖、转移、凋亡的影响,并通过裸鼠移植瘤试验探究miR-1229-3p对CRC细胞体内增殖的影响。通过DIANA、TargetScan、miRDB数据库筛选miR-1229-3p的靶基因,并通过KEGG富集分析、GO分析靶基因的生物学功能。检测60例CRC患者及60例健康体检者血浆外泌体中的miR-1229-3p含量,采用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristi...     

多囊卵巢综合征中环状RNA差异表达的生物信息学分析

目的 利用生物信息学探讨多囊卵巢综合征中环状RNA(circular RNA,circRNA)的差异表达,并预测与之相结合的微RNA(microRNA,miRNA)。方法 通过基因表达综合数据库查找多囊卵巢综合征的卵丘细胞基因芯片表达谱,采用数据库自带的GEO2R工具筛选出差异circRNA,并利用DAVID 6.8数据库对差异circRNA基因进行基因本体分析及京都基因和基因组数据库信号通路分析,使用Circular RNA interactome预测潜在调控的miRNA,并利用Cytoscape软件建立circRNA-miRNA网络图,预测差异最显著的上调和下调的circRNA潜在调控的miRNA各5个。结果 共获得多囊卵巢综合征差异circRNA 247个,预测到与上调circRNA基因结合的miRNA共277个,与下调circRNA基因结合的miRNA共125个,前10个能够与多个差异circRNA结合的miRNA分别为hsa-miR-557、hsa-miR-507、hsa-miR-224、hsa-miR-136、hsa-miR-127-5p、hsa-miR-579、hsa-m...     

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-493-5p表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA NR2F1-AS1(LncRNA NR2F1-AS1)靶向微小RNA-493-5p(miR-493-5p)的表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NR2F1-AS1与miR-493-5p在不同卵巢癌细胞株中的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测NR2F1-AS1与miR-493-5p的相互作用;采用MTT增殖实验检测干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后卵巢癌细胞增殖能力的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot检测CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达。结果 与正常卵巢上皮细胞比较,NR2F1-AS1在卵巢癌细胞中的表达水平升高,而miR-493-5p的表达水平则降低,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验证实NR2F1-AS1能与miR-493-5p特异性结合,并可负性调控miR-493-5p的表达及活性。干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后可抑制卵巢癌细胞增殖能力,...     

MiR-139-5p通过靶向NFAT抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长、集落形成、侵袭和迁移

目的:探究miR-139-5p对卵巢癌SKOV3细胞的生长、集落形成、侵袭能力以及迁移能力的影响及其机制。方法:采用qRT-PCR检测卵巢癌患者癌组织和卵巢癌细胞SKOV3中miR-139-5p表达情况。MiR-139-5p mimic转染SKOV3细胞,WST比色实验、集落形成实验和Transwell实验分别检测细胞的活性、集落形成、侵袭和迁移能力。采用TargetScan在线软件筛选miR-139-5p的潜在靶基因NFAT,并进一步验证。结果:MiR-139-5p在卵巢癌组织和SKOV3细胞中表达异常降低。MiR-139-5p过表达显著抑制SKOV3细胞的生长、集落形成、迁移及侵袭能力。NFAT是miR-139-5p的靶基因。过表达NFAT能逆转miR-139-5p过表达对SKOV3细胞集落形成、侵袭能力以及迁移能力与侵袭的抑制作用。结论:MiR-139-5p通过抑制靶基因NFAT来抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长、集落形成、侵袭和迁移能力。     

基因芯片研究卵巢癌细胞系HO-8910差异基因表达

目的用基因芯片技术研究人卵巢癌细胞系HO-8910和正常卵巢上皮的基因表达谱,分析其基因表达变化,探讨卵巢癌发生、发展过程中与肿瘤相关的基因群及其功能,有助于从分子水平全面了解细胞癌变机理,为卵巢癌的临床诊断和治疗提供分子标记和靶基因.方法用一步法抽提人卵巢癌细胞和对照正常卵巢组织的总RNA并纯化mRNA;将等量的人卵巢癌细胞及对照组织的mRNA逆转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA链做探针,混合后在含有4096条双点人类全长基因的芯片上进行杂交.经洗片后用ScanArray 3000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用ImaGene 3.0软件对扫描图像进行数字化处理,分析高低转移人卵巢癌细胞系之间及与正常卵巢上皮基因表达谱差异.结果人卵巢癌细胞系HO-8910细胞与正常卵巢上皮比较,差异3倍以上共有355个基因,其中表达上调＞3倍有88个,表达下调＜0.33有267个.差异6倍以上共有75个基因,其中表达上调＞6倍有13个,表达下调＜0.17有62个.结论通过基因谱平行比较表明:人卵巢癌细胞系与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异:人卵巢癌细胞系HO-8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因.提示这些基因与卵巢癌的发生和发展有关.本实验说明利用基因芯片对基因表达谱的检测可以为人体卵巢癌的基因诊断、治疗和预防提供新的方向.     

新疆结核病患者外周血环状RNA差异表达分析

目的了解新疆结核病患者全血环状RNA(circRNA)差异表达谱,并预测其靶基因,探索circRNA与结核病发生发展的关系。方法用表达谱芯片对肺结核患者和健康人对照各3例全血circRNA进行检测,筛选差异表达的circRNA;选择新疆43例肺结核患者、40例健康人对照者及43例肺炎患者全血进行qRT-PCR验证,用circRNA靶基因预测数据库进行差异circRNA靶microRNA的预测。结果芯片结果显示新疆结核病患者全血中存在差异表达的circRNA有835个,其中249个表达上调,586个表达下调。筛选出4个有显著差异的circRNA进行qRT-PCR验证,结果表明hsa_circ_0008276、hsa_circ_0003452、hsa_circ_0001846(P0.05)和hsa_circ_0090508表达均下调(P0.05),hsa_circ_0090508相较于其他3个circRNA特异性更高。circRNA靶基因预测结果提示,has-miR-1294、has-miR-604、has-miR-616、has-miR-663b、has-miR-486-3p可能是hsa_circ_0090508的潜在靶基因。结论 hsa_circ_0090508在结核病患者中的表达显著下调,其可能通过靶基因影响结核病的调控机制。     

氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达 circRNA的筛选及功能分析

目的：探究氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达共价闭合、单链环状RNA(circRNA)及功能分析。方法：通过构建氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠模型,取癫痫大鼠及对照大鼠海马组织通过Illumina高通量测序平台进行转录组测序,并通过EdgeR包对circRNA进行差异分析、通过R语言进行GO及KEGG信号通路富集分析,通过Targetscan与miRanda软件进行circRNA与miRNA互作分析寻找circRNA核心调控靶标。结果：对照组及癫痫组大鼠海马的circRNA进行差异分析获得的262个差异表达circRNA,信号通路富集分析发现与胞蛋白修饰过程、蛋白质变性过程、树突形态调控、神经元分化调节、离子跨膜转运的调节等生物过程相关。并进一步确定了可能与circRNA存在互作的核心调控miRNA,包括miR-322-5p、miR-322-3p、miR-323-5p、miR-323-3p、miR-301a-5p、miR-301a-3p、miR-324-5p、miR-324-3p等。结论：本研究筛选了氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠与正常大鼠脑组织差异circRNA,系统地分析了其可能...     

新疆结核病人外周血circular RNA差异表达分析

目的:了解新疆结核病患者全血环状RNA (circRNA)差异表达谱，并预测其靶基因，探索circRNA与结核病发生发展的关系。方法：选取新疆肺结核患者43例与健康对照者40例，利用表达谱芯片对病例组和对照组各3例全血circRNA进行检测，筛选差异表达的circRNA，同时选择43例肺炎患者全血进行qRT-PCR验证，再用circRNA靶基因预测数据库进行差异circRNA靶microRNA的预测。结果：芯片结果显示新疆结核病患者全血中存在差异表达的circRNA 835个，其中249个表达上调，586个表达下调，筛选出4个有显著差异的circRNA进行qRT-PCR验证，结果表明hsa_circ_0008276、hsa_circ_0003452、hsa_circ_0001846(P＜0.05)和hsa_circ_0090508表达均下调(P＜0.05)。circRNA 靶基因预测结果提示，has-miR-1294、has-miR-604、has-miR-616、has-miR-663b、has-miR-486-3p可能是hsa_circ_0090508的潜在靶基因。结论：hsa_circ_0090508在结核病患者的表达下调显著，并且相较于其他三个circRNA特异性更高，其可能通过靶基因影响结核病的调控机制。     

Circ0066629促进结直肠癌细胞活力的体外研究

目的探讨环状RNA circ0066629促进结直肠癌细胞活力作用及其调控的分子机制。方法 35例结直肠癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)及伊立替康耐药和不耐药患者组织来源于南京医科大学附属上海市松江中心医院,不同结直肠癌细胞系来源于美国菌种保藏中心,利用RT-q PCR测定circ0066629在结直肠癌组织及细胞系中的表达水平。Circ0066629过表达质粒、siRNA质粒、miR-219a-2-3p过表达质粒(miR-219a-2-3p mimics)及miR-219a-2-3p干扰质粒(miR-219a-2-3p inhibitor)用于调控circ0066629和miR-219a-2-3p的表达。RT-q PCR用于测定转染效率。随后,应用CCK-8和细胞划痕实验测定LOVO细胞活力。荧光素酶报告基因实验用于评估circ0066629与miR-219a-2-3p以及p53与miR-219a-2-3p的靶向关系。蛋白免疫印迹实验用于测定p53和鼠双微体基因2(MDM2)在LOVO细胞中的蛋白表达水平。结果 circ0066629在结直肠癌5-Fu及伊立替康耐药患者组织中表达下调,但在不同结直肠癌细胞系中表达上调。过表达circ0066629明显促进了5-Fu和伊立替康处理下的LOVO细胞活力。MiR-219a-2-3p被预测为circ0066629的靶基因,并且miR-219a-2-3p过表达对LOVO细胞活力的作用与circ0066629相反。另外,p53是miR219a-2-3p的预测靶向基因,p53特异性抑制剂(PFT-α)明显抑制LOVO细胞活力。结论 circ0066629通过调控miR-219a-2-3p/P53/MDM2轴促进结直肠癌细胞活力。     

miR-142-3p在感染后肠易激综合征中的表达及意义

目的 探讨微RNA（miR）-142-3p在感染后肠易激综合征（PI-IBS）中的表达及意义,进一步阐明miR-142-3p调控PI-IBS发生发展的分子机制。方法 使用脂多糖（LPS）刺激后,在大鼠肠上皮细胞上考察miR-142-3p对高迁移率族蛋白B1（HMGB1）-Toll样受体4（TLR4）靶基因的作用;通过TargetScan预测软件分析发现HMGB1是miR-142-3p的靶基因,之后采用旋毛虫感染建立PI-IBS模型,原代肠上皮细胞进行小干扰RNA（siRNA）转染实验,提取肠上皮细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR检测,检测细胞中 miR-142-3p、HMGB1和TLR4的mRNA表达水平,考察miR-142-3p对HMGB1-TLR4靶基因的作用,并进一步验证HMGB1在miR-142-3p抗炎中的介导作用。结果 炎症基因NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α均为HMGB1-TLR4的靶基因。使用LPS刺激后,施加miR-142-3p大大抑制了HMGB1-TLR4靶基因（NLRP3、IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α）的表达（P均< 0.01）。使用siRNA对肠上皮细胞中的HMGB1靶向敲低后,细胞中的HMGB1表达降低超过80%,HMGB1-TLR4靶基因（NLRP3、IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α）的表达均无明显变化（P均> 0.05）。结论 miR-142-3p在肠上皮细胞中具有抗炎作用,其抗炎作用依赖于HMGB1。     

卵巢癌细胞多药耐药中miR-193a-3p的表达及作用

目的探讨在卵巢癌细胞多药耐药中miR-193a-3p的表达及其作用。方法采用MTT法分析卵巢癌细胞系A2780、SKOV-3、HO8910和ES-2对5种化疗药物的敏感性,确定其半数抑制浓度(IC_(50))值;用定量实时PCR(qRT-PCR)方法检测miR-193a-3p;转染miR-193a-3p mimic于最低表达miR-193a-3p的相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中,用qRT-PCR方法检测转染效率;用MTT方法在转染后相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中检测其对上述化疗药物敏感性的差异。结果在相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中miR-193a-3p的表达最低,而在相对多药最耐药的卵巢癌细胞系SKOV-3中miR-193a-3p的表达最高(P0.01);转染miR-193a-3p mimic于相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中后,使其增加对(紫杉醇,卡铂,多西他赛)化疗药物的耐受性(P0.01)。结论卵巢癌细胞多药耐药的调控中可能有miR-193a-3p的参与。     

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA X失活特异转录物（lncRNA XIST）通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系；划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力；RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA和蛋白表达。结果 在卵巢癌组织和细胞系中，lncRNA XIST高表达，miR-340-5p低表达（P <0.05）。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达（P ...     

miR-4645-5p通过靶向MUC16调控食管癌细胞的恶性生物学行为

目的 探讨微小RNA(miR)-4645-5p靶向黏蛋白16(MUC16)对食管癌细胞增殖、侵袭、上皮间充质转化的影响及其分子机制。方法 通过TCGA数据库在线分析miR-4645-5p在食管癌组织中的表达。利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)分析食管癌细胞系中miR-4645-5p的表达水平。通过脂质体转染技术将miR-4645-5p模拟物和阴性对照模拟物转染KYSE-30细胞，作为miR-4645-5p组和对照模拟物组。分别采用CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分析转染KYSE-30细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力。通过生物信息学网站预测miR-4645-5p的靶基因，双荧光素酶报告基因实验检测miR-4645-5p对靶基因的结合。采用qPCR检测MUC16 mRNA的表达水平，Western blotting检测MUC16、转录因子-1(ZEB-1)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达水平。结果 食管癌组织中miR-4645-5p表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。与HET-1...     

miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p 表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法 利用实时荧光定量PCR 实验（qRT-PCR）检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p 相对表达;构建miR-505-3p 过表达、c-MYC 过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8 法,克隆斑点形成实验、Transwell 侵袭/ 迁移实验检测miR-505-3p 和c-MYC 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p 对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p 和c-MYC 的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot 检测miR-505-3p 和c-MYC 对Wnt/β-catenin 通路关键蛋白表达的影响。结果 临床胃癌组织中miR-505-3p 表达水平较正常癌旁组织显著下调（0.92±0.37 vs 1.74±0.59）,差异有统计学意义（t=3.723,P ＜ 0.01）。胃癌细胞系MGC803（1.12±0.35）,AZ521（2.31±0.24）和HGC-27（2.28±0.43）中miR-505-3p 相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1（4.62±0.79）明显降低,差异有统计学意义（F=26.109,P ＜ 0.001）。miR-505-3p 过表达组细胞增殖（0.92±0.27）、克隆形成（51.67±21.75）、迁移（43.25±15.47 ）、侵袭（38.53±14.76）能力较NC组（1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.131 ～ 7.166,均P ＜ 0.05）;miR-505-3p 过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC 是miR-505-3p 的靶基因,miR-505-3p 靶向负调控c-MYC。c-MYC 过表达组细胞增殖（2.72±0.68）、迁移（147.15±20.36）、侵袭（145.46±22.73）能力较NC 组（1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94）明显增高,差异均有统计学意义（t=2.455 ～ 4.456,均P ＜ 0.05）;c-MYC 过表达可逆转miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p 过表达组Wnt（0.46±0.07 ）,β-catenin（0.50±0.05）蛋白相对表达水平明显低于NC 组（1.01±0.02,1.02±0.02）,差异均有统计学意义（t=8.139,7.342,均P ＜ 0.001）;过表达c-MYC 能够逆转miR-505-3p 对Wnt 和β-catenin 蛋白表达的抑制作用。结论 胃癌中miR-505-3p 显著低表达,其可通过靶向调控c-MYC 表达介导Wnt/β-catenin 信号通路激活进而发挥作用参与胃癌的发生发展过程。     

MiR-26b通过抑制p53基因表达增强胰腺癌细胞对吉西他滨抗药性

目的通过对miR-26b靶定p53促进胰腺癌细胞系PANC-1抗药性的研究,揭示胰腺癌细胞抗药机制,为临床治疗提供依据。方法 (1)构建p53的过表达和敲降质粒,以及含3′端非编码序列区(3′UTR)的荧光报告载体;(2)采用四甲基偶氮唑盐(MTT)实验研究在吉西他滨存在的条件下p53和miR-26b对PANC-1生长增殖的影响;(3)采用生物信息学、实时定量聚合酶链反应(PCR)试验、荧光报告载体和Western印迹试验确定miR-26b与p53的靶定关系;(4)采用挽救试验研究过表达p53对miR-26b促进细胞生长作用的影响。结果(1)MTT试验证实,在吉西他滨存在的条件下,过表达p53抑制胰腺癌细胞系PANC-1生长增殖,而敲降p53可以促进PANC-1生长和增殖;(2)生物信息学预测显示miR-26b靶定p53,实时定量PCR、荧光报告载体试验和Western印迹试验证实p53是miR-26b的靶基因,miR-26b通过靶定3′UTR抑制p53的转录和翻译;(3)MTT试验证实,在吉西他滨存在的条件下,过表达miR-26b促进PANC-1细胞系生长增殖,增强PANC-1细胞系对吉西他滨的抗药性;(4)挽救试验证实,同时过表达p53挽救miR-26b对PANC-1抗药的促进作用。结论 miR-26b通过靶定p53基因3′UTR抑制其表达,增强胰腺癌细胞系PANC-1对吉西他滨的抗药性。     

hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴促进胰腺癌细胞增殖与迁移的机制研究

目的　检测环状核糖核酸（circular RNA ,cicrRNA）hsa_circ_0006950 在胰腺癌（pancreatic cancer,PC）中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖、迁移的影响及其潜在分子作用机制。方法　利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 检测hsa_circ_0006950 在胰腺癌组织及细胞中的相对表达水平;转染hsa_circ_0006950 干扰载体构建低表达细胞系,通过CCK-8实验、克隆斑点形成实验和Transwell 实验检测hsa_circ_0006950 对胰腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移的影响;利用生物信息学网站预测hsa_circ_0006950 的miRNA 分子靶标及其调控网络（hsa_circ_0006950-miR-124-3p-EZH2）,双荧光素酶基因报告实验验证hsa_circ_0006950 和miR-124-3p,miR-124-3p 和EZH2 的靶向结合关系;转染过表达/ 干扰miR-124-3p 和过表达EZH2 细胞系,探究miR-124-3p 和EZH2 及hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴对胰腺癌细胞克隆形成及迁移的影响。结果　胰腺癌组织中hsa_circ_0006950 表达明显高于癌旁正常组织（3.57±0.52 vs 1.01±0.03）,差异有统计学意义（t=21.980,P ＜ 0.001）。胰腺癌细胞PANC-1（7.51±0.62）,AsPC-1（5.26±0.45）,Capan-2（3.69±0.38）,SW1990（3.25±0.32）and BXPC-3（3.86±0.35）中hsa_circ_0006950 相对表达明显高于正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7（1.00±0.01）中的表达,差异有统计学意义（F=88.585,P ＜ 0.001）。与对照组相比,干扰hsa_circ_0006950 表达组细胞增殖能力（0.79±0.17 vs 1.83±0.42）,克隆形成率（51.42%±5.84% vs 78.76%±13.65%）和迁移数目（104.64±24.73 vs 218.21±31.57）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.976,3.190,4.905,P=0.016,0.033,0.008）。miR-124-3p 是hsa_circ_0006950 的下游靶基因,EZH2 是miR-124-3p 的直接靶标。hsa_circ_0006950 靶向负调控miR-124-3p,miR-124-3p 靶向负调控EZH2。与对照组相比,过表达miR-124-3p 组PC 细胞增殖（0.21±0.16 vs1.75±0.47）,克隆形成率（47.85%±4.13% vs 81.54%±2.33%）和细胞迁移数目（118.74±24.65 vs 202.36±31.45）明显降低,差异均有统计学意义（t=5.378, 14.317, 3.390, 均P ＜ 0.001）;共转染过表达EZH2 后,miR-124-3p 对细胞增殖、克隆形成率及迁移能力的抑制作用被逆转。在干扰hsa_circ_0006950 组细胞中同时下调miR-124-3p 或过表达EZH2 后,hsa_circ_0006950 对细胞克隆形成及迁移的抑制作用被逆转恢复。结论　胰腺癌中hsa_circ_0006950 显著高表达,抑制其表达可以抑制胰腺癌细胞的增殖及迁移;hsa_circ_0006950 可能通过靶向下调miR-124-3p 表达,进而上调EZH2 表达来发挥作用,参与胰腺癌的发生发展。     

MDM2、p53在卵巢肿瘤组织及细胞系的表达和意义

目的　研究MDM 2 (murinedoubleminute 2 )和 p5 3在卵巢肿瘤组织、细胞系表达及与卵巢癌发生关系。 方法　①用细胞培养、蛋白质提取、Western免疫印迹法检测 17个卵巢癌细胞系MDM 2、p5 3蛋白表达。②用免疫组化SP法检测卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中MDM 2、p5 3蛋白的表达。结果　① 17个卵巢癌细胞系MDM 2蛋白p90表达阳性率为 11 8% (2 / 17) ;p5 3的阳性表达率为 3 5 3 % (6/ 17) ,2例MDM 2表达阳性出现在野生型卵巢癌细胞株。②在卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中MDM 2的阳性表达率分别为 :2 0 % (2 / 10 )、2 5 % (2 / 8)和 2 5 % (5 / 2 0 ) ;p5 3的阳性表达率分别为 2 0 % (2 / 10 )、3 7 5 % (3 / 8)和 60 % (12 / 2 0 )。 3组中 ,MDM 2阳性表达率无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而 p5 3在卵巢癌中的阳性表达率显著高于卵巢良性上皮性肿瘤和交界性上皮性肿瘤 (P <0 0 5 )。结论　p5 3的异常表达与卵巢肿瘤的恶性表型相关。在卵巢癌的发生发展过程中 ,p5 3的异常表达比MDM 2更有意义。MDM 2表达阳性可能在无 p5 3基因突变的卵巢癌细胞发生、发展过程中起一定作用     

miR-193a-3p在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA 193-a-3p(miR-193a-3p)在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制。方法运用实时荧光定量PCR在健康人胃黏膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16检测miR-193a-3p的相对表达水平;通过TargetScan在线分析和荧光素酶报告系统检测miR-193a-3p的靶基因;过表达或敲低miR-193a-3p后,免疫印迹试验检测靶基因和细胞凋亡标志蛋白的表达量以及细胞凋亡检测试验(Annexin V双染色法)检测细胞的凋亡水平。结果相比于健康人胃黏膜细胞系GES-1,miR-193a-3p在人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16中低表达(P0.05),并且MGC-803的表达量最低。miR-193a-3p靶向P21活化激酶4(PAK4)的3端非编码区。过表达miR-193a-3p后,PAK4的表达量降低,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量升高,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平上升(P0.05)。敲低miR-193a-3p后,PAK4的表达量升高,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量降低,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平下降(P0.05)。结论 miR-193a-3p通过靶向调节PAK4促进胃癌细胞发生细胞凋亡。     

miR-139-5p靶基因参与调控人骨肉瘤细胞表型的机制分析

目的 通过生物信息学方法预测miR-139-5 p的靶基因,并对靶基因进行信号通路富集分析,结合蛋白质互作(PPI)网络分析筛选核心基因.方法 使用dbDEMC数据库检索miR-139-5 p在骨肉瘤细胞中的表达,使用miRSystem网站的生物信息学数据库进行miR-139-5 p的靶基因预测,利用DAVID6.8软...     

miR-218-5p在胃癌细胞和胃癌组织中表达的临床意义及生物信息学分析

目的分析miR-218-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达,采用生物信息学方法,预测其靶基因并对其信号通路进行富集分析,并利用OncomiR数据库对miR-218-5p在胃癌中的表达与预后关系进行生存分析。方法通过实时荧光定量PCR检测miR-218-5p在不同分化程度的胃癌细胞和正常细胞、胃癌组织和癌旁组织中的表达,分析其临床意义。在miRecords网站数据库选择3个以上软件在线预测其靶基因,取其交集,运用DAVID6.7数据库,对其靶基因参与的信号通路进行富集分析。采用OncomiR数据库分析miR-218-5p在胃癌组织相对于癌旁组织中的表达,并利用OncomiR和cBioportal数据库分别进行miR-218-5p在胃癌组织中的表达与预后生存期的分析。结果miR-218-5p在不同分化程度的胃癌细胞中表达下调。相对于癌旁组织,miR-218-5p在胃癌组织中也明显下调,miR-218-5p的下调与胃癌淋巴结转移(P<0.001)及TNM分期(P<0.001)具有相关性。生物信息学分析显示,miR-218-5p的靶基因富集在与肿瘤相关的多个信号通路中,且其在胃癌中的表达与胃癌患者预后具有一定相关性(P=0.01632)。结论miR-218-5p在胃癌中表达下调,起到潜在的抑癌作用,可能成为新的治疗靶点和预后标志物。